Equipo C1

MICROBIOLOGÍA
APLICADA

Mg. Julio Reynaldo Ruiz

UNMSM 1
Microbiología
Aplicada
 Equipo C1

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. Decana de América.

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Informe N ”2”

ENSAYO DE EFICACIA DE DESINFECTANTES: CLOROX TRIPLE ACCIÓN

Bejar Ñopo, Grace

Carbajal Olanda, Maria Fernanda

Culque Sopla, Llesy

Huisa Romero, Jeffrie

Morales Vente, Diana Carolina

Pelaez Salas, Sergio Segundo

Santillan Zevallos, Renzo

Docente encargado:

                                               Mg. Julio Reynaldo Ruiz

Lima – 2021

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Practica N°2:
Ensayo de eficacia de desinfectantes: Clorox Triple Acción
I. INTRODUCCIÓN
Los desinfectantes son sustancia o mezclas de sustancias químicas utilizada
para matar microorganismos, mediante un proceso de desinfección de
objetos, superficies y ambiente (1). Generalmente la eliminación nunca
alcanza el 100% de efectividad, por lo tanto, es común admitir porcentajes de
hasta 99,999% de microbios. Debe tenerse en cuenta la potencia de las
sustancias empleadas como desinfectantes, pues ello se relacionará con el
riesgo relativo de ciertas superficies que actúan como reservorio de agentes
patógenos, es decir; será necesario utilizar un poderoso desinfectante sobre
instrumental o superficies contaminados con sangre, en relación con aquellos
aplicados sobre otro tipo de superficies sucias (2).
II. OBJETIVOS
1. Analizar la acción de los desinfectantes
2. Evaluar la eficacia del Clorox Triple Acción sobre la bacteria
Staphylococcus aureus.
III. DESARROLLO
Mecanismo de actividad de desinfectantes (Hipoclorito)
Según Fourneir el hipoclorito tiene su actividad antibacteriana por la variación en
ácido hipocloroso no disociado, el cual es afectado por el pH del medio. El ácido
hipocloroso no disociado actúa por dos mecanismos:
Por oxidación de la materia orgánica, combinándose con la proteína bacterianas y
reaccionando con el hidrógeno del grupo amino de un aminoácido. Como
consecuencia se forma un compuesto en el colorado llamado cloramina, que
presenta una elevada y directa acción bacteriana y por oxidación simple, es decir por
liberación de oxígeno.
La influencia de la concentración es bastante evidente: a mayor concentración del
hipoclorito de sodio tendremos una mayor acción antibacteriana. Esto es parque una
solución más concentrada proporciona más ácido hipocloroso no disociado (3).

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Tabla Nº1 Ventajas y desventajas del hipoclorito de sodio (3,4,5)

Ventajas Desventajas
Reducción comprobada de Ofrece protección
bacterias, Giardia y la mayoría relativamente baja contra el
de virus Criptosporidium
Se puede modificar fácilmente Ofrece menor eficacia en
para tener mayor o menor aguas contaminadas con
capacidad según la mayor o compuestos orgánicos y
menor demanda. algunos compuestos
inorgánicos, particularmente
amoníaco
Proporciona protección residual Deja un sabor y olor que
contra la contaminación algunos usuarios consideran
inaceptable
Requiere una concentración y Existen preocupaciones
un tiempo de contacto menor acerca de los efectos
para la eliminación de bacterias carcinogénicos a largo plazo
y virus.
No es toxico utilizado en las Vida de anaquel corta (debe
diluciones recomendadas almacenarse en lugar fresco y
oscuro para mantener
estabilidad)
Bajo costo Puede dañar la pie
Se disuelve fácilmente Se disipa rápidamente

FUENTE: The United States Pharmacopeia. Rockville, Md.: The United States
Pharmacopeial Convention; 2019(6).
Objetivo Desinfectante
Acción sobre enzimas con Óxido de etileno, glutaraldehído, peróxido de
grupos SH hidrógeno, hipoclorito y yodo
Ácidos nucleicos Hipocloritos
Grupos biol Óxido de etileno, glutaraldehído, peróxido de
hidrógeno e hipoclorito
Grupos aminos Óxido de etileno, glutaraldehído e hipoclorito
Oxidación general Hipocloritos
Pared celular Formaldehído, glutaraldehído e hipoclorito

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Figura 1. Etiqueta de Clorox triple acción

Figura 2. Presentaciones de Clorox triple acción

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Diagrama de flujo

Figura 3. Flujograma para la prueba de eficacia del Clorox Triple acción

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Protocolo
 Eficacia desinfectante
DATOS GENERALES
Desinfectante: Nombre del Cátedra de
Clorox triple Laboratorio que hace Microbiología Aplicada
Muestras Analizadas acción el muestreo
Procedencia  The clorox company

Solicitante Cátedra de
Microbiología Aplicada
Forma Farmacéutica Registro 001
-------------------
--------
Nombre de lugar de Laboratorio de Fecha de Análisis 04-06-2021
Muestreo Microbiología
de FFyB de la
UNMSM
 JE28LE19 Fecha que se 04-06-2021
Número de lote complemento el
análisis
Número de registro sanitario: RSDAN5715
El producto desinfectante (Clorox triple acción) presenta eficacia sobre la bacteria
Staphylococcus aureus, al cumplir con el rendimiento estándar para S. aureus, 0-3
portadores positivos de sesenta.
TABLA N°2 Clasificación
FUENTE: The United States Pharmacopeia. Rockville, Md.: The United States
Pharmacopeial Convention; 2019(6).
Entidad química Clasificación Ejemplo
Cloro e hipoclorito de sodio Agente esporicida Hipoclorito de sodio al

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0.5%

Materiales y equipos
o Muestra de Clorox: Triple acción
o 60 tubos
o Cultivos liofilizados de Staphylococcus aureus ATCC 6538
o Cilindros o transportadores
o Agar TSA
o Placas petri
o TSB
o Neutralizador
Procedimiento:
- Abrir la ampolla del organismo liofilizado como indica la ATCC. Utilizando un
tubo que contenga 5-6 mL de TSB para S. aureus, extraer asépticamente de
0,5 a 1,0 mL y rehidratar el cultivo liofilizado. Transferir asépticamente todo el
pellet rehidratado al tubo original de caldo designado como "TUBO A". Mezclar
bien. Tras la incubación, utilizar un esparcidor estéril para inocular un número
suficiente de placas TSA (por ejemplo, de 5 a 10 placas por organismo) con
100 μL cada una del cultivo de 24 ± 2 h. Incubar las placas a 36 ± 1°C durante
24 ± 2 h.
- A la par, se realiza la preparación de los transportadores, esto conlleva una
previa esterilización a 121 º C x 15 min. Luego, los cilindros estériles de
distribuyen a razón de 1 cilindro por tubo conteniendo 1 ml de cultivo de
ensayo de manera que el cultivo cubra el cilindro. Por un tiempo de contacto
de 15±2 min.
- En una placa Petri se colocan los cilindros previamente sumergidos, luego se
llevan a secar a 36º C por 40 ± 2 min. Después del tiempo de secado
requerido, los portadores se transfieren secuencialmente desde la placa de
Petri a los tubos de ensayo que contienen el desinfectante en los intervalos
apropiados por un tiempo de exposición de 10min.

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- Finalmente, los transportadores son transferidos a un tubo conteniendo un

medio de cultivo con neutralizador apropiado para eliminar el exceso de
desinfectante. Los transportadores luego se retiran en un tubo conteniendo un
medio de subcultivo que se incuba a 36º ± 1 ºC por 48±2 h.
- Agitar suavemente cada tubo antes de registrar los resultados. Registrar
resultados como (+) cuando hay crecimiento y 0 cuando no hay crecimiento,
dependiendo de la presencia de turbidez.

IV. RESULTADOS

Fig*. Resultados de la acción del Clorox Triple Acción sobre el Staphylococcus

aureus ATCC 6538 según el método AOAC 955.15.

- Los resultados obtenidos muestran que de los 60 tubos empleados; 2 tubos

con presencia de turbidez (lo que indica el crecimiento de Staphylococcus
aureus) y 58 tubos sin presencia de turbidez (lo que indica que no hay
presencia de Staphylococcus aureus) (7).
- Según el método AOAC, para confirmar la presencia de Staphylococcus
aureus en los tubos de subcultivo, se debe obtener como mínimo 4 carriers
positivos, si están presentes por prueba (por cada 60 tubos). Esto se
evidencia en la turbidez de los tubos de subcultivo (7).

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- Con respecto al rendimiento estándar para Staphylococcus aureus, se debe

obtener entre 0 a 3 carriers positivos de 60. Esto quiere decir que lo ideal o lo
que se espera es obtener como máximo 3 carriers positivos para poder
aprobar el producto. En nuestro caso se obtuvieron solo 2 tubos positivos (7).

V. CONCLUSIONES
El producto desinfectante (Clorox triple acción) presenta eficacia sobre la
bacteria Staphylococcus aureus, al cumplir con el rendimiento estándar para
S. aureus, 0-3 portadores positivos de sesenta.
FIRMAS

Huisa Romero, Santillan Zevallos, Culque Sopla Bejar Ñopo,Grace

Jeffrie Renzo Llesy

Morales Vente, Peláez Salas, Carbajal Olanda,

Diana Carolina Sergio Segundo María Fernanda

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Diomedi A., Chacón E., Delpiano L., Hervé B., Jemenao M. Antiseptics and
disinfectants: aiming at rational use. Recommendations of the Advisory
Committee on Healthcare Associated Infections. [Internet]. 2017 Abr [citado

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2021 Jun 08] ; 34( 2 ): 156-174. Disponible en:

http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-
10182017000200010&lng=es.
2. Gilbonio W., Rodriguez V. Efecto de un programa de limpieza y desinfección
sobre la contaminación microbiana en consultorios odontológicos al interior de
un centro de salud, el tambo – 2018 [Internet]. 2018 [Consultado 2021 junio
08]. Disponible en:
https://repositorio.upla.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12848/728/TESIS
%20FINAL.pdf?sequence=1&isAllowed=y
3. Fournier A. Efecto del hipoclorito de sodio al 2.5% y 5.25% sobre los tejidos
periapicales estudio in vivo [Internet]. 2003 [Consultado 2021 junio 08].
Disponible en:
https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12672/2779/
fournier_aa.pdf?sequence=1
4. Pupo M., Díaz C., Castellanos B., Simancas E. Eliminación de Enterococcus
faecalis por medio del uso de hipoclorito de sodio, clorhexidina y MTAD en
conductos radiculares. Av Odontoestomatol [Internet]. 2014 Oct [citado 2021
Jun 06] ; 30( 5 ): 263-270. Disponible en: http://scielo.isciii.es/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0213-12852014000500004&lng=es.
5. Sánchez R., Furuya M., Arroniz P., Gómez M., Gómez L. Comparación de la
acción bactericida de hipoclorito de sodio y Microcyn 60. Rev. Odont. Mex
[revista en la Internet]. 2009 [citado 2021 Jun 08]: Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1870-
199X2009000100009&lng=es.
6. The United States Pharmacopeia. Rockville, Md.: The United States
Pharmacopeial Convention; 2019.
7. Office of Pesticide Programs Microbiology Laboratory Environmental Science
Center, Ft. Meade M. US Environmental Protection Agency Office of Pesticide
Programs Standard Operating Procedure for. 2016;5–13. Available from:
http://www.epa.gov/opp00001/methods/atmpmethods/QC-23-01.pdf

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