Fermentacion de Bactetrias

Efecto de la inoculación conjunta con hongos
micorrizales y microorganismos solubilizadores

de fósforo en plantas de aguacate
Sandra Luz Serna Gómez
Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias, Instituto de Ciencias Naturales y Exactas
Medellín, Colombia
2013
II Efecto de la inoculación conjunta con hongos micorrizales y microorganismos
solubilizadores de fósforo en plantas de aguacate
Efecto de la inoculación conjunta con

hongos micorrizales y
microorganismos solubilizadores de
fósforo en plantas de aguacate
Sandra Luz Serna Gómez
Trabajo de investigación presentado como requisito parcial para optar al título de:
Magister en Geomorfología y Suelos
Director:
Nelson Walter Osorio Vega, Ph.D
Línea de Investigación:
Microbiología de Suelos
Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias, Área Curricular de Ciencias Naturales
Medellín, Colombia
2013
A mi madre y a mi padre, por siempre
Agradecimientos
Este trabajo se realizó con el apoyo financiero de la Dirección de investigaciones (DIME)
de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín, en el marco de la actividades del
Grupo de Investigación en Microbiología del Suelo. Proyecto: “Desarrollo de estrategias
biotecnológicas para incrementar el crecimiento, productividad y calidad del cultivo de
aguacate (Persea americana Mill) en el Norte de Antioquia”.
Expreso mis más sinceros agradecimientos,
Al Director Nelson Walter Osorio Vega por su dirección, sus grandes enseñanzas y
acompañamiento en todo el proceso.
A la Ingeniera Beatriz Elena Montoya por compartir sus conocimientos y su amplia

experiencia como Asesora en cultivos de aguacate y su inconmensurable apoyo en la
primera fase de la investigación.
Al Dr. Álvaro Tamayo, investigador de CORPOICA La Selva por toda su colaboración en

la logística, su atenta disposición durante toda la etapa de campo y especialmente por su
calidad humana.
Al Sr. Julio César Tabares, Técnico de CORPOICA La Selva por su acompañamiento

incondicional en las etapas de vivero y campo y por compartir sin miramientos ni
egoísmos toda su experiencia.
A don Luis y José por la ayuda que recibí de ellos en la fase de campo.
A las directivas de CORPOICA La Selva por permitir ocupar parte de su terreno para el
establecimiento de las plantas de aguacate.
A Gloria Stella Mazo y Nicolás Álvarez del Laboratorio LECA de la Universidad Nacional
de Colombia por las discusiones teóricas con las especulábamos alrededor de un buen
café y una buena música.
VI Efecto de la inoculación conjunta con hongos micorrizales y microorganismos
Al Ingeniero Agrónomo Diego Valencia por permitirme ser testigo de su pasión por las
micorrizas a través del estereoscopio.
A Margarita Sizquiarco, Cristina Valencia del Laboratorio de Suelos de la Universidad

Nacional de Colombia.
Y muy especialmente a mi madre quien estuvo siempre allí en los momentos más críticos
dándome ánimos y su abrazo caluroso y a mi padre que también con ella visitaba el
huerto y me apoyó sin restricción.
Resumen
Se evaluó el efecto de la inoculación conjunta con dos fuentes de hongos formadores de
micorriza arbuscular [monoespecie: Glomus fasciculatum; multiespecie: Glomus spp.,
Entrophospora sp., y Scutellospora sp.] y microorganismos solubilizadores de fósforo
[Mortierella sp., Aspergillus niger, Serratia sp., Pseudomonas koreensis, Cepa local]
sobre el crecimiento y absorción de P por plantas de aguacate (Persea americana Mill.)
var. Hass bajo condiciones de campo. El diseño experimental fue completamente al azar,
con un arreglo factorial de tratamientos 3x6 [tres niveles de inoculación micorrizal: AMF
monoespecie, AMF multiespecie y no-inoculación) y seis niveles de inoculación con PSM
(incluyendo un tratamiento de no-inoculación). Cada tratamiento tuvo cuatro repeticiones.
Las inoculaciones no afectaron significativamente las variables biométricas, pero si la
concentración de P foliar. Sin embargo, el efecto fue variable en función del tiempo de
muestreo y de la combinación del inóculo usado (AMF, PSM).
Un muestreo de la rizosfera y raíces de huertos de Aguacate en el Norte y Oriente
Antioqueño permitió detectar diferencias estadísticamente significativas en la abundancia
de PSM y colonización micorrizal; así mismo, se detectó una alta variabilidad en los
valores de pH y P soluble de la rizósfera debido muy probablemente a excesos con el
uso de cales y fertilizantes fosfóricos.
Palabras claves: biofertilización, rizosfera, fósforo soluble, micorrizas.

2 Introducción
Abstract
A field study was conducted to determine the effects of dual inoculation with arbuscular
mycorrhizal fungi inocula [monospecie: Glomus fasciculatum; multispecie: Glomus spp.,
Entrophospora sp., and Scutellospora sp.] and phospahte solubilizing microorganisms
[Mortierella sp., Aspergillus niger, Serratia sp., Pseudomonas koreensis, local isolate] on
plant P uptake and growth of avocado (Persea americana Mill.) var Hass. The
experimental design was completely randomized, treatment had a factorial arrangement
3x6 [three levels of mycorrhizal inoculation (AMF monospecie, AMF multispecie and no-
inoculation) and six levels of PSM inoculation (including a no-inoculated treatment).Each
treatment had four replicates. Microbial inoculations did not affect significantly the growth
of avocado plants, but they did affect P foliar concentration. However, this effect was
influenced by the sampling time and the type of inocula (AMF, PSM) used.
Sampling rhizosphere and roots of avocado plantation from the Eastern and Northern
Antioquia allow detecting significant differences in the abundance of PSM and mycorrhizal
colonization. Also, it was detected a high variability of rhizosphere pH and soluble P due
to excess in liming and P fertilization.
Keywords: biofertilization, rhizosphere, soluble phosphorus, mycorrhiza.

Introducción 3
Contenido
Resumen………………………………………………………………………………………..…1
Introducción………………………………………………………………………………………8
1. Marco teórico .......................................................................................................... 11

1.1 El Aguacate “Hass” como propuesta exportadora ............................................ 11
1.2 El fósforo en los Andisoles ............................................................................... 13
1.3 Microorganismos solubilizadores de fósforo ..................................................... 14
1.4 Micorrizas ........................................................................................................177
1.5 Efecto de las co-inoculaciones AMF y PSM ..................................................... 18
2. Determinación del pH del suelo, la concentración de fósforo y la presencia de

AMF y PSM en huertos de aguacate Hass del norte y oriente antioqueño ............... 20
2.1 Materiales y métodos ......................................................................................222
2.2 Resultados ......................................................................................................255
2.3 Discusión ......................................................................................................... 30
3. Efecto de la coinoculación con hongos formadores de micorrizas arbusculares

y microorganismos solubilizadores de fósforo sobre el crecimiento y la absorción
de fósforo de plantas de aguacate bajo condiciones de campo................................ 37
3.1 Materiales y métodos ......................................................................................388
3.2 Resultados ......................................................................................................488
3.3 Discusión ......................................................................................................... 57
4. Conclusiones y recomendaciones ........................................................................ 62

4.1 Conclusiones...................................................................................................622
4.2 Recomendaciones...........................................................................................633
5. Bibliografía……………………………………………………………………………………65
4 Introducción
Lista de figuras Pág.

Figura 2.1. Histograma de frecuencia del pH en los suelos rizosféricos de 26
huertos de aguacate en el Norte y Oriente antioqueño.
Figura 2.2. Histograma de frecuencia del contenido de P en solución de los 27

suelos rizosféricos de huertos de aguacate del Norte y Oriente antioqueño.
Figura 2.3. Histograma de frecuencia de PSM (UFC.g -1) en la rizósfera de

huertos de aguacate del Norte y Oriente de Antioquia 29
Figura 2.4. Histograma de frecuencia del % de colonización de AMF en

huertos de aguacate del Norte y del Oriente de Antioquia 30
Figura 2.5. Gráfica de pesos de los componentes. Análisis de Componentes

Principales entre las variables colonización micorrizal (%) (CM), Edad (E), P
soluble (mg.L-1) (P), pH, PSM (UFC.g-1) para los huertos de aguacate Hass del
norte antioqueño. 31
Figura 2.6. Variabilidad en los contenidos de P soluble de la rizósfera de

plantas de aguacate Hass entre la subregiones norte y oriente antioqueño. 34
Figura 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012 (Estación

Meteorológica CORPOICA “La Selva”) 40
Figura 3.2. Aspectos generales de las cajas en las cuales se realizó la

desinfección del suelo con Basamid. 41
Figura 3.3. Aspecto general del material vegetal (37 cm de altura) y de la raíz
al momento del transplante a las bolsas con suelo estéril y fertilizado. 42
Figura 3.4. Cepas de Aspergillus niger, Serratia sp., Mortierella sp. y cepa
local 43
Figura 3.5. Casa malla donde permanecieron las plantas antes del trasplante
a campo 45
Figura 3.6. Aspecto general del sitio en el cual se realizaron los hoyos para el
trasplante. 46
Figura 3.7. Toma de muestra foliar con un perforador 47
Figura 3.8. Altura de plantas de aguacate en función de la inoculación con

AMF y PSM 52
Figura 3.9. Masa seca aérea de plantas de aguacate en función de la

inoculación con AMF y PSM 52
Figura 3.10. Concentración foliar de P (%) de plantas de aguacate en función

de la inoculación con hongos formadores de micorrizas (AMF) en diferentes
Introducción 5
días de muestreo después de la inoculación 55
Figura 3.11. Concentración foliar de P (%) de plantas de aguacate en función

de la inoculación con (PSM) en diferentes días de muestreo después de la
inoculación. 56
Figura 3.12. Contenido de P foliar (mg.L-1) en cada uno de los tratamientos

con PSM y en presencia (+GF, +MZ) o no de AMF (Mo) a través del tiempo. 60
6 Introducción
Lista de tablas
Tabla 2.1. Localización de los huertos de evaluación del aguacate Hass 23
Tabla 2.2. Identificación de los sitios de muestreo en las subregiones Norte y

Oriente antioqueño 28
Tabla 2.3. Valores de significancia de los análisis de varianza para las

diferentes variables estudiadas (colonización micorrizal (%), edad, P soluble
mg.L-1, pH y PSM (UFC.g-1) para los huertos de aguacate Hass del norte y
oriente antioqueño. 31
Tabla 2.4. Análisis de componentes principales de las variables Colonización

micorrizal, edad, contenido de P soluble, pH y PSM 32
Tabla 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012 (Estación

Meteorológica CORPOICA “La Selva”) 39
Tabla 3.2. Propiedades físico-químicas del sustrato inicial y de suelos de las

fases vivero y campo 43
Tabla 3.3. Tratamientos establecidos en la experimentación 45
Tabla 3.4. Valores de significancia de los análisis de varianza para la altura,

grosor del tallo y masa seca de las plantas de aguacate en función de la
inoculación micorrizal (AMF), con PSM y la interacción entre ambos inóculos. 49
Tabla 3.5.Valores de significancia de los análisis de varianza para la

concentración de P foliar (%) de las plantas de aguacate en función de la
inoculación micorrizal (AMF), con microorganismos solubilizadores de fósforo
(PSM) y la interacción entre ambos factores. 54
Introducción 7
Lista de Símbolos y abreviaturas
Símbolo Término Unidad SI Definición

ha Hectárea ha 10000 m2
kg Kilogramo
t Tonelada t 1000 kg
-1
mg miligramo mg.L
UFC Unidades formadoras de colonia UFC
L Litro L 1000 cm3
cmol centimol cmol mol/100
Abreviaturas
Abreviatura Término
AMF Hongos formadores de micorriza
PSM Microorganismos solubilizadores de fósforo
GF Glomus fasciculatum
MZ Inóculo micorrizal multiespecie
MRT Mortierella sp.
ASP Aspergillus niger
PSD Pseudomonas koreensis
NAT Cepa local
SER Serratia sp.
Mo Sin inoculaicón micorrizal
8 Introducción
Introducción
El aguacate es un cultivo contemplado dentro de la Apuesta Exportadora para frutos de
ciclo largo en Colombia. La meta es aumentar tanto el área como el rendimiento en la
producción pues para el año 2020 (FAO, 2007) se espera pasar de 16220 ha con un
rendimiento de 11.2 t ha-1 a 29600 ha con 13.54 t ha-1, lo que representa un incremento
del 45% en área y del 17% en producción.
En Antioquia, buena parte de los suelos cultivados en aguacate están en las subregiones
norte y oriente. Estos suelos son derivados de ceniza volcánica y los regímenes de alta
pluviosidad y baja temperatura hacen que presenten pH bajo, alta presencia de aluminio
intercambiable, lavado de bases intercambiables y baja tasa de descomposición de la
materia orgánica.
Aunado a estas condiciones naturales, la mineralogía dominante (alofana e imogolita)
favorece una alta fijación de fósforo. En estos suelos, Andisoles, normalmente se
encuentran concentraciones entre 0.001-0.1 mg L-1 de P en la solución de suelo, lo que
representa una baja disponibilidad del elemento (<10 mg kg-1) (Bray II). De igual manera,
se genera una baja eficiencia en la fertilización fosfórica (<5%), lo que incentiva
aplicaciones de dosis altas de fertilizantes de síntesis (DAP y MAP). Como consecuencia
se incrementan los costos de producción, se generan posibles desbalances nutricionales
para las plantas y cambios sustanciales en la población de los microorganismos
rizosféricos.
Introducción 9
Puesto que las consecuencias aquí descritas ameritan propuestas que propendan por
disminuir los efectos adversos de tipo biológico, ambiental y económico, en las últimas
décadas ha aumentado el interés por adoptar nuevas estrategias biotecnológicas como el
uso de microorganismos bajo el concepto de biofertilizantes, debido a que hoy se quiere
atender, además de la productividad de un cultivo, la demanda por la sostenibilidad
(Singh et al., 2011).
Con este panorama, la utilización de roca fosfórica (RP) se ha convertido en una nueva
alternativa por su disponibilidad en las subregiones estudiadas y por su bajo costo. La
limitación que presenta este producto es su baja solubilidad por lo que suele ser poco
atractivo como producto comercial. Sin embargo, puede ser viable su utilización si está
expuesta a la acción de microorganismos solubilizadores de fósforo (PSM).
Estos microorganismos tienen la facultad de liberar algunos ácidos orgánicos que
disuelven tanto el P-nativo del suelo como la RP aplicada; así, el P solubilizado pasa a la
solución del suelo donde puede ser tomado por las raíces o por las hifas de hongos
formadores de micorriza (AMF), reconocidos por su importancia en la toma de agua y en
la absorción de elementos como fósforo, cobre, zinc, calcio, azufre y, en algunos casos,
nitrógeno y potasio (Vosátka and Albrechtova, 2009). Cabe resaltar que los AMF sólo
toman el P disponible presente en la solución del suelo ya que no hay evidencia de su
habilidad para solubilizar compuestos de fósforo insoluble (Osorio and Habte, 2009).
En términos generales, existe poco conocimiento sobre la población microbiana asociada
a la rizósfera del aguacate y particularmente sobre el efecto de los AMF que tiene sobre
la producción y menos aún bajo condiciones de campo. Pese a este panorama
inquietante, para esta investigación se planteó la hipótesis de que la aplicación conjunta
de hongos formadores de micorrizas arbusculares y microorganismos solubilizadores de

10 Introducción
fósforo, podrían reducir la aplicación de fertilizantes de síntesis para el cultivo del
aguacate y generar un valor agregado en función de su manejo.
El objetivo fue (i) evaluar el efecto de la inoculación conjunta con hongos formadores de
micorrizas arbusculares y microorganismos solubilizadores de fósforo en plantas de
aguacate y (ii) determinar el estado de algunas variables químicas (pH y P soluble
rizosferico) y biológicas (colonización micorrizal y abundancia de PSM) en la rizosfera de
huertos de aguacate en el Norte y Oriente Antioqueño.

1. Marco teórico
1.1 El Aguacate “Hass” como propuesta exportadora
El aguacate “Hass” ha generado gran expectativa en el mercado internacional por su alto
valor nutricional (Knight, 2002) y por poseer características deseables para su
exportación. Si bien todo lo que produce el país se consume internamente, se espera con
el tiempo exportar al mercado Europeo y Norteamericano por lo que la fruta y el proceso
de producción deben satisfacer estándares internacionales de Buenas Prácticas
Agrícolas y Certificación de Calidad (ASOHOFRUCOL-FNFH, 2005; FONTAGRO, 2006).
Esta variedad es el resultado del cruce entre “piel negra” guatemalteca y el híbrido
mejicano. Su principal característica es la maduración tardía que permite manejar un
margen de tiempo para la cosecha y programarla de acuerdo al comportamiento del
mercado (Whiley et al., 1996).
Como todas las variedades de aguacate, el Hass es susceptible a suelos inundables y de
baja infiltración. Su sistema de raíces es poco profundo; aunque como lo anota Salgado y
Cautín (2008), la distribución de la mayoría de raíces puede cambiar de acuerdo al tipo
de suelo y el método de irrigación utilizado.
Uno de los problemas más recurrentes es su pérdida de sanidad a causa de la asfixia
radicular. Según Lynce (2011), erróneamente se había considerado como efecto principal
12 Efecto de la inoculación conjunta con hongos micorrizales y microorganismos
la susceptibilidad al ataque de hongos del suelo. Arguye que éstos son organismos
oportunistas generadores de efectos secundarios sobre la sanidad de la planta.
Según Bernal y Díaz (2005) citados por Lynce (2011), las enfermedades generadas por
Phytophthora cinnanomi, Verticillium sp., Armillaria mellea, Rosellinia sp., entre otras,
están ligadas a condiciones de alta humedad del suelo. Las plantas comienzan a
presentar síntomas de decaimiento generalizado, estancamiento de desarrollo,
marchitez, pérdida de vigor, amarillamiento, pérdida de color y brillo de las hojas para,
finalmente en estados avanzados, conllevar a su muerte.
Las causas directas del porqué el sistema de raíz es tan superficial no es claro. Sin
embargo, se sabe que la consecuencia de esto es el pequeño volumen disponible del
suelo para que las raíces exploren en la adquisición de nutrientes y agua (Silber et al.
2012). Algunos autores consideran que son las condiciones ambientales las que pueden
ejercer un efecto sobre el desarrollo y funcionalidad de las raíces. Silber et al. (2012)
afirma que la combinación del sistema de raíces superficiales y la temperatura puede
afectar la funcionalidad de éstas, teniendo en cuenta que entre las funciones principales
están la toma de agua y nutrientes.
Bajo las condiciones ambientales del trópico donde, en zonas como la Andina
Colombiana, suelen suceder episodios de altas precipitaciones, el manejo cultural que se
le debe dar al cultivo de aguacate respecto al suelo debe estar como prioridad. Del
estado sanitario de la raíz depende la eficiencia en la toma de nutrientes. Ramaekers et
al. (2010) asevera que pese a las diferencias en la arquitectura radical, que puede
plantearse entre especies vegetales, las raíces finalmente se adaptan para aumentar la
adquisición de nutrientes, entre éstos el fósforo.

13
La mayor estrategia para que el fósforo sea adquirido por las plantas, teniendo en cuenta
que es un elemento poco móvil en el suelo, consiste en maximizar su exploración a
través de la proliferación y extensión de todas las formas de raíz con preferencia de
aquellas que son metabólicamente eficientes para tal fin (Linch y Ho, 2005, citados por
Ramaekers et al. 2010) o, como en el caso de las raíces de aguacate que son
superficiales con pocos pelos absorbentes, realizar simbiosis con hongos formadores de
micorrizas.
1.2 El fósforo en los Andisoles
Los Andisoles poseen características físicas y químicas complejas. Son suelos que han
evolucionado a partir de materiales volcánicos, básicamente cenizas. Los alumino-
silicatos amorfos confieren a estos suelos una alta retención de fosfatos y gran habilidad
para formar complejos estables con la materia orgánica (Jaramillo et al. 1994).
El alofano, es una sustancia amorfa y es uno de los más característicos minerales de los
Andisoles. Comprende un grupo de silicatos hidratados de aluminio con diferentes
relaciones Si/Al (Zhang y Zhao, 1997) y gran área superficial. Posee cargas variables,
dependientes del pH (Zhang, 1997). Así, cuando el pH es alto debido a la disociación de
iones H+ de los grupos siloxano (≡Si-OH) su carga superficial predominante es negativa;
cuando el pH del medio es bajo debido a la aceptación de protones por el grupo aluminol
(Al-OH), predominan las cargas positivas (Zhang y Zhao, 1997).
En los suelos de carga variable el fosfato es la especie de anión más fuertemente
adsorbida (Zhang, 1997) y es considerado como el mayor factor limitante en la
productividad de los cultivos del trópico (Ramaekers et al. 2010). El estado de valencia
de los iones fosfato los hace variables respecto a los cambios ambientales de su entorno,
por lo que las proporciones relativas entre H2PO4-, HPO42- y PO43- varían a diferentes pH
(Zhang, 1997). Estos aniones reaccionan, con hierro y aluminio a pH ácido y con calcio a
pH alcalino para formar fosfatos insolubles, lo mismo que con minerales arcillosos y
materia orgánica para formar también compuestos insolubles (Bolt, 1978; Conklin, 2005).
Se ha podido establecer que este elemento puede encontrarse hasta un 90% en forma
precipitada (Gyaneshwar et al., 2002, citados por Yang et al. 2009) para este tipo de
suelos. Por tanto, los impactos ambientales de la fertilización pueden ser atribuidos, en
parte, a que se requieren grandes cantidades de fertilizantes fosfatados para suplir las
necesidades de la planta (Auxtero, 2008).
1.3 Microorganismos solubilizadores de fósforo
Los microorganismos solubilizadores de fósforo (PSM), hacen parte de un gran grupo
conocido como microorganismos promotores de crecimiento vegetal (PGPM).
Importantes investigaciones se han llevado a cabo en diversos cultivos para incrementar
los rendimientos de cosecha, longitud de la parte aérea y de raíces, biomasa y calidad de
la cosecha (Mamta et al 2010, Farina, R., 2012, Gravel V. et al 2007, Naiman, A. et al.
2009, Rosas, S. et al. 2009, Karlidag, H. et al. 2007, Beneduzi et al. 2008, Hameeda,
2008, Aslantas et al. 2007, Beneduzi, A. et al. 2013, Mena, H. y Olalde V. 2007, Çakmakç
et al. 2006). De igual forma se les considera pieza clave en las técnicas de
fitorremediación como fitodegradación, fitotransformación, rizodegradación,
fitoextracción, fitoestabilización, etc. (De-Bashan et al. 2012).

15
La incidencia de estos microorganismos se debe, además de la solubilización de
fosfatos, a la producción de fitohormonas, al incremento en la toma de hierro a través de
los sideróforos quelatantes y/o a la inducción de resistencia sistemática contra un amplio
espectro de patógenos (Singh et al., 2011). Pese a que un número importante de
científicos demuestran la eficiencia de microorganismos promotores del crecimiento,
también postulan que los inóculos microbianos tienen un mejor efecto sobre las plantas
cuando los niveles de disponibilidad de los nutrientes es baja (Egamberdiyeva, 2004).
La capacidad para suplir las necesidades de P a través de la solubilización desde fuentes
de baja solubilidad ha suscitado el interés a nivel mundial. Varias especies de bacterias y
de hongos han sido reconocidas por cumplir esta función principalmente en las recientes
décadas (Nehl et al., 1996, Xiao et al. 2008). Los mecanismos de solubilización de
fósforo incluyen la liberación de ácidos orgánicos, protones y fosfatasas dentro de la
rizósfera. La presencia de aniones orgánicos como son los ácidos liberados por los
microorganismos solubilizadores, pueden conducir a un incremento en la carga negativa
y disminución en la carga positiva del suelo (Xu, 2003).
Las especies de bacterias pertenecientes a los géneros Pseudomonas y Bacillus y de
hongos, principalmente Penicillium y Aspergillus, son los más eficientes solubilizadores
(Ramaekers et al., 2010, Mittal et al., 2008). En un reciente estudio realizado con la
identificación de microorganismos asociados a la rizósfera de vainilla, se encontró, entre
las bacterias con un mayor potencial de solubilización a Pseudomonas koreensis así
como Serratia sp. (Álvarez et al., 2011). Éste último, ha sido igualmente reportado por
Yang et al. (2012) en China, Chen et al., (2006) en Taiwan y Pérez et al., (2008) en
Venezuela, por lo que se le considera parte del selecto grupo con potencial para ser
tenido en cuenta en la formulación de biofertilizantes.

Por su parte, los hongos filamentosos son ampliamente usados como productores de
ácidos orgánicos, particularmente algunas cepas de Aspergillus niger y algunas especies
de Penicillium (Sudhakara et al. 2002). En su revisión, estos autores citan las
investigaciones de Asea y Kucey (1988), Gaur (1990), Vassilev et al., (1996) y Goenadi
et al. (2000) para probar su efectividad como solubilizadores de fósforo, encontrando, al
igual que Narsian y Patel (2000) con Aspergillus aculeatus y Osorio y Habte (2012) con
Mortierella sp., resultados positivos.
Debe considerarse además que algunas condiciones abióticas pueden afectar la
eficiencia de estos organismos, por ejemplo, la influencia de las temperaturas o los tipos
de suelos (Egamberdiyeva y Höflich, 2003) y condiciones bióticas como las respuestas
sinérgicas, antagónicas (Felici, et al. 2008) o el estado fenológico de la planta a la cual
están asociados (Piromyou et al. 2011).
Aunque varios de estos organismos se encuentran en el suelo, su introducción resulta
usualmente insuficiente para competir con aquellos que comúnmente se encuentran
establecidos en la rizósfera. Por lo tanto, la inoculación debe ser dispuesta en una
concentración mayor (Rodríguez, 1999).
Si bien el fósforo solubilizado puede reaccionar nuevamente con otros elementos
metálicos del suelo como lo anota Conklin (2005), la natural dinámica microbiana seguirá
siendo una alternativa viable para intentar enfrentar los problemas de baja disponibilidad
en suelos altamente fijadores de fosfato.

17
1.4 Micorrizas
Esta asociación entre hongo y raíz es considerada una simbiosis mutualista debido a la
alta interdependencia establecida entre ambos. La planta hospedera recibe nutrientes
minerales a través del micelio del hongo (micotrofismo), mientras que el hongo obtiene
compuestos de carbono que le provee la planta (heterotrofismo) resultado de la
fotosíntesis (Azcón y Barea, 1997).
Los efectos de la simbiosis micorrizal pueden establecerse en el aumento de
enraizamiento y establecimiento de las plantas, incremento en la toma de iones de baja
movilidad y en el ciclaje de nutrientes, aumento en la tolerancia de la planta ante estrés
biótico y/o abiótico y mejoramiento en la calidad de la estructura del suelo (Azcón y
Barea, 1997).
Muchas de las propiedades inherentes en todos los sistemas simbióticos son
particularmente relevantes en las asociaciones micorrícico arbusculares conocidas como
dependencia, compatibilidad y especificidad (Azcón y Barea, 1997). En fresa, por
ejemplo, se observó que el crecimiento de raíces mejoró en plantas colonizadas por
Glomus intraradices y Glomus margarita, mientras que sucedieron afectaciones con la
inoculación realizada con Glomus rosea o con especies del género Scutellospora. (Taylor
y Harrier, 2001).
Más allá de sólo reconocer en las micorrizas su papel en la toma de nutrientes para la
planta, las aplicaciones de estos microorganismos se están enfocando en solucionar
problemas ambientales (Wang, 2006; Cozzolino, 2010). A partir de la simbiosis se puede
beneficiar, en su tasa de crecimiento y sanidad, tanto especies hortícolas como
forestales (Pascualini, 2007). Pero en general se ha observado que si los nutrientes

exceden un contenido máximo, puede ocurrir la inhibición de la simbiosis (Khaliq y
Sanders, 2000).
1.5 Efecto de las co-inoculaciones AMF y PSM

La competencia entre los microorganismos de la rizosfera por fuentes de nutrientes es
muy alta. (Perotto y Bonfante, 1997). La población microbiana en esta zona puede ser
diez a cien veces mayor que la población en igual volumen de suelo (Curl y Truelove,
1986; Weller y Thomsashow, 1994 citados por Perotto y Bonfante, 1997).
Autores como Juge et al. (2012) sugieren que interacciones complejas propuestas en
inoculaciones conjuntas pueden generar estrés a la planta lo cual puede estar ligado a
cambios metabólicos. Por su parte, Andrade et al. (1995) afirma que organismos
rizosféricos, actuando en concierto, pueden tener efectos positivos o negativos
dependiendo del contenido de nutrientes en el suelo, del balance hormonal de la raíz y
demás componentes del agrosistema (Cosme y Wurst, 2012).
Algunas bacterias han sido caracterizadas como microorganismos que afectan
positivamente las asociaciones micorrizales (Fernández et al. 2011; Ruíz et al., 2011;
Mäder et al. 2011) lo mismo que ciertos géneros de hongos. Por ejemplo, Londoño
(2010) encontró que hubo efecto sinergístico entre Glomus fasciculatum y el hongo
solubilizador de fósforo Mortierella sp. sobre Leucaena leucocephala, alcanzando un
mayor contenido de P foliar y un mayor crecimiento vegetal en comparación a su
aplicación individual. Una respuesta positiva también fue lograda con la interacción entre
Mortierella sp. con G. mosseae en el crecimiento y actividad enzimática de Kostelelzkya
virginica (Zang H., et al. 2011).

19
Sin embargo, en una investigación realizada por Fernández et al. (2012) sobre la
interacción entre micorrizas (Glomus intraradices) y microorganismos solubilizadores de
fósforo (Bacillus megaterium) en maíz, encontraron que algunas de estas combinaciones
deben ser cuidadosamente estudiadas antes de ser aplicadas pues la cantidad de fósforo
soluble liberado, en este caso por B. meagaterium afectó la infectividad del hongo
micorrícico.
Desde el punto de vista del efecto, las respuestas a las inoculaciones pueden resultar en
efectos primarios o secundarios. Microorganismos como Rhizobium y Glomus spp.,
promoverían el crecimiento y productividad (efecto primario) o aminorarían la reducción
de daños por cuenta de microorganismos patógenos en las plantas (efecto secundario).
Por su parte, Trichoderma y Pseudomonas spp., protegerían a la planta de daños
fitopatógenos (efecto primario) pero también estimular el crecimiento de plantas (efecto
secundario) (Tyler et al. 2008).
En términos generales esto nos lleva a afirmar que existe un beneficio potencial en la
coinoculación de microorganismos solubilizadores de fósforo y los hongos formadores de
micorriza al facilitar la toma del nutriente por las plantas proveniente de fuentes poco
solubles y aún más cuando las condiciones químicas o físicas las hace menos
disponibles.
2. Determinación del pH del suelo, la concentración de

fósforo y la presencia de AMF y PSM en huertos de
aguacate Hass del norte y oriente antioqueño
En Antioquia se han establecido huertos de aguacate en grandes extensiones de las
subregiones del Norte y el Oriente Antioqueño (INFOAGRO, 2007). Gran parte de estos
suelos se han formado sobre materiales del batolito o a partir de cenizas volcánicas. La
fracción coloidal de estos suelos está compuesta por alofana, caolinita, gibsita, goetita y
por complejos húmicos-alofánicos que favorecen una alta fijación de P (Fox y Kamprath,
1970; Juo y Fox, 1977; Havlin et al., 1999). Este elemento se encuentra en muy baja
concentración en la solución del suelo (0.001-0.02 mg L-1) y el nivel extraído con el
método de Bray-II es comúnmente muy bajo (<10 mg kg-1) (Osorio, 2012).
Los regímenes de alta pluviosidad y baja temperatura propios de estas zonas favorecen
un intenso lavado de bases intercambiables y una baja tasa de descomposición de la
materia orgánica (IGAC, 1988). Como consecuencia, estos suelos presentan una baja
fertilidad natural (extrema acidez pH < 5.0), altos niveles de aluminio intercambiables (>1
cmolc kg-1) y baja disponibilidad de nutrientes, particularmente nitrógeno (N), fósforo (P),
calcio (Ca), magnesio (Mg) y boro (B) (Zapata, 1998).
Se ha investigado muy poco sobre la fertilización de cultivos de aguacate sin una clara
certeza sobre los niveles de fertilizantes y enmiendas que se deben aplicar en las
21
diferentes condiciones de suelo existentes (Bernal y Díaz, 2006). Para corregir la extrema
acidez del suelo y la baja disponibilidad de P se realizan aplicaciones de cal y fertilizantes
fosfóricos solubles. Sin embargo, en muchas ocasiones no se tienen criterios claros
sobre las cantidades requeridas por lo que frecuentemente se pueden observar síntomas
visuales de deficiencias nutricionales debido a un posible desbalance de nutrientes,
excesiva caída de flores y frutos.
El desmedido uso de fertilizantes fosfatados y sus efectos residuales en la disponibilidad
de P pueden suprimir los beneficios del AMF como fue reportado en otros cultivos (p.e.
café, lulo, tomate) (González, 2006; Montoya, 2007; Jaramillo y Osorio, 2009; González y
Osorio, 2008). La ventaja de usar RP es que está disponible localmente en muchos
países (incluyendo Colombia) y son más económicos que los fertilizantes fosfóricos
solubles; desafortunadamente su baja solubilidad no lo hace tan popular, pero esto
puede corregirse con PSM efectivos (Msolla et al., 2005; Ojo et al., 2007), respuestas
positivas suficientemente probadas por varios autores (Sreenivasa y Krishnaraj, 1992;
Whitelaw, 2000; Osorio y Habte, 2001; Barea et al., 2005 a,b).
El uso de PSM incrementa la disponibilidad de P en el suelo a través de la desorción de
compuestos de P nativos o aplicados, especialmente roca fosfórica (RP) (Omar, 1998;
Osorio y Habte, 2009). Aunque en Andisoles puede darse una eficiencia limitada de los
PSM sobre la solubilización del P desde la RP debido a una posible fijación en los
minerales del suelo (Bolan, 1991), la co-inoculación de PSM con AMF resulta ser una
propuesta estratégica. Así, las hifas de la micorriza pueden absorber el P liberado por la
acción de los PSM y facilitar su toma por la planta (Osorio y Habte, 2009).
En Colombia, el uso de las micorrizas en aguacate ha sido investigado recientemente por
algunos autores (Montoya, 2007; Montañez, 2009; Melo, 2011) que indican que la
inoculación micorrizal promovió significativamente el crecimiento de plántulas (cultivares
Hass; Villagorgona; Santana, Lorena, y Común, respectivamente). Por otra parte,
Bolaños y Saenz (2010) establecieron que, en adición a la promoción del crecimiento, la
inoculación con AMF también redujo significativamente la afección de raíces a causa de
fitopatógenos como Fusarium sp. y Phytophthora cinnamomi; la reducción fue más alta
cuando algunos agentes biocontroladores como Trichoderma, Paecilomyces o
Pseudomonas fluorescentes fueron co-inoculadas con las micorrizas.
Por tal motivo, y con el fin de verificar los efectos sucedidos por aplicaciones de
enmiendas bajo criterios disímiles entre huertos, se monitoreó el pH, la concentración de
P en la solución, la presencia de AMF y PSM del suelo rizosférico de árboles de
aguacate (Persea americana Mill. cv. Hass) en las subregiones Norte y Oriente
Antioqueño.
2.1 Materiales y métodos
Sitio de muestreo
Los muestreos de suelos se realizaron en árboles de huertos productivos de aguacate de
la variedad “Hass”, de 3 a 5 años, ubicados en las regiones del Norte y Oriente
Antioqueño (Tabla 2.1). En cada región se seleccionaron al azar árboles de buen
desempeño (sanos y vigorosos) y otros con reducido crecimiento (pequeños, cloróticos y
en algunos casos enfermos) (Tabla 2.2). De cada árbol se tomaron de cuatro sitios un
total de 200 g de suelo rizosférico a una profundidad de 0-10 cm y raíces finas para el
análisis microbiológico. Las muestras se empacaron en bolsas de plástico que

23
posteriormente se transportaron al Laboratorio de Suelos de la Universidad Nacional de
Colombia, Sede Medellín.
Medición de pH
Se transfirieron, de cada muestra, 10 g de suelo (base seca) a tubos plásticos de
centrífuga de 50 cm3 de capacidad, luego se adicionaron 20 cm3 de agua destilada y la
suspensión se agitó con varillas de vidrio durante 1 minuto. Luego de 30 min de reposo
se midió el pH en el sobrenadante con un electrodo selectivo.
Tabla 2.1. Localización de los huertos de evaluación del aguacate Hass
Subregión Municipio Coordenadas
Norte San Pedro de los Milagros 6°19´19´´N; 1° 37´ 40´´ W
Entrerríos 6°33´ N; 75°31´ W
Oriente Rionegro 6° 09' N; 75°22´ W
El Retiro 6° 03' 31" N; 75°30´16´´ W
La Ceja 6° 00' 14" N; 75°25´39´´ W
Medición del P soluble
Se tomaron 3 g de suelo (base seca) y se transfirieron a tubos de centrífuga. Luego se
adicionaron 30 cm3 de CaCl2 0.01 M y dos gotas de tolueno para inhibir la actividad
microbiana. Los tubos se agitaron horizontalmente en un agitador recíproco durante 1
hora. Posteriormente, los tubos se centrifugaron a 5000 rpm (2500 x g) por 15 min y el
sobrenadante se pasó a través de un papel filtro Whatman No. 1. La concentración de P

fue determinada a través del método del azul de molibdato (Murphy y Riley, 1962) con un
espectrofotómetro Genesys-20 a una longitud de onda de 890 nm.
Colonización micorrizal
Las raíces finas fueron cortadas en fragmentos de 1 cm, se lavaron con agua corriente y
luego se pasaron a viales plásticos. Posteriormente, se les adicionó una solución de KOH
al 10% (Phillips y Hayman, 1970) la cual se removió 24 horas después. Luego, las raíces
se lavaron con agua y se mantuvieron en H2O2 al 35% por 30 minutos, para nuevamente
ser lavadas con agua corriente. A continuación, se adicionó HCl al 10% durante 5 min y
después (sin lavarlas), se agregó azul de tripano (0.15%) disuelto en glicerol y ácido
láctico. Las raíces se mantuvieron allí por 48 h para su tinción (Brundrett et al. 1996).
Posteriormente, fueron sumergidas en una solución de glicerol y ácido láctico con el fin
de remover el exceso de colorante. La medición de la colonización micorrizal se hizo a
través del método del intercepto de cuadrícula (Giovannetti y Mosse, 1980).
Aislamiento de microorganismos solubilizadores de fósforo
Las muestras de suelo se dispersaron manualmente con el fin de obtener agregados
finos y uniformes y así mejorar la capacidad de aislamiento de microorganismos. Con las
muestras de suelo disturbado se prepararon diluciones seriales 10-1-10-6 para lo cual se
utilizó una solución de CaCl2 0.01 M. En la cámara de flujo laminar se transfirieron
asépticamente 0.1 a 1 cm3 de una dilución dada a cajas Petri que contenían un medio
selectivo para PSM. El medio selectivo contenía por litro 1.0 g de NaCl, 0.2 g de
CaCl2.2H2O, 0.4 g de MgSO4.7H2O, 1.0 g de NH4NO3, 10 g de glucosa, 15 g de Agar, 3.5
g de RP y 5 mL de azul de bromotimol como indicador de pH. Las cajas Petri fueron

25
incubadas a 28°C por tres a cinco días. Las unidades formadores de colonia fueron
contadas y algunos morfotipos fueron preliminarmente seleccionados, basados en otras
evaluaciones, en la presencia de un halo amarillo alrededor de la colonia, abundancia y
velocidad de crecimiento. Luego se hicieron pruebas in vitro (Osorio, 2011) para
cuantificar la capacidad de disolver la RP Huila. Los microorganismos seleccionados
fueron transferidos a cajas Petri en el mismo medio para conservación a 4°C hasta su
uso.
Análisis estadístico de los datos
Los datos fueron sometidos a análisis descriptivos de correlación y se organizaron en
histogramas de frecuencia. Para lo anterior se utilizaron pruebas de análisis multivariado
con el paquete estadístico Statgraphics-Centurion versión XV.
2.2 Resultados
pH
Para la zona del Norte y Oriente Antioqueño se encontró que el pH del suelo rizosférico
fluctuó entre 5.0-7.0 y 3.9-6.4, respectivamente (Tabla 2.2). Los valores de pH
registrados estuvieron en el rango entre 4.3 y 6.8 en los árboles sanos y 3.9 y 7.0 en los
enfermos. Para la subregión norte el 24% de las muestras del norte registraron un pH
menor a 5.5, 36% pH entre 5.5 y 6.5 y 32% mayor a 6.5. En la subregión oriente en el
56% de las muestras se encontró un pH < 5.5 mientras que en el 44% un pH entre 5.5 y
6.5 (Figura 2.1).

a
b
Figura 2.1. Histograma de frecuencia del pH en los suelos rizosféricos de huertos de aguacate en el
Norte (a) y Oriente (b) antioqueño.
P soluble
La subregión norte presentó en 24% de los suelos rizosféricos un contenido de P en
solución menor a 0.2 mg L-1, 20% entre 0.2 a 0.5, 20% entre 0.5 a 1.0 y 32% con
contenidos mayores a 1.0. En la subregión oriente la mayor parte de los suelos
rizosféricos (83%) arrojó, como contenido de P, valores menores a 0.2 mg L-1 y el 17%
restante sólo tuvo su máximo contenido en 0.294 mg L-1 (Figura 2.2). De manera global,
teniendo en cuenta los datos de las dos subregiones, los contenidos de P soluble en
suspensión estuvieron entre 0.022 y 1.528 mg L-1 para los árboles sanos y entre 0.024 y
1.719 mg L-1 (Tabla 2.2).
.
27
a b
Figura 2.2. Histograma de frecuencia del contenido de P en solución de los suelos rizosféricos de
huertos de aguacate del Norte (a) y Oriente (b) antioqueño.
Tabla 2.2. Identificación de los sitios de muestreo en las subregiones Norte y Oriente antioqueño*
Colonización
Identificación Edad Estado -1 PSM
Subregión pH P (mg L ) -1 micorrizal
árbol (años) Fitosanitario (UFC.g )
(%)
1 N 3 S 6,1 0,195 102 86

2 N 3 S 6,3 0,033 1460 92
3 N 3 S 6,1 0,326 195 87
4 N 3 E 5,9 0,126 1140 53
5 N 3 E 6 0,393 395 85
6 N 3 E 5,5 0,042 143 80
7 N 5 S 5,3 0,602 120 72
8 N 5 S 5,3 0,587 85 32
9 N 5 S 5,6 1,528 520 23
10 N 5 S 6,2 1,423 46 46
11 N 5 E 5,9 1,408 259 80
12 N 5 E 6,7 1,407 760 27
13 N 5 E 6,6 1,332 660 41
14 N 3 S 5,3 0,014 215 25
15 N 3 S 5,3 0,022 190 67
16 N 3 S 5 0,779 221 71
17 N 3 E 5,7 0,451 228 98
18 N 3 E 5,1 0,937 137 0
19 N 5 S 6,7 0,233 191 22
20 N 5 S 6,8 0,585 830 8
21 N 5 S 6,3 0,347 190 50
22 N 5 E 6,9 1,719 110 85
23 N 5 E 7 1,124 228 47
24 N 5 E 7 1,288 1880 8
25 N 5 E 7 1,505 1830 7
26 O 4 S 6 0,237 79 71
27 O 4 S 6 0,05 95 57
28 O 4 S 5,7 0,08 29 86
29 O 4 E 6 0,237 118 25
30 O 4 E 6,2 0,12 72 62
31 O 4 E 6,4 0,185 103 80
32 O 4 S 4,5 0,144 66 55
33 O 4 S 4,3 0,03 55 69
34 O 4 S 4,5 0,294 52 49
35 O 4 E 3,9 0,027 86 48
36 O 4 E 4,2 0,024 35 66
37 O 4 E 4,5 0,029 166 56
38 O 5 S 5,2 0,063 33 34
39 O 5 S 5,9 0,031 62 76
40 O 5 S 5,3 0,027 67 91
41 O 5 E 4,8 0,075 500 55
42 O 5 E 4,6 0,034 151 36
43 O 5 E 5,7 0,139 71 59
*N=Subregión norte, O= Subregión oriente, S=Plántulas sanas, E=Plántulas enfermas, P= fósforo soluble
29
Cuantificación de microorganismos solubilizadores de fósforo
La cantidad de unidades formadoras de colonias (UFC.g-1) de PSM varió entre 46 y 1880
UFC.g-1 en la rizósfera de los árboles para la zona norte, superando hasta diez veces lo
registrado en la subregión oriente (Figura 2.3). La presencia de PSM para ésta última
fluctuó entre 29 y 166 UFC.g-1 como máximo (Tabla 2.2).
a b
-1
Figura 2.3. Histograma de frecuencia de PSM (UFC.g ) en la rizósfera de huertos de aguacate del Norte
(a) y Oriente (b) de Antioquia
Porcentaje de colonización micorrizal
Con respecto al porcentaje de colonización micorrizal, se tuvo desde raíces no infectadas
hasta raíces con el 98% con presencia micorrizal para los árboles muestreados en el
norte antioqueño. Mientras que en los árboles del oriente osciló entre 25 y 91% (Tabla
2.2).
En cuanto al porcentaje de colonización, para la subregión norte se halló que 48% y el
17% en el oriente de los árboles muestreados presentaron un porcentaje de colonización
< 50% (Figura 2.4).

a b
Figura 2.4. Histograma de frecuencia del % de colonización de AMF en huertos de aguacate del Norte (a)
y del Oriente (b) de Antioquia
2.3 Discusión
Teniendo en cuenta los manejos culturales que difieren entre huertos y más entre
subregiones que podían distorsionar las discusiones alrededor de los resultados
obtenidos, los análisis se realizaron separadamente por zona (norte y oriente
antioqueño).
En la Tabla 2.3 puede observarse que no se registraron diferencias significativas entre la
colonización micorrizal, edad de los árboles, contenido de P soluble, pH y
microorganismos solubilizadores de fósforo de la rizósfera para la subregión del oriente.
A diferencia, en la subregión norte se observó un alto nivel de significancia entre las
variables edad del árbol y el fósforo de la solución, pH y colonización micorrizal.
Igualmente se presentó una diferencia estadísticamente significativa entre el número de
UFC.g-1 de PSM y el pH de la rizósfera.
A partir de este análisis se realizó la prueba de Componente Principales para los
resultados obtenidos en el Norte antioqueño para definir si existía información

31
redundante respecto a las variables escogidas para ser monitoreadas (Figura 2.5). Allí se
observó cómo las variables P y edad del cultivo tienen una alta correlación. Sin embargo,
sería prematuro afirmar que excluir la verificación de una variable u otra explicaría el
comportamiento preciso de la variable en cuestión pues debe de tenerse en cuenta las
prácticas culturales de cada comunidad, subregión o huertos.
Tabla 2.3. Valores de significancia de los análisis de varianza para las diferentes variables
-1 -1
estudiadas (Colonización micorrizal (%), Edad, P soluble mg.L , pH y PSM (UFC.g ) para los
huertos de aguacate Hass del norte y oriente antioqueño.
Colonización Edad P (mg.L-1) pH PSM

micorrizal (%)
Norte Oriente Norte Oriente Norte Oriente Norte Oriente Norte Oriente
Colonización - - 0,0191 N.S. N.S. N.S. N.S. N.S. N.S. N.S.

micorrizal (%)
Edad 0,0191 N.S. - - 0,0002 N.S. 0,0040 N.S. N.S. N.S.
P (mg.L-1) N.S. N.S. 0,0002 N.S. - - 0,0381 N.S. N.S. N.S.
pH N.S N.S. 0,0040 N.S. 0,0381 N.S. - - 0,0106 N.S.
PSM N.S N.S. N.S. N.S. N.S. N.S. 0,0106 N.S. - -
N.S. = No
significativa
1
PSM
0,7
Componente 2
0,4
pH
0,1
CM
-0,2
E
P
-0,5
-0,53 -0,33 -0,13 0,07 0,27 0,47
Componente 1
Figura 2.5. Gráfica de pesos de los componentes. Análisis de Componentes Principales entre las
-1 -1
variables colonización micorrizal (%) (CM), Edad (E), P soluble (mg.L ) (P), pH, PSM (UFC.g )
para los huertos de aguacate Hass del norte antioqueño.
Puede observarse además que sobre el componente 1 hay una clara correlación
negativa entre el porcentaje de colonización micorrizal y las otras variables y en el
componente 2 una correlación negativa de los PSM y el pH de la rizósfera respecto a la
edad de los árboles, el contenido de P en solución y el porcentaje de colonización
micorrizal.
Sin embargo, al reconocerse en el análisis de componentes principales un 71.96% de las
correlaciones explicado por el componente 2, se centró la discusión a partir de las
correlaciones expresadas por éste (Tabla 2.4).
Tabla 2.4. Análisis de componentes principales de las variables Colonización micorrizal, Edad,
Contenido de P soluble, pH y PSM
Número del Valores Porcentaje de Porcentaje

componente propios Varianza Acumulado
1 2,58126 51,625 51,625
2 1,01655 20,331 71,956
3 0,783469 15,669 87,625
4 0,427012 8,540 96,166
5 0,191714 3,834 100,000
pH
Las grandes fluctuaciones en el pH se deben a la variación en el manejo del suelo con
cales, particularmente cal agrícola (CaCO3). Las dosis aplicadas son constantes,
reportándose adiciones que van desde 1 hasta 10 kg de cal por árbol. Según la literatura,
el rango de pH del suelo adecuado para las plantas de aguacate es de 5.5-6.5 (Bernal y
Díaz, 2006). Ciertamente se pueden encontrar huertos sanos y productivos a pH 5.5-6.0,

33
por lo que este rango de pH puede ser deseable en el manejo de estos suelos (Barber,
1995).
A pesar de lo anterior, se puede observar que una buena proporción de los suelos
muestreados presentaron valores de pH muy bajos por lo que se les clasifica en la
categoría de extremados y fuertemente ácidos (24% para la subregión norte y 56% para
la subregión oriente). Estos valores sugieren un uso insuficiente de cal y una condición
marginal para el cultivo. A tales valores se pueden encontrar Al intercambiable en la
solución del suelo que pueden afectar a la planta y los microorganismos asociados a ella
(Zapata, 1998). En contraste, hay un 36% de los suelos del norte que están en un rango
más adecuado (5.5 – 6.5) y 44% para el oriente antioqueño. Sin embargo, en la zona
norte puede observarse que el 32% de los suelos rizosféricos muestreados tuvieron pH
mayores a 6.5 que puede generar desbalances nutricionales.
Se ha encontrado en suelos del oriente Antioqueño que cuando el pH del suelo está por
encima de 6.2 la disponibilidad de algunos elementos menores (Fe, Mn, Cu y Zn)
disminuye notoriamente (Barber, 1995; Osorio 1997). Este problema es más grave
cuando el suelo alcanza la neutralidad (pH ~ 7), lo que puede explicar la cada vez más
frecuente presencia de síntomas visuales de deficiencia de elementos menores en
huertos comerciales de aguacate.
Si bien hasta aquí se ha analizado de forma independiente el pH, se debe resaltar que
éste es un parámetro decisivo en las otras variables analizadas como colonización
micorrizal, fósforo en solución del suelo rizosférico y presencia de microorganismos
solubilizadores de fósforo. Aunque las diferencias significativas para la subregión del
oriente no se presentaron, sí fue significativo en los huertos del norte antioqueño,

específicamente con el porcentaje de colonización y el contenido de fósforo soluble y
edad de la planta.
P soluble
Para muchas especies se recomienda que una adecuada concentración de P en la
solución del suelo debe estar alrededor de 0.2 mg L-1 (Hue y Fox, 2010). Este valor
puede permitir interpretar que una buena parte de los suelos muestreados (61%
subregión oriente) tienen concentraciones extremadamente bajas (menores a 0.1 mg L-1),
lo que significa que una gran parte del fósforo del suelo no se encuentra disponible por
efectos de una posible fijación con los minerales presentes en los Andisoles. Esta
situación también se presenta para el norte antioqueño, que aunque está en menor
proporción (16% de las muestras), no es despreciable. En la Figura 2.6 se observa la
variabilidad en los contenidos de P en solución entre ambas subregiones.
-1
P (mg L )
Figura 2.6. Variabilidad en los contenidos de P soluble de la rizósfera de plantas de aguacate

Hass entre la subregiones norte y oriente antioqueño.
35
Dentro de un rango bajo a ideal (0.1 – 0.25 mg L-1) la subregión norte reporta un 12%
respecto a la totalidad evaluada mientras que la subregión oriente lo refiere en el 33% de
la población lo cual puede ser manejable con adición de fertilizantes. Sin embargo, una
proporción elevada (72% subregión norte) exhibe una concentración de P soluble en el
suelo excesivamente alta (> 0.25 mg L-1), mientras que la subregión oriente lo presenta
en un porcentaje menor (6%). Lo anterior pone en evidencia la falta de control de la
fertilización fosfórica de muchos de los agricultores y representa un sobrecosto
innecesario para la producción.
Los niveles altos de P pueden reducir la disponibilidad de algunos elementos para las
plantas (Fe, Mn, Cu, Zn), aumentar los riesgos en contaminación de aguas (Barber,
1995; Havlin et al., 1999) o crear condiciones desfavorables para el establecimiento de
las micorrizas.
Porcentaje de colonización micorrizal
Varios autores han reportado que la inoculación micorrizal en aguacate y en otras plantas
produce beneficios en el crecimiento de las plantas sólo cuando existe baja
concentración de P soluble (Habte y Manjunath, 1987; Bolan, 1992; Allen, 1996; Brudett
et al., 1996; Smith y Read, 1997; Miyasaka y Habte, 2001; Habte y Osorio, 2001; Silvieira
et al., 2003). Cuando el suelo presenta una alta concentración de P soluble (≥ 0.2 mg L-1)
la inoculación micorrizal genera un efecto negativo (Montoya y Osorio, 2009).
Efectos favorables de la asociación micorrizal a bajos contenidos de P y desfavorables a
altas concentraciones se han reportado para otras especies tales como café, tomate de
árbol, uchuva, granadilla, entre otras (González y Osorio, 2008; Jaramillo y Osorio, 2009).
En algunos de los sitios de muestreo se encontró que no necesariamente los árboles de
aguacate con micorrizas arbusculares estuvieran afectadas por el contenido de P soluble
de la rizósfera. Esto puede explicarse por la utilización de materiales fertilizantes variados
como los que son de síntesis o tipo roca fosfórica cuya solubilidad es diferente.
Aunque se ha reportado en varias investigaciones que el efecto sinergístico de PSM y
AMF en la nutrición, crecimiento y cosecha de diversos cultivos es efectiva (Osorio y
Habte, 2009), la correlación inversa resultante en este estudio está fundamentada en la
competencia por espacio y nutrientes como se señala en otros apartes.
Microorganismos solubilizadores de fósforo
Pese a que son innumerables los estudios que reportan un efecto sinergístico entre PSM
y AMF, otros autores han señalado (Zaidi et al., 2009) que estos microorganismos
también podrían alterar la composición de los exudados de las raíces y con lo cual
pueden afectar la colonización y desarrollo de los AMF. Esto afectaría la colonización y
establecimiento de los hongos formadores de micorriza y por supuesto la competencia
entre los organismos inoculados y los locales
.
3. Efecto de la coinoculación con hongos formadores de
micorrizas arbusculares y microorganismos
solubilizadores de fósforo sobre el crecimiento y la
absorción de fósforo de plantas de aguacate bajo
condiciones de campo
El cultivo de aguacate (Persea americana Mill) en Colombia, tiene un alto potencial de
mercado interno y de exportación. La producción de esta fruta está representada así:
50% en la Costa Atlántica, 30% en Tolima y Antioquia y el 20% restante lo cubren los
departamentos de Caldas, Huila, Risaralda y Valle. Actualmente el aporte a nivel
mundial, 8.6% de la producción mundial con 144.000 toneladas, no registra
exportaciones significativas (Secretaria de productividad y competitividad, 2004). Sin
embargo, bajo política gubernamental se propone incrementar tanto el área de siembra
como el rendimiento del cultivo.
Muchos de los suelos Antioqueños, donde están establecidos los huertos de aguacate,
presentan características complejas a nivel químico como bajo contenido de bases
intercambiables, alta acidez y fuerte fijación de fósforo. Sumado a lo anterior, a nivel
mundial se prevé una crisis por la escasez de este mineral ya que las reservas naturales
de fósforo se estiman para aproximadamente unos 100 a 150 años.
La aplicación de biofertilizantes, productos que contienen células vivas o propágulos de
diferentes tipos de microorganismos, tienen la habilidad de convertir formas no
disponibles de ciertos elementos esenciales en la nutrición vegetal a formas disponibles.
(Hegde et al., 1999; Vessey, 2002). Sin embargo, este tipo de herramienta biotecnológica
aún no ha sido ampliamente estudiada en condiciones de campo para el cultivo de
aguacate.
Los biofertilizantes poseen muchas ventajas sobre los productos químicos
convencionales al ser ambientalmente más amigables y al poder ser replicados en caso
de necesitarse nuevas aplicaciones (Weller, 1988; Gloud, 1990; Shen, 1997). Las co-
inoculaciones de los AMF con microorganismos solubilizadores de fósforo (PSM),
permiten una mayor respuesta de producción en suelos con escaso P asimilable. En
caso de que la fijación de iones fosfato inhiba la efectividad de los PSM para mejorar la
absorción de P por las plantas, el micelio micorrizal puede facilitar esta toma (Barea et
al., 1997).
Como hipótesis para esta investigación se planteó que el crecimiento y la absorción de P
asimilable (determinado según el contenido de fósforo foliar) está en función de la
inoculación con hongos formadores de micorriza (AMF), microorganismos solubilizadores
de fósforo y la interacción entre ambos. El objetivo fue evaluar estos factores sobre el
crecimiento y la absorción de fósforo de plantas de aguacate en la etapa de
establecimiento bajo condiciones de campo.
3.1 Materiales y métodos
Sitio
Este trabajo se realizó en el Centro de Investigación CORPOICA “La Selva”, el cual está
ubicado en el municipio de Rionegro (Antioquia), bajo las coordenadas 75°25’05” W,
6°08’01” N y una altitud de 2120 m. La precipitación promedia anual es de 1800 mm y

39
tiene una temperatura promedia de 17°C. La zona de vida corresponde a un bosque
húmedo montano bajo (Bh-MB) (Holdridge, 1977).
Durante el tiempo de la investigación se tomaron los registros pluviométricos arrojados
por la estación meteorológica del mismo Centro de Investigación (Tabla 3.1 y Figura 3.1).
Los análisis químicos y microbiológicos se realizaron en el Laboratorio de Ecología y
Conservación Ambiental (LECA) de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellín,
coordenadas 4°38′17.59″N 74°5′3.65″W.
Tabla 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012(Estación Meteorológica CORPOICA “La

Selva”)
Precipitación mensual (mm)
MES/AÑO 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
Enero 91 23,4 4,9 80,8 112,8 99,2 64,5 80,5 139,9 23,2 71,9 120,1
Febrero 59,7 76,2 67,6 81,4 55,7 67,8 3,8 194,3 119,1 23,2 89,2 50,7
Marzo 135,1 130,2 252,3 198,7 140,1 147,5 118,6 244,3 91,3 89,4 337 134,0
Abril 89,8 271,9 206,4 215,1 211,7 285,8 209,4 176,9 213,3 150 598,4 337,6
Mayo 211,8 243 250,8 267,7 318,4 299,8 365,8 313,4 206,4 214,7 220,2 339,7
Junio 173,8 174,2 282,1 128,1 201,2 200,2 185,5 213,8 301,6 271 85,2
Julio 169 172,6 102,9 265,9 153,2 145,6 163,8 240,6 124,8 315,9 238,9 129,7
Agosto 31,9 86,5 135,9 173,5 133,2 146,9 218,5 346,7 145,6 172,9 136,3 192,9
Septiembre 185,7 134,3 218,7 239,5 205,5 240,3 293,5 136,3 69,1 399,8 164,9 80,3
Octubre 106,7 173,7 227,8 199,2 307,9 206,1 373,4 227,8 260,4 332,5 318,1 272,5
Noviembre 186,1 113,9 206,9 303,2 211,3 202,3 113,6 330,9 136,7 378,3 329,7 282,9
Diciembre 136,9 120,9 88,7 102,4 58,8 52,9 109,6 47,4 43,3 256,2 217,5 87,6
Total 1578 1721 2045 2256 2110 2094 2035 2525 1764 2658 2993 2025,6
Figura 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012 (Estación Meteorológica CORPOICA “La
Selva”)
Suelo
En este estudio se utilizaron dos suelos, el primero se empleó como sustrato de
crecimiento para las plántulas en la etapa de vivero. Este suelo se colectó dentro de la
Estación Experimental en un lote denominado “La Vega”, corresponde al horizonte Ap
(0-20 cm) de un Endoaquand. Los resultados del análisis físico químico hecho en el
Laboratorio de Suelos de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín, arrojó los
resultados consignados en la Tabla 3.2. El suelo se transfirió a cajas recubiertas con
plástico donde se aplicó Basamid, un fumigante de suelos, en una dosis de (200 g m -3)
(Figura 3.2); luego, éste se cubrió con plástico y se mantuvo así durante siete días.
Posteriormente, el suelo se dejó a libre exposición durante tres días para permitir la
salida de gases residuales.

41
Basado en los análisis físico químicos el suelo recibió la siguiente fertilización:
CaCO3 0.94 g kg-1, CaSO4 1.7 g kg-1; MgO 0.25 g kg-1; MgSO4 1.36 g kg-1; K2SO4 0.26 g
kg-1; Bórax 0.05 g kg-1; Quelato de Fe 0.6 g kg-1, Cu 0.6 g kg-1, Mn 0.6 g kg-1, Zn 0.6 g
kg-1;Roca fosfórica (0-28-0) 7.51 g kg-1. El suelo fertilizado se transfirió a bolsas plásticas
negras calibre 4’ (30 x 15 cm) a razón de 4.05 kg/bolsa.
Figura 3.2. Aspectos generales de las cajas en las cuales se realizó la desinfección del suelo con
Basamid.
Material vegetal
En éste experimento se utilizaron plantas de aguacate (Persea americana) cv. Hass
injertadas seis meses sobre un patrón criollo en el vivero AGROMARIN (municipio de El
Peñol). El sustrato en el cual crecieron las plantas presentó las propiedades físico
químicas descritas en la Tabla 3.2, las cuales fueron determinadas en el Laboratorio de
Suelos de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín. Las plantas se
transfirieron a raíz desnuda a las bolsas con el suelo esterilizado y fertilizado descrito
anteriormente (Figura 3.3).

Figura 3.3. Izquierda: aspecto general del material vegetal (37 cm de altura). Derecha: Aspecto de
la raíz al momento del transplante a las bolsas con suelo estéril y fertilizado.
Microorganismos
En este experimento se utilizaron dos tipos de microorganismos: hongos formadores de
micorrizas arbusculares (AMF) y microorganismos solubilizadores de fósforo (PSM).
Como fuente de hongos formadores de micorrizas arbusculares se utilizaron dos
inóculos, uno compuesto únicamente por Glomus fasciculatum (GF), el cual contenía
250 esporas g-1 y 43 propágulos micorrizales infectivos g-1, determinados por la técnica
del número más probable (Porter, 1979), suspendidos en una mezcla de suelo y arena
(2:1). Este inóculo se obtuvo de la colección del Laboratorio de Ecología y Conservación
Ambiental (LECA).
El otro inóculo consistió en una mezcla comercial de hongos formadores de micorrizas
arbusculares (Glomus spp., Entrophospora sp., Scutellospora sp.) (MZ), el cual contenía
250 esporas g-1 suspendidos en una mezcla de suelo y arena (2:1). El inóculo fue
suministrado por el Ingeniero Octavio González de la Empresa Abonamos S.A.

43
Los PSM utilizados fueron: Mortierella sp.(MRT), Aspergillus niger (ASP), Serratia sp.
(SER), Pseudomonas koreensis (PSD), Cepa nativa (NAT) obtenidos de la colección del
a b
c d
Figura 3.4. a. Aspergillus niger, b. Serratia sp. c. Mortierella sp. d. Cepa nativa
Tabla 3.2. Propiedades físico-químicas del sustrato inicial y de suelos de las fases vivero y campo
Parámetro Método Unidad Sustrato Suelo del Suelo del

original vivero campo
Textura Bouyoucos FA FA FA
pH Agua (1:1) 6.6 4.3 6.2
M.O. Walkley Black % 18.2 28.9 15.9
-1
Al KCl 1M cmolc kg - 3.8 -
-1
Ca Acetato de amonio cmolc kg 30.2 1.8 14.6
1M
-1
Mg Acetato de amonio cmolc kg 1.5 0.6 1.9
1M
-1
K Acetato de amonio cmolc kg 2.24 0.21 0.5
1M
-1
P Bray II mg kg 58 11 66
-1
S Fosfato monocálcio mg kg 120 6
0.008 M
-1
Fe Olsen-EDTA mg kg 13 618 49
-1
Mn Olsen-EDTA mg kg 2 7 8
(Continuación
Parámetro Método Unidad Sustrato Suelo del Suelo del
original vivero campo
-1
Cu Olsen-EDTA mg kg 3 1 4
-1
Zn Olsen-EDTA mg kg 5 4 12
-1
B Agua caliente mg kg 2.9 0.24 0.3
M.O. = Materia orgánica del suelo
LECA y fueron seleccionados en base a su habilidad de disolver roca fosfórica bajo
condiciones in vitro (Osorio, 2008; Zapata, 2010; Alvarez, 2012). La cepa NAT fue
obtenida en huertos de aguacate del municipio de San Pedro de los Milagros (ver
capítulo 2). Las cepas fueron multiplicadas en extracto de malta-agar a 28°C y
almacenadas en nevera portátil a 4°C para ser transportadas hasta el lugar de aplicación.
Tratamientos
Los hongos formadores de micorrizas arbusculares se aplicaron separadamente a razón
de 40 g/bolsa al momento del llenado con el suelo. Esto se hizo de tal manera que el
inóculo quedara en contacto directo con la raíz en toda su longitud o en el suelo que está
inmediatamente alrededor de ésta. Las plantas se distribuyeron al azar al interior de una
casa de malla en la Estación Experimental (Figura 3.5) donde se regaron frecuentemente
para mantenerlas a un 50% de su máxima capacidad de retención de agua. Cada diez
días se aplicaron 50 mL de Solución Hogland libre de P. Semanalmente se realizó una
fertilización foliar con el fertilizante foliar AGROFAST (libre de P).
En el día 173 se aplicaron alrededor del tallo y sobre la superficie del suelo 50 mL de las
suspensiones microbianas que contenían los PSM a razón de 2.4 x 106 UFC/planta. Un
resumen de los tratamientos se puede observar en la Tabla 3.3. Para ambos factores se
incluyeron tratamientos no inoculados (Mo, PSMo).

45
Tabla 3.3. Tratamientos establecidos en la experimentación (AMF: Hongos formadores de

micorriza; PSM: Microorganismos solubilizadores de fósforo; Mo: sin inoculación; GF: Glomus
fasciculatum; MZ: Inóculo micorrizal multiespecie; PSMo: Sin inoculación; MRT: Mortierella sp.; ASP:
Aspergillus niger.; PSD: Pseudomonas koreensis; NAT: cepa nativa; SER: Serratia sp.
AMF PSM Tratamiento
Mo PSMo Mo + PSMo
MRT Mo +MRT
ASP Mo + ASP
PSD Mo + PSD
NAT Mo + NAT
SER Mo + SER
GF PSMo GF + PSMo
MRT GF + MRT
ASP GF + ASP
PSD GF + PSD
NAT GF + NAT
SER GF + SER
MZ PSMo MZ + PSMo
MRT MZ + MRT
ASP MZ + ASP
PSD MZ + PSD
NAT MZ + NAT
SER MZ + SER
Figura 3.5. Casa malla donde permanecieron las plantas antes del trasplante a campo
Trasplante a campo:
A los 180 días después del trasplante a las bolsas, las plantas se trasplantaron al sitio
definitivo en el campo (octubre 12 de 2011). Para este fin se realizaron hoyos (70 x 70 x
60 cm) a una distancia de 2 x 2 m. El suelo de estos sitios fue analizado en el Laboratorio
de Suelos (Tabla 3.2). Este suelo corresponde a un Fulvudand (Fig 3.6). En cada sitio de
trasplante se aplicaron los siguientes fertilizantes: quelato de hierro 20 g/sitio, quelato de
cobre 20 g/sitio, quelato de zinc 20 g/sitio, bórax 10 g/sitio, cascarilla de arroz 1 kg/sitio,
500 g/sitio de CaCO3, KSO4: 100 g/sitio, roca fosfórica (0-28-0) 300 g/sitio. Cada 45 días
se aplicó sulfato de amonio a razón de 50 g/sitio. La desyerba se realizó cada 30 días
Figura 3.6. Aspecto general del sitio en el cual se realizaron los hoyos para el trasplante.
47
Variables
Como variables de respuesta se midió mensualmente la altura de las plantas y grosor en
la base del tallo. Igualmente la concentración de fósforo en los tejidos foliares se midió en
función del tiempo (76, 229, 265, 295, 325 y 408 días después del primer trasplante),
usando el método desarrollado por Habte et al. (1987) y aplicado a plántulas de aguacate
por Montoya (2007). Para este fin se tomaron muestras de la cuarta hoja madura, de
arriba hacia abajo, en el centro de la hoja al lado de la nervadura central, utilizando para
esto un perforador que permitía tomar muestras foliares en forma de disco de 6 mm de
diámetro (Figura 3.7). Las muestras se secaron en una estufa a 60°C por 24 horas, se
pesaron y se convirtieron en ceniza en una mufla a 500°C durante 3 horas. Luego las
cenizas fueron disueltas en agua estéril y se determinó la concentración de fósforo a
través del método del azul de molibdato (Murphy y Riley, 1962).
A los 411 días después de la siembra se determinó la masa seca aérea de las plantas,
para lo cual se llevaron las hojas y tallos fragmentados (2 cm) a una estufa (60°C)
durante 72 horas.
Figura 3.7. Toma de muestra foliar con un perforador

Diseño experimental y análisis de los datos
El diseño experimental fue completamente al azar con un arreglo factorial de tratamientos
3 x 6. Esto es, tres niveles de inoculación micorrizal (Mo, GF, MZ) y seis niveles de
inoculación con PSM (PSMo, MRT, ASP, PSD, SER, NAT). Cada tratamiento tuvo 4
repeticiones.
Los datos se sometieron a análisis de varianza y cuando se detectaron efectos
significativos de los tratamientos se realizó la prueba de rangos múltiples de Duncan;
ambos con un nivel de significancia (P) ≤ 0.05. Los análisis se realizaron con el paquete
estadístico Statgraphics Centurion XV.
3.2 Resultados
Parámetros biométricos
En general, las variables altura de tallos y masa seca aérea de las plantas de aguacate
cv. Hass no fueron significativamente afectadas por la inoculación con hongos
formadores de micorrizas arbusculares, con microorganismos solubilizadores de fósforo,
ni por la co-inoculación con ambos (P > 0.05) (Tabla 3.4; Figuras 3.8 y 3.9). No obstante,
vale la pena resaltar que en el día 295 la aplicación del inóculo micorrizal multiespecie
(MZ) generó plantas con una altura menor (68.6 cm) que aquellas no-inoculadas (80.9
cm); la altura de las plantas inoculadas con GF no presentó diferencias significativas con
ambos tratamientos (71.7 cm). Sin embargo, esto ocurrió a un nivel de significancia de
0.097, que se considera relevante teniendo en cuenta las condiciones de campo en las
que se desarrolló la investigación.

49
Tabla 3.4. Valores de significancia de los análisis de varianza para la altura, grosor del tallo y
masa seca de las plantas de aguacate en función de la inoculación micorrizal (AMF), con PSM y la
interacción entre ambos inóculos.
Altura Grosor Masa seca
Tiempo (días)
233 264 295 325 264 295 325 411
PSM NS NS NS NS NS NS NS NS
AMF NS NS 0.097 NS NS NS NS NS
PSM x AMF NS NS NS NS NS NS NS NS
51
Figura 3.8. Altura de plantas de aguacate en función

de la inoculación con hongos formadores de
micorrizas arbusculares (Mo: sin inoculación; GF: G.
fasciculatum; MZ: hongo micorrizal múltiespecie) y
microorganismos solubilizadores de fósforo (PSMo:
sin inoculación; MRT: Mortierella sp.; ASP:
Aspergillus niger.; PSD: Pseudomonas koreensis;
NAT: cepa nativa; SER: Serratia sp.] y en diferentes
días de muestreo después de la inoculación.
Columnas con letras diferentes presentan diferencia
significativa (P ≤ 0.05) de acuerdo a la prueba de
rangos múltiples de Duncan.
Masa seca aérea
Figura 3.9. Masa seca aérea de plantas de aguacate en función de la inoculación con hongos formadores de
micorrizas arbusculares (Mo: sin inoculacón; GF: Glomus. fasciculatum; MZ: hongo micorrizal multiespecie) y
microorganismos solubilizadores de fósforo (PSMo: sin inoculación; MRT: Mortierella sp.; ASP: Aspergillus
niger.; PSD: Pseudomonas koreensis; NAT: cepa nativa; SER: Serratia sp.) en el día 411 después de la
inoculación micorrizal.
Concentración y contenido de P foliar
Los resultados indican que la concentración de P foliar en las plantas de aguacate fue
significativamente afectada por los tratamientos (Tabla 3.5). Sin embargo, el efecto fue
53
variable en función del tiempo de muestreo y del tipo de inóculo usado (AMF, PSM). En
ningún caso se encontró interacción de los factores AMF x PSM.
En los días 325 y 408, la concentración foliar fue significativamente (P=0.0552 y 0.0134,
respectivamente) mayor en las plantas inoculadas con GF (0.215 y 0.306%) que en
aquellas con MZ (0.169 y 0.224%, respectivamente) (Figura 3.10). Esto representa una
diferencia relativa de 27.2% y 36.6%. El tratamiento no-inoculado presentó valores
intermedios (0.201 y 0.269%) que no fueron diferentes a los tratamientos con inoculación
micorrizal.
La concentración de P foliar también fue afectada significativamente con la inoculación
con PSM en todos los días de muestreo, excepto en el día 408 (Tabla 3.11). Vale la pena
aclarar que solamente para el día 229 el nivel de significancia (P) del ANAVA fue ≤ 0.05;
si bien en los otros días los valores de P fueron > 0.05 se considera válida su
presentación por tratarse de un experimento en campo que tuvo muchas influencias no
controlables del ambiente (clima, insectos plagas) y porque la prueba de Duncan arrojó
niveles de significancia ≤ 0.05.
En día 229 (día 56 después de la inoculación con PSM), las diferencias significativas
ocurrieron entre los tratamientos MRT en comparación con SER y NAT. El incremento en
la concentración de P foliar fueron del 28 y 38%, respectivamente. También hubo
diferencias significativas entre los tratamientos NAT y PSD; el incremento del primero
respecto al segundo fue de 32% (Figura 3.11).
En el día 265, sólo se presentó una diferencia significativa entre tratamientos NAT
(0.194%) y PSD (0.269%). Los otros tratamientos (SER, ASP, MRT y PSMo) tuvieron
concentraciones intermedias (0.203-0.223%) (Figura 3.11).

En el día 295, las diferencias significativas se presentaron entre los tratamientos MRT y
Po con respecto a SER. Las diferencias fueron de 47.9% y 52.9%, respectivamente. En
los otros tratamientos se hallaron concentraciones intermedias (0.159-0.195) (Fig. 3.11).
Para el día 325, la concentración de P foliar más baja fue la del tratamiento NAT con un
valor medio de 0.153; la inoculación con MRT y el control no inoculado (Po) resgistraron
valores superiores en un 51.0% y 43.1%. Los otros tratamientos SER, ASP y PSD
presentaron valores intermedios (0.181-0.203%) que no ´presentaron diferencias
significativas con los anteriores tratamientos (Figura 3.11).
En el día 408 no hubo diferencias significativas entre los tratamientos. Las
concentraciones oscilaron entre 0.216 y 0.284 (Figura 3.11).
Tabla 3.5.Valores de significancia de los análisis de varianza para la concentración de P foliar (%)
de las plantas de aguacate en función de la inoculación micorrizal (AMF), con microorganismos
solubilizadores de fósforo (PSM) y la interacción entre ambos factores.
Número de días
76 229 265 295 325 408
AMF NS NS NS NS 0,0552 0,0134
PSM 0,0304 0,0917 0,0558 0,0673 NS
PSM x AMF NS NS NS NS NS
55
Figura 3.10. Concentración foliar de P (%) de plantas de aguacate en función de la inoculación con hongos
formadores de micorrizas (AMF) en diferentes días de muestreo después de la inoculación [Mo: sin
inoculación; GF: Glomus fasciculatum; MZ: mezcla de hongos formadores de micorrizas arbusculares).
Columnas con letras diferentes presentan diferencia significativa (P≤0.05) de acuerdo a la prueba de rangos
múltiples de Duncan.
Figura 3.11. Concentración foliar de P (%) de plantas

de aguacate en función de la inoculación con
microorganismos solubilizadores de fósforo (PSM) en
diferentes días de muestreo después de la inoculación
[Po: sin inoculación; MRT: Mortierella sp.; ASP:
Aspergillus niger.; PSD: Pseudomonas koreensis; NAT:
cepa nativa; SER: Serratia sp. Columnas con letras
diferentes presentan diferencia significativa (P ≤ 0.05)
de acuerdo a la prueba de rangos múltiples de Duncan.
57
3.3 Discusión
Los resultados indican que se presentaron diferencias significativas en la absorción de P
por las plantas de aguacate, y no en su crecimiento, en función de las inoculaciones
individuales, pero no de la co-inoculación, lo cual no soporta nuestra hipótesis inicial.
Varios son las razones para explicar este comportamiento. En primer lugar, es posible
que esto se deba al crecimiento lento de estas plantas pues, para este estudio, fue
necesario esperar 325 y 408 días para detectar efectos significativos de la inoculación.
Los efectos de la inoculación micorrizal en plantas de aguacate se han detectado a un
plazo muy largo (Menge et al., 1980). Quizá un lento crecimiento vegetal genere un
pobre suministro de carbono a microorganismos asociados a la raíz o rizosfera de la
planta pues como afirma Marschner (1995) citado por Ahemad et al., (2009), las
concentraciones de exudados de la raíz están determinados, además del estado
nutricional y factores edáficos y climáticos, por el tipo de especie vegetal. Los exudados
pueden consistir de compuestos solubles en agua como aminoácidos, azúcares,
hormonas y vitaminas hasta compuestos poliméricos complejos de carbohidratos y
enzimas, conocimientos que aún no se tienen de manera específica para el cultivo de
aguacate.
Por otro lado, el análisis del suelo en campo arrojó un contenido de P disponible
relativamente alto (66 mg kg-1), lo cual puede sugerir una suficiencia de este elemento
para las plantas de aguacate. Consecuentemente, las inoculaciones AMF y/o PSM no se
requerían para mejorar la absorción de fósforo por las plantas y así impactar el
crecimiento de las mismas. Consistente con esta situación, se observó que la
concentración de fósforo foliar estuvo dentro o por encima del rango considerado como
adecuado para las plantas de aguacate (0.08 – 0.25 %).
Uno de los factores que restringe la efectividad de los PSM para mejorar la nutrición
fosfórica en las plantas es la alta fijación de fósforo del suelo. Osorio (2008) reporta que
el hongo Mortierella sp. fue inefectivo para mejorar la absorción de fósforo aún en
presencia de la asociación micorrizal. Esto se debe a que el suelo puede fijar el fosfato
liberado de la roca fosfórica y a la incapacidad del hongo de desorberlo (Osorio y Habte,
2012). Estos autores encontraron que el nivel de efectividad está íntimamente ligado con
la naturaleza mineralógica del suelo. Concluyeron que el alofano es el mineral menos
susceptible a desorber el Pi, contrario a lo sucedido en suelos donde el mineral
predominante es la montmorillonita.
Pese a este panorama, las diferencias que presentaron las plantas inoculadas con
respecto a la altura, puede sugerir el establecimiento de nuevas dinámicas poblacionales
debido a la competencia por nutrientes o por espacio creado entre la planta y los AMF, o
entre los AMF locales y los que son aplicados en el inóculo, lo que también pudo
observarse con los efectos descritos en transcurso del tiempo sobre la concentración de
P foliar.
Aunque Mortierella sp. se considera un eficiente solubilizador de P cuando se co-inocula
con hongos formadores de micorrizas arbusculares, también se ha encontrado que
ambos microorganismos compiten por sitios de colonización (Londoño, 2010). Es posible
que esta competencia se presente entre PSM y los hongos formadores de micorrizas
59
arbusculares, lo cual debería ser estudiado. No se puede descartar además que
organismos endémicos puedan ejercer algún grado de competencia sobre estos
microorganismos, incluyendo AMF y PSM. Vale la pena recordar que este suelo no fue
esterilizado como tradicionalmente se hace en estudios con microorganismos y podría
reflejar un comportamiento más cercano al que se espera que ocurra en el huerto de los
agricultores.
Así mismo, el régimen de precipitación a las que estuvieron sometidas las plantas y los
microorganismos inoculados fue inusualmente alto (2658 mm año-1, 30% más que el
registro histórico), pudo favorecer la pérdida de estas poblaciones y afectar su
efectividad. Durante el tiempo de crecimiento de las plantas estudiadas, se observó que
el suelo estuvo frecuentemente saturado con agua y esto no sólo afecta el desarrollo de
las plantas de aguacate (muy susceptibles a esta situación), sino también a los
microorganismos inoculados.
En retrospectiva, se puede considerar que después de los meses de mayor precipitación
(septiembre – diciembre: 1030 mm) el potencial efecto de estos PSM se redujo y quizá
en ese momento se requería una re-inoculación (Figura 18). Podría recomendarse
realizar varias inoculaciones a través del tiempo con el fin de corregir problemas en el
establecimiento y colonización. Sin embargo, debe considerarse que los
microorganismos pueden poseer mecanismos para adquirir resiliencia ante factores
ecológicos adversos a través de tasas rápidas de crecimiento y así suprimir el factor
perturbador o, a través de un alto grado de flexibilidad fisiológica propia (Ahemad et al.,
2009).
-1
Figura 3.12. Contenido de P foliar (mg.L ) en cada uno de los tratamientos con PSM y en
presencia (+GF, +MZ) o no de AMF (Mo) a través del tiempo.
61
A pesar de lo discutido anteriormente, vale la pena resaltar las diferencias detectadas
con los dos tipos de inóculos micorrizales en los últimos muestreos (días 325 y 408). En
ambos casos la concentración de P foliar de las plantas inoculadas con G. fasciculatum
(GF) estuvo por encima de las plantas inoculadas con la mezcla de inóculos micorrizales
(MZ) (27 y 37%, respectivamente). Esto contradice la idea de que un inóculo diverso en
especies es más efectivo que uno monoespecie lo cual puede ser debido a competencia
entre los mismos hongos por espacio, por colonizar la raíz y por capturar nutrientes.
Resultados similares han sido reportados por Londoño et al. (2010) en pasturas de
Brachiaria sp.
A pesar que la inoculación con los PSM no incrementó la concentración de fósforo por
encima del control (no inoculado), merece cierta consideración las diferencias
encontradas entre los diferentes inóculos. Por ejemplo, la inoculación con Mortierella sp.
MRT superó la concentración de P foliar con respecto al efecto de la cepa nativa (NAT)
en los días 229, 265 y 325 en un 38, 36 y 51%, respectivamente. En general, los valores
de P foliar en las plantas de aguacate inoculadas con la cepa nativa estuvieron entre los
más bajos, lo cual desvirtúa un poco la creencia de que las cepas nativas son la mejor
fuente de inóculo para ser utilizadas como biofertilizantes.

4. Conclusiones y recomendaciones
4.1 Conclusiones
Mucho se ha discutido sobre las propiedades químicas de los Andisoles y su marcada
característica de baja disponibilidad de Pi para las plantas y la microbiota. Sin embargo,
el aspecto de la ecología microbiana, sus interacciones, los efectos que el ambiente y
las prácticas culturales en suelos destinados para la agricultura se ciernen sobre ellos,
sigue siendo una de las preocupaciones para llevar a campo las experiencias exitosas
que se presentan en laboratorio.
Se han detectado en la rizósfera de huertos de aguacate niveles de pH y P soluble muy
variables, lo cual refleja que en muchos casos hay aplicaciones de cales y fertilizantes
fosfóricos inadecuadas, tanto por defecto como por exceso. Con frecuencia los niveles de
pH y P soluble son muy altos. Esto podría generar desbalances nutricionales y/o
biológicos que desfavorecerían el desempeño de las plantas cultivadas de aguacate.
Se encontró que hay una alta pero muy variable cantidad de PSM en la rizósfera de
aguacate. No se halló una relación entre el estado de la planta y la densidad de
microorganismos ni tampoco con el pH y el P disponible. Se presume que altas

63
cantidades de fertilizantes y enmiendas hayan podido intervenir en la relación
microorganismo-planta en términos de disponibilidad y toma de nutrientes.
El manejo integral de la fertilidad del suelo y la nutrición vegetal de cultivos intensivos
debe ir acompañado de un monitoreo en la calidad del suelo. Esto puede permitir
moderar la cantidad de cal y fertilizantes que se aplican, con la concomitante disminución
de costos y el mantenimiento de los balances nutricionales de la planta. Adicionalmente,
un mejor desempeño nutricional vegetal se puede esperar con el desarrollo de
interacciones favorables con microorganismos rizosféricos benéficos tales como hongos
formadores de micorrizas arbusculares, microorganismos solubilizadores de fósforo,
bacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR) y presumiblemente reducir el
impacto negativo de fitopatógenos (Sreenivasa y Krishnaraj, 1992; Omar, 1998; Bashan y
Holguín, 1998, Barea et al., 2005a, b; Osorio y Habte, 2009; Osorio, 2011).
Sumado a lo anterior, las especies cultivables de ciclo largo representan un reto mayor
en cuanto al estudio de la dinámica microbiana a través del tiempo y transversalidad a las
distintas etapas de desarrollo del mismo se refiere. Sin embargo, este estudio pudo
reflejar una tendencia marcada que la propuesta biotecnológica con la adición de
microorganismos solubilizadores de fósforo y hongos formadores de micorriza, puede ser
aplicable en tanto se mantenga la población necesaria para responder a los cambios en
condiciones ambientales y manejos culturales propios de las actividades agrícolas.
4.2 Recomendaciones
Para próximos estudios se recomienda realizar re-inoculaciones a través del tiempo de
las cepas PSM para corregir problemas en el establecimiento y colonización. Igualmente

se recomienda realizar estudios sobre la competencia que puede suscitarse entre PSM y
AMF por los sitios de colonización.

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Efecto de la inoculación conjunta con hongos

micorrizales y microorganismos solubilizadores

Sandra Luz Serna Gómez

Universidad Nacional de Colombia

Efecto de la inoculación conjunta con

Sandra Luz Serna Gómez

Universidad Nacional de Colombia

Expreso mis más sinceros agradecimientos,

A la Ingeniera Beatriz Elena Montoya por compartir sus conocimientos y su amplia

Al Dr. Álvaro Tamayo, investigador de CORPOICA La Selva por toda su colaboración en

Al Sr. Julio César Tabares, Técnico de CORPOICA La Selva por su acompañamiento

A Margarita Sizquiarco, Cristina Valencia del Laboratorio de Suelos de la Universidad

micorriza arbuscular [monoespecie: Glomus fasciculatum; multiespecie: Glomus spp.,

Entrophospora sp., y Scutellospora sp.] y microorganismos solubilizadores de fósforo

sobre el crecimiento y absorción de P por plantas de aguacate (Persea americana Mill.)

monoespecie, AMF multiespecie y no-inoculación) y seis niveles de inoculación con PSM

(incluyendo un tratamiento de no-inoculación). Cada tratamiento tuvo cuatro repeticiones.

Las inoculaciones no afectaron significativamente las variables biométricas, pero si la

muestreo y de la combinación del inóculo usado (AMF, PSM).

Un muestreo de la rizosfera y raíces de huertos de Aguacate en el Norte y Oriente

Antioqueño permitió detectar diferencias estadísticamente significativas en la abundancia

valores de pH y P soluble de la rizósfera debido muy probablemente a excesos con el

uso de cales y fertilizantes fosfóricos.

Palabras claves: biofertilización, rizosfera, fósforo soluble, micorrizas.

mycorrhizal fungi inocula [monospecie: Glomus fasciculatum; multispecie: Glomus spp.,

Entrophospora sp., and Scutellospora sp.] and phospahte solubilizing microorganisms

experimental design was completely randomized, treatment had a factorial arrangement

inoculation) and six levels of PSM inoculation (including a no-inoculated treatment).Each

to excess in liming and P fertilization.

Keywords: biofertilization, rhizosphere, soluble phosphorus, mycorrhiza.

1. Marco teórico .......................................................................................................... 11

1.2 El fósforo en los Andisoles ............................................................................... 13

1.3 Microorganismos solubilizadores de fósforo ..................................................... 14

1.4 Micorrizas ........................................................................................................177

1.5 Efecto de las co-inoculaciones AMF y PSM ..................................................... 18

2. Determinación del pH del suelo, la concentración de fósforo y la presencia de

2.2 Resultados ......................................................................................................255

2.3 Discusión ......................................................................................................... 30

3. Efecto de la coinoculación con hongos formadores de micorrizas arbusculares

3.2 Resultados ......................................................................................................488

3.3 Discusión ......................................................................................................... 57

4. Conclusiones y recomendaciones ........................................................................ 62

Lista de figuras Pág.

Figura 2.2. Histograma de frecuencia del contenido de P en solución de los 27

Figura 2.3. Histograma de frecuencia de PSM (UFC.g -1) en la rizósfera de

Figura 2.4. Histograma de frecuencia del % de colonización de AMF en

Figura 2.5. Gráfica de pesos de los componentes. Análisis de Componentes

Figura 2.6. Variabilidad en los contenidos de P soluble de la rizósfera de

Figura 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012 (Estación

Figura 3.2. Aspectos generales de las cajas en las cuales se realizó la

Figura 3.7. Toma de muestra foliar con un perforador 47

Figura 3.8. Altura de plantas de aguacate en función de la inoculación con

Figura 3.9. Masa seca aérea de plantas de aguacate en función de la

Figura 3.10. Concentración foliar de P (%) de plantas de aguacate en función

días de muestreo después de la inoculación 55

Figura 3.11. Concentración foliar de P (%) de plantas de aguacate en función

Figura 3.12. Contenido de P foliar (mg.L-1) en cada uno de los tratamientos

Tabla 2.2. Identificación de los sitios de muestreo en las subregiones Norte y

Tabla 2.3. Valores de significancia de los análisis de varianza para las

Tabla 2.4. Análisis de componentes principales de las variables Colonización

Tabla 3.1. Registros pluviométricos período 2001-2012 (Estación

Tabla 3.2. Propiedades físico-químicas del sustrato inicial y de suelos de las

Tabla 3.3. Tratamientos establecidos en la experimentación 45