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Núcleo de Sucre
Departamento de Bioanalisis
Citología
Bachilleres:
Belmonte Marcelys
Cornivell Josselyn
González Favianny
La citología hormonal se inicia con Pouchet, médico y Profesor de Zoología del Museo de
Historia Natural de Rouen, quien descubrió los cambios citológicos en material fresco de
secreción vaginal de la mujer. Pero es realmente con Moraou que comienza el estudio de
la citología vaginal hormonal. Este investigador present6 en 1899, a la sociedad de
Citología de Paris, sus observaciones sobre los cambios cíclicos en la vagina de los
roedores pequeños.
Uno de los primeros en utilizar la citología para el diagnóstico de las lesiones cancerosas
fue Veale, quien en 1880 reconoció células malignas en un tumor faríngeo6. Siguieron
luego numerosas publicaciones sobre diagnóstico citológico, sin que el método fuese
aceptado en la clínica.
En 1927 presentó sus resultados en una Conferencia en Battle Creek, Michigan. El trabajo
titulado Nuevo Diagnóstico del Cáncer (New Cáncer Diagnosis), describía las células
malignas en los extendidos vaginales. Fue publicado en los Proceedings del Congreso en
1928, pero no despertó mayor interés en la comunidad científica medica. Paralelamente,
en 1927, el pat6logo rumano Aurel Babes presentaba a la Sociedad de Ginecología de
Bucarest sus observaciones sobre las características de las células tumorales obtenidas por
raspado cervical con un asa bacteriológica. El trabajo fue publicado en 1928 en Presse
Medicale con el titulo Diagnostic du Cáncer du Col Uterine par le frotties. Como en el caso
de Papanicolaou, la idea no tuvo mayor trascendencia. El único que utilizó el método fue
un ginecólogo de Verona, Italia, de nombre Odorico Viana7.
El método de la citología tuvo inicialmente mucha resistencia para su use clínico. En los
mismos EU de A tenia detractores, sobre todo patólogos, pero también defensores, como
Rubin, Meiggs, Stewart y Koss. Ewing, considerado como el padre de la patología del
cáncer de los Estados Unidos, fue inicialmente escéptico; para 61, el cuello del útero era lo
suficientemente accesible a la biopsia, de modo que la citología era un examen superfluo.
A Ewing, quien fue Director del Memorial Hospital de Nueva York, se le diagnosticó cáncer
de la vejiga, diagnóstico que sus colegas trataron de ocultar, pero el comenzó a examinar
a intervalos su propio sedimento urinario y cuando identificó las células malignas, anunció
a sus colegas que ya conocía el tipo de cáncer que padecía4.
En 1947, Ernest Ayre introdujo la espátula que lleva su nombre, para obtener por raspado
células del orificio cervical externo en lugar de la aspiración del fondo de saco posterior8.
Este instrumento permitió mejores resultados, al bajar la excesiva tasa de falsos negativos
por toma inadecuada de la muestra.
La técnica de la citología de aspiración con aguja fue ensayada por primera vez por Kronig,
en 1884, para diagnosticar un cáncer pulmonar9. El temor de diseminar el cáncer
mediante la biopsia motivó la introducción de la citología por aspiración de los tumores.
En 1920, Hayes Martin y Edward Ellis, tecnólogo de Ewing, del Memorial Sloan Kettering
Hospital de Nueva York, comenzaron a usar agujas gruesas calibre 16 a 18, con una jeringa
de 20 mL, para obtener aspirado de tumores palpables, come los de mama y ganglios
linfáticos. Con el material aspirado, se preparó extendidos gruesos que eran coloreados
con hematoxilinaeosina, y los fragmentos tisulares residuales llama-dos "coágulos" eran
procesados come biopsias8. En 1947, Oschner y De Bakey objetaron el procedimiento,
porque en algunos de sus pacientes se había producido implantes de tumor en el sitio de
la punción10. La técnica de la citología por aspiración fue modificada en Europa con el uso
de agujas finas de calibre 22 por investigadores daneses y suecos, particularmente
Soderstromm, Franzen y Zajicek. Desde entonces, la técnica de la citología por aspiración
con aguja fina es ampliamente aceptada.
Para las muestras de orina se recogerá la segunda micción de la mañana, previa ingestión
de líquidos. Se centrifuga a 1.500 rpm durante 5 min, se extiende sobre el portaobjeto y se
fija.
PUNCIÓN-ASPIRACIÓN:
Esta técnica ha ampliado enormemente el campo del estudio citológico. El utillaje es muy
simple, consta de jeringas desechables, agujas finas (0,6mm) con diferente longitud y si es
factible pistola portajeringas, así como guías de aguja para punciones de determinados
órganos como próstata y ovario. Este tipo de toma tiene diferentes vertientes: cavidades,
nódulos y masas quísticas.
En muchas ocasiones por el arrastre de hematíes requerirá una heparinización del líquido
(3 gotas de heparina son suficientes) para lisar los hematíes y facilitar el estudio
morfológico del material.
Nódulos: cuando se puede delimitar la masa tumoral, se fija con una mano, mientras que
con la otra se introduce la aguja (evitar el dolor al atravesar la piel incidiendo de forma
tangencial), una vez en la zona del tumor se aspira, y al mismo tiempo se retira un poco la
aguja moviéndola en 2 o 3 direcciones, manteniendo la presión. Una vez finalizada la
aspiración se deja que el émbolo vuelva a su posición y se retira el bloque aguja-jeringa, se
retira la aguja, se aspira aire en la jeringa, se coloca la aguja de nuevo, se impulsa el
émbolo sobre el portaobjeto y se recoge en él el contenido.
La extensión puede realizarse suavemente con otro portaobjeto o con la misma aguja
horizontalizada.
Masas quísticas: si al puncionar una masa la jeringa se llena de líquido, ello indica que,
normalmente, nos encontramos ante una cavidad quística. El líquido recogido debe
remitirse directamente al laboratorio. Los ejemplos típicos de este tipo de toma son:
tiroides, mama, ovario, etc.
Permite localizar zonas de sospecha a veces mínima, de las cuales nos interesaría dilucidar
sus características de benignidad o malignidad. La introducción de equipos de guía de
punción nos facilita la posibilidad de obtener material valorable para el estudio citológico
en estas localizaciones.
La utilidad de la técnica:
Otro órgano que por su accesibilidad tiene la oportunidad de beneficiarse de este tipo de
punción dirigida es el tiroides.
En los casos de punción dirigida diagnóstica se realiza una valoración de celularidad con
una técnica de tinción rápida, Diff Quick, con lo cual se evita la reiteración de la punción
por escases de material celular.
Impronta: es una técnica clásica muy utilizada para el estudio de ganglios linfáticos que
pueden ser de gran utilidad en biopsias y piezas peroperatorias.
En general, el mismo cirujano en pleno campo operatorio toma una muestra del tejido a
estudiar por medio de una sección con el bisturí presionada suavemente sobre el
portaobjeto (impronta). En otras ocasiones, también intraoperatoriamente se hace un
raspado de la zona a estudiar con el bisturí, extendiendo el material sobre el portaobjeto.
En realidad cualquier técnica se puede emplear para el estudio peroperatorio y
procesándose con carácter de urgencia para obtener un resultado inmediato.
Raspado: esta técnica se puede realizar con cualquier instrumental: espátula, bisturí,
cánula, etc. Los ejemplos característicos de este tipo de toma los hallamos en la triple
toma cervicovaginal de Wied en el cuello uterino, en la toma de mucosa oral con
espátula, en las toma de mucosa endometrial con cánulas (Medhosa, espiral de Mi-Mark)
y las tomas de vulva con bisturí.
Cepillado: los avances en los instrumentos de exploración endoscópicas, como son los
fibroscopios flexibles con múltiples complementos (cepillos), nos permiten realizar
cepillados de zonas muy concretas que nos interesa estudiar. Una vez realizado el
cepillado se pueden lavar en suero fisiológico o bien se extiende el material directamente
sobre el portaobjeto.
En todo momento se hará cuidadosamente para no alterar las células, procurando que
quede una fina película de material sobre el portaobjeto, con el fin de facilitar una buena
tinción de todo el material, que nos permitirá un buen estudio morfológico de éste.
A veces puede resultar útil el desplazamiento del material con otro portaobjeto para que
no quede amontonado, pues el extendido debe ser fino y uniforme, a la manera de la
extensión hematológica.
CENTRIFUGACIÓN
Actualmente existe citocentrifugas (tipo Cytospin), con las que se consiguen mejores
resultados que con los convencionales. Este tipo de centrifuga consta de un rotor central
que se dispone de 12 espacios con recipientes, a los que se pueden adaptar otros tantos
líquidos. Dependiendo de la densidad de los líquidos se puede decantar la parte
sobrenadante y realizar una nueva centrifugación o forzar las revoluciones, ya que se
puede llegar hasta 2.000 rpm. Quizás un inconveniente sea el que deben utilizarse filtros
troquelados, no siempre fáciles de obtener, y que la técnica responsable debe ser muy
cuidadosa.
FIJACIÓN
MEDIOS DE FIJACIÓN
Alcohol éter
Alcohol de 95º
Nebulizadores (sprays) comerciales
Secado al aire
ALCOHOL- ÉTER: se utiliza una mezcla de alcohol etílico de 90º y éter a partes iguales con
un pH de 6.8 a 7; la mezcla debe guardarse en frascos de boca ancha y, si puede ser, con
pestañas verticales que facilitan la colocación de varias preparaciones en un solo frasco.
Las preparaciones deben mantenerse en esta mezcla fijadora un mínimo de 15 min. Y un
máximo de 6 días para teñirlas posteriormente.
A los fijadores nombrados se les puede añadir ácido acético al 2.5% con lo que lisan los
hematíes; por ello, en las preparaciones en que se sospecha su existencia, resulta una
buena solución para evitar la dificultad que representa una presencia masiva de
hematíes, recubriendo a los elementos celulares motivo de estudio. Esta mezcla no debe
realizarse en los casos en que se desee realizar una valoración citológica hormonal (toma
vaginal o urinaria), ya que se produce una falsa eosinofilia que puede llevar a confusión al
realizar el recuento para el índice de eosinofilia.
SECADO AL AIRE: suelen usarse cuando se van a emplear tinciones como las de May-
Grünwald-Giemsa. Con esta tinción no se puede observar bien el detalle de la cromatina
nuclear, cosa que suele interesar mucho al citopatológo y que se consigue muy bien con
tinciones como las de Papanicolaou, pero en estos casos no es útil el secado al aire por
producirse oxidación y dificultad para interpretar la visión citológica. En las extensiones
de sangre es una técnica muy utilizada, por contrastar las granulaciones citoplasmáticas
de gran interés en el diagnóstico de la patología hematológica.
IDENTIFICACIÓN
Toda solicitud de análisis que llegue al laboratorio de citología debe cumplir una serie de
requisitos para una buena interpretación diagnóstica.
Se rellenará con letras mayúsculas y con los siguientes datos, como mínimo: nombre, tipo
de toma, edad, clínica y características técnicas citológicas (tabla 3-1). En los laboratorios
citológicos se utilizan un petitorio más detallado codificado para un programa de
ordenador, lo cual permite disponer de mayor número de datos del paciente y facilita
enormemente los trabajos científicos y el control estadístico.
Tabla 3-1. Datos mínimos de un impreso de solicitud para realizar un estudio citológico
Dictamen nº
Habit. Nº
Remite Dr.
Nombre……………………………………………………………………………………………………………………………
……………
Toma
de………………………………………………………………………………………………………………………………………
..
FUR……………………………………..Edad…………………………….Gestación………………………………………
………….
Motivo estudio
a) Fijador utilizado
b) Breve resumen de la historia clínica
c) Impresión del diagnóstico clínico
TINCION
La célula, que es una porción de materia orgánica, tiene una composición determinada,
que varia discretamente según el tipo de tejido, y unas características físicas propias, que
determinan la posibilidad de ser teñidas. Se debe tener en cuenta que en estado normal
las células presentan muy poco contraste.
Hay un segundo elemento que es el colorante que vamos a añadir para que aumente el
contraste de las diferentes estructuras celulares.
TEORIA DE LA COLORACION CELULAR.
En los colorantes por medios físicos se trata de una pura difusión del colorante (coloración
por impregnación), y en las coloraciones por adsorción se originan precipitaciones
(coloración por precipitación).
E las coloraciones físicas, el primer proceso que se da es la disolución del colorante en las
estructuras celulares y un ejemplo son las tinciones para grasas (Sudan III).
TIPOS DE COLORANTES.
1. Colorantes Básicos: son sales que tiñen muy bien las estructuras acidas;
pertenecen a este grupo: azul de metileno, azul de toluidina, violeta de metilo y
verde de metilo.
2. Colorante Ácidos: son sales que tiñen las estructuras básicas. En este grupo se
hallan: eosina, eritrosina, verde brillante, fuscina acida, etc.
3. Colorantes Neutros: son unas sales con componente acido y básico capaces de
colorear. El eosinato de azul de metileno (componente de la tinción de Giemsa) es
el ejemplo más característico.
Coloración Directa.
Coloración Indirecta.
Coloración Progresiva.
Coloración Regresiva.
Coloración Simple.
Coloración Panóptica.
Coloración Pancrómica.
Las tinciones de uso habitual en los laboratorios de citología son los siguientes:
TECNICAS MICROSCOPICAS.
Las técnicas de estudio por fluorescencia se basan en que existen sustancias que se
excitan al incidir en ellas los rayos ultravioletas la cual es el fenómeno de la fluorescencia
primaria.
Con esta técnica de tinción se diferencian claramente las áreas con contenido de RNA y
DNA que nos muestran fluorescencias diferentes (rojizo, anaranjado o verdoso).
NORMAS GENERALES PARA LA LECTURA DE LAS EXTENSIONES CITOLOGICAS
Para poder leer una preparación citológica bajo el microscopio es indispensable que toda
su elaboración previa haya sido totalmente correcta. Ello implica:
1. Que la toma del material celular se realiza guardando las normas antes
mencionada, con el material y técnica adecuada para cada caso.
2. Que la fijación sea la adecuada y se realice de inmediato a la práctica de la
extensión del material en el portaobjeto.
3. Que la tinción sea la más adecuada, de acuerdo a la pretención clínica que se
desee, si es un estudio puramente morfológico o si se solicita una valoración
hormonal.
4. Que el montaje de la preparación sea correcto para evitar con el retardo la
oxidación y la hidratación.
SISTEMA DE ESTUDIO
Por ultimo, se debe realizar el examen citológico, que en definitiva es lo que se pretende
con esta sistemática de estudio.
SUSTANCIA DE FONDO
FONDO LIMPIO: es aquel que permite visualizar perfectamente los elementos celuares y
su identificación.
FONDO SUCIO: es aquel que dificultad la lectura y no permite delimitar bien los elementos
celulares. Aquí se puede englobar el término de diátesis tumoral, que se asocia a las
neoplasias malignas avanzadas y estan constituidos por productos de desintegración
tumoral (detritus celular).
CANTIDAD CELULAR
DISPOSICIÓN CELULAR
Las células se pueden hallar de formas totalmente aislada o formando grupos con
características definidas. El motivo de que la célula se presente de una u otra forma está
relacionando con varios aspectos: del tipo de toma, tejido de base y enfermedad causal.
Existen múltiples denominaciones para designar a los grupos celulares que se hallan en los
extendidos citológicos. En el cual se menciona lo siguiente:
TAMAÑO CELULAR
El tamaño celular es muy variable, oscilando desde las pequeñas células de la microglia de
5µm de diámetro a las 200µm del ovulo femenino. Hay una aspecto a la relación del
tamaño que debe valorarse cuidadosamente y es que existe una relación entre el nucleo y
citoplasma que se mantiene constante en cada estirpe celular.
Cuando se observa una celula, debe tenerse muy en cuenta este aspecto, pues lo que
puede resultar normal en los tejidos puede ser patológico si lo aplica a otro. El tamaño
celular guarda relación con la función que desarrolla la célula.
La forma de la celula varia según el tejido estudiado y en relación con la función que
desarrolla. La forma celular viene dada por el conjunto del aspecto morfológico del
citoplasma y núcleo, y en ello puede influir la técnica de toma y la existencia o no de
agentes que pueden alterarla. Las formas pueden se multiples pero hay dos grandes
grupos fundamentales que se describen a continuación:
Isodiamtericas:
Anisodiamtericas:
Es ahora el momento de observar los mas pequeños detalles que pueden ayudar a
precisar si las células en estudio son normales o están alteradas, y en este caso hasta que
grado; para esto es indispensable los grandes aumento de observación microscópica. El
objetivo de inmersión facilitara la visión de la trama cromática y sus mas pequeños
detalles.
Toda la sistemática hasta aquí señalada es notorio que necesita de unos cuantos factores
imprescindibles para su seguimiento; por ejemplo, es fundamental el tiempo, pues debe
emplearse todo el necesario; no se puede realizar el estudio citológico con prisas. Es decir,
la calma es muy importante; en caso de dudas recomendamos dejar la observación para
volver a ella en un segundo tiempo al cabo de unos minutos, de unas horas o de un dia;
quizás entonces con mente mas fresca se pueda interpretar aquello que en un primero
intento no se puede comprender.
SEÑALIZACIÓN DE CAMPOS
Es muy recomendable que una vez estudiada toda la preparación se señale los campos
citológicos de mayor interés con un punto o un circulo para poder ser observado
posteriormente con rapidez en su búsqueda tanta veces como se necesite, sea por un
motivo de docencia, por una revisión del caso, como control de calidad o por
revalorización del informe, dado el resultado del estudio anatomopatologico.
INFORME CITOLOGICO
El fin ultimo del estudio citológico es orientar la patología del enfermo para que con un
tratamiento adecuado pueda recuperar la salud.
El informe debe constar de una descripción minima del fondo de la preparación, de los
elementos celulares observados, asi como de sus características para concluir en un
resumen diagnostico y unas sugerencias de cara al clínico solicitante.
ARTEFACTOS Y CONTAMINANTES
Los artefactos de técnicas son alteraciones de las extensiones ocurridas durante su
procesado que originan imágenes no habituales reproducibles.
Los contaminantes son partículas y organismos que aparecen en las extensiones y que son
ajenos a la población celular y la flora especifica de la región tisular en objeto de estudio.
Se dividen en:
Intratintoriales:
Sin embargo el diagnostico citológico tiene sus limitaciones para el diagnóstico de tumores
malignos, estese basa fundamentalmente en los caracteres celulares de malignidad
(heterotipía); el extendido no permite ver directamente la distorsión de la
microarquitectura ni la invasión. En algunos casos es difícil distinguir entre caracteres
citológicos de cáncer y anaplasia de regeneración. La aplicación de técnicas de
inmunohistoquímica es más dificultosa que en los cortes histológicos. Finalmente, es
necesario destacar que un diagnóstico negativo para cáncer no descarta la existencia de
un tumor maligno, especialmente cuando ese diagnóstico no demuestra una lesión
benigna específica (tumor benigno, agente etiológico de un proceso infeccioso). Esta
aseveración es válida para todos los métodos de diagnóstico.
BIBLIOGRAFIA
CITOPATOLOGIA GINECOLOGICA Y MAMARIA. 2º Edicion. Editorial MASSON – SALVAT
Medicina. Edicion Cientifica y Tecnica, S.A.
Autores: A. Fernandez – CID
L. Lopez Marin