ESTRATEGIAS PARA LA DETECCÍON Y DIAGNOSIS

DE VIRUS EN PLATANOS Y BANANOS EN LA

COMUNIDAD ANDINA DE NACIONES

CIRO BARRERA
Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA)
PERÚ

Piura, Junio 2011

INTRODUCCION
Campos comerciales
Plantones de Banano

Forma tradicional de la propagación e

instalación de plantaciones a partir de
campos comerciales.
Síntomas de CMV en follaje
Efecto del Virus BSV
Otras síntomas de CMV
Efecto del Virus BBTV
BBrMV (Banana Bract Mosaic Virus)
Virus del Mosaico de la Bràctea

400 nm
BBTV (Banana Bunchy Top Virus)
Virus del Cogollo racimosos del Banano
Virus del Arrosetamiento del Banano

100 nm
Descarte
Altos porcentajes de descarte por
no alcanzar calibres requerido
para exportación.
 Objetivo General
• Establecer las bases para la unificación y
fortalecimiento del sistema de protección
fitosanitaria en la Comunidad Andina
(CAN) implementando un caso modelo de
trabajo en el aspecto de detección y
control de virus de importancia económica
en la cadena productiva de Musáceas
(Banano y Plátano) de países de la CAN
 Objetivo Específico
• Implementar los laboratorios del ICA,
SENASA e INIA con tecnologías y
metodologías modernas para la
identificación, detección y diagnosis de
los virus más importantes que afectan al
banano y plátano Banana Streak Virus
(BSV), Cucumber Mosaic Virus (CMV),
Banana Bunchy Top Virus (BBTV),
Banana Brack Mosaic Virus (BBrMV),
Banana Mild Mosaic Virus (BanMMV) y
Abacá Mosaic Virus (AbaMV)
Virus de Musáceas
Estructura - Virus
Procedimientos basados en ensayos con ácidos nucleicos (ADN
y ARN) aplicados al diagnóstico y caracterización, entre otros.

ADN

Los ácidos nucleicos ADN y ARN contienen la información genética

 Diversas técnicas moleculares

NASH:
Hibridación de Ácidos Nucleicos:
Dot-Blot, Southern Blot, Northern Blot PCR:
Reacción en Cadena de la Polimerasa:
AFLP, RFLP, RAPDS, NESTED, RT-PCR, SSR

Secuenciamiento
 Reaccion en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Principio de la PCR:
4to ciclo 36 ciclos
Fragmento deseado
3er ciclo
ARN
Segundo ciclo
Transcripción
Reversa

Primer ciclo
ADN ADN molde

21 =
22 = 236 = 68
RT-PCR 2 copias 16 billones
4 copias 8 copias copias de copias
Materiales y Métodos
 Distribución de Virus por
Países
Virus Nombre Entidad

BSV Banana Streak Virus ICA

CMV Cucumber Mosaic Virus ICA

BBTV Banana Bunchy Top Virus SENASA

BBrMV Banana Brac Mosaic Virus SENASA

BanMMV Banana Mild Mosaic Virus INIA

AbaMV Abacá Mosaic Virus INIA

 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS Y
EXTRACCIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS

Selección y división Pulverización Centrifugación

Visualización y
Electroforesis documentación
Resultados
 Detección de BBrMV mediante PCR
convencional: RT-PCR de un solo paso

Positivo

Positivo

100 bp
100 bp

M 22
M 68
M 69

M 22
M 68
M 69
H2O

H2O
M8

M8
500
400
260 300 280 bp
bp 200

100 bp

N2/NR N1/NR
 53.0 °C
54.3 °C
55.3 °C

+ Adgen
56.4°C
57.3 °C
53.0 °C
54.3 °C

+ Agdia
55.3 °C
56.4°C
100bp
1056 bp

51.1°C
51.8 °C
53.0 °C
+ Adgen

54.3 °C
55.3 °C
51.1°C
51.8 °C
ESTANDARIZACION DE CONDICIONES DE PCR PARA LA
DETECCIÒN DEL BBTV MEDIANTE PCR CONVENCIONAL

53.0 °C
+ Agdia

54.3 °C
55.3 °C
100bp
bp
349
 Detecciòn de BBrMV mediante PCR en
tiempo real

BBrMV

COX

COX

SANO

Positivo para BBrMV (Sonda MGB FAM) Sano para BBrMV (Sonda MGB FAM)

Internal Control COX (Sonda MGB VIC) Internal Control COX (Sonda MGB VIC)
 Detección del BBTV mediante PCR en tiempo real
a partir del segmento DNA-1

BBTV
COX

COX

SANO

Positivo para BBTV (Sonda MGB FAM) Sano para BBTV (Sonda MGB FAM)
Internal Control COX (Sonda MGB VIC) Internal Control COX (Sonda MGB VIC)
 Western blot
1. Preparación de la muestra 3. Transferencia a la
membrana de nitrocelulosa

4. Detección

2. Electroforesis en geles
de acrilamida
 Detección
PS PV PS (-) PS (+)
1/50 1/50 1/250 1/500 1/1000 1/50 1/50

kD

97.4
66.2

45.0

31.0
21.5

14.4

Acrilamida al 15%, Fosforilasa B BSA Ovoalbumina Anhidrasa Carbónica Inhibidor de Tripsina Lisozima
 Resultados
Virus Genoma Técnica Detección

BSV DNA IC PCR

CMV RNA RT PCR

DAS ELISA

BBTV DNA PCR convencional

PCR tiempo real

BBrMV RNA RT PCR Convencional

RT PCR tiempo real

BanMMV RNA Western Blot

Micro propagación plántulas
 Resultados

• El proyecto permitió un mejor

equipamiento de los laboratorios
de las tres instituciones.
• Capacitar al personal en técnicas
modernas e innovación de
tecnologías.
 Conclusiones
• Trabajo en equipo dentro y fuera del país.

• Las técnicas de detección y diagnosis permitirán

fortalecer el sistema de producción de plantones.

• Contribuir a la producción de plantones de mejor calidad

fitosanitaria permitirá una mejor vida útil de las
plantaciones de plátanos y bananos.

• Intercambio de material de propagación de plátanos y

bananos promisorios entre Perú y Colombia.

• Fortalecimiento y sostenibilidad de las actividades agro

exportadoras plátanos y bananos.
 Compromiso

El Proyecto "Unificación y Fortalecimiento del Sistema

de Protección Fitosanitaria en la Comunidad Andina
de Naciones (CAN) Caso Modelo: Virus en
Musáceas (plátano y banano) de Importancia
Económica en CAN“ contribuirá significativamente a:

Brindar sostenibilidad (sanidad) a las actividades

de exportación del banano orgánico y la
seguridad alimentaría para nuestras poblaciones
Importancia del banano y plátano
Gracias!
Ciro Barrera Rojas
cbarrera@inia.gob.pe
INIA - Perú