INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

Laboratorio en casa.

PRÁCTICA NO.6

EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES EN LA DISTRIBUCIÓN DE

MICROORGANISMOS EN UN ECOSISTEMA.

Grupo: 5AM1.

Integrantes.

Equipo 7:

• Camargo González Carlos

• De Jesus Reyes Cielo

Profesor responsable: Gisela Boll Argüello

Fecha de realización: 15/02/2022, 07/04/2022 y 12/04/2022

 Fecha de entrega: 26/04/2022

OBJETIVOS
1. Observar la distribución de microorganismos en una columna de agua-sedimento.
2. Relacionar su presencia con las características del microhábitat.
Resultados.
Tabla 6.1 Descripción y observaciones de las columnas de Winogradsky
Día Fecha Foto Descripción

Se coloco el clavo al
fondo de las botellas, se
adiciono la muestra de
suelo(cultivo) en partes
iguales a cada una, el
CaSO4 en la misma
cantidad, 1 mL de
resazurina, un pedazo
de papel filtro y los
siguientes
tratamientos:
1 20/02/2022
1. Testigo.
2. Sacarosa.
3. Detergente.
4. Oscuridad.
5. Suavizante.
Finalmente se adiciono
agua (manantial), sin
llenar totalmente las
botellas y cerrar para
colocarlas a la
exposición requerida.
 La columna del testigo
estaba más clara, la
resazurina estaba más
oxidada que en las
demás columnas y la de
azúcar se veía de un
color rosa.

Hora: 10:05
En la columna del
azúcar la resazurina se
encontraba reducida en
un corto periodo de
tiempo pasando del
rosa de unas horas
3 22/02/2022 antes a un rosa casi
incoloro. Las columnas
de suavizante y
detergente también
disminuyeron su
Hora: 15:25 coloración.

Ese mismo día por la

tarde las columnas del
testigo y azúcar estaban
incoloras y la
resazurina totalmente
reducida. la del
suavizante se notaba
aún más claro el color.

Hora: 18:31
 La columna de
suavizante fue teniendo
un color más tenue por
la reducción de la
resazurina, en el testigo
se aprecia un color
7- 27/02/2022-02-
verde (presencia de
10 03/2022
algas y cianobacterias o
tiobacilos) y la
formación de burbujas,
formación de burbujas
y sedimento en la
columna con azúcar.
La botella del
suavizante quedo
incolora y se
comprimió (por lo que
se abrió para
descomprimirla), el
testigo tenía
11- coloraciones verdes y
03-16/03/2022
24 el de azúcar
coloraciones cafés.
Posibles formaciones
de colonias de algas
verdes y bacterias sulfo
reductoras.
La de detergente tomo
un color café-rojizo.
La botella de
suavizante se re-oxido
la resazurina por lo que
se tornó de color rosa,
posteriormente de color
blanco-rosa, y hubo
formación de
coloración verde en
25-
18-30/03/2022 zonas de la columna
37
por la posible presencia
de algas y
cianobacterias.
Nuevamente la del
testigo tenía burbujas y
coloración verde y un
olor fuerte, la de azúcar
tenía color café y
 empezaba a formarse
precipitado negro.
En la columna de
suavizante se redujo
nuevamente la
resazurina y tuvo
formaciones verdes y
cafés, la del detergente
siguió igual
únicamente la parte del
38- 31/03/2022-
fondo tenía burbujas y
44 06/04/2022
precipitado negro en
muy poca cantidad, en
la de azúcar había
formaciones cafés y
naranjas y en la del
testigo verdes y cafés
además de formación
de precipitado negro.

Tabla 6.2 Resultados finales y microorganismos según los colores observados en las
columnas de Winogradsky.
Día/ Fecha Día 45 / 07 de abril del 2022

Vista
completa

Tratamiento Testigo Azúcar Detergente. Suavizante. Oscuridad.

Vista inferior

Bacterias verdes Precipitado Precipitado Precipitado Precipitado

del azufre y negro y negro, negro, negro,
cianobacterias, presencia de presencia de formación de formación de
tiobacilos y
bacterias sulfo bacterias sulfuro ferroso, sulfuro ferroso
bacterias sulfo reductotras o sulforeductoras presencia de y presencia de
reductoras o
fermentadoras, o bacterias sulfo bacterias sulfo
Zona fermentadoras degradación de fermentadoras. reductoras o reductoras.
anaerobia por la presencia celulosa, Acumulación fermentadoras,
de precipitado presencia de de detergente bacterias verdes
negro, burbujas, encima del del azufre,
formación deformación de suelo cianobacterias y
sulfuro ferroso. sulfuro ferroso, sedimentado. tiobacilos.
bacterias verdes
del azufre.
Zona Cianobacterias y Cianobacterias Color café- Cianobacterias Nada.
microaerofilic tiobacilos. y Tiobacilos. rojizo. y tiobacilos.
a
Algas y Formación de Color café Cianobacterias Solidos
cianobacterias, espuma y rojizo y y tiobacilos, suspendidos y
presencia de presencia de acumulacion de presencia de larvas de
Zona aerobia larvas de larvas de detergente en la larvas de insectos.
insectos insectos, superficie. insectos.
flotando. cianobacterias o
tiobacilos.

DISCUSIÓN
La columna de Winogradsky es una demostración clásica de cómo los microorganismos
ocupan microespacios altamente específicos de acuerdo con sus tolerancias
medioambientales y sus necesidades vitales. En esta práctica pudimos evidenciar la
diversidad microbiana, así como la distribución de las comunidades de las muestras de
sedimento y agua. Todas las columnas se enriquecieron con sulfato de calcio.
Desde el primer día se comenzaron a observar cambios en dichas columnas los cuales se
fueron registrando. Notamos que las columnas tenían varias estratificaciones, esto debido
que se encuentran diversos grupos microbianos llevando procesos distintos debido a las
diferencias en la disponibilidad de luz, oxígeno y nutrientes.
Debido a que cianobacterias y algas (microorganismos fotosintéticos oxigénicos) crecen en
la superficie aeróbica, la zona superior aparece típicamente verde. El oxígeno producido por
estos microorganismos mantiene una zona aeróbica en la que pueden desarrollarse
poblaciones de bacterias heterótrofas aerobias y de hongos. Esto se observa perfectamente
en la columna 1 principalmente, ya que se utilizó como testigo y no hay alteración de los
microorganismos presentes en el medio.
Por otro lado, los organismos fotoautótrofos se encuentran en la superficie de la columna,
donde la cantidad de O2 y luz es mayor se pueden juntar para formar biofilm que se observa
en la superficie de color oscuro. Con el transcurso de los días, la formación de estas
biopelículas o biofilms fue más evidente, especialmente en las paredes de la botella, ya que
la superficie de esta favoreció la adhesión, siendo más evidente en el último día. Otro de los
microorganismos que pueden ser encontrados en la zona son las bacterias oxidantes del
azufre, estas bacterias obtienen energía de la oxidación del H2S y sintetizan su propia materia
orgánica a partir del CO2. Por eso se denominan organismos quimiosintéticos, o
quimioautótrofos. La superficie de la columna presentó diferentes colores de resazurina, esto
debido al cambio redox presente en la zona, podemos observar que mientras más días
transcurrían, éste medio se reducía, aunque se mantuvo oxidado al inicio, la oxidación de la
zona se debe principalmente al oxígeno producido por las cianobacterias y las algas.
En el caso de la columna adicionada con Sacarosa, en el día 38-45 se observó un precipitado
de color negro, esto denota la actividad de reductores de sulfato (Desulfovibrio,
Desulfotomaculum, entre otros). El color se da por la presencia de sulfuros metálicos,
principalmente sulfuros ferrosos; estos compuestos son producidos por el metabolismo de las
bacterias mencionadas anteriormente y pueden ser utilizados por las bacterias fotosintéticas
del azufre verdes y rojas. Las bacterias verdes del azufre son anaerobias estrictas, que llevan
a cabo el metabolismo fotoautótrofo y fotoheterótrofo usando sulfuro y azufre como
donadores de electrones. Cuando se oxida el sulfuro, el azufre elemental se deposita fuera de
la célula.
A comparación de la botella testigo, se puede observar que en la botella que se mantuvo en
la oscuridad no hubo formación de biofilms, o en caso de haber, estos fueron más pequeños,
esto se debe a que, como se mencionó anteriormente, estas biopelículas están formadas
principalmente por microorganismos fotoautótrofos, y al no haber energía luminosa estos no
pudieron crecer. Como consecuencia, no fue liberado más oxígeno además del que ya contaba
la columna, por lo que el desarrollo de otras poblaciones microbianas anaerobias también se
vio afectado.
En cuanto a la columna del detergente estudios señalan que el detergente y los compuestos
químicos que contiene inhiben el crecimiento especialmente de las bacterias, por este hecho
son usados para lavar y limpiar zonas del cuerpo, ropa y utensilios de uso doméstico,
dependiendo del tipo de jabón y su acción como agente limpiador van a ser los compuestos
que inhiban a las bacterias, Grosso, Antonino L (1943). Comentado [au1]: Presentan una discusión muy buena.
Considero que hicieron u análisis muy bien elaborado.
 CONCLUSIÓN
• La diversidad microbiana de las columnas es impulsada por gradientes
biogeoquímicos y fuentes de carbono específicas lo que nos permite entender cómo
una comunidad microbiana diversa se desarrolla con el tiempo y se adapta a las
fluctuaciones biogeoquímicas en los sedimentos contaminados.
• Los microhábitats necesitan de los microorganismos presentes en las diferentes zonas
de la columna para producir metabolitos o utilizar los metabolitos de otros
microorganismos y de esta manera mantener un equilibrio en el mismo.
• En las columnas se evidenció una relación entre la ausencia de luz y bajas
temperaturas con los procesos bióticos que ocurren dentro de ellas, siendo que a
menor luz/temperatura, dichos procesos son más lentos o se ven desfavorecidos.
• Las condiciones ambientales limitan el crecimiento y desarrollo de ciertos tipos de
microorganismos.
• El detergente inhibe el crecimiento de microorganismos.

CUESTIONARIO
1.-Describa que es un indicador de óxido-reducción, dé dos ejemplos y mencione los
cambios que se observan cuando esta oxidado o cuando esta reducido.
Un indicador es una sustancia cuyo color es intenso, bien definido y distinto en sus estados
de oxidado y reducido. Se utilizan como indicador en las titulaciones redox ya que estas
sustancias requieren solo un ligero cambio en la proporción de un estado u otro, para variar
de color. Comentado [au2]: Sus ejemplos son incorrectos. No es lo
mismo indicador de pH que indicador REDOX.

Figura 6.2
Azul de Bromotimol
Figura 6.1 Amarillo pH 6, verde pH neutro, azul pH 7.5
Rojo de Metilo
Amarillo pH 6.4, Rojo pH 8.2

2.-Describa que es o a que se refiere la palabra gremio en microbiología.

En un sistema microbiano el crecimiento celular forma poblaciones; las poblaciones
metabólicamente relacionadas se denominan gremios y el conjunto de estas agrupaciones
interaccionan formando comunidades microbianas.
3.- Diga los grupos fisiológicos (gremios) que se enriquecieron en las columnas, de
acuerdo al tratamiento que tuvieron:
Adición de CaSO4----->Reductores de sulfatos.
Adición de papel filtro----->Celulolíticos.
Adición de sacarosa-------->Sacarolíticos.
Adición de detergente------>
Exposición a la luz---------->Fotoautótrofos.
NO exposición a la luz (oscuridad)------->Quimiótrofos.
4.- Escriba que explicación se da cuando se observa la producción de burbujas y cuál
cuando aparece un precipitado negro.
La producción de burbujas puede darse debido a la producción de oxígeno de las
cianobacterias y eso se da en las capas aeróbicas y dentro de las capas anaeróbicas las
burbujas son producidas por los organismos que descomponen anaeróbicamente la materia
orgánica y forman gas metano como subproducto y se llaman metanógenos.
El precipitado negro dentro de las columnas se da gracias a las bacterias reductoras de azufre
que se observan como una capa negra, pueden utilizar sulfato u otras formas parcialmente
oxidadas de azufre generando así H2S, el cual reaccionara con el hierro del sedimento
produciendo sulfuro ferroso que da una coloración negra.

Anexo de Fotografías.

Figura 6.3. Algas verdes. Figura 6.4-Diatomeas.

 Figura 6.5-Euglena.

Figura 6.6-Vorticella.

Figura 6.7-Paremecium. Figura 6.8-Bacteria púrpura del azufre.

Figura 6.9- Bacteria verde del azufre. Figura 6.10-Bacteria sulfato reductora.

Bibliografía.
• Atlas, R.M. y R. Bartha. 2001. Ecología microbiana y microbiología ambiental. 4ª
edición. Ed. Addison Wesley.
• Babcsanyi, I., Meite, F. & Imfeld, G. (2017). Biogeochemical gradients and microbial
communities in Winogradsky columns established with polluted wetland sediments.
FEMS Microbiology Ecology, 93, 2017, fix089. University of Strasbourg, Francia.
• Alfaro Martinez Veronica Patricia. (2010). Recopilación de mecanismos de reacción de
los indicadores químicos y su aplicación en los diferentes métodos clásicos de análisis.
El Salvador: Universidad de El Salvador
• Madigan M., Martinko, M., Dunlap, P. & Clark, D. (2009). Brock Biología De Los
Microorganismos. 12 ma ed. Pearson Education.
• Grosso, Antonino L.. (1943). Acción de varios detergentes sobre ciertas bacterias
comunmente halladas en los equipos lecheros. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
Universidad de Buenos Aires.
http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0355_Grosso.pdf
Comentado [au3]: Evaluación de la práctica = 9.5.
Incluye reporte y presentación de resultados en clase.