LEUCOGRAMA

Es el análisis cuali y cuantitativo de los leucocitos en sangre periférica. Está compuesto por:
• recuento total de leucocitos
• recuento diferencial de leucocitos, incluidas las alteraciones morfológicas observadas en extendidos de
sangre periférica.

Acá tenemos detallado un Neutrófilo en banda que, si bien forma parte de lo que es el grupo de neutrófilos
segmentado, se lo suele describir aparte como un elemento con cierto grado de inmadurez comparado al
segmentado. En la maduración de la serie neutrofilica tenemos desde el mieloblasto, promielocito y el
mielocito a partir del mielocito ya es una célula con la granulación específica de los neutrófilos y luego de los
mielocitos tenemos el metamielocito y neutrófilos en bandas (2-3 % es normal hallar en sangre periferica) que
se va a seguir segmentando el núcleo hasta formar el neutrófilo segmentado. Todos estos elementos
jóvenes, es decir, el neutrófilo en bandas, el metamielocito o el mielocito que puede haber en sangre
periférica se tienen que describir aparte no se los incluye dentro de la del recuento de neutrófilos
segmentados, si bien forman parte de esta población son elementos más inmaduros.
Se observan Eosinófilos cuya granulación es básica y tiene afinidad por un colorante acido como la eosina
con lo cual se ponen en evidencia los gránulos de color rojo- naranja.
Basófilos, mucha afinidad por colorantes básicos y se ven gránulos azules ricos en histaminas
Linfocitos y Monocito como componentes mononucleares. El monocito citoplasma más grisáceo y más
esmerilado, núcleo más arriñonado y cromatina mucho más laxa, en cambio el linfocito posee un citoplasma
más celeste y claro y un núcleo de cromatina más condensada y más chico.

RECUENTO DE LEUCOCITOS
El recuento de leucocitos consiste en determinar la cantidad de glóbulos blancos en sangre periférica por
unidad de volumen por microlitro (μL), milímetro cúbico (mm3) o litro (L). Se recomienda por litro. Desde el
punto de vista de la metodología disponible en el laboratorio clínico, el recuento de leucocitos se puede hacer
por método manual (cámara) o electrónico.

RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS

Para hacer el recuento de leucocitos por método manual se realiza una dilución 1/20 de la sangre entera
anticoagulada con EDTA muy bien homogeneizada, se carga en la cámara de Neubauer, y se realiza la
lectura en los cuadrantes correspondientes utilizando un microscopio óptico. Para su dilución, se utiliza como
diluyente el líquido de Turk (1/20). El líquido de Turk es hipotónico (con ácido acético y azul de metileno o
cristal violeta) de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento y resaltar el núcleo
del leucocito para que sea mejor identificado. El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar (2 ml), violeta
de genciana disolución de 1% (1ml) y agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml. Deberá filtrarse a
menudo para evitar levaduras y hongos.

El recuento de leucocitos tiene un mejor CV q el recuento de eritrocitos, es más fiable el recuento de

leucocitos en cámara.

Utilidad clínica:
El recuento total de leucocitos es indispensable para definir los conceptos de leucopenia y leucocitosis,
situaciones que se pueden presentar asociadas con distintas patologías.
 Leucocitosis: puede estar asociada a procesos reactivos (infecciosos, inflamatorios) o neoplasias
hematológicas.
 Leucopenia: puede estar asociada a procesos infecciosos (virosis), inmunodeficiencias (primarias o
secundarias), neoplasias hematológicas.

ERITROBLASTOS
Son elementos de la serie eritroide que tienen núcleo, se cuentan por error como Leucocitos (el contador
hematológico no los diferencia de un leucocito por tener núcleo). Se informa el número de los mismos cada
100 leucocitos. Si su número es grande, puede alterar el valor real de los leucocitos. Mediante un frotis se
estima la cantidad de eritroblastos cada 100 leucocitos y se corrige.

Con relación al recuento total de leucocitos es importante recordar que éste tiene variaciones importantes
relacionadas con:
+ La raza, siendo más bajo en la raza morena que en la blanca (a expensas de neutrófilos).
+ Tiene variaciones circadianas, encontrándose los valores más altos en las horas de la tarde.
+ Se eleva por el ejercicio, el estrés y algunos medicamentos, como la epinefrina, con incremento de
2.000 a 5.000 por μL.
+ El recuento total de leucocitos también se eleva en el embarazo y se normaliza a partir de la primera
semana postparto. LEUCOCITOSIS A EXPENSAS DE NEUTRÓFILOS FISIOLOGICA
+ Tiende a ser más bajo a medida que pasan los años, especialmente en la subpoblación de linfocitos
Aunque tengan métodos automatizados siempre hay que recurrir a la observación microscópica. El contador
hematológico puede dar alarmas en ciertas situaciones donde no esté reconociendo bien a las células que
lleven al bioquímico a observar el frotis de sangre periférica. Si el recuento se hizo de forma manual es
obligatorio ver el frotis, pero si se hizo de forma automatizada, se observa el frotis en casos de alarma.

Se realiza con una gota no más de 10 ul. En este caso siempre mejor de menos que de más. Si subestiman la
cantidad de gota queda un poco más finito pero nada más, en cambio si la gota es grande ya es difícil de
observar.

Coloración:
- Las coloraciones más usadas son May grunwald Giemsa y Giemsa. Se coloca el May grunwald
luego del secado, se agrega y se deja 3-5 minutos luego unas gotas de buffer fosfato (pH6,8) sobre el
may grunwald. Luego se deja actuar un minuto más y luego se vuelca la solución de trabajo de
Giemsa (dil 1/10 de la sn madre), para desplazar el may grunwald y se colorea con el Giemsa como
coloración final
- Cuando es solo Giemsa se deja de 10-15 min. Se fija con metanol (3-5min) luego se adiciona la
solución de trabajo del Giemsa que es una dilución uno en diez de la madre de la Giemsa.
 - Con wright se coloca directamente de la solución madre de wright se deja actuar 5 min y luego se
hace la dilución con buffer fosfato durante 10 min luego se enjuaga y se mira.

El may grunwald proporciona una coloración a los GR rosa-salmón y a los gránulos eosinófilos les da una
mejor coloración. De todas formas, el Giemsa es muy funcional.

Luego de la coloración se hace la observación microscópica que es en la zona donde los eritrocitos están
separados unos de otros formando una población homogénea y donde están distribuidos equidistantes. Del
origen a la cola la mitad de la mitad, sería la zona apta de observación, donde se recorre en guardia griega.
En la zona central se suelen acumular las células más pequeñas como los linfocitos y en los en los
bordes y en el final de la cola los neutrófilos y los monocitos.

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

El recuento diferencial de leucocitos corresponde a la concentración de las subpoblaciones de glóbulos
blancos en sangre periférica. Bajo condiciones normales, el recuento diferencial de leucocitos está constituido
por 5 poblaciones a saber:
+ Polimorfonucleares neutrófilos
+ Polimorfonucleares eosinófilos
+ Polimorfonucleares basófilos
+ Linfocitos
+ Monocitos
El porcentual y el absoluto.

• El recuento diferencial de leucocitos se realiza mediante su identificación microscópica, hasta completar 100
a 200 células (mejor precisión con 200) en el extendido de sangre periférica.
• El recuento diferencial de leucocitos por método manual depende de la calidad del extendido de sangre
periférica, de la calidad de la coloración y, sobre todo, de la experiencia y habilidad del observador.

CONTADORES HEMATOLÓGICOS
La mayoría de los contadores hematológicos realizan el recuento diferencial de leucocitos, de acuerdo con la
tecnología utilizada por el instrumento. Desde el punto de vista práctico, se dispone de recuento diferencial de
leucocitos de:
•diferencian tres poblaciones por impedancia. ¡Obligatorio en este caso el frotis!
• diferencian cinco poblaciones por dispersión óptica o citometría de flujo. Siempre que este bien
calibrado, con conocimiento del equipo y sin disparos de alarma no hace falta de frotis, pero nunca está de
más hacerlos.
Impedancia: Arriba se observa el recuento de GB que es un histograma en tres picos, que mide linfocitos,
neutrófilos y células medias (eosinófilos, monocitos puede incluir células anormales como blastos, etc.) es de
acuerdo al tamaño al nuclear. Para poder diferenciarlas hay que hacer un frotis. Abajo se observa el
histograma glóbulos rojos y plaquetas eso es igual que cualquier otro contador de cinco poblaciones o de tres
poblaciones en eso no va a diferir si en el principio por el cual se hace el estudio pero no en ningún resultado
en particular.

DOT PLOT: (Abajo) En base a tamaño y complejidad celular. Población celeste son linfocitos (menor tamaño
y complejidad celular). Violeta monocitos, amarillos neutrófilos y verdes eosinófilos. Recordar que el recuento
de eritrocitos y plaquetas lo hacen igual que los de impedancia. La hemoglobina la miden con un
hemoglobinómetro de 3 poblaciones.
UTILIDAD CLINICA
El recuento diferencial de leucocitos permite establecer los conceptos de neutrofilia, neutropenia,
agranulocitosis, eosinofilia, eosinopenia, basófila, basopenia, monocitosis, monocitopenia,
linfocitosis y linfopenia que pueden estar asociados a enfermedades benignas como procesos infecciosos,
procesos inflamatorios y mielotoxicidad, o enfermedades malignas como neoplasias hematológicas.

TROMBOCITOGRAMA
Se define como el análisis cuantitativo y cualitativo de los parámetros relacionados con las plaquetas en
sangre periférica.
Del trombocitograma forman parte el recuento convencional de plaquetas y los nuevos parámetros derivados
de los contadores electrónicos como volumen medio plaquetario y el índice de plaquetas inmaduras. Además
de los parámetros cuantitativos, también forman parte integral del trombocitograma el estudio de la morfología
de las plaquetas en extendidos de sangre periférica.

CONTEO MANUAL DE PLAQUETAS

Hasta la incorporación de los contadores de células al equipamiento de los laboratorios clínicos, la manera de
contar las plaquetas era en la cámara de Neubauer, utilizando el retículo central.
Se utiliza el oxalato de amonio (líquido de Bresher), se diluye y se cuenta al igual que los eritrocitos. Es
necesario dejar un tiempo reposar alrededor de media hora para decanten y sedimenten en la cámara de
neubauer o cámara húmeda.
También manualmente se puede hacer una estimación por un método llamado Método de Fonio, en el cual
hace un extendido de sangre periférica y se cuentan plaquetas por cada eritrocito, es decir, por cada campo,
ustedes ven los 800 300 500 eritrocitos con tantas plaquetas, con 6, 8, 10 plaquetas. Entonces a partir de la
observación de varios campos y según el número de eritrocitos totales hacen una relación, es decir se puede
hacer una estimación del número de plaquetas para constatar si está funcionando bien el contador
hematológico.

El método de recuento es en cámara, la estimación en frotis es para estimar y constatar el recuento.

+ El recuento de las plaquetas puede disminuir por la presencia de agregados de plaquetas y el satelitismo
plaquetario. HACER FROTIS MÉTODO DE FONIO. En trombocitopenia siempre se hace un frotis.
+ El hemograma es un examen que debe interpretarse conociendo la historia clínica, para interpretar e
informar el estudio adecuadamente

¿Qué analizamos respecto de las plaquetas?

 Se cuentan por mm3 (uL) o L.
 Se observa su número, tamaño y la morfología en el frotis.
 Se observa si hay agregados de plaquetas. Si es así el recuento es invalido y hay que tomar nueva
muestra.
 Se calcula el VPM (contador hematologico).
+ El volumen medio plaquetario define, en fL como unidad de volumen, el tamaño de las plaquetas.
+ El volumen medio plaquetario es un parámetro exclusivo de los autoanalizadores de hematología.
+ Valores de referencia El valor de referencia del volumen medio plaquetario es de 6,5 fL a 12,5 fL.
Igualmente, cada laboratorio clínico debe definir sus respectivos valores de referencia de acuerdo con la
población y la instrumentación que pueden modificar los parámetros de un lugar a otro y de una institución a
otra

UTILIDAD CLÍNICA
Con hiperplasia megacariocítica en la médula ósea, la hiperactividad de la megacariopoyesis se expresa en el
hemograma con plaquetas más grandes, que en los contadores hematológicos queda en evidencia como el
volumen plaquetario medio y el porcentaje de plaquetas inmaduras.
Cuando la trombocitopenia está relacionada con un defecto de la producción de plaquetas, el volumen
plaquetario medio se encuentra por debajo del límite inferior, como en: anemia aplásica, anemia perniciosa
(CURSAN CON VPM BAJOS), leucemias agudas, síndromes mielodisplásicos, posterior a tratamientos de
radioterapia y quimioterapia.

PLAQUETAS RETICULADAS
También conocidas como plaquetas inmaduras o reticuloplaquetas, son plaquetas jóvenes, de 1 a 2 días, que
se caracterizan por un alto contenido de ARN (más complejas) que puede ser coloreado con un fluorocromo,
como la OXAZINA, y cuantificado de forma independiente mediante un citómetro de flujo o por láser
incorporado a un autoanalizador de hematología.

Utilidad clínica
Las plaquetas reticuladas en pacientes trombocitopénicos se correlacionan directamente con la actividad
megacariocítica y reflejan el estado clínico de la enfermedad convirtiéndose en un importante indicador de los
pacientes con trombocitopenia.
La fracción de plaquetas inmaduras es baja por plaquetas reticuladas en un paciente con plaquetas normales
como 257.000 y es más alto en un paciente con plaquetas bajas que está recuperando, es alrededor del 16%
con lo cual se espera que en días posteriores el número de plaquetas aumenten porque hay una mayor
actividad trombopoyetica por parte de la médula

RESUMEN
Hemograma
• Serie roja:
– Recuento de eritrocitos.
– Concentración de hemoglobina.
– Hematocrito.
– Índices eritrocitarios.
– Recuento de reticulocitos (NO INCLUÍDO EN LA PRÁCTICA “HEMOGRAMA”)
• Serie blanca:
– Recuento de leucocitos.
– Recuento diferencial de las poblaciones leucocitarias.
• Serie plaquetaria:
– Recuento de plaquetas.
– VPM (si hay contador hematológico)

LA INTERPRETACIÓN DEL HEMOGRAMA

El hemograma debe ser siempre interpretado dentro del contexto clínico del paciente. Se deben analizar los
valores que se expresan en número (absoluto y relativo) y la descripción morfológica de las células.

INTERPRETACIÓN DE LOS VALORES NUMÉRICOS

Los valores numéricos del hemograma se interpretan como anormales si se salen del rango de referencia
establecido. Si están por debajo tendremos cuadros como anemia, trombocitopenia, leucopenia, y si son
mayores eritrocitosis, leucocitosis y trombocitosis.
Hipercromía no es una entidad en sí, sino un fenómeno en determinadas patologías (HCM y CHCM
aumentado)

Es una prueba que se sigue utilizando, es sencilla, económica y que da mucha información sobre el estado
inflamatorio y la composición de las fracciones proteicas que están en el plasma del paciente. La
sedimentación o velocidad de sedimentación globular es una prueba simple pero que da mucha información
en cuanto al estado inflamatorio del paciente. Si bien no es específica de una patología en sí, pero se sigue
utilizando como screening y para el seguimiento de determinadas patologías.
Se puede hacer por métodos manuales o automatizados. En este caso los métodos automatizados no están
tan difundidos. Si bien en laboratorios muy grandes o tiene un gran volumen de muestras se usan métodos
automatizados y algunos tienen muy buena correlación con el método manual, recordar que el método de
referencia es el método manual ya que hay pequeñas cosas de un pequeño grupo de patologías en los cuales
los métodos automatizados no son fiables, como por ejemplo en el caso de el mieloma múltiple. En este caso
no todos los métodos automatizados ponen en evidencia el aumento de la eritrosedimentación como sí lo
hace el método manuales . El método manual no falla y siempre pone en evidencia cualquier desbalance en
las proteínas del paciente o cualquier falla en la función celular. En la figura de la izquierda vemos el método
clásico con pipeta de Western Wing de vidrio, se llenan las pipetas enrasa en 100, con sangre anticoagulado
con citrato en la proporción 1 en 4 (se aprueba que se use sangre anticoagulada con edta que después se
haga la dilución con citrato o no). Se lleva a cero y se apoya en el portapipeta y se deja una hora y se mida la
sedimentación del paquete globular después de una hora. Hay métodos comerciales.

La eritrosedimentación está formada por tres fases: una primera fase de agregación y aglutinación en el
cual se empiezan a formar las pilas de monedas y los glóbulos rojos que dura más o menos los primeros 10
minutos. Una segunda fase de sedimentación en el cual estos núcleos de tiras de monedas se van
agrupando con otros que éstos duran alrededor de 40 minutos y la fase final de los últimos diez minutos de
empaquetamiento o depósito de todos estas pilas de monedas de glóbulos rojos formadas, proteínas del
plasma que interfieren en la normal repulsión de los glóbulos rojos.
Los glóbulos rojos son muy ricos en ácido siálico en la membrana. El ácido siálico es una molécula de carga
negativa, por el mismo está conformado el coeficiente z o potencial z de los glóbulos rojos: esto es la
capacidad de repulsión entre glóbulos rojos de carga negativa cuando el plasma es rico en proteínas como el
fibrinógeno o las inmunoglobulinas. Estas últimas son proteínas que disminuyen el potencial z de los glóbulos
rojos y permiten una agregación mucho más rápida. Entonces este desbalance inflamatorio de proteínas
lo que hace es disminuir el potencial z los glóbulos rojos y estos van a formar el fenómeno de
hemaglutinacion o formación en pila de monedas entre ellos mismos formando la escuela
sedimentación y la fase de empaquetamiento aumentando la sedimentación en una hora. Con una
composición normal de proteínas o habitual, la albúmina ,de carga negativa, no disminuye el potencial z entre
los glóbulos rojos.
Mieloma múltiple especialmente porque hay una liberación muy importante de una inmunoglobulina o
componente monoclonal y éste va a disminuir marcadamente el potencial z de .