Tesis Edgar - Couttolenc Final

Efecto del uso de portainjertos resistentes en injertos
susceptibles de Café (Coffea arabica L.) en respuesta a la

infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.).
TESIS QUE PRESENTA Edgar Couttolenc Brenis

PARA OBTENER EL GRADO DE DOCTOR EN CIENCIAS
Xalapa, Veracruz, México (año)

Aprobación final del documento de tesis de grado:
Título de la tesis en comillas:
“Efecto del uso de portainjertos resistentes en injertos susceptibles de Café (Coffea arabica L.)
en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.)”
Nombre Firma
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Martin Mata Rosas al trabajo de tesis titulado:
Efecto del uso de portainjertos resistentes en injertos susceptibles de Café (Coffea
arabica L.) en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.)..
Nombre del estudiante: Edgar Couttolenc Brenis. Sello digital del voto aprobatorio:
<<LpykDBt.-7j8ÑTOüMFn 0ilZEvmrbJíQWG:IasXHUúxg-ETñ7,HjCÚÚj?m:o,ü7m:+Z,-
SmoÚj,Em?,CZj,Em,(j7Úñ+:Ám7ÚjZ,7mZ+ZÚm:ÚmZ,m:,+:Ám7ÚjZ,ZCZom(Ú+6?mZ,E
Director Dr. Martin Mata Rosas m,HñSl,JHjSSmñ,ñ7ñ6+oñ,)Óp,m:,7mZ(CmZÚñ,ñ,?ñ,+:Smoo+r:,Em,?ñ,7j]ñ,JXm8+?m
+ñ,9ñZÚñÚ7+U,üm7[Ó,&,ü7ÓpÓ,Ü7Ó, ñ7Ú+:,
ñÚñ,ejZñZ,íCm,éoÚ,RI,II0Oú0II,I.IR,[6PR4áN;o?éeSc)ÉówqzñAYÍÚÁhuKdÓVC2(5Ü9+
3¿]1>> Fecha y hora de emisión del voto: Tue Oct 12 22:38:22 2021. Usted puede
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posgradoinecol.shinyapps.io/VERIFIC/
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Alfonso Méndez Bravo al trabajo de tesis
titulado: Efecto del uso de portainjertos resistentes en injertos susceptibles de Café
(Coffea arabica L.) en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. &
Br.).. Nombre del estudiante: Edgar Couttolenc Brenis. Sello digital del voto
aprobatorio: <<oñÚ[EfIHki,Q¿K]zyVÜÓrÑg9F65úxMÍ;A0Tw-
BYR4cdNÜU?d.DQ)bzz)qLJVDZ.LJÉIDÜüLVz)DULqDbI)DULDn).zdÉJwL.z)ID.LIÉIzLJzLID
Codirector Dr. Alfonso Méndez Bravo LJDÉJwL.z)IDIbIVLnzÉrqLIDULDQdüBDaQ)üüLdDd.drÉVdDtoxDLJD.LInbLIzdDdDqdDÉ
JüLVVÉSJDULDqdD.)
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Dmmg8jgusDm1mu(uJaPO:DX3ÁG2p.vlb8L1hj)UtÉéW +áümsnZe7íqSC?>> Fecha y
hora de emisión del voto: Wed Oct 13 22:53:18 2021. Usted puede verificar la
validez del sello digital en https://firmaselectronicas-
Voto aprobatorio otorgado por: Dra. Gloria Luz Carrión Villarnovo al trabajo de tesis
Comité Dra. Gloria Luz Carreón Br.).. Nombre del estudiante: Edgar Couttolenc Brenis. Sello digital del voto
aprobatorio: <<Ñ:QnóNiáY9Üc-
Tutorial Villarnovo ÁEAq7WvZwpS.4dCGDol+FbÉ1ñPxrjf?é8KBWx74iww43D[úxSWD[ÚIxéUDúw4x8D3x
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2
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Wc-x&xSW-C-x5WB-
x634WÚBxHiOx7BWWÚÜ[xLÚ33BW[4,4xx:D8xyúwxñQxñt(ñQ(JpxJAJñÚRk(TK¿üuíU
[húX8]ÍÓ6é,t O50a)eIHyLs2gV;mzM3J>> Fecha y hora de emisión del voto: Wed Oct
13 16:13:28 2021. Usted puede verificar la validez del sello digital en
https://firmaselectronicas-posgradoinecol.shinyapps.io/VERIFIC/
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Luc Villain al trabajo de tesis titulado: Efecto del
uso de portainjertos resistentes en injertos susceptibles de Café (Coffea arabica L.)
en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.).. Nombre del
estudiante: Edgar Couttolenc Brenis. Sello digital del voto aprobatorio:
<<?dp4OxoLzmutÍ)C;9hveZFbQ.MsÁJg5HAkáYy+É(-
nfÑm(5SnséÚÁúúÚC,VJsMn,VO8smU,JúÚs(,CsÁ8Ús(,s]ÚnúSOVD,núÚ8sn,8O8ú,Vú,8
Dr. Luc Villain s,VsOVD,núÚ8s8Á8J,]úO?C,8s(,séSUksXéÚUU,SsSnS?OJSsÓ-
ís,Vsn,8]Á,8úSsSsCSsOVU,JJOBVs(,sCSsnÚñSsX3,ÉOC,OSs:S8úSúnOüsM,n1-s&sMn-í-
scn-sÓÁJsiOCCSOVsjÁ,sÜJúsvasaaeavevasaLav2ÚDñ:í6wVTéÜErWIPX
qÓ1Nü3,[óljG]UúRc¿0BKiS78>> Fecha y hora de emisión del voto: Tue Oct 12
22:21:12 2021. Usted puede verificar la validez del sello digital en
Voto aprobatorio otorgado por: Dra. Diana Sánchez Rangel al trabajo de tesis
aprobatorio: << xMqÜÚsh:uGá6N¿jV-
PaKpgnB+SUíÁyóFmd8bél1L.;2p0?,t)SLÉRRLYs¿A)-
Jurado Dra. Diana Sánchez Rangel ts¿FÚ)pbsARL)0sY)ÉÚL)0s)+LtR,F¿ástRLÚ)tsÚFÚRs¿RsÚ)s¿)F¿ástRLÚ)ÚÉÚAs+RFñYsÚ
)0s)S,bZ)HSLbbs,),t,ñFA,)WVI)s¿)tsÚ+ÉsÚR,),)Y,)F¿bsAAF3¿)0s)Y,)tL4,)Hys1FYsF,)z,Ú
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ÓúQHvcD]A7i[()ÍYoÉZ94zt>> Fecha y hora de emisión del voto: Wed Oct 13 03:12:35
2021. Usted puede verificar la validez del sello digital en https://firmaselectronicas-
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Eliel Ruíz May al trabajo de tesis titulado: Efecto
del uso de portainjertos resistentes en injertos susceptibles de Café (Coffea arabica
L.) en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.).. Nombre
del estudiante: Edgar Couttolenc Brenis. Sello digital del voto aprobatorio:
<<(CA.Éó:H,N19aOwR3qKñ4z]?oÁíMSLDt7bük5¿UG8vÍgqdTówP(-o33-
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Dr. Eliel Ruíz May zPzozgSF3k1ESzPdSP(óuRP)(-
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2ÚñJPJNJÁJáTdÓ-cúÑXinQ;uÜEyWmfFrhBs6[VPlpI)x2+YÚ0Z jé>> Fecha y hora de
emisión del voto: Tue Oct 19 23:37:52 2021. Usted puede verificar la validez del
sello digital en https://firmaselectronicas-posgradoinecol.shinyapps.io/VERIFIC/
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Gabriel Rincón Enríquez al trabajo de tesis
aprobatorio: <<;M9o6UqX¿K78xr)+Y.5HQÚLñy
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Dr. Gabriel Rincón Enríquez NGíq[X9íGXwXqGpqGX9Gp9wpNGíq[X9XAXbGmqwDoGX9sG9CKtc9OC[ttGK9KíKDw
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Fecha y hora de emisión del voto: Thu Oct 14 21:46:22 2021. Usted puede verificar
la validez del sello digital en https://firmaselectronicas-
Voto aprobatorio otorgado por: Dr. Misael Martínez Bolaños al trabajo de tesis
aprobatorio: <<áqGVMQTxUwÓpgDc4E9ÚvtHNk BjOÉJÜ?mXYCAW7[ÍIÁú oóLH-
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Dr. Misael Martínez Bolaños RjRéPú.AkNPR-oP-ÑLpG-IÑyppPL-LHLkAéL-nmh-Pg-HPRújPR.L-L-NL-AgpPééAMg-
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ubí.Ldf,Z2ñ0hF;ozi3RS¿yér(8:aól1eÑs>> Fecha y hora de emisión del voto: Thu Oct
14 14:19:52 2021. Usted puede verificar la validez del sello digital en
3
DECLARACIÓN
Excepto cuando es explícitamente indicado en el texto, el trabajo de investigación

contenido en esta tesis fue efectuado por Edgar Couttolenc Brenis como estudiante de la carrera
de Doctor en Ciencias entre septiembre de 2014 y agosto del 2018, bajo la supervisión del Dr.
Martin Mata Rosas.
Las investigaciones reportadas en esta tesis no han sido utilizadas anteriormente para
obtener otros grados académicos, ni serán utilizadas para tales fines en el futuro.
Candidato: Edgar Couttolenc Brenis
Director de tesis: Martin Mata Rosas
4
Contenido
ÍNDICE DE CUADROS ....................................................................................................6

ÍNDICE DE FIGURAS ......................................................................................................7
RESUMEN........................................................................................................................8
CAPÍTULO 1.....................................................................................................................9
Introducción ..................................................................................................................9
MARCO TEÓRICO .....................................................................................................11
Ciclo biológico de Hemileia vastatrix ......................................................................11
Patosistema roya-café ...........................................................................................13
Mecanismos moleculares de defensa vegetal .......................................................15
Expresión de genes ligados a la respuesta de defensa vegetal a H. vastatrix .......16
Los injertos .............................................................................................................24
Justificación ................................................................................................................29
Preguntas de investigación ........................................................................................30
HIPÓTESIS ................................................................................................................30
OBJETIVOS ...............................................................................................................31
Objetivo general .....................................................................................................31
Objetivos particulares.............................................................................................31
REFERENCIAS ..........................................................................................................32
CAPÍTULO 2: Prehaustorial local resistance to coffee leaf rust in a Mexican cultivar
involves expression of salicylic acid-responsive genes ..................................................39
CAPÍTULO 3 Defense response to Hemileia vastatrix in susceptible grafts onto resistant
rootstock of Coffea arabica .............................................................................................62
CAPÍTULO 4: Cambios en la severidad de la infección de roya en planta injertada de café
arábica. ...........................................................................................................................81
CAPÍTULO 5. DISCUSIÓN GENERAL ...........................................................................91
CAPITULO 6. CONCLUSIONES ....................................................................................97
REFERENCIAS ..........................................................................................................98
5
ÍNDICE DE CUADROS
Capítulo Cuadro Página
Cuadro1. Genes estudiados en diferentes variedades de C.

1 14
arabica durante la respuesta a la infección de H. vastatrix
Table 1. Designed primers for the amplification of CaPR1,

2 CaPR5, CaNBS-LRR, CaNDR1b, CaNPR1, CaUbiE2 and Hv40s- 41
Rib genes used in the expression analyses by qRT-PCR.
Table2. Percentage of uredospores germination, appressoria and

haustoria detection at 24 and 120 hours after H. vastatrix
2 42
inoculation on leaf disks of C. arabica cv. Garnica and cv. Oro
Azteca.
Table 1. Primers designed for genes NBS-LRR, NDR1b, NPR1,

3 PR1, PR5, UbiE2 and CaGAPH, used in the expression analysis 61
for qRT-PCR.
Table 2. Statistical values of fungal structure proliferation in

3 63
inoculated leaves of ungrafted and grafted plants.
Table 3. Values obtained from the Kruskal–Wallis test comparing

3 65
the relative expression of CLR recognition genes in coffee.
6
ÍNDICE DE FIGURAS
Capítulo Figura Página
1 Figura 1. Ciclo biológico de H. vastatrix 9
Figure 1. Scheme showing the preparation of coffee leaf disks

2 41
and the inoculation of H. vastatrix uredospores
2 Figure 2. Cytological analysis of inoculated leaf disks. 46
2 Figure 3 Growth of H. vastatrix on inoculated leaf disks. 47
2 Figure 4 Relative expression of pathogen recognition genes. 47
Figure 5 Relative expression of defense and salicylic acid-

2 48
responsive genes.
Figure 1. Presence of fungal structures. (a) Anchors, (b)

3 66
haustorial mother cells (HMC) and (c) haustoria
Figure 2. Global comparison of the presence of fungal
3 structures (anchors, haustorial mother cells and haustoria) in 67
each of the conditions evaluated
3 Figure 3. Relative expression of the pathogen recognition genes 69
Figure 4. Relative expression of genes associated with the

3 70
salicylic acid pathway
4 Figura 1. Índice de incidencia de H. vastatrix 82
Figura 2. a) Promedio del porcentaje del área foliar dañada por

H. vastatrix. El promedio está estimado por cada hoja dañada
4 83
que se revisó. b) Promedio de pústulas con esporulación en las
hojas dañadas
7
RESUMEN
El café (Coffea arabica L.) es un cultivo de gran importancia económica en México
que ha sido severamente afectado por la roya, enfermedad originada por el hongo biotrófo
Hemileia vastatrix Berk & Br. Nosotros evaluamos el efecto del uso de portainjertos
resistentes en injertos susceptibles de C. arabica L. en respuesta a la infección de H.
vastatrix, para explorar sí la injertación tiene el potencial de contribuir al manejo de este
patógeno induciendo una respuesta de defensa. Para esto, primero se comparó el nivel
de expresión de dos genes de reconocimiento del patógeno (CaLRR y CaNDR1), tres
genes relacionados con el ácido salicílico (CaNPR1, CaPR1 y CaPR5). También se
evaluó la proliferación, mediante cortes histológicos de los discos de hoja, de estructuras
fúngicas en un ensayo de infección local sobre discos de hoja en dos cultivares de C.
arabica; Oro Azteca (OA, resistente) y Garnica (G, susceptible), para identificar su
respuesta a la infección de la roya. A continuación, se hicieron inoculaciones en hojas de
plantas a pie franco e injertadas (injerto/portainjerto) Oro Azteca/ Garnica (OA/G) y
Garnica/ Oro Azteca (G/OA) y se evaluaron los niveles de expresión de los mismos genes
de defensa evaluados en el ensayo de infección local, proliferación de estructura fúngicas
(anclas, células madre haustoriales y haustorios) en la hoja y la aparición de pústulas en
las plantas. Los resultados obtenidos en el ensayo de infección en discos de hoja
mostraron que Oro Azteca presenta una expresión de genes de defensa vegetal a las 72
horas posteriores a la inoculación (hpi). En CaNDR1b el nivel de expresión fue 208.76;
en CaNPR1 fue 23.18 y en CaPR1, fue 8.41) y proliferación de haustorios (8.22 % de
presencia) similar a otros cultivares resistentes a roya. En el ensayo de las plantas
injertadas la respuesta a la infección de a roya en Garnica injertada en Oro Azteca (G/OA)
fue mejor que Garnica a pie franco. En la expresión del gen de reconocimiento CaNDRb1
la combinación de G/OA mostro niveles incluso superiores a las plantas pie franco de Oro
Azteca a las 2, 6, 12 y 48 hpi. En la expresión de los genes relacionados con el ácido
salicílico (CaNPR1, CaPR1 y CaPR5) en las plantas injertadas G/OA también se
observaron niveles de expresión mayores a Oro Azteca piefranco en algunos de los
tiempos de muestreo (CaNPR1: 2, 6, 12, 24, 48, 72 y 96 hpi; CaPR1: 2, 6, 12, 48 y 96
hpi; CaPR5: 2, 6, 12, 48 y 96 hdi). En lo referente a la proliferación de estructuras
fúngicas, presento porcentajes de presencia menores de anclas, células madre
haustoriales y haustorios que Garnica a piefranco. De igual forma no presento diferencias
estadísticas (α=0.05) con respecto a Oro Azteca piefranco y las plantas de Oro Azteca
injertado en Garnica (G/OA) para las anclas y células madre haustoriales. En la
evaluación de los síntomas visibles en las hojas de las plantas, la combinación G/OA
presentó menor índice de incidencia de H. vastatrix y menor severidad de la infección,
medida por el porcentaje de área foliar dañada y número de pústulas con esporulación,
que Garnica pie franco; su comportamiento fue similar a las otras plantas injertadas
(OA/G). Estos resultados indicarían que el portainjerto modifica la respuesta que la planta
tiene a la infección de H. vastatrix, por lo que, el uso de cultivares resistentes a este
patógeno, como Oro Azteca, podrían inducir una disminución de la susceptibilidad de
cultivares susceptibles como lo es Garnica.
8
CAPÍTULO 1
Introducción
El café (Coffea arabica L.) es uno de los principales cultivos que se producen en
las regiones tropicales del mundo (ICO, 2019). En México, en el ciclo agrícola 2019-2020
el café aportó al PIB nacional 298 millones de dólares (SIAP, 2020). A pesar de su
importancia como generador de divisas, las fluctuaciones en el precio del aromático, el
incremento del precio de los insumos y la falta de financiamiento han provocado que el
productor carezca de los recursos necesarios para el mantenimiento y renovación de las
plantaciones. Los cafetales en México han sido severamente afectados por plagas como
la broca, el barrenador del tallo y minador de la hoja; y enfermedades, como la roya, ojo
de gallo y nemátodos (Avelino et al., 2015; 2018).
Anteriormente la roya se distribuía en áreas de cultivo por debajo de los 1000
msnm, sin que se afectaran las plantaciones de café de altura (McCook, 2006). Sin
embargo, ante los cambios climáticos que se han presentado en los últimos 15 años,
aunado a el descuido de las plantaciones por factores socioeconómicos, han surgido
brotes de roya atípicos y de mayor virulencia que han afectado a las plantaciones por
arriba de los 1000 msnm (Cressey, 2013; Avelino et al., 2015; Torres Castillo et al., 2020).
Estos brotes provocaron la disminución de la producción en la región mesoamericana
entre 15 y 30 % (Cressey, 2013; Avelino et al., 2015).
Además del cambio en las condiciones ambientales, un factor a considerar en el
aumento de incidencia de la roya en los cafetales es el uso generalizado de variedades
como: Mundo Novo y Garnica; que se obtuvieron de la cruza del cultivar Borbón con el
cultivar Típica (Krug and Poerck, 1968). Estos cultivares solo poseen el gen de resistencia
9
SH5 por lo que son susceptibles a la raza II de H. vastatrix, que posee el gen de virulencia
V5 (Filho y Domian, 2015). Esta raza es la de mayor presencia en los países cafetaleros,
por lo que se ha promovido el uso de materiales resistentes a ella, generados a partir de
cruzamientos del híbrido Timor (HdT) con otros cultivares (Talhinhas et al., 2017). Entre
los que destacan los Catimores, cruza de HdT CIFC-832/1 y Caturra; Sarchimores, cruza
de HdT CIFC-832/2 y Villa Sarchi; Colombia, cruza de HdT CFC-832/3 y Caturra Amarillo.
En México el Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias
(INIFAP) generó el Catimor Oro Azteca, a partir de unas líneas F5 del cruce HdT CIFC-
832/1 y Caturra entre seleccionada por el Centro de investigación de la roya del café
(CIFC) de Oeiras (Anzueto, 2013). Sin embargo, los productores los consideran de menor
calidad en taza, por su mayor astringencia que los materiales susceptibles (López-García
et al., 2016; González et al., 2019).
Una alternativa para utilizar variedades susceptibles, apreciadas por su calidad en
tasa y rendimiento industrial, es inducir tolerancia a la roya (H. vastatrix) injertándolas en
portainjertos resistentes. Investigaciones recientes han mostrado que ésta práctica tiene
un efecto sobre la respuesta de los injertos a condiciones de estrés debido a factores
bióticos y abióticos (Spiegelman et al., 2013; Goldschmidt, 2014). Se ha identificado que
estas respuestas a estrés están relacionadas con: cambios en la expresión de genes
(Jensen et al., 2012), transferencia horizontal de genes (Fuentes et al., 2014) y activación
de genes silenciados (Kasai et al., 2011). Sin embargo, en café no se tiene información
sobre la interacción portainjerto-injerto. Por lo tanto, es necesario investigar esta
interacción, determinar su efecto sobre la roya e identificar qué genes se expresan.
10
Además de evaluar si el uso de portainjertos resistentes contribuye en la disminución de
la susceptibilidad a H. vastatrix en variedades susceptibles de C. arabica.
MARCO TEÓRICO
Ciclo biológico de Hemileia vastatrix
La roya del café es causada por el hongo H. vastatrix, el cual es un parásito
obligado que afecta las hojas y es específico de las especies del género Coffea. La
enfermedad es visible cuando aparecen manchas cloróticas en el haz de las hojas y en
el envés manchas amarillas o anaranjadas con presencia de un polvo fino amarillo o
naranja debido a la gran cantidad de esporas denominadas urediniosporas (Fig. 1;
Talhinhas et al., 2017).
La germinación de las esporas inicia en presencia de una película de agua libre,
con una temperatura ambiental entre 21 a 25 °C y en condiciones de obscuridad. Bajo
estas condiciones se forman los apresorios sobre el estoma en un lapso de 5.3 a 8.5 h y
con temperaturas óptimas entre 13 y 16 °C. Una vez que se ha formado esta estructura
se inicia el proceso de penetración, el cual requiere un mínimo de 6 h en presencia de
agua libre y dura entre 24 y 48 h. La hifa se introduce a través del estoma, invadiendo en
primera instancia la cámara subestomática, formando dos ramificaciones laterales,
dándole una forma de ancla a la hifa. Cada rama lateral de esta ancla produce un
haustorio que se encarga de extraer de las células subsidiarias, los nutrimentos para el
desarrollo del hongo (Filho y Domian, 2015). El proceso de infección continúa con la
invasión del parénquima esponjoso, parénquima en empalizada y en algunos casos la
epidermis. En esta etapa se forman hifas intercelulares; en un inicio son hifas pioneras,
las cuales dan origen hifas alimenticias y colonizadoras; con una gran cantidad de
11
haustorios intracelulares, en este momento aparecen los primeros síntomas visibles de
la infección, y se le conoce como periodo de incubación (Pi; Talhinhas et al., 2017). A
continuación, algunas hifas infectan la cámara subestomática y forman un agregado de
células esporógeas, de las cuales algunas emergen por el estoma y producen un
esporóforo, la agregación de estas estructuras por estoma es considerada como un soro
o pústula (Avelino y Rivas, 2013). Este periodo entre la germinación y la esporulación se
le conoce como periodo de latencia (Pl). Una vez que inicia la esporulación esta puede
durar hasta 5 meses dependiendo la disponibilidad de nutrientes en la hoja infectada, a
este periodo se le conoce como periodo contagioso o de generación (Avelino y Rivas,
2013; SENASICA, 2019).
Figura 1. Ciclo biológico de H. vastatrix modificado de Talhinhas et al. (2017). (A) Las esporas se fijan al
envés de la hoja. (B) En presencia de agua líquida inician su germinación formando un tubo germinativo y
el apresorio sobre el estoma. (C) La hifa de penetración se introduce a la cámara estomática. (D) Inicia el
proceso de colonización y el desarrollo de las anclas, células madre haustoriales (CMH) y haustorios. (E)
Se forman los esporóforo dando origen a los soros. (F) Se inicia la esporulación.
12
Patosistema roya-café
El patosistema entre la roya (H. vastatrix) y el cafeto (Coffea sp.), se caracteriza
por poseer dos tipos de relaciones de resistencia. La resistencia completa donde un gen
de resistencia de la planta está relacionado con un gen de virulencia del patógeno (Flor,
1971). En el cafeto se conocen nueve genes dominantes de resistencia en las diferentes
especies de café: SH1, SH2, SH4 y SH5 en C. arabica; SH6, SH7, SH8 y SH9 en C.
canephora; y SH3 en C. liberica (Talhinhas et al., 2017). Además, con las técnicas
moleculares actuales, se han identificado tres genes candidatos: SH10, SH11 y SH12
(Barka et al., 2020).
En contraparte H. vastatrix, presenta el mismo número de genes de virulencia (V1-
V9). Las combinaciones de estos genes dan origen a diferentes razas fisiológicas del
parásito y hasta el momento se reconocen 58 razas (Vidal, 2017). En América latina, se
han identificado las razas: I (V2, V5), II (V5), III (V1, V5), VII (V3, V5), X (V1, V4, V5), XIII (V5,
V7), XV (V4, V5), XVI (V1, V2, V3, V4, V5), XVII (V1, V2,V5), XIX (V1, V4), XXII (V5, V6), XXIII
(V1, V2, V4, V5), XXIV (V2, V4, V5), XXV (V2, V5, V6,), XXVII (V2, V5, V6, V7, V9), XXXIII (V5,
V7 o V5, V7, V9) XXXVI (V2, V4, V5, V8) y XXXVII (V2, V5, V6, V7, V9). La raza II es la de
mayor distribución en la región (Rodrigues et al., 1975; Cabral et al., 2009; Gichuru et al.,
2012; Zambolim, 2016). En México, solo se ha detectado la raza II; sin embargo, las razas
I, XXIV y XXXVI han sido detectadas en Centro América (Avelino et al., 2015).
La presencia o ausencia de estos genes de resistencia en la planta y de virulencia
en el patógeno determinan si la interacción será incompatible (resistencia completa) o
compatible (susceptibilidad). Es importante resaltar que no hay ninguna variedad o
especie de café que sea resistente a todas las razas de roya (Eskes, 1982).
13
Por otro lado, está la resistencia incompleta que no se basa en una relación gen a gen,
sino en un mayor número de genes involucrados en los diferentes procesos biológicos
de la planta (fotosíntesis, metabolismos primario y secundario, división celular, entre
otros) (Eskes y Carvalho, 1983). En este caso, la planta hospedera pueden presentar
señales de la infección de H. vastatrix, pero su efecto es menor que en un hospedero
completamente susceptible, debido a que el hongo presenta un desarrollo limitado que
se traduce en una disminución de la producción de esporas o periodos de latencia más
largos (Talhinhas et al., 2017).
A partir del conocimiento que se ha desarrollado sobre la resistencia a la roya, se
han generado híbridos intraespecíficos (C. arabica x C. arabica) o interespecíficos (C.
arabica x C. canephora) para el manejo de este patógeno. El primer híbrido
interespecífico tuvo su origen en un cruzamiento espontáneo entre la variedad Típica de
C. arabica (Tetraploide 2n=4x=44) y Robusta de C. canephora (Diploide 2n=2x=22),
identificada alrededor de 1917 en una plantación de Arábicas en la isla de Timor Oriental
(Talhinhas et al., 2017) y se le identifica como híbrido de Timor (HdT). Es a partir de este
híbrido que se han desarrollado tres líneas: 1) los Catimores, cruza de HdT-1 (CIFC
832/1) y cv. Caturra; 2) Sarchimores, cruza de HdT-2 (CIFC 832/2) y cv. Villa Sarchi, y 3)
Colombia, cruza de HdT-3 (CIFC 1343) y cv. Caturra Amarillo (Anzueto, 2013). En
México, se desarrolló la variedad Oro Azteca perteneciente a los Catimores y liberada
por el INIFAP en 1995 (World Coffee Research, 2019). Es importante destacar que los
genes de resistencia que han sido identificados en las líneas obtenidas del HdT son S H5,
SH6, SH7, SH8 y SH9.
14
Mecanismos moleculares de defensa vegetal
La respuesta de las plantas al ataque de un patógeno comienza con el
reconocimiento del patógeno. Este reconocimiento puede ocurrir extracelularmente
cuando los Patrones Moleculares Asociados al Patógeno (PAMP, por su siglas en inglés
Pathogen-Associated-Molecular-Patterns) son reconocidos por los Receptores de
Reconocimiento de Patrones (PRR), lo que dispara la Inmunidad Activada por Patógenos
(PTI, por sus siglas en inglés, Pattern-Triggered Immunity) (Jones y Dangl, 2006; Dodds
y Rathjen, 2010). Un segundo modo de inmunidad se basa en la identificación de
moléculas de patógenos adaptados (efectores) a nivel intercelular, esto se le conoce
como el mecanismo de Inmunidad Activada por Efectores (ETI, por sus siglas en inglés,
Effector-Triggered Immunity). Aunque ambos mecanismos de defensa generan
respuestas comunes, que incluyen un estallido oxidativo, cambios hormonales y
reprogramación transcripcional (Dodds y Rathjen, 2010), las respuestas inmunes
activadas de ETI son más prolongadas y robustas que las de PTI (Katagiri y Tsuda, 2010).
La PTI es eficaz contra patógenos no adaptados y la ETI contra patógenos
adaptados (Katagiri y Tsuda, 2010). Entre los genes de reconocimiento que se han
identificado en el cafeto, NDR1 está relacionado con la activación temprana de ambos
mecanismos de defensa (Knepper et al., 2011). Su función en PTI se ha descrito como
indispensable para la activación de la vía de señalización de la proteína quinasa activada
por mitógenos (MAPK) (Knepper et al., 2011). La señalización de MAPK durante la ETI
está relacionada con la activación de algunos de los genes CC-NB-LRR que codifican la
familia de proteínas de repetición rica en leucina (Dodds and Rathjen, 2010; Dubey and
15
Singh, 2018). Esta familia también se le conoce como los genes R de resistencia (McHale
et al., 2006; Barka et al., 2020).
Tanto la PTI como la ETI activan las respuestas defensivas de las plantas
relacionadas con las vías de señalización del ácido salicílico (SA) y del ácido jasmónico
(JA) / etileno (ET). La vía de señalización de SA es la más importante en la respuesta
inmune a patógenos biotróficos, como H. vastatrix. Destacan de la vía de señalización de
SA el gen NPR1 como regulador de la expresión de las proteínas relacionadas con
patogénesis (PR) (Barsalobres-Cavallari et al., 2013), así como, los genes PR1 y PR5,
pertenecientes a la familia de genes PR, de éstos dos, se ha identificado que la proteína
PR1 tiene actividad antimicrobiana, principalmente en respuesta a la infección por
hongos, además se ha observado que también participa en respuesta a estrés abiótico y
en el desarrollo de las plantas (Jain et al., 2018). La familia de proteínas PR1 tiene
incrustada en su estructura al péptido señalizador CAPE1 el cual no induce la vía de
señalización de inmunidad activada PTI, si no que es una vía independiente de
señalización (Breen et al., 2017).
Expresión de genes ligados a la respuesta de defensa vegetal a H. vastatrix
Además de la identificación de los genes de resistencia, con la ayuda de las
ciencias ómicas, se han realizado trabajos para identificar los procesos de regulación y
expresión de genes de defensa vegetal en respuesta a la infección H. vastatrix (Cuadro
1). Ganesh et al. (2006) evaluaron la expresión los genes CaWRKY, CaR111 y CaNDR1
en la variedad Caturra al ser inoculado con una cepa compatible (Raza II) y una
incompatible (Raza VI). La expresión de CaWRKY fue mayor entre las 12 y 16 horas
posteriores a la inoculación (hpi) en el caso de la interacción incompatible y a las 24 hpi

16
en el caso de la interacción compatible, la familia de genes WRKY participa en la
señalización y regulación de respuestas a estrés en las plantas (Ramiro et al., 2010).
Para el gen CaR111 observaron que existía una mayor expresión relativa entre la
interacción incompatible y la compatible a las 12-16 hpi. Este gen codifica para una
proteína desconocida (Ganesh et al., 2006). En el caso del gen CaNDR1 no se pudo
observar expresión diferencial entre ambas condiciones. Este gen es homólogo del NDR1
de Arabidopsis, el cual activa proteínas de defensa no específicas (Knepper et al., 2011).
Al evaluar la expresión de los genes relacionados con la defensa vegetal
CaWRKY1, CaR111, CaGT, CaRLK, CaPR1b y CaPR10 mediante RT-qPCR, en los
cultivar Tupi IAC1669-33 (incompatible) y el cultivar Catuai IAC81 (compatible) durante
las etapas primarias (18, 21, y 24 hpi) y secundarias (36, 39, 42 y 45 hpi) de la formación
haustorial de H. vastatrix Raza II se observó que, durante la etapa primaria, no se
presentó una expresión diferencial entre la condición incompatible y la compatible. Sin
embargo, en la etapa secundaria, se observó que los genes CaPR1b (QR= 38) y CaPR10
(QR= 86) estaban sobre expresados en la interacción incompatible, mientras que los
genes CaWRKY1(QR= 14) y CaRLK (QR= 3) estaban sobre expresados en la interacción
compatible (Ramiro et al., 2009). Estos resultados indican una mayor respuesta
especializada de las variedades resistentes dado que los genes de tipo PR (Proteínas
relacionadas con patogénesis), son los que codifican para la formación de proteínas
relacionadas con las defensas de las plantas (Jain et al., 2018).
17
Cuadro1. Genes estudiados en diferentes variedades de C. arabica durante la respuesta a la infección de H. vastatrix
Gen Función Referencia
Fernandez et al. (2004); Ganesh et

CaNDR1 Gen de reconocimiento de patógenos no especifico
al. (2006); Cacas et al. (2011)
Familia de genes involucrados en la respuesta a estrés biótico y
abiótico. Se han identificado que solo cinco de los 22 que se tienen Ganesh et al. (2006); Ramiro et al.
CaWRKY
registrados en C. arabica tienen importancia en la respuesta a la (2010); Petitot et al. (2013)
infección de H. vastatrix como factores de transcripción
CaR111 Codifica para una proteína de función desconocida Ganesh et al. (2006)
Participa en la señalización de la ruta del ácido salicílico en la Ramiro et al. (2007); Barsalobres-
CaNPR1
activación de la expresión de los genes PR Cavallari et al. (2013)
Codifica para una proteína antifúngica y forma parte de la ruta del ácido Ramiro et al. (2007; 2009); Diniz et
CaPR1b
salicílico al. (2012)
Codifica para la enzima ciclasa de óxido de aleno la cual participa en la
CaAOS Guzzo et al. (2009)
ruta del ácido jasmónico
CaGLU Codifica para la síntesis de proteína antimicrobiana β-1,3-glucanasa Guzzo et al. (2009)
Codifica para una proteína de la familia de la ubiquitina E3 ligasa, con
CaRING-Finger Guzzo et al. (2009)
funciones de señalización en la respuesta de defensa vegetal
Transportador que media la captación de la fitohormona ABA en las
CaABC Guzzo et al. (2009)
células vegetales
Codifica para la enzima lipoxigenasa, involucrada en la producción de
Guzzo et al. (2009); Diniz et al.
CaLOX13 hidroperóxidos lipídicos y la biosíntesis de oxilipinas. Está relacionado
(2012)
con la respuesta de hipersensibilidad (RH).
Gen de reconocimiento de patógenos, son una familia de genes
Guzzo et al. (2009); Diola et al.
CaNBS-LRR identificados como genes tipo R y son los asociados a la resistencia
(2013)
vertical.
CaPR10 Codifica para una proteína tipo ribonucleasa Diniz et al. (2012)
18
Diniz et al. (2012); Diola et al.
Codifica para un receptor de quinasas en el proceso de
CaRLK (2013); Florez et al. (2017); Almeida
reconocimiento de patógenos
et al. (2021)
Codifica para la enzima sintasa de calcona, la cual es clave en la
CaCHS Diniz et al. (2012)
síntesis de flavonoides e isoflavonoides
Codifica para la enzima amonio fenilalanina liasa que pertenece a la
CaPAL Diniz et al. (2012)
ruta de los fenilpropanoides
Codifica para la enzima glicosiltransferasa y participa en la ruta de
CaGT Diniz et al. (2012)
ácido salicílico
CaEREB2 Factor transcripcional y participa en la activación de los genes PR Diola et al. (2013)
Factor transcripcional en la regulación de la resistencia sistémica
CabZIP Diola et al. (2013)
adquirida (RSA)
CaPR5 Codifica para una proteína de tipo taumatina Diola et al. (2013)
CaRGH1A Gen de resistencia análogo 1A Diola et al. (2013)
CaBerg1 Gen de resistencia receptor elicitor de eta-glucano Diola et al. (2013)
CaPto-like Gen de resistencia codifica para Pto R similar a la proteína quinasa Diola et al. (2013)
CaMEK Gen que codifica para proteínas quinasa activado por mitógeno Diola et al. (2013)
CaMAPK3 Gen que codifica para proteínas quinasa activado por mitógeno Diola et al. (2013)
CaMAPK2 Gen que codifica para proteínas quinasa activado por mitógeno Diola et al. (2013)
CaCDPK Codifica para la proteína quinasa dependiente de calcio Diola et al. (2013)
19
CaCBP Codifica para una proteína de la familia de la calmodulina Diola et al. (2013)
CaPOX Codifica para una enzima peroxidasa Diola et al. (2013)
CaGR Codifica para la enzima glutatión reductasa Diola et al. (2013)
CaCytP450 Codifica enzimas dependientes del citocromo P450 Diola et al. (2013)
CaUbi-E2 Codifica para la enzima E2 conjugadora de ubiquitina Diola et al. (2013)

Codifica para una enzima similar a la S-adenosil-L-metionina
CaSAMs1 Diola et al. (2013)
sintetasa
Gen asociado a la senescencia y codifica para la enzima peptidasa
CaSAG12 Diola et al. (2013)
de tipo cisteína
Codifica para la enzima ACC- oxidasa que participa en la biosíntesis
CaAco1 Diola et al. (2013)
del etileno
CaGPX Codifica para la enzima glutatión peroxidasa Diola et al. (2013)
CaPRP Codifica para una probable proteína de respuesta a enfermedades Florez et al. (2017)
Codifica para la proteína básica-hélice-bucle-hélice, que es un
CabHLH Florez et al. (2017)
factor de transcripción en la ruta del ácido jasmónico.
CaEFR Codifica para el factor de transcripción sensible al etileno Florez et al. (2017)
Codifica para una proteína que funciona como interruptor que
CaNB-ARC Florez et al. (2017)
controla la activación de las proteínas R
Codifica para la enzima premnaspiridiona oxigenasa que participa
CaPrenna Florez et al. (2017)
en la síntesis de una fitoalexinas con propiedades antifúngicas
20
Codifica para la proteína serina treonina quinasa. Relacionado con el

CaRLSksd1 Florez et al. (2017)
reconocimiento de patogénesis
CaR1A-6 Codifica para una posible proteína de resistencia a patógenos Florez et al. (2017)
Codifica para una proteína de la familia de la ubiquitina E3 ligasa, en la regulación
CaPUB24 Florez et al. (2017)
de los genes RLK
CaRGA1 Codifica para una posible proteína de resistencia a patógenos Florez et al. (2017)
Codifica para la proteína akirina que es un promotor de la resistencia sistémica
CaAnky Florez et al. (2017)
adquirida (RSA)
CaPO Proteína relacionada con la acumulación de compuestos lignínicos Florez et al. (2017)
Codifica para una probable familia de proteínas relacionadas con la respuesta y
CaDDR Florez et al. (2017)
resistencia a enfermedades
Codifica para una proteína ligada a las auxinas, con actividad de superóxido
CaABP20 Barka et al. (2017)
dismutasa
Participa en la señalización para la proteólisis de la proteína F-Box mediada por
CaSLY1_12 Barka et al. (2017)
ácido giberélico (AG)
CaKAPP Codifica para la enzima fosfatasa asociada a quinasa Barka et al. (2017)
Codifica para la proteína que responde a las auxinas IAA9 que es un factor de
CaIAA9 Barka et al. (2017)
transcripción que reprime los genes de respuesta temprana a las auxinas
Codifica para una proteína de 12.5 kDa reprimida por auxina, que participa en la
CaAURP Barka et al. (2017)
señalización de la ruta de las auxinas
CaAc-like
Codifica para una transposasa tipo Ac similar a la histona H1 Barka et al. (2017)
transposase
Participa en el reconocimiento de patógenos mediante la transducción de la señal,
CaNIK1 Barka et al. (2017)
principalmente virus.
21
Diniz et al. (2012), evaluaron la expresión de los genes CaRLK, CaWRKY1,
CaPAL, CaCHS, CaLOX13, CaGT, CaPR1b y CaPR10, a las 6, 9, 12, 18, 21 y 24 hpi en
plantas del híbrido de Timor HDT 832/2 (Híbrido interespecífico C. canephora x C.
arabica) infectadas con la Raza II de H. vastatrix. Este estudio mostró que existen dos
picos de activación de los genes estudiados. El primero durante la diferenciación del
apresorio y la penetración de la hifa, entre las 6-12 hpi, y el segundo cuando se da la
formación del ancla y la diferenciación de la célula madre haustorial, entre las 21 y 24
hpi. Por lo que, el proceso de defensa ante el patógeno se podría basar en restringir la
formación de la célula madre haustorial. Además, muestran que los mecanismos de
defensa se activan en dos etapas; la primera cuando la planta detecta la formación del
apresorio y la segunda con la formación de las estructuras pospenetración (hifa de
penetración, ancla, CMH y haustorios).
Diola et al. (2013) estudiaron la expresión de genes a las 24 hpi y 72 hpi en hojas
infectadas con H. vastatrix Raza II en cinco genotipos resistentes y cinco susceptibles de
plantas F2 de la cruza entre un Híbrido de Timor (UFV 427-15) y el cv. Catuai Amarillo
(IAC 30). En los genotipos resistentes y durante las 24 hpi, los genes que mostraron
mayor expresión son factores transcripcionales (EREB1 y bZIP), genes de resistencia
(NBS-LRR, RGH1A, RLK, Berg1 y Pto-like), homólogos de quinasas (MEK, MAPK3,
MAPK2 y CDPK) y proteínas de señalización de la calmodulina (CBP). A las 72 hpi, los
genes que mostraron mayor expresión fueron los relacionados con las proteínas de
respuesta de defensa (PR5).
De igual forma se han realizado estudios enfocados en conocer cuáles genes de
H. vastatrix se expresan durante el inició de la infección del hongo. Fernandez et al.
22
(2012) realizaron la secuenciación de genes expresados de C. arabica y H. vastatrix. El
estudio destacó la importancia de RTP, HESP379 y HESP-C49, por su posible
participación como efectores en el proceso de colonización biotrófica.
Vieira et al. (2012) observaron la expresión diferencial de los genes CD1, CD2,
Gpα, MAPK, Asp-AT, HXT, MAD, INV, AAT1-2, AAT3 y RTP1 mediante qPCR-RT en la
Raza II y la Raza XIV de H. vastatrix. Al inocular plantas de C. arabica de la variedad
Caturra y Matari. El desarrollo de patógeno se monitoreó a las 18 hdi, y a 1, 2, 3, 7, 14 y
21 días posteriores a la inoculación (dpi). Este trabajo destaca la actividad de los genes
CD1, CD2 y Gpα, que están involucrados en el proceso de reconocimiento entre la planta
y el patógeno al inicio de la infección. Otro gen importante es el RTP1, vinculado con el
establecimiento y mantenimiento del proceso de biotrofía, este es un gen que comparte
con otras royas. Además, el gen MAPK mostró una expresión diferencial entre las dos
razas por lo que este podría estar ligado a la especificidad de la interacción. De igual
forma encontraron ortólogos con respecto a otras especies de roya en dos
transportadores de aminoácidos (AAT1-2 y AAT3), una invertasa (INV), un transportador
de hexosas (HXT) y una manitol-deshidrogenasa (MAD), lo que podría indicar que el
mecanismo de infección en este grupo de patógenos se ha conservado desde linajes más
antiguos.
Otro enfoque han sido los estudios proteínicos que han permitido identificar las
proteínas de C. arabica presentes en las primeras etapas de la infección. Hoyos-Carbajal
et al. (2004) aislaron compuestos proteicos de bajo peso molecular en las primeras horas
después de la inoculación (8 y 12) en interacciones compatibles e incompatibles. Hallaron
que compuestos proteicos entre 30 y 39 kDa son los de mayor abundancia en las plantas
23
resistentes. Sin embargo, señalan que los compuestos de bajo peso molecular son
específicos de procesos de resistencia, por lo que destacaron la presencia de 14 kDa.
Guerra-Guimarães et al. (2015) realizaron un estudio proteómico en el fluido apoplástico
de hojas de C. arabica para identificar posibles biomarcadores de resistencia a Hemileia
vastatrix. Ellos hallaron que existen dos fases en el proceso de respuesta a la infección,
24-48 hpi nombrada como inicial o basal y la tardía o específica 72-96 hpi. Al hacer el
análisis de muestras tomadas en cada uno de esos periodos encontraron una marcada
diferencia entre los materiales susceptibles y los resistentes. En el periodo de 72-96 hpi
encontraron que los materiales resistentes tienen un alto contenido de proteínas
hidrolíticas (ej. beta-xyloxidasa, alpha-arabinofuranosidasa, quitinasas y glucanasas,
pectin metilesterasa, ácido fosfatasa purpura y reticulina oxidasa) y de proteólisis
(subtilasas y serina carboxylasa). Este último grupo de enzimas están relacionadas en
procesos de defensa contra patógenos.
Los injertos
La injertación ha sido una práctica común en la agricultura como una forma de
propagación vegetativa, la cual consiste en colocar un órgano (yema apical, lateral, tallo)
de una planta (injerto), sobre el sistema radicular de otra llamado portainjerto
(Goldschmidt, 2014). Esta práctica se ha utilizado tradicionalmente para inducir
resistencia a plagas o enfermedades, cambiar la arquitectura de los árboles, proporcionar
tolerancia a condiciones ambientales adversas, así como para incrementar el vigor y el
rendimiento (Jensen et al., 2003; Gil-Izquierdo et al., 2004; King et al., 2008; Schwarz et
al., 2010; Huang et al., 2011). En años recientes se han empezado a realizar
investigaciones centradas en la interacción portainjerto-injerto, con el objetivo de

24
entender los mecanismos que operan a nivel fisiológico, bioquímico y genético y sus
efectos en la capacidad de respuesta de las plantas ante estrés biótico y abiótico
(Goldschmidt, 2014).
Se ha logrado identificar el transporte de macromoléculas como el mARN,
proteínas y sobre todo miARN a través de la unión del portainjerto y el injerto (Cookson
et al., 2014; Yang et al., 2015; Zhang et al., 2016; Tsaballa et al., 2021). Incluso se ha
observado el flujo de mitocondrias y otros organelos a través de las células de la unión
del injerto (Fuentes et al., 2014; Gurdon et al., 2016). Por lo que, entender el rol que este
intercambio de macro moléculas e incluso organelos, tienen en procesos de regulación
genética y su efecto en la expresión de genes silenciados o ausentes en las plantas
injertadas permitirá el desarrollo de plantas mejor adaptadas a diferentes condiciones de
estrés (Spiegelman et al., 2013; Goldschmidt, 2014; Gautier et al., 2019).
En el caso del estrés biótico provocado por patógenos se ha observado que el uso
de portainjertos resistentes influyen en la respuesta de los injertos a estos patógenos
(Tsaballa et al., 2021). Por ejemplo, en frutales existen trabajos con manzana (Malus
pumila) cv. Gala, donde se observaron cambios en la severidad de la infección de Erwinia
amylovora relacionados con el cultivar del portainjerto, se redujo en un 30 % el tamaño
del daño en los brotes de la plantas con el portainjerto resistentes al tizón (Jensen et al.,
2003; 2012). Además de que se registró una expresión diferencial en el porcentaje de
genes relacionados con la fotosíntesis (11 %), transcripción/traslación (26 %), estrés
(13 %), división celular (7 %) y transducción (5 %) de la señal de genes relacionado con
el portainjerto (M.7 EMLA resistente y M.9 T337, susceptible). Otro ejemplo es el del
cultivar Sonora de almendra (Prunus dulcis), donde se registró que el grado de severidad
25
de la infección por Xylella fastidiosa estaba relacionado con el portainjerto, ya que las
plantas donde se utilizó en el portainjerto susceptible a esta enfermedad presentó hasta
un 50 % mas en el nivel de severidad de la infección (Krugner y Ledbetter, 2016).
En hortalizas también se han reportado resultados similares. En chile dulce el
cultivar Totál (Capsicum annuum) al ser injertado sobre cultivar Szentesi (C. annuum var.
cerasiforme), mostró mayor tolerancia la cenicilla. En este caso los niveles de expresión
de los genes CaPR-1 y CaPR-2 en plantas injertadas eran similares a las plantas a pie
franco de la variedad resistente, en ambas condiciones al inocular con el patógeno el
nivel de expresión de los genes fue inferior a uno (Albert et al., 2017). Otra hortaliza en
la cual se demostró que el portainjerto influía en la respuesta a un patógeno foliar fueron
las cucurbitáceas. Gu et al. (2008) observaron que existe una disminución del índice de
severidad del moho suave de la hoja (Pseudoperonospora cubensis) en pepino (Cucumis
sativus) injertado sobre chilacayote (Cucurbita ficifolia), ya que las plantas injertadas
registraron un índice de 41.3 y sin injertar fue de 51.5.
La influencia del portainjerto en la respuesta del injerto ante estrés biótico no solo
se ha observado contra patógenos, también se ha documentado un comportamiento
similar en el caso del ataque de artrópodos. Al usar la naranja agria (Citrus aurantium)
como porta injerto de mandarina (C. clementina), disminuyó la presencia de síntomas por
el ataque del ácaro Tetranychus urticae en comparación de las plantas injertadas en la
variedad Cleopatra (C. unshio). Además, se encontró que existía una expresión
diferencial del gen GLR, involucrado en la señalización de respuesta al daño en las hojas,
dependiendo el portainjerto usado (Agut et al., 2016). También se ha observado que el
uso del fresno de manchuria (Fraxinus mandshurica), resistente al ataque del barrenador
26
del floema Agrilus planipennis, al ser usado como portainjerto se mostró una reducción
significativa del número de hembras, número de huevos y huevos por hembra en los
injertos susceptibles de fresno verde (Fraxinus pennsylvanica). Lo que puede indicar que
con el uso de un portainjerto resistente a A. planipennis se disminuye la susceptibilidad
del fresno verde ante el barrenado del floema (Stack et al., 2019).
En café se han hecho estudios sobre el uso de portainjertos para tolerar el ataque
de nemátodos, utilizando como portainjerto otras especies (C. canephora y C. excelsa),
ya que se ha demostrado que el uso de estos es tan efectivo como la aplicación de
nematicidas, reduciendo la mortalidad, manteniendo bajos niveles de infestación y sin
que se afecte el rendimiento y la calidad del café (Villain et al., 2000). Además, el uso de
portainjertos tolerantes a nemátodos en combinación con micorrizas incrementa la
supervivencia hasta un 100 % y el crecimiento de las plantas, y disminuye la densidad
poblacional de algunas especies de nemátodos, en el caso de Meloidogyne incognita 43
individuos y en Pratylenchus coffeae 173 individuos por 100 g de suelo, lo que representa
una disminución de casi el 50 % con respecto a las plantas sin injertar (Pham et al., 2020).
Myers et al. (2020) observaron que el uso de portainjertos de las variedades
Fukonaga y Arnoldiana (C. liberica) con injertos de Kona Típica (C. arabica) permitió
incrementar significativamente la supervivencia (> 90 %) ante el ataque del nemátodo
Meloidogyne konaensis así como incrementar la cosecha de café (10 kg/árbol) en
comparación con la plantas a pie franco de Kona Típica (supervivencia 19%, rendimiento
0.1 kg/árbol). En México, también se ha observado que el uso de portainjertos de robusta
(C. canephora) incrementa el rendimiento de los cafetos en plantas con injertos de
arábicos hasta en un 60 % en sitios donde existe una presencia abundante de nemátodos
27
(López-García y Cruz-Castillo, 2019). Por otro lado, también se ha demostrado que si no
se hace una selección adecuada de los cultivares usados como portainjerto, las plantas
injertadas presentan problemas de incompatibilidad injerto/portainjerto, disminución del
rendimiento, cambios en la calidad del grano, entre otros, si no se hace una selección
adecuada de los cultivares usados como portainjerto. Por ejemplo, Bertrand et al. (2001)
al evaluar el comportamiento C. canephora, C. liberica y C. dewevri como portainjertos
en injertos de las variedades Caturra y Catimor de C. arabica observaron mayor
mortalidad, menor rendimiento y menor puntación en la evaluación del aroma en las
plantas de Caturra en portainjertos de C. liberica, mortalidad 21.2 % y puntuación del
aroma 2.53, y C. dewevrei, mortalidad 20.7 % y puntación del aroma 2.7, en comparación
con el uso de C. canephora, mortalidad 6 % y aroma 3.20..
Los portainjertos también han sido utilizados para mejorar la respuesta de los
cafetos a condiciones de sequía. Silva et al. (2018) encontraron en clones de café
robusta, tolerantes y susceptibles a sequía, que las plantas donde la combinación era de
un portainjerto tolerante y un injerto susceptible, la respuesta de la planta era similar a la
presentada por una a pie franco del clon tolerante, ya que tanto las plantas a pie franco
del clon tolerante como las injertadas del clon susceptible sobre el tolerante alcanzaron
un potencial de presión en xilema de -3 MPa a los 25 días, en cambio el clon susceptible
los alcanzo a los 18 días . También se observó un incremento del ácido abscísico en las
hojas del injerto similar a las concentraciones presentadas en las plantas tolerantes (>
600 ng·ml-1 de ácido abscísico). Patil et al. (2019), demostraron que en la respuesta
fisiológica a la sequía de las variedades Sln.10, S.4202 y S.795 de C. arabica fue superior
cuando se injertaron en las variedades Sln.11 y Sln.9 que a pie franco. Entre los cambios
28
bioquímicos que observaron destacan el aumento en contenido de cera epicuticular,
acumulación de prolina libre, la actividad de la enzima nitrato reductasa, contenido de
fenoles, acumulación de carbohidratos y niveles clorofila b. Además, del incremento en
los parámetros de: tasa fotosintética, tasa de respiración, eficiencia bioxidativa, eficiencia
instantánea del uso de agua y eficiencia del mesófilo, mostraron valores que indican una
mejor respuesta a condiciones de sequía en las plantas injertadas.
En cuanto al efecto del portainjerto en la calidad y características organolépticas
de los granos, los trabajos realizados muestran que si existen cambios en cuanto a la
calidad física de los granos y los atributos organolépticos del café. Por ejemplo; González
et al. (2016) encontraron que en las variedades Colombia BC, Colombia BV, Pa, Garnica
Pacamara, Costa Rica 95, Garnica F5 y Oro Azteca de C. arabica la calidad física del
grano y las características organolépticas era mejor en plantas sembradas a pie franco
que cuando estas variedades eran injertadas en C. canephora. Otro ejemplo es el trabajo
de Prawoto y Yuliasmara (2013), que observaron que se incrementaban los puntajes de
las características organolépticas de cuerpo, astringencia y amargor la usar C. excelsa
como portainjerto de clones de C. canephora, y en cambio la fragancia y el aroma
disminuía. Esto muestra la importancia de seleccionar adecuadamente los portainjertos,
con la finalidad de no afectar la calidad y características de los granos de café.
Justificación
H. vastatrix representa uno de los principales problemas en la producción de café
por lo que la utilización de variedades resistentes es hasta el momento, la mejor manera
de disminuir los efectos de este patógeno. Pero estas carecen de la aceptación por parte
de los productores y, algunas de ellas están perdiendo resistencia ante la aparición de
29
nuevas razas de roya. Una alternativa puede ser combinar el uso de variedades
resistentes de café con prácticas que puedan inducir cambios en la respuesta al ataque
de patógenos foliares. De estas prácticas, el uso de portainjertos resistentes podría tener
el potencial de ofrecer a los productores la alternativa de conservar los cultivares
susceptibles de alta calidad injertados en cultivares resistentes, ya que se ha observado
en otros cultivos que existen cambios en la respuesta contra las enfermedades
relacionados con el tipo de portainjerto utilizado. Por lo que, en el caso del café
estudiamos los cambios inducidos por el de portainjerto sobre los cinco genes de defensa
vegetal de C. arabica en respuesta a H vastatrix.
Preguntas de investigación
1. ¿Existe una expresión diferencial de genes relacionados con la respuesta a
enfermedades en plantas injertadas y no injertadas de las variedades de C. arabica
Oro Azteca y Garnica, durante las primeras etapas de la infección de roya (H.
vastatrix Berk & Br.)?
2. ¿Qué genes se expresan diferencialmente entre las plantas injertadas y no injertadas
de las variedades de C. arabica Oro Azteca y Garnica, durante las primeras etapas
de la infección de roya (H. vastatrix Berk & Br.)?
3. ¿Cuál es el efecto de esta expresión diferencial en la severidad del ataque de la roya
en plantas injertadas de las variedades de C. arabica var. Oro Azteca y Garnica?
HIPÓTESIS
El portainjerto utilizado en los cafetos modifica la expresión de los genes relacionados
con la respuesta al ataque de patógenos. Este cambio en la expresión de los genes de
defensa vegetal permitirá que el uso de variedades resistentes de café (Coffea sp.) a la
30
roya (H. vastatrix) como portainjertos disminuirán los efectos de la infección en los injertos
susceptibles.
OBJETIVOS
Objetivo general
Determinar cambios en la expresión diferencial de genes relacionados con mecanismos
de defensa a enfermedades en plantas injertadas y no injertadas de Coffea arabica,
durante las primeras etapas de la infección de Hemileia vastatrix
Objetivos particulares
1. Evaluar la expresión de genes relacionados con mecanismos de defensa vegetal
durante el proceso de infección en cultivares resistentes y susceptibles de Coffea
arabica en respuesta a Hemileia vastatrix durante sus primeras etapas.
2. Analizar los cambios de expresión en genes de defensa vegetal durante las
primeras etapas de la infección de Hemileia vastatrix en plantas injertadas y no
injertadas, contrastando un cultivar resistente y uno susceptible de Coffea
arabica.
3. Valorar cambios en la incidencia y severidad de la infección de Hemileia vastatrix
en plantas injertadas y no injertadas, contrastando un genotipo resistente y uno
susceptible de Coffea arabica.
31
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CAPÍTULO 2: Prehaustorial local resistance to coffee leaf rust in a Mexican
cultivar involves expression of salicylic acid-responsive genes
En este capítulo se presentan los resultados de la evaluación de la expresión de
genes relacionados con mecanismos de defensa vegetal durante el proceso de
colonización en cultivares resistentes y susceptibles de C. arabica en respuesta a la
infección de Hemileia vastatrix en el inicio de la infección. Para lo que se seleccionaron
dos cultivares mexicanos Oro Azteca y Garnica. Oro Azteca es un Catimor perteneciente
la cruza obtenida HdT CIFC 832/1 y cv. Caturra por lo que se considero resistente a H.
vastatrix y Garnica es resultado de la cruza de Caturra Amarillo con Mundo Novo
considerado susceptible.
Para esta evaluación se utilizaron uredósporas de H. vastatrix obtenidas de
plantas infectadas en las zonas de monitoreo de epidemiológico de este patógeno en
Huatusco, Veracruz, donde solo se ha reportado la presencia de la raza II1. El estudio se
realizó en discos de hojas de los cultivares seleccionados, midiendo el desarrollo del
patógeno y la expresión algunos genes de defensa durante las primeras etapas de la
infección, ya que se ha observado que los cultivares resistentes se diferencian de los
susceptibles desde la etapa prehaustorial23. El desarrollo del hongo se evaluó contando
las esporas germinadas y apresorios en impresiones de barniz de uñas del envés de la
hoja a las 24 y 120 hpi, y los haustorios en cortes transversales del tejido foliar a las 120
1
SENASICA, 2019. Roya del cafeto (Hemileia vastatrix Berkeley & Broome)., Ficha Técnica. Dirección General de Sanidad Vegetal -Programa de
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39
hpi. Para el análisis de la expresión de genes de defensa mediante qRT-PCR se
seleccionaron dos genes de reconocimiento de patogénesis, CaNBS-LRR vinculado
directamente al grupo de genes R vinculados a la resistencia gen a gen y CaNDR1, que
está catalogado como un gen no especifico a una raza. Además de los genes CaNPR1,
CaPR1 y CaPR5, tres genes asociados con la vía relacionada con el ácido salicílico (SA)
considerada de mayor importancia en la respuesta al ataque de hongos biotróficos como
la roya45. La expresión se evaluó a las 24 y 72 hpi.
Como resultados, obtuvimos que en el cv. Oro Azteca la proliferación de haustorios
fue significativamente menor al del cv. Garnica, con un 8.2 % y un 53.3 %
respectivamente, lo que indica una mejor respuesta a la infección por la roya. En cuanto
a la expresión de genes, Oro Azteca presentó una mayor expresión estadísticamente
significativa (p < 0.0001)a las 72 hpi en el gen de reconocimiento no específico de raza
CaNDR1 (QR=208.76), así como los genes asociados con SA, CaNPR1 (QR=23.18) y
CaPR1 (QR=8.41) que el cultivar Garnica; CaNDR1 (QR=32.73), CaNPR1 (QR=1.17) y
CaPR1 (QR=3.51). Nuestros resultados sugieren que los mecanismos de defensa de Oro
Azteca podrían implicar el reconocimiento temprano de CLR por CaNDR1 disparando el
mecanismo de defensa vegetal PTI, por el nivel de expresión mostrado a las 72 hpi.
Además, la expresión de CaNPR1 indicaría que el ácido salicílico juega un rol importante
en la respuesta inmunológica a la roya induciendo una resistencia sistémica adquirida
(RSA).
4
Dodds, P.N., Rathjen, J.P., 2010. Plant immunity: towards an integrated view of plant–pathogen interactions. Nat. Rev. Genet. 11, 539–548.
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CAPÍTULO 3 Defense response to Hemileia vastatrix in susceptible grafts onto
resistant rootstock of Coffea arabica
En este capítulo analizamos los cambios de expresión en genes de defensa
vegetal durante las primeras etapas de la infección de H. vastatrix en plantas injertadas
y no injertadas, contrastando el cultivar resistente Oro Azteca y el susceptible Garnica.
Usamos plantas no injertadas de Oro Azteca (cultivar resistente) y Garnica (cultivar
susceptible), y plantas injertadas, combinando tanto como patrón como injerto (Garnica /
Oro Azteca y Oro Azteca / Garnica).
Todas las plantas fueron inoculadas con uredósporas de H. vastatrix plantas
infectadas en las zonas de monitoreo de epidemiológico de este patógeno en Huatusco,
Veracruz, donde solo se ha reportado la presencia de la raza II61. Para evaluar el efecto
que tiene el portainjerto en la infección de la roya en la planta injertadas, cuantificamos
el desarrollo de estructuras fúngicas en el tejido foliar de las plantas inoculadas y
mediante la técnica de qRT-PCR determinamos la expresión relativa de dos genes de
reconocimiento de patogénesis (CaNDR1 y CaNBS-LRR) y tres genes asociados con la
vía del ácido salicílico (SA) (CaNPR1, CaPR1 y CaPR5).
En la cuantificación de estructuras fúngicas observamos que Garnica injertado en
Oro Azteca la presencia de las estructuras fúngicas; anclas (1.59 %), CMH (0.3 %) y
haustorios (12.88 %) fueron significativamente menores que en las plantas de Garnica a
pie franco, 18.4 %, 1 % y 22.13 % respectivamente. En cuanto a la expresión de genes
relacionados con la defensa, el gen de reconocimiento CaNDRb1 en la combinación de
1 6
SENASICA, 2019. Roya del cafeto (Hemileia vastatrix Berkeley & Broome)., Ficha Técnica. Dirección General de Sanidad Vegetal -Programa de
Vigilancia Epidemiológica Fitosanitaria, Ciudad de México, México.
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Garnica/Oro Azteca mostro niveles de expresión incluso superiores a las plantas pie
franco de Oro Azteca a las 2, 6, 12 y 48 hpi. Un comportamiento similar se presentó en
los genes relacionados con el ácido salicílico donde las plantas injertadas Garnica/Oro
Azteca registraron niveles de expresión mayores que las plantas a piefranco (CaNPR1:
2, 6, 12, 24, 48, 72 y 96 hpi; CaPR1: 2, 6, 12, 48 y 96 hpi; CaPR5: 2, 6, 12, 48 y 96 hdi).
Nuestros resultados indican que el portainjerto tiene efecto en la respuesta de defensa a
la roya por lo que, él uso de variedades resistentes a la roya podría ser una alternativa al
manejo de este patógeno para utilizar las variedades susceptibles que tienen de mayor
aceptación entre los productores. Por lo que es necesario profundizar en los mecanismos
de interacción entre el portainjerto y el injerto que pudieran participar en la respuesta a la
infección de a roya y otros patógenos de interés en el café.
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CAPÍTULO 4: Cambios en la severidad de la infección de roya en planta injertada
de café arábica.
En el capítulo anterior se evaluaron los cambios en la expresión de genes de
defensa en plantas injertadas de café para identificar si el uso de portainjertos resistentes
tenía efecto sobre la expresión diferencial de estos genes en injertos susceptibles. En
este capítulo se dio seguimiento al desarrollo de la enfermedad en las plantas utilizadas
anteriormente para poder valorar los cambios en la incidencia y severidad de la infección
de H vastatrix en plantas injertadas y no injertadas, contrastando un genotipo resistente
y uno susceptible de C. arabica.
Los parámetros medidos fueron: el índice de incidencia (IR), el área de la hoja
dañada, el número de pústulas por hoja y el número de pústulas con esporas. La
evaluación del IR se realizó a los 30, 60, 100, 130, 165, 208 y 236 días posteriores a la
inoculación (dpi) y la de los otros parámetros pasando los 236 dpi. Los resultados
mostraron que el injerto susceptible presentó una severidad menor con relación al
tratamiento de pie franco y en el injerto resistente se observó un efecto contrario. Esto
muestra que la respuesta y el grado de afectación que sufra las plantas al ser atacadas
por la roya, dependerá del cultivar utilizado como portainjerto. Por lo que, el uso de
cultivares resistentes como portainjertos, puede incrementar la resistencia a este
patógeno y el uso de planta injertada ser considerado como una opción en el manejo
integrado de este patógeno.
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CAPÍTULO 5. DISCUSIÓN GENERAL
Aunque el uso del injerto ha estado presente en la actividad agrícola desde hace
7000 años (Gautier et al., 2019), ha sido recientemente que se han estudiado los efectos
que tiene el portainjerto en el injerto en respuesta a patógenos (Louws et al., 2010; Alzate
et al., 2018). Nuestros resultados mostraron que en café, al igual que con: manzana
(Jensen et al., 2003, 2012); durazno (Rubio et al., 2013, 2015); melón (Crinò et al., 2007);
pepino (Gu et al., 2008); sandía (Kousik et al., 2018) y chile dulce (Albert et al., 2017), el
uso del cultivar resistente como portainjerto disminuye la susceptibilidad de los injertos.
En nuestro estudio el empleo del cultivar Oro Azteca como portainjerto del cultivar
Garnica promovió una menor proliferación de estructuras fúngicas en el mesófilo de la
hoja durante las primeras 72 horas posteriores a la infección (hpi) que las plantas a pie
franco de este cultivar. Esta diferencia entre las plantas injertadas y a pie franco también
se observó en el desarrollo de la infección al evaluar el índice de incidencia, el porcentaje
del área dañada de la hoja y el número de pústulas con esporulación por hoja a los 236
días posteriores a la infección (dpi). Esta respuesta diferencial entre las plantas injertadas
y a pie franco también se registró a nivel de la expresión de genes de defensa vegetal.
Lo anterior muestra que el portainjerto del cultivar resistente Oro Azteca, propició cambios
en la respuesta del injerto de Garnica a la infección de la Hemileia vastatrix.
En la mayoría de las interacciones entre las plantas y los patógenos, los
mecanismos de defensa inician con el reconocimiento del patógeno, dando inicio a la
respuesta y posterior activación de los genes de defensa (Florez et al., 2017; Oliveira et
al., 2016). En el caso del café se han identificado los genes CaNDR1b y CaNBS-LRR
entre los principales genes de reconocimiento que participan en la activación de los
mecanismos de defensa PTI y ETI (Cacas et al., 2011; Couttolenc-Brenis et al., 2020;
91
Diola et al., 2013; Florez et al., 2017). En el ensayo con discos de hoja, CaNDR1b mostró
sobreexpresión hasta las 72 hpi, su expresión relativa fue al menos 10 veces mayor en
Oro Azteca que en los discos de Garnica, lo que sugiere que CaNDR1 podría estar
involucrado en las respuestas de reconocimiento y defensa a la roya en Oro Azteca. Sería
interesante determinar en futuros estudios su patrón de expresión entre 24 y 72 hpi, con
el fin de comparar la cinética de expresión en los cultivares Oro Azteca y Garnica. En
cambio, CaNBS-LRR, en el cultivar Oro Azteca mostró un nivel de expresión por debajo
Garnica 72 hpi. Esto puede indicar que la inducción de la expresión de CaNBS-LRR
podría ocurrir después de 72 hpi, confirmando lo previamente reportado por Florez et al.
(2017).
En las plantas injertadas, Garnica/Oro Azteca se cuantificó una expresión del gen
CaNDR1b mayor en todos los tiempos con respecto a Garnica pie franco, incluso a las 6,
12 y 48 hpi mostró los mayores niveles de expresión de todos los tratamientos. Esto
puede ser un indicador de que el portainjerto está induciendo cambios en la expresión
del gen CaNDR1b promoviendo que el injerto de la variedad Garnica responda a niveles
incluso mayores que la Oro Azteca a pie franco. Por lo que el reconocimiento de H.
vastatrix en plantas injertadas de Susceptible/Resistente sería similar a la respuesta
esperada en materiales resistentes (Couttolenc-Brenis et al., 2020; Fernandez et al.,
2004). Este cambio en la expresión de genes de la familia NDR1 por efecto del
portainjerto también ha sido descrito en Vitis sp., Chitarra et al. (2017) evaluaron los
cambios en la expresión de genes en las hojas de injertos del cultivar Gaglioppo sobre
13 diferentes portainjertos y encontró que el nivel de expresión de este gen dependía del
portainjerto usado.
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En el análisis de expresión del gen CaNBS-LRR observamos que, a diferencia de
CaNDR1b, las plantas injertadas de Garnica/Oro Azteca presentaron niveles de
expresión superiores a Garnica pie franco solo en las 6, 12 y 48 hpi. En manzana Jensen
et al. (2012) encontraron que la disminución de la necrosis causada por E. amylovora,
que presentaron las plantas injertadas del cultivar susceptible Gala sobre portainjertos
resistentes G30 y MM.111, estaba involucrada la expresión de un gen de reconocimiento
de patogénesis LRR. Lo que podría explicar porque durante la proliferación de las
estructuras fúngicas en las plantas injertadas de Garnica/Oro Azteca es más baja que las
plantas de Garnica a pie franco. En contraste, en las plantas injertadas de Oro
Azteca/Garnica los niveles de expresión por debajo del control a las 12, 24 y 48 hpi y la
presencia de estructuras fungosas fue mayor que en Oro Azteca a pie franco. Este
comportamiento también ha sido observado en Vitis sp. (Cookson and Ollat, 2013;
Cookson et al., 2014; Chitarra et al., 2017). Por lo que, la expresión de los genes NBS-
LRR, relacionados con la resistencia vertical o gen a gen (Flor, 1971; Cohn et al., 2001;
Jones and Dangl, 2006; Boyajyan et al., 2014), podría depender de los cultivares
utilizados como portainjerto.
En lo referente a los genes relacionados con la ruta del ácido salicílico, el cual es
clave contra de H. vastatrix y asociados a la Respuestas Sistémica Adquirida (RSA).
Nosotros estudiamos el comportamiento de CaNPR1, el cual dispara el inicio de la
respuesta inmune mediante las proteínas relacionadas con patogénesis (PR) CaPR1 y
CaPR5 e inicia la respuesta RSA (Barsalobres-Cavallari et al., 2013; Jain y Khurana,
2018; Couttolenc-Brenis et al., 2020). Ortólogos de este gen en otras especies como:,
Arabidopsis thaliana (Shah et al., 1997), Vitis vinifera (Le Henanff et al., 2009); Glycine
max (Sandhu et al., 2009) y Gladiolus hybridus (Zhong et al., 2015) también han mostrado
93
estas funciones. La expresión de este gen en variedades susceptibles a la roya muestran
niveles de expresión más bajos que en las resistentes (Barsalobres-Cavallari et al., 2013).
Como lo observamos en el experimento de discos de hojas.
Además, en este experimento la expresión de genes CaPR1 fue comparable a la
reportada por Ramiro et al. (2009), Diniz et al. (2012) y Florez et al. (2017); exhibiendo
un nivel más alto de la expresión en Oro Azteca que en Garnica. Hoegen et al. (2002)
encontraron que en las papas infectadas con Phytophthora infestans, la mayor
concentración de PR1 estaba en células epidérmicas, células de protección de estomas,
tricomas glandulares y células del sistema vascular de las hojas infectadas. Por lo que el
menor número de estructuras haustoriales de H. vastatrix observadas en Oro Azteca en
comparación con Garnica podría estar relacionado, al menos parcialmente, con esta
sobreexpresión del gen CaPR1. CaPR5 mostró un aumento de la expresión relativa en
ambos cultivares, Garnica y Oro Azteca, en comparación con el control, pero una mayor
inducción en el cv. Garnica. Los estudios realizados en variedades de trigo han mostrado
niveles de expresión más altos en plantas susceptibles que en materiales resistentes a
24 y 72 hpi con Puccinia triticina (Wang et al., 2010). El amplio espectro de señales
relacionadas con el estrés que inducen la expresión de CaPR5 en diferentes modelos de
plantas puede explicar estos patrones de expresión (Wang et al., 2010).
En el ensayo con plantas, los injertos de Garnica/Oro Azteca presentaron una
expresión de CaNPR1 mayor que en Oro Azteca pie franco en todos los tiempos de
muestreo. En la expresión del gen CaPR1 el comportamiento de los injertos de
Garnica/Oro Azteca fue similar al del gen CaNPR1, siendo mayor en las plantas a pie
franco de ambos cultivares en casi todos los tiempos de muestreo. Este gen destaca el
comportamiento de las plantas injertadas de Oro Azteca/Garnica, las cuales presentaron
94
niveles inferiores al resto de las otras condiciones en casi todos los tiempos de muestreo.
Lo que indicaría que el portainjerto del cultivar Garnica podría afectar la capacidad de
resistencia que posee Oro Azteca al ser injertada sobre este. Huang et al. (2019) observó
en berenjena (Solanum melongena) que en plantas donde se usó como injerto la variedad
susceptible Rf a Ralstonia solanacearum y como portainjertos del cultivar resistente S21
el portainjerto disminuyó su tolerancia este patógeno. También Chitarra et al. (2017)
encontró que en el nivel de expresión en hojas del cultivar Gaglioppo de uva este gen
dependía del porta injerto que se utilizó.
La expresión de CaPR5 también mostró cambios por efecto del portainjerto, ya
que, en ambos casos las plantas se comportaron de manera diferente a lo esperado.
Donde las plantas de Garnica/Oro Azteca tuvo en algunos periodos de muestreo niveles
por encima de Oro Azteca a pie franco (6, 12, y 48 hpi). En contraste, las plantas de Oro
Azteca/Garnica tuvieron periodos donde la expresión estuvo por debajo de Garnica pie
franco (12 y 48 hpi). Por lo que se puede observar que existe un efecto a nivel de los
procesos de regulación y expresión de genes de defensa inducidos por el portainjerto.
Albert et al. (2017) evaluaron el uso de los genes PR1 y PR5 como marcadores de la
trasmisión de resistencia mediada por la injertación. Sus resultados mostraron que a los
45 días posteriores a la inoculación (dpi) los niveles de expresión eran similares entre las
plantas injertadas del cultivar de chile dulce “Total”, susceptible a L. taurica, injertado
sobre el cultivar “Szentesi” de chile Cereza, resistente, y las del “Szentesi” a pie franco.
Por lo que los niveles de expresión de CaPR1 y CaPR5 en ambas condiciones de injerto
podrían estar indicando que la respuesta a la roya en las plantas injertadas es modificada
por él portainjerto.
95
Este cambio en él comportamiento del genotipo susceptible probablemente no solo
modifique la respuesta de defensa vegetal, también se pueden generar cambios en
contenido de azúcares y metabolitos secundarios en el fruto, como se ha observado en
los niveles de actinidina en kiwi (Boyes et al., 1997); el contenido de flavonoides en el
jugo de limón (Gil-Izquierdo et al., 2004). Lo que podría afectar la calidad del café como
sucede en otros cultivos (Davis et al., 2008). Al respecto, González et al. (2016) evaluaron
las características organolépticas y el perfil de taza de cultivares de C. arabica injertados
en C. canephora, sus resultados muestran que en algunos cultivares hubo cambios en
los parámetros organolépticos y la disminución en el puntaje del perfil de taza.
Para poder hacer uso de la injertación como un método más de manejo de la roya, sin
que se afecte la calidad del café, es necesario dilucidar los mecanismos que actúan para
generar los cambios de la respuesta del genotipo usado como injerto. Entre los
mecanismos que probablemente estén involucrados tenemos: transferencia de ADN,
movimiento de sARN, transferencia a larga distancia de moléculas de miARN y mARN,
señalización hormonal; y movimiento de proteínas y otros metabolitos (Rasool et al.,
2020). Por lo anterior, se requiere realizar estudios transcriptómicos, proteómicos,
metabolómicos y de epigenética, que permitan describir y evaluar los cambios que
pueden estar sucediendo en los genotipos de café que se usan como injerto en relación
al del portainjerto.
96
CAPITULO 6. CONCLUSIONES
De manera general los resultados que se obtuvieron permiten concluir que:
1. La expresión de los genes de defensa relacionados con el ácido salicílico en Oro
Azteca es mayor que en Garnica, lo que indica que esta hormona vegetal tiene un
papel fundamental en la respuesta molecular a la infección de roya (H. vastatrix).
2. Existe un efecto del portainjerto en la respuesta de defensa a la infección de H
vastatrix, ya que los injertos de Garnica sobre Oro Azteca mostraron un nivel de
expresión de los genes de reconocimiento y los relacionados con el ácido salicílico
mayor que las plantas a pie franco.
3. Las plantas injertadas de Garnica sobre Oro Azteca mostraron un menor
porcentaje de área foliar dañada y pústulas con esporulación que las plantas a pie
franco. Lo que indica que la susceptibilidad de Garnica disminuyó por efecto del
patrón de Oro Azteca.
4. Es necesario profundizar en el estudio de las interacciones de patrón e injerto para
poder dilucidar los mecanismos que promueven los cambios en la expresión de
genes.
5. El presente estudio con café es un primer acercamiento para vislumbrar en café al
estudio del efecto del patrón en el injerto, ya que hasta ahora no se ha puesto
atención a la selección del genotipo de los patrones en relación al efecto que estos
pudieran tener en la respuesta a enfermedades foliares o la calidad del fruto. Por
lo que, es necesario profundizar en el estudio de los efectos de los injertos
relacionados con el portainjerto, ya que el uso de las plantas injertadas es común
en este cultivo.
97
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101

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Efecto del uso de portainjertos resistentes en injertos

susceptibles de Café (Coffea arabica L.) en respuesta a la

TESIS QUE PRESENTA Edgar Couttolenc Brenis

Xalapa, Veracruz, México (año)

en respuesta a la infección de la roya (Hemileia vastatrix Berk. & Br.)”

Excepto cuando es explícitamente indicado en el texto, el trabajo de investigación

Candidato: Edgar Couttolenc Brenis

Director de tesis: Martin Mata Rosas

ÍNDICE DE CUADROS ....................................................................................................6

Capítulo Cuadro Página

Cuadro1. Genes estudiados en diferentes variedades de C.

Table 1. Designed primers for the amplification of CaPR1,

Table2. Percentage of uredospores germination, appressoria and

Table 1. Primers designed for genes NBS-LRR, NDR1b, NPR1,

Table 2. Statistical values of fungal structure proliferation in

Table 3. Values obtained from the Kruskal–Wallis test comparing

Capítulo Figura Página

1 Figura 1. Ciclo biológico de H. vastatrix 9

Figure 1. Scheme showing the preparation of coffee leaf disks

2 Figure 2. Cytological analysis of inoculated leaf disks. 46

2 Figure 3 Growth of H. vastatrix on inoculated leaf disks. 47

2 Figure 4 Relative expression of pathogen recognition genes. 47

Figure 5 Relative expression of defense and salicylic acid-

Figure 1. Presence of fungal structures. (a) Anchors, (b)

3 Figure 3. Relative expression of the pathogen recognition genes 69

Figure 4. Relative expression of genes associated with the

4 Figura 1. Índice de incidencia de H. vastatrix 82

Figura 2. a) Promedio del porcentaje del área foliar dañada por

importancia como generador de divisas, las fluctuaciones en el precio del aromático, el

productor carezca de los recursos necesarios para el mantenimiento y renovación de las

de gallo y nemátodos (Avelino et al., 2015; 2018).

Anteriormente la roya se distribuía en áreas de cultivo por debajo de los 1000

aunado a el descuido de las plantaciones por factores socioeconómicos, han surgido

Estos brotes provocaron la disminución de la producción en la región mesoamericana

entre 15 y 30 % (Cressey, 2013; Avelino et al., 2015).

Además del cambio en las condiciones ambientales, un factor a considerar en el

aumento de incidencia de la roya en los cafetales es el uso generalizado de variedades

por lo que se ha promovido el uso de materiales resistentes a ella, generados a partir de

En México el Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias

et al., 2016; González et al., 2019).

Una alternativa para utilizar variedades susceptibles, apreciadas por su calidad en

tasa y rendimiento industrial, es inducir tolerancia a la roya (H. vastatrix) injertándolas en

un efecto sobre la respuesta de los injertos a condiciones de estrés debido a factores

bióticos y abióticos (Spiegelman et al., 2013; Goldschmidt, 2014). Se ha identificado que

estas respuestas a estrés están relacionadas con: cambios en la expresión de genes

sobre la interacción portainjerto-injerto. Por lo tanto, es necesario investigar esta

interacción, determinar su efecto sobre la roya e identificar qué genes se expresan.

la susceptibilidad a H. vastatrix en variedades susceptibles de C. arabica.

La roya del café es causada por el hongo H. vastatrix, el cual es un parásito

enfermedad es visible cuando aparecen manchas cloróticas en el haz de las hojas y en

el envés manchas amarillas o anaranjadas con presencia de un polvo fino amarillo o

naranja debido a la gran cantidad de esporas denominadas urediniosporas (Fig. 1;

Talhinhas et al., 2017).

La germinación de las esporas inicia en presencia de una película de agua libre,

con una temperatura ambiental entre 21 a 25 °C y en condiciones de obscuridad. Bajo

se inicia el proceso de penetración, el cual requiere un mínimo de 6 h en presencia de

primera instancia la cámara subestomática, formando dos ramificaciones laterales,

invasión del parénquima esponjoso, parénquima en empalizada y en algunos casos la

la infección, y se le conoce como periodo de incubación (Pi; Talhinhas et al., 2017). A

continuación, algunas hifas infectan la cámara subestomática y forman un agregado de

células esporógeas, de las cuales algunas emergen por el estoma y producen un

esporóforo, la agregación de estas estructuras por estoma es considerada como un soro

o pústula (Avelino y Rivas, 2013). Este periodo entre la germinación y la esporulación se