RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS por UFC/g o UFC/ml

1. OBJETIVO: Cumplir con las normas establecidas para los Laboratorios según resolución ICA
093858 e ISO/IEC 17025: 2017.

2. Alcance:

Alcance: el recuento de mohos y levaduras viables en productos elaborados

para consumo humano o animal por medio de la técnica de recuento de
colonias a 25 °C.

Material

 Horno
 Autoclave
 Incubadora temperatura a 25 °C ± 1 °C.
 Baño de María
 Medidor de pH
 Frascos o Erlenmeyer
 Pipetas graduadas
 Cajas de Petri, de 90 mm a 100 mm de diámetro

Reactivos y medios

 Medio agar-extracto de levadura-dextrosa-cloranfenicol

9.2 Inoculación e incubación

9.2.1 Se toman dos cajas de Petri estériles. Se transfiere a cada caja de Petri,
con una pipeta estéril) 1 ml de la muestra si es líquida o 1 ml de la suspensión
inicial en el caso de otros productos.
9.2.2 Se toman otras dos cajas de Petri. Se transfiere por medio de otra
pipeta estéril, 1 ml de la dilución 10-1 (producto líquido), o 1 ml de la dilución
10-2 (otro producto).
Se repite el procedimiento anterior usando mayores diluciones si es necesario.

9.2.3 Se transfieren desde uno de los frascos de cultivo a cada caja de Petri,
aproximadamente 20 ml del medio agar-extracto de levadura-dextrosa-
cloranfenicol previamente fundido y mantenido a una temperatura de 45 °C ± 1
°C, en baño de María. El tiempo transcurrido entre el final de la preparación de
la suspensión inicial (o de la dilución 10-1 si el producto es líquido) y el
momento en que el medio se transfiere a las cajas de Petri no debe exceder los
20 min.

Cuidadosamente, se mezcla el inóculo con el medio y se permite que la mezcla

solidifique, dejando que las cajas de Petri permanezcan en una superficie
horizontal fría. Se debe preparar una caja de Petri de control, con 15 ml del
medio para verificar su esterilidad.

9.2.4 Se invierten las cajas de Petri y se llevan a la incubadora a una

temperatura de 25 °C ± 1 °C.

9.3 Interpretación

Se cuentan las colonias de cada caja después de 3 d, 4 d y 5 d de incubación. Después

de 5 d, se cuentan las cajas que contengan menos de 150 colonias. Si en alguna parte de
la caja hay sobrecrecimiento con mohos o si es difícil contar colonias bien aisladas, se
emplean los conteos realizados a los 4 d o 3 d de incubación. En este caso se refiere el
periodo de incubación como de 3 d o 4 d en el reporte de ensayo. Si es necesario, se
llevan al microscopio para distinguir las colonias de mohos y levaduras de las bacterias,
de acuerdo con su morfología.

10. Expresión de resultados

10.1 CÁLCULO

10.1.1 Se usan para el recuento, los platos que contengan menos de 150 colonias.

10.1.2 El número de levaduras y de mohos por gramo o por mililitro es igual a:

∑C
------------------
(n1 + 0,1 n2) d
Donde:
∑C es la suma de colonias contadas en todas las cajas
n1 es el número de cajas contadas de la primera dilución
n2 es el número de cajas contadas de la segunda dilución;
d es el factor de dilución con que se obtuvo el primer recuento (por ejemplo, 10-2)

10.1.3. Se debe redondear el resultado a dos cifras significativas. Cuando el número que
se redondea es 5 y no hay otras cifras significativas, se redondea el número para dar una
cifra par inmediatamente a la izquierda, por ejemplo 28 500 se redondea a 28 000; 11 500
se redondea a 12 000.

10.1.4 El resultado se expresará como un número entre 1,0 y 9,9 multiplicado por 10x,
donde x es la potencia apropiada de 10.

 Si no hay colonias en las cajas de la suspensión inicial, y si el producto inicial era

sólido, el número de levaduras y mohos por gramo del producto se debe reportar
como “< 10” (menor de 10).

 Si no hay colonias en las cajas de la muestra de ensayo y si el producto inicial es

líquido, el número de mohos y levaduras por mililitro de producto debe reportarse
como “< 1” (menor de 1).

10.2 EJEMPLO DE CÁLCULO

Un recuento de mohos y levaduras dio el siguiente resultado (se incubaron dos cajas de
Petri por dilución):
dilución 10 -2: 83 y 97 colonias
dilución 10 -3: 33 y 28 colonias

∑C 83 + 97 + 33 + 28 241
------------------ = ------------------------ = --------------- = 10 954
(n1 + 0,1 n2) d [2 + (0,1 x 2)] x 10-2 0,022