10,11

Español Principio del test

Información del sistema Prueba enzimática colorimétrica conforme con lo estipulado por la IFCC
Test AMYL2, ID del test 0-609 (suero, plasma) Los oligosacáridos definidos tales como el 4,6-etilideno-(G7)-p-nitrofenil-
(G1)-α,D-maltoheptaósido (etilideno-G7PNP) se desdoblan bajo la acción
Test AMYU2, ID del test 0-509 (orina) catalítica de la α-amilasa. La -glucosidasa actúa sobre los fragmentos
Uso previsto G2PNP, G3PNP y G4PNP así formados que se hidrolizan entonces
Test in vitro para la determinación cuantitativa de la actividad catalítica de completamente a p-nitrofenol y glucosa.
la α-amilasa (1,4-α-D-glucano: glucanohidrolasa; EC 3.2.1.1) en suero,
Esquema de reacción simplificado:
plasma y orina humanos en los sistemas COBAS INTEGRA.
Características1,2,3,4,5,6,7,8,9
Las α-amilasas (1,4-α-D-glucanohidrolasas, EC 3.2.1.1) catalizan la hidrólisis de carbohidratos polímeros tales como la amilosa, la amilopectina y el glucógeno
por desdoblamiento de los enlaces 1,4-α-glucosídicos. En los poli y oligosacáridos, algunos enlaces glucosídicos se hidrolizan simultáneamente. La maltotriosa, la
unidad más pequeña de este grupo, se convierte a maltosa y glucosa, si bien muy lentamente. Se distinguen dos tipos de α-amilasas: el tipo pancreático (tipo P) y
el tipo salival (tipo S). El tipo P se forma casi exclusivamente en el páncreas y es, por lo tanto, organoespecífico, mientras que el tipo S se sintetiza en diferentes
órganos. Este último se encuentra en las glándulas salivales, las lágrimas, el sudor, la leche materna, el líquido amniótico, los pulmones, los testículos y el epitelio
de las trompas uterinas.

La determinación de la α-amilasa juega un papel importante en el diagnóstico de las enfermedades del páncreas ya que presentan síntomas clínicos poco
específicos. La α-amilasa se emplea sobre todo en el diagnóstico y seguimiento de la pancreatitis aguda. La hiperamilasemia no sólo puede producirse en la
pancreatitis aguda o en la fase inflamatoria de la pancreatitis crónica, sino también en la insuficiencia renal por filtración glomerular reducida, los tumores
pulmonares u ováricos, la neumonía, las afecciones de las glándulas salivales, la cetoacidosis diabética, el trauma cerebral así como en intervenciones
quirúrgicas o en caso de una macroamilasemia. Para confirmar la especificidad pancreática, se recomienda determinar adicionalmente otra enzima específica del
páncreas, como la lipasa o la α-amilasa pancreática.
Los numerosos métodos descritos para la determinación de la α-amilasa se basan en determinar la reducción del sustrato de forma viscosimétrica,
turbidimétrica, nefelométrica o amiloclástica o bien en medir la formación de productos de degradación por sacarimetría o cinéticamente mediante
reacciones sucesivas catalizadas por enzimas. El presente método se basa en el probado proceso de degradación del sustrato
4,6-etilideno-(G7)-1,4-nitrofenil-(G1)-α,D-maltoheptaósido (Ethylidene Protected Substrate = EPS) por la α-amilasa y la consecuente
hidrólisis de todos los productos de degradación a p-nitrofenol por la acción de la α-glucosidasa (liberación del cromóforo del 100 %). Los
resultados del presente método correlacionan con los obtenidos por CLAR (cromatografía de líquidos de alta resolución).

α-amilasa

a)
5 etilideno-G7PNP + 5 H2O 2 etilideno-G5 + 2 G2PNP
+ 2 etilideno-G4 + 2 G3PNP + etilideno-G3 + G4PNP
a) PNP = p-nitrofenol

α-glucosidasa

b)
2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O 5 PNP + 14 G
b) G = glucosa
La intensidad cromática del p-nitrofenol formado es directamente proporcional a la actividad de la α-amilasa. Se determina midiendo el
aumento de la absorbancia a 409 nm.
Reactivos - Soluciones de trabajo
R1 HEPES: 52.4 mmol/L; cloruro de sodio: 87 mmol/L; cloruro de calcio: 0.08 mmol/L; cloruro de magnesio: 12.6 mmol/L;
α-glucosidasa (microbiana): ≥ 66.8 µkat/L; pH 7.0 (37 °C); detergente; estabilizadores
SR HEPES: 52.4 mmol/L; etilideno-G7-PNP: 22 mmol/L; pH 7.0 (37 °C); detergente; estabilizadores
R1 está en la posición B y SR está en la posición C.
Medidas de precaución y advertencias
Observar las advertencias y medidas de precaución indicadas en la introducción de la sección 1 del manual de técnicas.
Para los EE.UU.: İAtención! Según la ley federal estadounidense, este producto puede ser vendido exclusivamente por
facultativos o por prescripción médica.
El presente estuche contiene componentes que han sido clasificados por la directiva CE No. 1272/2008 de la siguiente manera:
clorhidrato de 2-metil-2H-isotiazol-3-ona.
EUH 208 Puede provocar una reacción alérgica.
Las indicaciones de seguridad del producto corresponden a los criterios del sistema globalmente armonizado de clasificación y etiquetado de productos
químicos (GHS por sus siglas en inglés) válidas en la UE.
Preparación de los reactivos
Los reactivos están listos para el uso.
Conservación y estabilidad
Sin abrir, a 2-8 °C véase la fecha de caducidad
impresa en la etiqueta del
cobas c pack
En uso en el analizador, a 10-15 °C 12 semanas
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Obtención y preparación de las muestras
Emplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las muestras.
Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí
indicados.
Suero
+
Plasma tratado con heparina (Li, Na, NH4 ) o con EDTA (K2, K3)
Los valores obtenidos en plasma tratado con EDTA son aproximadamente un 5-10 % más bajos que los valores obtenidos en suero.
Los tipos de muestra aquí indicados fueron analizados con tubos de recogida de muestras seleccionados, comercializados en el momento de efectuar
el análisis, lo cual significa que no fueron analizados todos los tubos de todos los fabricantes. Los sistemas de recogida de muestras de diversos
fabricantes pueden contener diferentes materiales que, en ciertos casos, pueden llegar a afectar los resultados de los análisis. Si las muestras se
procesan en tubos primarios (sistemas de recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de tubos.
Orina: recoger la orina sin aditivos. La α-amilasa es inestable en orina ácida. Realizar el test directamente o alcalizar las muestras antes del
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almacenamiento (a justo por encima de pH 7).
Consulte la sección de limitaciones e interferencias para obtener detalles sobre posibles interferencias por muestras.
Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
13
Estabilidad en suero: 7 días a 15-25 °C
1 mes a 2-8 °C
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Estabilidad en orina: 2 días a 15-25 °C
10 días a 2-8 °C
La estabilidad de las muestras fue establecida a partir de los datos experimentales del fabricante o de la literatura de referencia y solamente para las
temperaturas y los tiempos indicados en la metódica. Cada laboratorio debe establecer sus propios criterios de estabilidad a partir de todas las referencias
disponibles y/o realizando sus propios estudios.
Material suministrado
Consultar la sección "Reactivos - Soluciones de trabajo" en cuanto a los reactivos suministrados.
Realización del test
Para garantizar el funcionamiento óptimo del test, observe las instrucciones de la presente metódica referentes al analizador
empleado. Consulte el manual del operador apropiado para obtener las instrucciones de ensayo específicas del analizador.
Aplicación para suero, plasma y orina Definición del test
Modo de medición Absorbancia
Cálculo de la absorbancia Cinética
Modo de reacción R1-S-SR

Dirección de la reacción Aumento

Longitud de onda A/B 409/659 nm

Cálc. primero/último 50/69

Unidad U/L
Parámetros de pipeteo
Suero/plasma/orina Diluyente (H2O)
R1 100 µL
Muestra 4 µL 4 µL
SR 20 µL
Volumen total 128 µL

Calibración
Calibrador Calibrator f.a.s.
Usar agua desionizada como
calibrador cero.
Modo de calibración Regresión lineal
Réplica de la calibración Se recomienda por duplicado
Intervalo de calibración Con cada lote y si fuera necesario
según los procedimientos de control
de calidad
El intervalo de calibración puede ampliarse si el laboratorio asegura una verificación aceptable de la calibración.
Trazabilidad: el presente método ha sido estandarizado de forma manual frente a un reactivo de Roche según la IFCC.
Control de calidad
Control de calidad para suero, Precinorm U plus o
plasma PreciControl ClinChem Multi 1
Precipath U plus o
PreciControl ClinChem Multi 2
Control de calidad en orina Se recomienda efectuar el control de
calidad de rutina con controles
cuantitativos de orina.
Intervalo de control Se recomienda cada 24 horas

Secuencia de control Definida por el usuario

Control tras la calibración Recomendado
Efectuar el control de calidad con el material de control indicado en la sección “Información de pedido”. Adicionalmente puede usarse otro
material de control apropiado.
Adaptar los intervalos y límites de control a los requisitos individuales del laboratorio. Los resultados obtenidos deben hallarse dentro de los límites
definidos. Cada laboratorio debería establecer medidas correctivas a seguir en caso de obtener valores fuera del intervalo definido.
Cumplir con las regulaciones gubernamentales y las normas locales de control de calidad pertinentes.
Cálculo
El analizador COBAS INTEGRA 400 plus calcula automáticamente la concentración de analito de cada muestra. Para más detalles, consultar
el análisis de datos de la ayuda on-line.
Factores de conversión: U/L × 0.0167 = μkat/L Limitaciones del análisis - interferencias
No pipetear con la boca y evitar el contacto del reactivo con la piel porque ¡la saliva y el sudor contienen α-amilasa!
Criterio: recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial.
Suero/plasma
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Ictericia: sin interferencia significativa hasta un índice I de 52 para la bilirrubina conjugada y de 76 para la bilirrubina sin conjugar
(concentración de la bilirrubina conjugada: aproximadamente 889 µmol/L o 52 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin conjugar:
aproximadamente 1300 µmol/L o 76 mg/dL).
15
Hemólisis: sin interferencia significativa hasta un índice H de 260 (concentración de hemoglobina: aproximadamente
161 µmol/L o 260 mg/dL).
 15
Lipemia (Intralipid): sin interferencia significativa hasta un índice L de 2200. No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que
corresponde a la turbidez) y la concentración de triglicéridos.
16,17
Fármacos: no se ha registrado ninguna interferencia con paneles de fármacos comunes analizados a concentraciones terapéuticas.
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Exepción: los fármacos basados en icodextrina pueden producir valores artificialmente bajos de amilasa.
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Anticoagulantes: se producen interferencias con el citrato y el fluoruro.
En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía, particularmente del tipo IgM
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(macroglobulinemia de Waldenström).
Orina
17
Fármacos: no se registró ninguna interferencia con paneles de fármacos de uso común a concentraciones terapéuticas.
Criterio: recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial a una actividad de la amilasa de 460 U/L (7.68 µkat/L).
Hemólisis: Sin interferencia significativa hasta una concentración de hemoglobina de 311 µmol/L (500 mg/dL).
Fosfato: sin interferencia significativa hasta una concentración de fosfato de 70 mmol/L (217 mg/dL).
Urea: sin interferencia significativa hasta una concentración de urea de 1500 mmol/L (9009 mg/dL).
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en cuenta la anamnesis del paciente, la exploración clínica
así como los resultados de otros exámenes.
ACCIÓN REQUERIDA
Programación de lavado especial: Los pasos de lavado especial se aplican cuando ciertas pruebas se utilizan conjuntamente de
forma combinada en los analizadores COBAS INTEGRA. Para más detalles y en cuanto a la última versión de la lista de lavados
adicionales, consulte la metódica CLEAN.
En caso de que sea necesario, implemente el lavado especial para evitar la contaminación por arrastre antes de comunicar
los resultados del test.
Límites e intervalos
Intervalo de medición
Suero/plasma/orina
3-2000 U/L (0.05-33 µkat/L)
Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen de 1:5.
Los resultados de las muestras diluidas por la función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 5.
Límites inferiores de medición
Límite inferior de detección del test:
3 U/L (0.05 µkat/L)
El límite de detección inferior representa la menor concentración medible de analito que puede distinguirse de cero. Se calcula como la
concentración situada a 3 desviaciones estándar por encima de la muestra cero (muestra cero + 3 DE, repetibilidad, n = 21).
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Valores teóricos
Suero/plasma
28-100 (0.47-1.67
Hombres/mujeres U/L μkat/L)

Orina espontánea
16-491 (0.27-8.20
Hombres U/L μkat/L)
21-447 (0.35-7.46
Mujeres U/L μkat/L)
Cociente de α-amilasa/creatinina
58-283 (0.97-4.73
Hombres U/g μkat/g)
75-390 (1.25-6.51
Mujeres U/g μkat/g)
Cociente de α-amilasa/creatinina
Debido a las fluctuaciones de la actividad de α-amilasa en orina, se recomienda determinar el cociente de α-amilasa/creatinina. Para ello,
determinar la actividad de α-amilasa y la concentración de creatinina en orina espontánea.

α-amilasa [U/L o µkat/L]

Cociente [U/g o µkat/mmol] =
creatinina [g/L o mmol/L]
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Cociente de amilasa/aclaramiento de creatinina (ACCR)
El ACCR se calcula a partir de la actividad de la amilasa y la concentración de la creatinina. Las muestras de suero y orina
deben obtenerse simultáneamente.
amilasa en orina [U/L] x creatinina en suero [mg/L]
ACCR [%] = × 100
amilasa en suero [U/L] x creatinina en orina [mg/L]
El ACCR es más o menos equivalente a 2-5 %.
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso
necesario, establecer sus propios valores.
Datos específicos de funcionamiento del test
A continuación, se indican los datos de funcionamiento representativos obtenidos con los analizadores COBAS INTEGRA. Los resultados de cada
laboratorio en particular pueden diferir de estos valores.
Precisión
La precisión ha sido determinada a partir de muestras humanas y controles según un protocolo interno con repetibilidad (n = 21) y
precisión intermedia (1 alícuota por serie, 1 serie por día, 21 días). Se obtuvieron los resultados siguientes:
Suero/plasma
Repetibilidad Nivel 1 Nivel 2
Media 76 U/L 192 U/L
 (1.3 µkat/L) (3.2 µkat/L)
CV 1.4 % 1.2 %

Precisión intermedia Nivel 1 Nivel 2

Media 73 U/L 181 U/L
(1.2 µkat/L) (3.0 µkat/L)
CV 1.4 % 1.4 %
Orina
Repetibilidad Nivel 1 Nivel 2
Media 39.4 U/L 201 U/L
(0.66 µkat/L) (3.4 µkat/L)
CV 0.8 % 0.4 %

Precisión intermedia Nivel 1 Nivel 2

Media 36.7 U/L 189 U/L
(0.61 µkat/L) (3.2 µkat/L)
CV 1.0 % 1.0 %
Comparación de métodos
Los valores de α-amilasa para muestras de suero, plasma y orina humanos obtenidos en un analizador COBAS INTEGRA 700 con el
reactivo COBAS INTEGRA α-Amylase EPS ver.2 (AMYL2) (y) fueron comparados con los resultados obtenidos con el mismo reactivo
en un analizador Roche/Hitachi 917 (x) y con el reactivo anterior AMYLL en un analizador COBAS INTEGRA 700 (x).
Suero/plasma
Analizador Roche/Hitachi 917 Número de muestras (n) = 64
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Passing/Bablok Regresión lineal
y = 0.98× + 0.51 U/L y = 1.00× - 1.28 U/L
т = 0.987 r = 1.000
DE (dm 95) = 5.57 Sy.x = 5.59
Las actividades de las muestras se encontraron entre 22 y 1900 U/L (0.37-31.7 μkat/L).
20
Passing/Bablok Regresión lineal
y = 0.98× + 1.72 U/L y = 0.97× + 3.01 U/L
т = 0.982 r = 1.000
DE (dm 95) = 12.22 Sy.x = 5.71

Las actividades de las muestras se encontraron entre 22 y 1930 U/L (0.37-32.2 μkat/L).
Orina
Analizador Roche/Hitachi 917 Número de muestras (n) = 59
20
Passing/Bablok Regresión lineal
y = 0.98× - 0.32 U/L y = 0.99× - 1.03 U/L
т = 0.988 r = 1.000
DE (dm 95) = 17.3 Sy.x = 6.54

Las actividades de las muestras se encontraron entre 0.66 y 1767 U/L (0.01-29.5 μkat/L).
Analizador COBAS INTEGRA 700 Número de muestras (n) = 59
20
Passing/Bablok Regresión lineal
y = 0.96× + 0.54 U/L y = 0.95× + 1.92 U/L
т = 0.991 r = 1.000
DE (dm 95) = 18.6 Sy.x = 6.28

Las actividades de las muestras se encontraron entre 0.64 y 1853 U/L (0.01-30.9 μkat/L).
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En la presente metódica se emplea como separador decimal un punto para distinguir la parte entera de la parte fraccionaria de un
número decimal. No se utilizan separadores de millares.