c la fase de maduración de los frutos está caracterizado por cambios bioquímicos,

fisiológicos, biológicos y físicos. Uno de los principales cambios que trae la

maduración son el cambio de color y composición del fruto.
El estimulador por excelencia es el ETILENO, esta es la única hormona gaseosa.
El Acetileno también puede actuar como agente madurante debido a que es capáz
de actuar con la enzima encargada de este proceso (Es como si engañara a la
enzima para poder trabajar también).

El proceso de maduración ocurre debido a que se aumenta en cierto grado la tasa

de respiración, dependiendo de esto te vas a encontrar con 2 tipos de frutos: los
climatéricos y nos No climatéricos. El primero es el que aumenta la respiración
después de la cosecha (Frutos perecederos: banana, tomate,mango, etc..),
mientras que en el segundo, la actividad respiratoria es menos acelerada (frutos
no perecederos: Limón, naranja, etc.). Te escribo todo esto para expresarte lo
siguiente:

La aplicación exógena (por fuera) de etileno, promueve la maduración en frutos

climatéricos, teniendo que aumentar la concentración cuando el fruto está más
verde o más joven. Para los NO climatéricos, esta aplicación tanto antes como
después de la cosecha, promueve la degradación de las clorofilas provocando un
cambio de color.

Sin embargo, aunque la fresa se puede tomar por climatérica, la adición de etileno
o sus antagonistas, parece no causar un efecto significativo en la maduración,
pero cuando se hace uso de las AUXINAS, si comienzan a madurar. La
explicación es que estas son precursoras del etileno, que solo tiene un efecto
endógeno en este caso.

c Etrel y ácido naftalen acético (ANA) han sido utilizado como acelerantes de frutas,
verduras y hortalizas y en caña de azucar se utiliza el glifosato

Aplicación de microorganismos promotores de la descomposición de los residuos

de cosecha y promotores del crecimiento vegetal en caña de azúcar

Por: Ing. Juan Pablo Erazo Arias

FUNDAMENTOS TEÓRICOS DEL USO DE MICROORGANISMOS EN LA

AGRICULTURA.

1.0 LOS MICROORGANISMOS.

1.1 Hongos.

1.1.1 O
 

Trichoderma contribuye al crecimiento en cuanto a profundidad de las raíces de las

plantas, haciendo que estos cultivos sean más resistentes a la sequía. Las raíces de
colonizadas por Trichoderma requieren un 40% menos de fertilizantes nitrogenados con
relación a las raíces que no se encuentran colonizadas (Montero et al.,----) .
El Hongo Trichoderma ejerce un efecto favorable en la primera fase de desarrollo de la
caña de azúcar, ya que es capaz de inhibir la acción de otros hongos, además, Se pudo
comprobar que la aplicación de Trichoderma fue eficiente debido a que en todas las
combinaciones donde se aplicó este producto, se logró un mayor número de posturas
germinadas que en la variante donde no se aplicó el mismo (Montero et al.,----).

Dentro de los organismos utilizados en bioremediación se ha estudiado el genero

Trichoderma. El cual puede degradar organoclorados, clorofenoles, y otros insecticidas
coma DDT, endosulfán, pentacloronitrobenceno, aldrin y dieldrin, herbicidas como
trifluralin y glifosato. (Esposito y Da Silva, 1998). Este hongo posee enzimas tales como
celulasas, hemicelulasas y xylanasas que ayudan a la degradación inicial del material
vegetal y por último enzimas de mayor especialización que contribuyen a la simplificación
de moléculas complejas como son las de biopesticidas (Kaytama y Marsumara, 1993) .

Trichoderma spp toma nutrientes de los hongos (a los cuales degrada) y de materiales
orgánicos ayudando a su descomposición, por lo cual las incorporaciones de materia
orgánica y compostaje lo favorecen. La velocidad de crecimiento de este organismo es
bastante alta, por esto es capaz establecerse en el suelo y controlar enfermedades
(Esposita y Da-Silva, 1998; Papavisas, 1985) .

La aplicación de Trichoderma para el control de enfermedades tiene varias ventajas:

1. Trichoderma ofrece un control eficaz de enfermedades de plantas.

2. Posee un amplio rango de acción.
3. Este hongo está propagándose en el suelo, aumentando sus poblaciones y ejerciendo
control duradero en el tiempo sobre hongos fitopatógenos.
4. Este hongo ayuda a descomponer materia orgánica, haciendo que los nutrientes se
conviertan en formas disponibles para la planta, por lo tanto tiene un efecto indirecto en la
nutrición del cultivo.
5. Trichoderma estimula el crecimiento de los cultivos porque posee metabolitos que
promueven los procesos de desarrollo en las plantas.
6. Puede ser aplicado en compostaje o materia orgánica en descomposición para acelerar
el proceso de maduración de estos materiales, los cuales a su vez contendrán el hongo
cumpliendo también función de biofungicida.
7. Favorece la proliferación de organismos benéficos en el suelo, como otros hongos
antagónicos.
8. No necesita plazo de seguridad para recolección de la cosecha.
9. Preservación del medio ambiente al disminuir el uso de fungicidas.
10. Economía en los costos de producción de cultivos (Chet and Inbar, 1994).
11. Ataca patógenos de la raíz (Pythium, Fusarium, Rhizoctonia) y del follaje (Botriys y
Mildew) antes que puedan ser los detectados y evita el ataque de (Phytophtora).*
12. Previene enfermedades dando protección a la raíz y al follaje.*
13. Promueve el crecimiento de pelos absorbentes y raíces alimenticias. *
14. Mejorando la nutrición y la absorción de agua.*
15. Disminuye o elimina la dependencia de fumigantes químicos. *
16. No se ha registrado ningún efecto fitotóxico.*

1.1.2 K



Solubilizador de fósforo y regulador de nematodos.

En el ciclo del fósforo hay unos microorganismos, principalmente hongos y bacterias, que
son capaces de solubilizar compuestos insolubles en P con Fe (estrenuita), con Al
(variscita) o con Ca (fosfato tricálcico o fosfato ortocálcico), según Brady y Weil, citados
por cabrera (2000) , estos microorganismos capaces de solubilizar este fósforo, lo hacen
mediante la acidificación del medio liberando a él protones y/o ácidos orgánicos como
cítrico, oxálico o succinico. Cabrera (2000) encontró especies de hongos Penicillium,
Aspergillus, Scytalidium y Paecilomyces presentando una alta actividad solubilizadora de
fósforos.
La facultad que posee para parasitar huevos de nematodos, también se ve algunas veces
o se expresa sobre nematodos en estados libres o móviles, o sobre hembras sedentarias,
pero es mas agresivo sobre los huevos. (Cabanillas et al., 1989) .

Las toxinas producidas por parte del Paecilomyces afectan el sistema nervioso y causan
deformación en el estilete de los nematodos que sobreviven, lo que permite reducir el
daño y sus poblaciones.

Al controlar las poblaciones de nematodos, se reducen las posibilidades de enfermedades

a nivel de la raíz, pues los sitios de penetración o entrada de estas son los mismos por
donde el nematodo se ha fijado o adherido a succionar nutrientes y a desarrollar su ciclo
de vida, sumado a esto, se reducen el numero de raíces no funcionales que se traduce en
una mejor nutrición y en un mayor anclaje, que para el caso de la caña significa una
reducción en los índices de volcamiento y demás efectos que esto acarrea.

1.1.3 _ 
 (C.U.M, 1997)

Las levaduras sintetizan sustancias antimicrobiales y otras substancias útiles para el

crecimiento de las plantas, a partir de aminoácidos y azúcares secretados por las
bacterias fotosintéticas, la materia orgánica y las raíces de las plantas.
Las sustancias bioactivas producidas por las levaduras como hormonas y enzimas,
promueven la división activa de células y raíces. Estas secreciones también son sustratos
útiles para los Microorganismos como las bacterias ácido lácticas y los actinomicetos.
Las diferentes especies de Microorganismos (bacterias fotosintéticas y ácido lácticas y
levaduras) tienen sus funciones respectivas. Sin embargo, las bacterias fotosintéticas son
consideradas el eje central de la actividad de estos microorganismos.
Las bacterias fotosintéticas dan sostén a las actividades de los demás microorganismos,
sin embargo, las bacterias fotosintéticas también utilizan substancias producidas por otros
microorganismos. Este fenómeno se conoce como ³Coexistencia y Coprosperidad´. El
incremento de las poblaciones de Microorganismos en el suelo a través de su aplicación,
promueve el desarrollo de microorganismos benéficos ya existentes en el suelo. Debido a
esto, la microflora del suelo se vuelve abundante, y así el suelo desarrolla un sistema
microbiano balanceado. En este proceso, algunos microbios específicos del suelo
(especialmente los nocivos) son suprimidos, reduciendo así la incidencia de
enfermedades causadas por patógenos del suelo. En estos suelos desarrollados, los
Microorganismos Eficaces mantienen un proceso simbiótico con las raíces de las plantas
en la rizosfera.
Las raíces de las plantas también secretan sustancias como carbohidratos, aminoácidos,
ácidos orgánicos, y enzimas activas. Los Microorganismos Eficaces utilizan estas
sustancias para su crecimiento. Durante este proceso, también secretan y proveen
aminoácidos, ácidos nucleicos y una variedad de vitaminas y hormonas a las plantas. Los
Microorganismos ³Eficaces´ coexisten en la rizosfera con las plantas. Por esta razón, las
plantas crecen excepcionalmente bien en suelos dominados por estos agentes.
1.2 Bacterias.

1.2.1.1 =   
= 

.

Hapase et al, 1984 , encontró que al inocular con azotobacter las yemas de caña de
azúcar al momento del transplante y la inmersión de las raíces al momento de la siembra,
originaba un incremento en la velocidad de germinación, en el establecimiento del
material trasplantado, en el desarrollo de las raíces, el macollamiento, la altura y numero
de tallos movibles, lo cual incremento la producción por unidad de área.

En el congreso internacional de la caña de azúcar realizado en Australia en 1997, se

demostró que con la aplicación de Azotobacter y Azospirillum se pueden reducir la
perdidas de Nitrógeno (NO3) por lavado, permitiendo la aplicación hasta de 400kg de N
sin que se presenten riesgos ambientales, pues los niveles de perdidas están entre los
valores permitidos y se estima que es posible hacer una reducción de al menos el 20% de
fertilizante nitrogenado sin afectar la producción (Hussigi et al, 2001) .

En Rio de Janeiro Brasil, Dobereiner J. 1992 , mostró que con la inoculación de bacterias
diazotroficas (diazo= N2, trofic = Nutrición) en caña de azúcar se pueden fijar hasta 150kg
de nitrógeno por hectárea año.

En experimentos de campo para evaluar la respuesta de la caña de azúcar a la aplicación

de un biofertilizante elaborado con la cepa INICA-8 de Azospirillum sp, debido a su alta
potencialidad dinitrofijadora; Realizados en la Red Geográfica Experimental del INICA, en
diferentes condiciones edafo-climáticas y de manejo fito-técnico. Los resultados indican
que los retoños responden con diferentes magnitudes y altos niveles de sustitución de
fertilizantes minerales desde y por encima de 50% del nitrógeno total necesario para el
ciclo de la plantación, cuando se realizan inoculaciones de Azospirillum en la rizosfera en
concentraciones de 109 cel/ml de bioproductos puros, frescos y bien conservados. Los
incrementos medios por producciones adicionales están en orden aproximado a 20%
cuando se inocularon dosis en el rango 80 a 100 L/ha del biopreparado, observándose un
alto índice de frecuencia positiva de las respuestas obtenidas (76%) de los experimentos
cosechados. (INICA, 2000)

La Asociación Surafricana de Tecnología de la Caña de Azúcar, menciona que el cultivo

de la caña de Azúcar deriva unos 25kg por hectárea año, resultados encontrados en su
estación experimental (Purchase, 1980) .

1.2.1.2 ˜ 
 (C.U.M, 1997)

Las bacterias ácido lácticas producen ácido láctico a partir de azúcares y otros
carbohidratos desarrollados por bacterias fotosintéticas y levaduras. Desde tiempos
antiguos, muchos alimentos y bebidas como el yogurt y los pepinillos son producidos
usando bacterias ácido láctico. Sin embargo, el ácido láctico es un compuesto altamente
esterilizante que suprime microorganismos nocivos y mejora la descomposición de la
materia orgánica. Además las bacterias ácido lácticas promueven la fermentación y
descomposición de materiales como lignina y celulosa, eliminando así los efectos
indeseables de la materia orgánica no descompuesta.
Las bacterias ácido lácticas tienen la habilidad de suprimir microorganismos causantes de
enfermedades como Fusarium, los cuales aparecen en sistemas de producción continua.
Bajo circunstancias normales, las especies como Fusarium debilitan las plantas
cultivadas, exponiéndolas a enfermedades y a poblaciones crecientes de plagas como los
nemátodos. El uso de bacterias ácido lácticas reduce las poblaciones de nemátodos y
controla la propagación y diseminación de Fusarium, mejorando así el medio ambiente
para el crecimiento de cultivos.

1.2.1.3 †  


De entre las PGPR s usadas en biocontrol, las bacterias del genero Pseodomonas (gram
negativa) son de las mas conocidas, produciendo una amplia gama de metabolitos con
capacidad antimicrobiana. Su mecanismo de acción es conocido y puede ser bien por
competencia nutricional a través de la producción de sideroforos que secuestran hierro y
que no pueden ser usados por organismos pat ógenos, bien por la inducción de
resistencia sistémica inducida, restringiendo la penetración del patógeno en la planta,
optimizando su defensa, o bien por la producción de antibióticos, fenazinas, pioluteorina,
ácido cianhidrico, etc. efectivos contra enfermedades fúngicas, como la podredumbre
negra de la raíz (Antón, 2000) .

Las rizobacterias Bacillus y Pseudomonas han demostrado en condiciones de invernadero

su capacidad para desencadenar una aceleración en el reciclado de nutrientes al mismo
tiempo que estimulan el desarrollo de un sistema radical más eficaz para la absorción de
nutrientes. Además del efecto favorable sobre la fisiología de la planta, estas bacterias
han demostrado su capacidad para evitar la entrada de patógenos, probablemente por un
proceso de ocupación de nicho, también se ha comprobado su capacidad para producir
sideroforos, así como la capacidad de inhibición de hongos fúngicos "in-vitro" (Antón,
2000)

La producción de sustancias estimuladoras del crecimiento es otra de las propiedades

detectadas por las bacterias del género Pseudomonas y sus principales ventajas son
inducir la iniciación radicular e incrementar la formación de raíces y pelos radiculares
como así también el desarrollo vegetal general del cultivo de trigo. Las principales
sustancias estimuladoras producidas son de tipo hormonal como auxinas, giberelinas y
citoquininas pero también producen sustancias de otro tipo como aminoácidos y
promotores específicos del crecimiento. (Rizobacter, 2001)

Burkholderia cepacia se describe como una bacteria muy atractiva y de considerable

atención por su versatilidad genética, apareciendo como patógeno de plantas, saprofítico,
biorremediador y agente de biocontrol en cultivos de interés agrícola. Entre sus
mecanismos de acción se destacan el aumento de la toma de agua y nutrientes por la
planta, la producción de fitohormonas y el biocontrol de patógenos (Sanchez et al., ----).

Por lo que trabajar con productos a partir de los metabolitos activos de B. cepacia, en
ausencia o no de la célula como tal, brinda magnificas posibilidades para su utilización
como agente del biocontrol, además constituyen una alternativa eficaz a quimiotóxicos,
altamente contaminantes y peligrosos para la salud (Sanchez et al., ----).
En primer lugar, decir que puesto que esto de las micorrizas se pone de moda en el foro,
quisiera hacer una aclaracion sobre el hongo Trichoderma harzianum, el cual se
comercializa como micorriza pero no es así. Durante mucho tiempo se ha pensado que
este hongo, beneficioso en cualquier caso para nuestras plantas, era una micorriza e
incluso hoy en dia, mucha gente lo considera como tal, deciros que recientemente los
ultimos estudios han demostrado que no es micorriza como tal, sino un hongo endofito de
raices, es decir, un hongo que habita en el interior de las raices colonizandolas, ofrece
proteccion contra patogenos, estimula el crecimiento de raices, pero la diferencia principal
radica en que no aporta nutriente directamente a la planta, tal y como hace una micorriza
verdadera a traves de las estructuras que desarrolla en la raiz de la planta huesped, sino
que Trichoderma favorece la descomposición de materia organica en los alrededores de
la raiz para que ésta la aproveche pero no llega a suministrarlo directamente a la raiz de
la planta, como hace una micorriza. Aun asi este hongo es muy interesante para nuestras
orquideas y ofrece un sinfín de beneficios a nuestras plantas, lo cual reflejo en este
articulo para información de todos, pero aclarando sobre todo que no es una micorriza.
Veamos todas las ventajas d este hongo para nuestras orquis y plantas en general. En
rojo pongo los parrafos referentes a consultas frecuentes y dudas que ya me ha planteado
gente del foro.
Introduccion
El Trichoderma es un tipo de hongo anaerobio facultativo que se encuentra de manera
natural en un número importante de suelos agrícolas y otros tipos de medios. Pertenece a
la subdivisión Deuteromycetes que se caracterizan por no poseer, o no presentar un
estado sexual determinado. De este microorganismo existen mas de 30 especies, todas
con efectos benéficos para la agricultura y otras ramas.
Este hongo se encuentra ampliamente distribuido en el mundo, y se presenta en
diferentes de zonas y hábitat, especialmente en aquellos que contienen materia orgánica
o desechos vegetales en descomposición, así mismo en residuos de cultivos,
especialmente en aquellos que son atacados por otros hongos. Su desarrollo se ve
favorecido por la presencia de altas densidades de raíces, las cuales son colonizadas
rápidamente por estos microorganismos. Esta capacidad de adaptación a diversas
condiciones medioambientales y sustratos confieren a Trichoderma la posibilidad de ser
utilizado en diferentes suelos, cultivos, climas y procesos tecnológicos.
Trichoderma tiene diversas ventajas como agente de control biológico, pues posee un
rápido crecimiento y desarrollo, también produce una gran cantidad de enzimas,
inducibles con la presencia de hongos fitopatógenos. Puede desarrollarse en una amplia
gama de sustratos, lo cual facilita su producción masiva para uso en la agricultura. Su
gran tolerancia a condiciones ambientales extremas y hábitat, donde los hongos son
causantes de diversas enfermedades, le permiten ser eficiente agente de control; de igual
forma pueden sobrevivir en medios con contenidos significativos de pesticidas y otros
químicos. Además su gran variabilidad se constituye en un reservorio de posibilidades de
control biológico bajo diferentes sistemas de producción y cultivos.
Trichoderma, toma nutrientes de los hongos (a los cuales degrada) y de materiales
orgánicos ayudando a su descomposición, por lo cual las incorporaciones de materia
orgánica y compostaje lo favorecen; también requiere de humedad para poder germinar,
la velocidad de crecimiento de este organismo es bastante alta, por esto es capaz
establecerse en el suelo y controlar enfermedades
El Trichoderma probablemente sea el hongo beneficioso, mas versátil y polifacético que
abunda en los suelos. No se conoce que dicho microorganismo sea patógeno de ninguna
planta; sin embargo, es capaz de parasitar, controlar y destruir muchos hongos,
nemátodos y otros fitopatógenos, que atacan y destruyen muchos cultivos; debido a ello,
muchos investigadores le llaman el hongo hiperparásito. Ello convierte al Trichoderma en
un microorganismo de imprescindible presencia en los suelos y cultivos, y de un
incalculable valor agrícola.
Principales beneficios agrícolas del Trichoderma
Se conocen muchas funciones beneficiosas que realiza este hongo en la agricultura,
especialmente en el campo de la sanidad vegetal. A modo de resumen se han
demostrado las siguientes:
a) Estimulador del crecimiento de las plantas
Se ha comprobado que el Trichoderma produce sustancias estimuladoras del crecimiento
y desarrollo de las plantas. Estas sustancias actúan como catalizadores o aceleradores de
los tejidos meristemáticos primarios( los que tienen potencial de formar nuevas raices) en
las partes jóvenes de éstas, acelerando su reproducción celular, logrando que las plantas
alcancen un desarrollo mas rápido que aquellas plantas que no hayan sido tratadas con
dicho microorganismo.
Algunas especies de Trichoderma han sido reportadas como estimuladoras de
crecimiento en especies tales como clavel, crisantemo, tagetes, petunia, pepino,
berenjena, arveja, pimienta, rábano, tabaco, tomate, lechuga, zanahoria, papa, algodón,
fríjol y pastos ornamentales.
Las semillas de pepino germinan dos días antes que aquellas que no van sido inoculadas
con el hongo. La floración de Pervinca rosea, se acelera el número de botones por planta.
En crisantemo se incrementa también el número de botones, la altura y el peso de plantas
son mayores que aquellas no tratadas. Tales respuestas han ocurrido consistentemente a
concentraciones de 108 unidades formadoras de colonias por gramo de suelo, estas
densidades de población son fácilmente aplicables al suelo en formulaciones, las cuales
favorecen a su vez el incremento de la población de Trichoderma en el medio.
Se han realizado algunos estudios preliminares con Trichoderma para la estimulación del
crecimiento sobre plantas de fríjol, donde los aislamientos seleccionados estimularon la
germinación y presentaron un aumento en la altura de las plantas entre el 70 y 80%, y una
ganancia en peso de un 60% aproximadamente, ello supone un incremento en los
rendimientos de este cultivo.
Un ensayo similar realizado sobre pasto Estrella demostró que la ganancia en peso seco
con algunos aislamientos es cercana al 23%, en longitud de las raíces y de estolones este
incremento fue de un 30%.
b) Protección de semillas contra el ataque de hongos patógenos
Muchos productores al recoger la cosecha, guardan semillas para la próxima siembra, y
no les dan la suficiente cobertura de conservación, para que éstas conserven su potencial
germinativo y productivo. Esto trae como consecuencia que varias especies de hongos
patógenos ataquen dichas semillas con relativa facilidad, logrando una significativa
pérdida de sus cualidades botánicas y productivas.
Se ha demostrado que una protección con el Trichoderma garantiza la próxima cosecha,
ya que este hongo coloniza las semillas botánicas protegiendo las futuras plántulas en la
fase post-emergente de patógenos fúngicos.
Cepas de Trichoderma son capaces de colonizar la superficie de la raíz y de la rizósfera a
partir de la semillas tratadas y de las plantas adultas existentes en el suelo, protegiendo a
las mismas de enfermedades fungosas. Así las semillas reciben una cobertura protectora
cuyo efecto se muestra cuando la misma es plantada en el sustrato correspondiente.
Las semillas agrícolas, tratadas con Trichoderma protegen eficientemente las plántulas en
el semillero sin necesidad de tratamiento del suelo previo a la siembra.
El empleo de Trichoderma por medio de las semillas es probablemente la forma más
económica y extensiva para introducir el biocontrol en la producción, el método
sencillamente consiste en tratar las semillas con una suspensión acuosa de esporas o en
forma de polvo, con o sin necesidad de adherente.
El tratamiento de las semillas reduce los contaminantes externos como Rhizopus
stolonifer y otras especies de hongos en cucurbitáceas, col, cebolla, rábano, remolacha,
zanahoria, habichuela, tomate y pimiento entre otros; además incrementa el porcentaje de
germinación y estimula el crecimiento
En las pruebas de protección de las semillas contra las infecciones post-emergentes se
registraron coberturas elevadas por el antagonista que reducen a menos de 50 % las
infecciones por F. solani y a un 3 % las de R. solani en comparación con un 90 % en el
testigo.
Las semillas tratadas con Trichoderma protegen eficientemente las plántulas en el
semillero contra R. solani sin necesidad de tratamiento del suelo previo a la siembra.
c) Protección directa a suelos y diferentes cultivos
El manejo de las plantas mediante la rotación de cultivos favorece a Trichoderma a librar
el suelo de los propágulos del fitopatógeno( las estructuras de resistencia que el patogeno
deja en el suelo con el fin de que cuando vuelvas a sembrar te vuelva a infectar la
cosecha) , vulnerables durante su latencia en ausencia del hospedante, por esta razón la
utilización del biopreparado en los cultivos a rotar en las áreas altamente infectadas será
una forma a contribuir en la reducción de la población del patógeno en un menor plazo de
tiempo.
Además la preparación adecuada del terreno, la mejor fecha de plantación, fertilización y
riego actúan a favor de la combinación Planta-Trichoderma asociadas.
La aplicación del Trichoderma, directa al suelo ofrece incluso una protección mayor a los
cultivos. Cuando Trichoderma es utilizado para el control de hongos del suelo, pueden
mezclarse con materia orgánica (estiércol, casting y biotierra) y otras enmiendas utilizadas
como biofertilizantes, tal como se hace con inoculantes bacterianos usados como
fertilizantes ecológicos.
Se comprobó también que la cachaza y la turba son soportes y vehículos eficientes para
Trichoderma donde puede permanecer viable por más de 30 días en condiciones
ambientales sin que se altere la concentración inicial del inóculo. Aunque la aplicación del
biopreparado al suelo puede ser directa, la introducción de una enmienda orgánica en los
canteros previa a la siembra favorecerá el establecimiento del bioagente y el desarrollo
posterior de las plantas.
El aislamiento de una cepa de Trichoderma, recomendado para combatir los patógenos
fúngicos en hortalizas es capaz de proliferar en el suelo a partir de las semillas tratadas y
colonizar el sustrato antes que desarrolle la raíz del pimiento y el tomate asegurando su
protección adecuada.
El Trichoderma ejerce un control efectivo sobre el hongo que causa la podredumbre
húmeda de la lechuga, y de otras hortalizas de hojas.
La cepa de Trichoderma, efectiva para patógenos en tabaco coloniza el suelo de forma
progresivamente superior al desarrollo del sistema radical y brinda una cobertura
adecuada a las plántulas en el semillero, que es donde mejor puede lograrse una mayor
protección con el biopreparado de Trichoderma.
También el conjunto Trichoderma ± Micorriza favorece el desarrollo de las plantas de
tabaco y no afecta el hiperparasitismo, por lo que se pueden aplicar éstos bioagentes de
forma conjunta. Este efecto beneficioso también se logra en otros cultivos.
Nota: En la fase de transplante de hortalizas y tabaco por la tecnología habitual surge la
necesidad de proteger la postura sana en la plantación. El tratamiento de la radícula de
las plántulas por 10 minutos en el biopreparado al 10 % permite la transportación del
bioagente a la plantación que registra un efecto favorable cuando la incidencia en el suelo
de patógenos fúngicos es reducida.
El Trichoderma ejerce un efecto favorable en la primera fase de desarrollo de la caña de
azúcar, ya que es capaz de inhibir la acción de otros hongos, además, se pudo comprobar
que la aplicación de Trichoderma fue eficiente debido a que en todas las combinaciones
donde se aplicó este producto, se logró un mayor número de posturas germinadas que en
la variante donde no se aplicó el mismo.
Es evidente que la presencia de Trichoderma en la plantación es necesaria, y la forma
más eficiente sin duda es la transportación del bioagente junto con el sustrato donde el
mismo se encuentra previamente establecido como micobiota normal de la rizosfera.
d) Control sobre diferentes microorganismos fitopatógenos (ver tabla 1)
El Trichoderma, posee aislamientos con poderes antibióticos, los cuales actúan contra
varios microorganismos fitopatógenos. Se comporta como saprofito en la rizosfera, siendo
capaz de destruir residuos de plantas infectadas por patógenos. Se considera que su
acción es antagonista, siendo capaz de sacar el mejor provecho por su alta adaptación al
medio y por competir por el sustrato y por espacio.
Es bien conocida la definición de la enfermedad como resultado de una interacción entre
la planta - hospedante y el patógeno, y organismos antagónicos que limitan la actividad
del patógeno y/o elevan la resistencia de la planta.
La importancia del hombre en esta relación radica en saber manejar las especificidades
de cada uno para lograr que prevalezca la interacción a favor de la planta y el
antagonista.
Esto no es posible sin conocimientos de la etiología( comportamiento) de la enfermedad
que se desea controlar, el hábito del hongo fitopatógeno, su forma de propagarse y
permanecer en el campo. Trichoderma siendo un microorganismo competitivo ofrece una
protección biológica a la planta, destruye el inóculo patógeno presente y contribuye a
prevenir su formación.
Trichoderma, posee aislamientos con poderes antibióticos, los cuales actúan contra varios
microorganismos fitopatógenos. Se comporta como saprofito en la rizósfera, siendo capaz
de destruir residuos de plantas infectadas por patógenos. Se considera que su acción es
antagonista, siendo capaz de sacar el mejor provecho por su alta adaptación al medio y
por competir por el sustrato y por espacio. Trichoderma, actúa por medio de una
combinación de competencia por nutrientes, producción de metabolitos antifúngicos y
enzimas hidrolíticas y mico parasitismo.
Una cepa de Trichoderma controla muy bien al hongo Botrytis cinerea (moho gris, el
canalla que nos ataca las flores de las orquis produciendo esos picados florales como
puntitos negros), el cual es un patógeno con un rango de hospedantes bastante amplio en
diversos cultivos.
En un experimento se realizado en la Estación Experimental de la Universidad Central de
Las Villas y las Empresas Agrícolas "Valle del Yabú" y "Manacas" en la provincia de Villa
Clara, Cuba. Se comprobó la efectividad del biopreparado de Trichoderma, para el
combate del Damping off, post emergente (marchitez del semillero) y la pudrición en collar
del tomate (Lycopersicon esculentum), causada por el hongo A. Solani.
En este caso del tabaco el efecto del tratamiento de la postura puede reducirse por el
hecho de transplantar en surcos con agua abundante. La introducción del biopreparado
directamente en el surco reduce la incidencia de la enfermedad llamada Pata Prieta "
(Phytophthora nicotianae var. nicotianae), pero requiere de una mayor cantidad de
biopreparado por lo que su utilización de esta forma debe ser analizada para algunos
campos de mayor riesgo.
Al emplear un abono orgánico rico en microorganismos de excelente control biológico
como el Trichoderma, se logra un buen control de la enfermedad "mal del alluelo"
producido por el hongo de suelo Rhizoctonia spp, en este caso el control es debido a los
mecanismos de competencia e hiperparasitismo del Trichoderma hacia el hongo
Rhizoctonia spp. Además de otro control ejercido por medio de sustancias nocivas al
patógeno (antibiosis, por producción de antibioticos), producidas por el sustrato de
materia orgánica empleada.
Varias instituciones han demostrado la potencialidad del Trichoderma como posible
agente de control, tanto ³in vitro´, como en vivo, de los siguientes fitopatógenos: A. mellea,
R. solani, S. sclerotiorum y Phytophthora spp.
En América del Sur, científicos están aplicando el hongo Trichoderma para combatir y
controlar el "witches±broom´ y el hongo "frosty pod" ; principales enfermedades en el
cultivo del cacao en Brasil y Perú respectivamente .
En el cultivo de arroz (Oryza sativa), el Trichoderma ejerció un control sobre el hongo
Rhizoctonia solani, agente que afecta la producción de arroz en mas del 20%. Cuando se
aplicó Trichoderma, los niveles de incidencia estuvieron por debajo del 13%, mientras que
en el testigo la incidencia del fitopatógeno estuvo por encima del 50%.
Existen pocos reportes a cerca de la aplicación de control biológico para problemas
fitosanitarios en post cosecha, ya que el estado de sanidad de un producto de post
cosecha es la consecuencia directa de las prácticas empleadas durante el tiempo de
permanencia en campo. No obstante a eso, se han logrado resultados significativos
cuando se aplican algunas cepas de Trichoderma, para el control de Rhizoctonia carotae,
en el cultivo de la zanahoria.
Tabla 1. Diferentes especies de hongos fitopatógenos controlados por el Trichoderma
Fitopatógenos controlados por Trichoderma Enfermedad Cultivo
Armillaria spp Pudrición de raíces. Frutales
Colletotrichum gloeosporioides Antracnosis Papa, tomate, fríjol, fresa, flores, tomate.
Fusarium moniliforme Pudrición Maíz
Phytophthora infestans Gota Papa, pepino de agua
Phytophthora spp Pudricion Tabaco, flores, frutales, etc.
Pythium spp Pudrición algodonosa, volcamiento Varios cultivos.
Fusanum oxysporum Marchitamientos vasculares Papa, tomate, fríjol, plátano, maíz,
clavel.
Rhizoctonia solani Pudrición algodonosa, volcamiento Zanahoria, tomate, lechuga, col,
café, papa, cebolla, ajo, pimentón.
Macrophomina phaseolina Carbón de las raíces. Maíz, fríjol, melón , ajonjolí.
Sclerotinia sclerotiorum Pudrición algodonosa, volcamiento Habichuela, tomate, lechuga,
col, café, papa, cebolla, ajo, pimentón.
Rosellinia necatrix Pudrición blanca de raices Aguacate, manzano
Botrytis cinerea Moho gris Papa, tomate, fríjol, fresa, flores, tomate.
Cylindrocladium scoparium Volcamiento Pino
Fuente: Adaptado de: Herrera-Estrella y Carsolio, 1998 y Chet and Inbar, 1994.
La introducción del biocontrol por Trichoderma en el manejo integrado de plagas por
cultivo es la forma óptima de explotar las posibilidades que brinda el microorganismo
como antagonista de suelo.
e) El Trichoderma como agente para la biodegradación de agrotóxicos
Dentro de los organismos utilizados para la biodegradación se ha estudiado el género
Trichoderma el cual puede degradar pesticidas organoclorados, clorofenoles, y otros
insecticidas coma DDT, endosulfán, pentacloronitrobenceno, aldrin y dieldrin, herbicidas
como trifluralin y glifosato. Este hongo posee enzimas tales como celulasas,
hemicelulasas y xylanasas que ayudan a la degradación inicial del material vegetal y por
ultimo enzimas de mayor especialización que contribuyen a la simplificación de moléculas
complejas como son las de biopesticidas.
Se han realizado experimentos donde se ha comprobado que la aplicación del
Trichoderma degrada algunos grupos de pesticidas de alta persistencia en el ambiente.
Esto abre las puertas hacia la descontaminación de extensas áreas de suelos que se han
contaminado por el uso irracional e indiscriminado de pesticidas de un alto efecto residual,
causantes de grandes daños para la salud animal y humana.
Trichoderma posee resistencia innata a la mayoría de los agroquímicos, incluyendo a los
funguicidas. Sin embargo, el nivel de resistencia difiere entre cepas. Algunas líneas han
sido seleccionadas o modificadas para ser resistentes a agroquímicos específicos. La
mayoría de productores de cepas de este hongo destinadas a control biológico poseen
información relacionada con la susceptibilidad o resistencia a un amplio rango de
agroquímicos. Esto con el fin de que estos aislamientos sean compatibles con métodos de
control aplicados, los cuales incluyen control químico.
f) El Trichoderma como alternativa para el ahorro de fertilizantes químicos y pesticidas
Investigaciones recientes han demostrado que la aplicación del Trichoderma en el cultivo
del maíz y cuyas raíces han sido colonizadas por dicho microorganismo, requieren menos
fertilizante nitrogenado, que el maíz no tratado; lo cual implica un ahorro del 35 al 40% de
fertilizante. Conociendo que dicho cultivo demanda mucho Nitrógeno, existe la posibilidad
real que las aplicaciones de nitrógeno químico, sean disminuidas, disminuyendo así los
costos de aplicación y una mejora apreciable del medio ambiente. El empleo del
Trichoderma puede beneficiar a los productores agrícolas en sus propósitos de lograr
cosechas mas sanas y con mayor productividad.
Está comprobado el efecto que hace el Trichoderma en la solubilización de los fosfatos
insolubles del suelo, facilitando su asimilación por los cultivos. Trichoderma forma
asociaciones con Micorrizas, aumentando de manera significativa la rizósfera del suelo,
permitiéndole a las plantas hacer una mayor extracción de nutrientes y con un alto grado
de asimilación. Se ha demostrado también que el Trichoderma es compatible con el
biofertilizante a base de Azotobacter chroococcum, una bacteria que fija Nitrógeno en el
suelo; por lo que se establecen relaciones de ayuda mutua, con el consiguiente beneficio
para la nutrición de los cultivos.
Está demostrado que el Trichoderma también es empleado como bioagente para el
control de diferentes fitopatógenos, por lo que ha contribuido a sustituir en muchas
cultivos las aplicaciones de pesticidas químicos, que son mas caros y mas dañinos a la
salud de las personas y de los animales. Ello ha posibilitado la producción de alimentos
mas sanos y ecológicos, potenciando de manera significativa una Agricultura Orgánica y
mas en correspondencia con las actuales necesidades de los consumidores.
g) Trichoderma y su empleo en sustratos bajo condiciones de hidropónico y zeopónicos
Aunque los resultados alcanzados hasta el momento son insuficientes, el empleo del
Trichoderma en cultivos de hidropónicos ha demostrado otra de las aplicaciones y usos
de este microorganismo para la agricultura, todo lo cual puede ser válido también para los
zeopónicos, debido a las propiedades de la zeolita para el intercambio, la adsorción, la
absorción y el almacenamiento de nutrientes, así como la capacidad que pudiera tener de
dejarse colonizar por dicho microorganismo, o al menos permanecer éste, por un tiempo
mas prolongado en la zeolita, que en otros sustratos minerales (roca basáltica ± gravas --
piedra pómez ± etc.)
La combinación semillas - sustrato redujo la incidencia del damping-off en condiciones de
hidropónico a menos de 5 % mientras que en el área testigo el nivel de plantas de tomate
muertas fue superior al 70 %. Esto es un resultado muy interesante y abre muchas
perspectivas para la producción en éstas condiciones, tanto para el campo como para la
ciudad.
El sustrato de basalto fue tratado por irrigación 48 horas antes de la siembra, el
Trichoderma se mantuvo viable en la roca de basalto alrededor de 100 días. El
hidropónico tenía antecedentes de pérdidas en la postura entre 70 - 80 % en años
anteriores que fueron repetidas en las unidades testigos no tratadas con Trichoderma. La
disminución de la mortalidad de plántulas y el aumento del rendimiento demuestran la
efectividad del esquema de aplicación semillas - sustrato en la fase pre y post -
emergente en semilleros.
Resumen de los principales beneficios agrícolas del Trichoderma
1) Ofrece un control eficaz de enfermedades de plantas.
2) Posee un amplio rango de acción.
3) Elevada propagación en el suelo, aumentando sus poblaciones y ejerciendo control
duradero en el tiempo sobre hongos fitopatógenos.
4) Ayuda a descomponer materia orgánica, haciendo que los nutrientes se conviertan en
formas disponibles para la planta, por lo tanto tiene un efecto indirecto en la nutrición del
cultivo.
5) Estimula el crecimiento de los cultivos porque posee metabolitos que promueven los
procesos de desarrollo en las plantas.
6) Puede ser aplicado en compostaje o materia orgánica en descomposición para acelerar
el proceso de maduración de estos materiales, los cuales a su vez contendrán el hongo
cumpliendo también función de biofungicida.
7) Favorece la proliferación de organismos benéficos en el suelo, como otros hongos
antagónicos.
8) No necesita plazo de seguridad para recolección de la cosecha.
9) Preservación del medio ambiente al disminuir el uso de funguicidas.
10) Economía en los costos de producción de cultivos.
11) Ataca patógenos de la raíz (Pythium, Fusarium, Rhizoctonia) y del follaje (Botritis y
Mildew) antes que puedan ser los detectados y evita el ataque de (Phytophtora).
12) Previene enfermedades dando protección a la raíz y al follaje.
13) Promueve el crecimiento de raíces y pelos absorbentes.
14) Mejora la nutrición y la absorción de agua.
15) Disminuye o elimina la dependencia de fumigantes químicos.
16) No se ha registrado ningún efecto fitotóxico.
17) Moviliza nutrientes en el suelo para las plantas.
18) Actúa como biodegradante de agrotóxicos.
19) Se puede emplear en sustratos de organopónicos y zeopónicos.
20) Protege las semillas agrícolas y botánicas de fitopatógenos.
21) Es compatible con Micorrizas, Azotobacter y otros biofertilizantes.
22) También es compatible con bio agentes controladores de plagas y enfermedades.
Nota: Se debe tener en cuenta que un solo método de control no basta para erradicar una
enfermedad de forma eficaz y duradera, es necesario integrar varias prácticas. Ninguna
de estas por si sola abarca todos los aspectos que deben considerarse para obtener un
cultivo sano y económicamente rentable.
Bibliografía consultada
Existen muchas publicaciones y trabajos científicos que tratan del Trichoderma y sus
diferentes especies. A continuación declaramos las referencias empleadas para la
realización de este trabajo. Cualquier omisión les anticipamos nuestras disculpas y
nuestra intención de incluirla en estos resultados.
‡ ³Producción y aplicación de Trichoderma spp. como antagonista de hongos
fitopatógenos´. Dra. Marusia Stefanova Nalimova. Instituto de Sanidad vegetal. La
Habana. Cuba.
‡ ³Actividad metabólica de cepas de Trichoderma spp para el control de hongos
fitopatógenos´ del suelo. M. Stefanova, A. Leiva, L. Larrinaga, M. F. Coronado . Instituto
de sanidad vegetal. 1999. La Habana Cuba.
‡ ³El Trichoderma spp. Deuteromycetes, Moniliales (el sistema de la clasificación asexual)´
.por G. E. Harman, Universidad de Cornell, Ginebra, NY 14456.
‡ ³Evaluación de la efectividad del antagonista Trichoderma lignorum al tratar la semilla de
arroz (Oriza sativa), contra el hongo Rhizoctonia solani´. Departamento Técnico Agro
servicios ; Uldarico Varón Reyes e Iván Ramírez Segura. Colombia
‡ La Biotecnología en el Control de Enfermedades de los Cultivos. Chet, Yo. 1993. Wiley-
Liss, Nueva York, 373 pg,
‡ ³Solubilización de fosfatos y micro nutrientes para el crecimiento de las plantas
promovidos por diferentes especies de Trichoderma´. C., Norvell, W. A., Björkman, T., y
Harman, G. E. 1999.

CINETICA DE AZUCARES DURANTE EL PROCESO DE GERMINACIÓN DEL È


IOWA B73
Adrián García Casarrubias, Licenciatura en Biotecnología, Facultad de Química,
Universidad Autónoma de Querétaro
Dr. Axel Tiessen Favier, Laboratorio de Metabolómica y Fisiología Molecular, Depto. De
Ingeniería Genética, CINVESTAV-IPN Unidad Irapuato
RESUMEN
El maíz ha sido durante milenios la base de la alimentación de la población
mesoamericana, pero desafortunadamente el maíz como base de la alimentación
presenta diferentes desventajas nutricionales, entre ellas la elevada concentración de
carbohidratos, que generan una elevada ingesta calórica en la población cuya base de la
alimentación es la tortilla o el maíz en general. Uno de os objetivos del laboratorio de
Metabolómica y Fisiología Molecular del CINVESTAV Unidad Irapuato es crear, por
mejoramiento genético tradicional, variedades de maíz que cumplan con los
requerimientos nutricionales de la población mexicana, siendo una de sus líneas de
investigación el estudio de los azucares presentes en el maíz, principalmente las solubles.
Con el objetivo de acelerar el proceso de identificación de las variedades con
concentraciones deseables de azucares solubles, en este trabajo se estudió la cinética
que presentan las concentraciones de azucares solubles durante el proceso de
germinación, con lo que se intentará determinar las concentraciones de azucares solubles
que tendrá la planta madura, sin tener que esperar a que esta madure, permitiendo
descartar las no deseables y propagar las deseables.
Palabras Clave: Germinación Azucares solubles, È

, IOWA B73
INTRODUCCIÓN
A pesar de la importancia que durante milenios ha tenido el cultivo y consumo de maíz en
nuestra cultura hasta hace poco los métodos y materiales usados se basaban más en
conocimientos empíricos que en conocimientos científicos, la falta tanto de tecnología
como de conocimientos evitaron, por mucho tiempo la propagación de una cultura
agronómica más científica en nuestro país. Fue hasta hace pocos años cuando, gracias a
la tecnología existente en otras partes del mundo y los conocimientos adquiridos a lo largo
del tiempo por personas con enfoque científico, que se comenzó a buscar variedades
mejoradas que satisficieran necesidades especificas para los distintos usos que se le da
al maíz. Fue así que se comenzaron a crear variedades resistentes a herbicidas y plagas,
así como variedades con rendimientos muy superiores a las variedades nativas,
Cumpliendo con las necesidades de los países que desarrollaron estas variedades, que
únicamente lo emplean como alimento pecuario, pero al no realizarse suficientes avances
en esa materia en los países consumidores de maíz como alimento, se descuido el
aspecto nutricional del maíz.
Recientemente en centros de investigación nacionales como el Instituto Nacional de
Investigación Forestal Agrícola y Pecuaria (INIFAP) y el Centro de Investigaciones
Avanzadas del Instituto Politécnico Nacional (CINVESTAV-IPN) se ha buscado potenciar
la investigación científica, enfocada en productos agronómicos entre ellos el maíz, siendo
parte importante de este esfuerzo el Laboratorio de Metabolómica y Fisiología Molecular
del CINVESTAV Unidad Irapuato, que se enfoca en investigación y mejora genética
tradicional de variedades de maíz rico en Aminoácidos esenciales, Carotenos,
Antocianinas, y con concentraciones adecuadas de carbohidratos. Uno de los objetivos de
éste laboratorio es el de generar variedades que posean suficientes carbohidratos para
proporcionar energía a quien los consuma, pero sin que esto represente una ingesta
calórica demasiado elevada. Para llegar a este objetivo es necesario conocer y estudiar
todos los procesos metabólicos en los que se involucran los carbohidratos, entre ellos el
proceso de germinación, si conocemos la cinética de los carbohidratos durante el proceso
de germinación, podemos predecir la concentración de los distintos carbohidratos solubles
en la planta madura, lo que nos ahorrara
tiempo, pudiendo de esta manera descartar las plantas que consideremos que tienen
concentraciones inadecuadas de carbohidratos en las etapas tempranas de crecimiento,
ahorrándonos tiempo y recursos, a ser focalizados en las variedades que identifiquemos
en etapas tempranas con las concentraciones adecuadas de carbohidratos.
OBJETO DEL ESTUDIO
En este estudio buscaremos evaluar los cambios presentes en la concentración de las
distintas azucares soluble, tales como Glucosa, Fructosa y Sacarosa a lo largo de las
distintas fases del proceso de germinación del Zea Mays de la variedad IOWA B73, bajo
condiciones ideales de crecimiento.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
-Determinar las condiciones ideales de germinación para la variedad IOWA B73,
considerando las variables de Agua, Temperatura, Oxigeno y Luz.
-Germinar las semillas bajo las condiciones evaluadas como las ideales y evaluar la
concentración de azucares solubles en diferentes momentos del proceso de germinación
MATERIALES Y MÉTODOS
En primer lugar realizamos un experimento en el que el objetivo era encontrar las
condiciones ideales de germinación para la variedad IOWA B73 ,variedad ampliamente
utilizada en estudios científicos por los conocimientos genéticos que se tienen de ella,
considerando las variables de Agua, Oxigeno, Temperatura y Luz. Para esto realizamos
un diseño experimental basado en 2 niveles de cada variable. (Tabla 1)
El tiempo de germinación fue de 4 días, y se evaluaron factores de Apariencia, asi como
largo del coleotilo y raíz, para determinar las condiciones ideales, Una vez concluidos los
4 días de germinación bajo las condiciones expuestas previamente, solo se observó
germinación en los tratamientos 1 y 9. Consideramos como condiciones ideales las del
tratamiento 1 ya que el Tratamiento 9 presentó decoloración del coleotilo, principalmente
por la baja síntesis de clorofila ocasionada por la falta de luz. (Tabla 2 y Figura 1 )
Una vez determinadas las condiciones ideales, se determinó que los tiempos para tomar
las muestras para el experimento serían en los días 0, 3, 5, y 7 para así obtener puntos de
comparación en al menos cuatro momentos de la germinación. (Figura2)
El protocolo que se siguió para realizar las mediciones de azucares solubles fue el
siguiente, germinando con semillas de Zea Mays de la variedad IOWA B73 provenientes
del Centro Internacional de Mejoramiento de maíz y Trigo (CIMMYT), tomando 5 semillas
para cada medición y validándolo por triplicado.
Protocolo de determinación de azucares solubles:
Germinar bajo condiciones ideales
Tomar muestras los días 0, 3, 5, y 7, utilizando tanto la semilla como el coleoptilo y la raíz.
Congelar con Nitrógeno liquido durante 10min y almacenar a -80oC en equipo REVCO ®
Premoler en molino de postas durante 1min a 30Hz en equipo Retsch MM301 ®
Liofilizar durante 36hrs en equipo LABCONCO®
Moler de nuevo en molino de postas, 1min a 30Hz en el mismo equipo
Pesar 20mg de muestra en una microplaca Deepwell
Extraer las azucares solubles con 1ml de agua desionizada por pozo de la microplaca,
durante 1hr en agitación constante a 65oC
Centrifugar 5 min a 3700rpm en equipo Eppendorf® y utilizar el sobrenadante
Prepara el reactivo Sugar Assay que contiene ATP, NADP, G6P
Tomar 5ȝl del sobrenadante y mezclar con 200ȝl de Suggar Assay en una placa Greiner®
Tomar lectura de blanco en el lector de microplacas ȝQuant ® a 340nm
Esperar a que la lectura se estabilize
Agregar Hexoquinasa (HK) Bayer ®, mezclar y esperar a que la lectura se estabilice
Agregar Isomerasa (PGI) Fluka ®, mezclar y esperar a que la lectura se estabilice
Agregar Invertasa (I) Sigma ® , mezclar y esperar a que la lectura se estabilice
La lectura a 340nmse basa en el principio de acoplamiento enzimático de la reacción de la
hexoquinasa con la reacción de la G6P deshidrogenasa y la comparación contra la lectura
a 405nm en referencia al valor de absorbancia máxima del NADPH bajo estas
condiciones de lectura (Figura4 y Figura 5)

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Después de realizar la metodología previamente expuesta, y obtener las lectura a 340nm
se procesaron los datos en un paquete informático obteniendo de esta manera las
concentraciones de azúcares solubles en micromol por gramo de peso fresco (ȝmol/gFW),
para posteriormente realizar los cálculos estadísticos entre las distintas repeticiones del
experimento, para con los datos ya sintetizados realizar la siguiente gráfica. (Figura 6)
En los resultados, claramente se observa un aumento exponencial en la concentración de
Glucosa conforme aumenta el tiempo de germinación principalmente causado por la
degradación del almidón de la semilla, mientras que tanto la Fructosa como la Sacarosa
presentan un comportamiento complementario, mostrándose las mayores diferencias
tanto en el día 0 como en el día 5 siendo la causa del aumento en la concentración de
Fructos, la degradación de Sacarosa, en tanto que el aumento final en la concentración de
Sacarosa se debe al inicio del proceso fotosintético.
CONCLUSIONES
En primer lugar, consideramos que este experimento mostro alto índice de repetitividad
entre las tres repeticiones, se mostraron datos consistentes y reproducibles.
En cuanto a las causas de los resultados obtenidos, el comportamiento de la Glucosa,
Sacarosa y Fructosa, puede ser fácilmente explicado, por la degradación de la Sacarosa
en Glucosa +Fructosa, por lo que podemos observar que en los puntos en los que la
fructosa se encuentra en el máximo, la sacarosa se encuentra en sus valores mínimos,
mientras que los valores de Glucosa derivada de sacarosa se van aumentando al valor de
Glucosa libre proveniente de la degradación del almidón.
La utilidad de este estudio se puede centrar en la posibilidad de obtener datos de la
proporción de la concentración de azúcares en una planta con pocos días de germinada,
para relacionarla con la concentración de azucares solubles de una planta madura, lo que
aceleraría el proceso de selección para el mejoramiento genético pudiendo seleccionar
las plantas con las concentraciones adecuadas de azucares solubles y descartar las que
presenten concentraciones de azucares solubles no deseadas.
REFERENCIAS
*/Rodriguez Montessoro, Rafael, El cultivo de maíz Temas selectos Mundi Prensa 1ª
Edición, 2008
*Tiessen Favier, Axel Conceptos Básicos y metodologías innovadoras del mejoramiento
genético del maíz 1ª Edicion 2008
*Poehlman Milton, John Mejoramiento genético de las Cosechas, Limusa Wiley 2da
Edición 2005
*Journal of Experimental Botany, Vol 85 No 9, 2007 pp2270-3389

El ethrel

ETHREL® 480 SL al ser aplicado a la planta o

a los frutos induce la liberación anticipada de
etileno que es el madurador natural de las
plantas, lográndose así una maduración
uniforme en un periodo de tiempo más corto.
se usa principalmente como madurante de frutos,
aunque en algunos cultivos tiene otros efectos, tales
K

  
 

 como la inducción anticipada de flores en piña e
incremento de la germinación, macollamiento y
contenido de sacarosa en caña de azúcar.
Mantenga un nivel adecuado de fertilización, de

  
acuerdo con las exigencias de un mayor número de
 rebrotes inducidos por el uso de ETHREL® 480 SL.
O
   

ETHREL® 480 SL no debe aplicarse con
temperatura ambiente superior a 40° C ni en mezcla
con otros productos, excepto urea en piña. No




 necesita el uso de coadyuvantes. Entre la aplicación
de un producto a base de cobre y la posterior de
ETHREL® 480 SL debe transcurrir por lo menos un
mes.


INFORMACIÓN ESPECIALIZADA RECOMENDACIONES Y ADVERTENCIAS DE USO: ETHREL®

480 SL por ser un plaguicida fitorregulador de baja categoría toxicológica se debe manejar con
prudencia a fin de evitar posible efecto tóxico al usuario, se exige: Utilizar ropa de protección:
Overol, guantes, botas, careta y gafas. Después de usar esta ropa lavarla muy bien teniendo
precaución de no contaminar otras prendas. Durante el manejo/aplicación no comer, no beber ni
fumar. Al finalizar la jornada, bañarse todo el cuerpo con abundante agua y jabón.

INSTRUCCIONES SOBRE EL ALMACENAMIENTO Y MANEJO: Almacene el producto fuera del

alcance de los niños, bajo llave, en un sitio seguro, fresco, seco y bien ventilado, separado de
alimentos y drogas de consumo humano o animal, ropa, calzado y utensilios del hogar.

RECOMENDACIÓN PARA LA PROTECCIÓN AMBIENTAL: Para la protección de fauna terrestre o

acuática evite contaminar áreas fuera del cultivo a tratar. DESPUÉS DE USAR EL CONTENIDO,
ENJUAGUE TRES VECES ESTE ENVASE Y VIERTA EL AGUA EN LA MEZCLA DE
APLICACIÓN LUEGO INUTILÍCELO.

ADVERTENCIA: Ningún envase que haya contenido plaguicidas debe utilizarse para conservar
alimentos o agua potable. ANTÍDOTO Y TRATAMIENTO MÉDICO: Si se presenta contacto con:
Ojos: Lave inmediatamente durante 15 minutos con agua limpia. Piel: Retire la ropa y bañe al
paciente con abundante agua y jabón. Si por uso inadecuado se ingiere: NO INDUZCA EL
VÓMITO. Vías Respiratorias: Retire al paciente del área contaminada hacia un lugar con aire
fresco.

En todos los casos, consiga atención médica. Inmediata y presente la etiqueta. Se sugiere al
médico tomar medidas contra conmoción circulatoria, depresión respiratoria y convulsiones. El
tratamiento debe ser sintomático.
PRIMEROS AUXILIOS: En caso de intoxicación llame al médico inmediatamente o lleve el paciente
al médico y muéstrele la etiqueta. En caso de ingestión NO INDUZCA EL VÓMITO. Si se ingiere,
beber leche en abundancia, clara de huevo o una solución de gelatina o grandes cantidades de
agua. Mientras consigue asistencia médica, suministre al paciente los primeros auxilios generales.

GUÍA PARA EL MÉDICO: Se sugiere al médico tomar medidas contra conmoción circulatoria,
depresión respiratoria y convulsiones. Aplique tratamiento sintomático. Para mayor información
dirigirse al Dr. Alfredo Noboa Telf: (04) 2567-500, 2563-500, 09 9426-154 - Receptor 34334
(Guayaquil).
Glifosato

_
   
  








 




 




 







 


glifosato




 C3H8NO5P !_"#$"%&'(

 

 
 )

)  

)  



(
   
)


)*(

 
* 
)
(+ )
  *
_) )

 
(+ 
    

 )+    
(

 
*

,  )




   
)
 
 )
 )
  

-
 -
*




 
)

)
 

(

 .)  

 '
) /)
0###'* ) 
) 
12#01+ 

 
 





 *, )
 
 

 (  

)
 3
*

(

 - *44*"-0*###2*###5 6
72#*###
8#*###5 6 

 *"

†
 m





   
(


8
)


(

  
  9_9_'
:
 )



 
-
 -




 

 

) *


(

  

-
(

'
) 
 




 
-
 -


) 
 



-

()
*;"<

, 9_9_ 

: 

(

  _9'
)
 99'
)   _9 *, 
-
 -



:  
3)   
 

  
 




 
 
 *,  

) 


(

    

*

!





: 

 (   
 


  )

   )
 
  
 

)
*= 
3 (

 
 


+ ( 
 
)
 3
)      )  
*

4
las y no
s
gist
ados ;

 <

!
  
  è


/




4_9 
>

)  ( /)
 *!


 *44*





 + ( 
 ?8.)@ . :9
2"A'B
/ CC2"AD  '.)E9   8#0A'.
8"0A'!  8%A'!  88A'*&F
) ) 


  
 *9+)
.)
   

))


 $  

  

    
 
*




 ) 


)  
?

c _
 
c _
  
 

c 
   
 
  


 

c _
   

,) )
 "0#02#&#2%#&%#


 
)


*, 

-  

 &#5, 
  
   

*

9  


&#5,


) )
 )


  )
(  "0,5( )  
 

: ) Elytrigia ree'*,-
 )
 -,5( )  
(

 

: 

 

*%

Otr

m

˜  

R
  
 

 

    

     


 






 
(

  )

*44*)   )+ 
) 

   


9
 

*_  


(  
 
 
 




 

 
  *44*

   
 - )


) *G= ( )   
)

  )


 3 

 

 

  
_ 3

 
 

 
 )    

 

 

  @


  (  
+  )

*"#!( 
)

  
 

 


   

)-
*
!- -)(

 )

(

 
9 

 


 

    -   

 



)




  *

Cltivos odificados gnéticant ;

 <

!

 

 

8
)


(

  

  9_9_'
 

(


)

 *, 
   




)

 3



 : =gr acteri
 92 92
9_9_'
 

 *"""0 929_9_
     + 
"GG& :
 


:

+  3
*""2

O

   t
   m


, !
9
!

9!'"8  
> 
:




_
"&"$



(

  

  
/

1
CCC1
)  /)



(

"%)


CH -
))
)  /)




(

*"G_
 

C
 ')  /)

 
*"G, 

0### 
1 +
 


)) ( )



(

 .))


 ( 1*"G

_
 

0#(  


) 
 

.)   
 
)
  3






( i vitr   +   
"/"#8 
  

   )  
'*, ))

 
  

B

 
)
 
: 
   


*

 ) 
 



 !9!
)

)
  9>!
 6 )  
3

    

 
.4)) 

  
*_:
 B

  - 6
 *
 
t
t 
m





 


 (
 
)

)
 


   

5 
)


  
 
 )

 )
  

)

) 
 
 
 6 
)



  
 
 ) -
  ) 

 
)


  *  )
 
 


  
 )  


 
)) ()  
) )    I
 

) 
    
   



 

))
)


')
 )
 


: 8"#A
)   


:
)


) 

 ))
*

4r  t 
m


 

!
9
!


 4
(   







  

 
) 

:  


 



   ) )  

 



 *0"000
)




  JJC
@
,  
1


9!
)3



 1



 
 1
 1


 


 



  
 
 
 + (1*02080&


 





  
"GG"
))
 


 
  , '
)
   0# I
))
 
   8 6
)

 
 8#*###


 

   "88





)  $




*0$0%0G,
 
  
(  

: 
)  0&0) 


)


  *

K   
m


"GG&   
 )

  6 
) 
 



      +





 )




 
 =K#

H
0#0##$ 
  
)
)


  6 
)) 
.) 
 

 

)   

)

)3*

 

 (
 

)

 0##" 
 


 


)

)


.)-


)
4
)  1)

)  

 
1
1/
)  
 
 -
1*  

)
 )



*"

£ t 
r 
  t
 
r 

 
m





(  


     
)
) 
3

 0)  


 
 3

)
 
*$_


)






  
) 
  

 *

!
 
 

i vitr 


-)  



  

  

 

  
   

 

  

)  
 
 
*
!-
 
 

i vitr /)

  

 
 
 
 
   



  3 
/)
  


 *

> 



) 







 

 
3
 
) 

)  





  

) 
 
 

)6 

 

 
 
 )    
)



    3

 
)
* 



 
 ( )
  + -
: 
 *

ÿ
tr
 r  
r   
t
m


n A
gntina ;
 <


"G0##G
9
 
.)

!
  

 -:
L
 (
 
 0"50##G;"2<  3
 
  
 




C


 -

  



_
)



 +
?

" C
 
( (





   *0 
   
))
)
)   * 

 )  
)   




 
  
*2 9)( 
 


    )  


:


 

*8 C



)
 

 
 
 

)

    *&  


 
 
)  )



) 





*$ .


  



) *% 9)



 
 )
))


   
)
 *G 9)
) 6  

:

 
 
)

 

 
*"# C)
 +  5 
 
)
) 
)  *"" .

:   



 

9





*


 0"5#G 

 ( 
)


@ 
C:
!/

-
  

)


 

 :   
)
  *

! :
"8 

0##G
!

!
 !  
!


 ;"8<


 
 )  
 _) M




;"&<


 

 )

 




)



 
 
 

:    

 
 

)

)



:
 /

 
)

)
) 


 ( 

*,  
 


)

@
!
  _  *!
)  )

)
 


:  

(

   

 

  N 
 O*

 

0##G
)

!
  
 +!3
  _   
C



F 






 2




 ))







 
 
( *8!-




 
!3   

 
 >C F +

C




F3 
!
 '*&  
( +( 
)


 
  3
 
 ) 

)) )
 
( 



 

)) 
 
 

*


 
 




F 
 ,
@  6 



)

  
 




*   $F 




 4

 
 >!4'

 
: ) 6


 
1
 


 ( 
 
   ) 6 
 
  : 


    

  


1*%

9  
_



_ 
 

 !

 
_  '
(

 
)
  
 
  ( 


 

!3   
)  

 ( 

) 
 *G,  -  
 
)  
 



   ) 6 )


)
  )
9
+ 
  : 
 
 )

 
/)

+ *2#





 
.)

!
 )(


  + 

)))
 *, )(


( 
 

 

    
 

 





)


 %*###( 
+    
: !  +  3

)


 
 
+ 
 ) 6   

   
 

 
 2"

El Etileno (C2H4)


Etileno es una hormona natural de las plantas.
Afecta el crecimiento, desarrollo, maduración y envejecimiento de todas las
plantas. Normalmente es producido en cantidades pequeñas por la mayoría de
las frutas y vegetales. Muchas frutas producen grandes cantidades de etileno y
resulta en una maduración uniforme cuando es expuesta a una fuente externa
de etileno.

ETILENO NO ES DAÑINO O TOXICO PARA LOS HUMANOS EN LAS

CONCENTRACIONES QUE SE ENCUENTRAN EN LOS CUARTOS DE
MADURACIÓN.
De hecho, etileno era usado en el medio medico como un anestésico en
concentraciones significativamente más alta del que se encuentra en un cuarto
de maduración. Sin embargo, etileno es frecuentemente acusado de ser la
razón por la cual algunas personas tienen dificultad de respirar en los cuartos
de maduración; lo que sí puede afectar a algunas personas es usualmente
cualquiera de estos dos motivos a) Dióxido de Carbono (CO); Dióxido de
Carbono, es producido por la maduración de la fruta en el cuarto y los niveles
aumentan substancialmente o b)nivel de Oxigeno, el Oxigeno en el cuarto de
maduración es absorbido por la maduración de fruta, esto algunas veces hará
que la respiración en el cuarto de maduración sea dificultosa. El aumento de
niveles de CO y falta de Oxigeno son las razones principales por la cual se
necesita ventilar el cuarto de maduración.

La acción del etileno es más lenta en temperaturas más bajas

A su más bajo nivel de temperatura, la fruta es básicamente inactiva y no
responde bien al etileno aplicado externamente.

El Etileno penetra ha muchas sustancias

De hecho, penetra a cajas de cartón, madera (que son usadas para envío de
los productos) y hasta paredes de concreto.

El etileno es dañino para muchas otras frutas, vegetales y flores.

Mientras que el etileno es invaluable debido a su habilidad para iniciar el
procesamiento de maduración en muchas frutas, este puede también ser muy
dañino para muchas frutas, vegetales, flores y plantas ya que acelera el
proceso de envejecimiento, disminuyendo así la calidad del producto y
duración. El grado de daño depende de la concentración de etileno, tiempo que
ha sido expuesto y temperatura del producto. Uno de los siguientes métodos
debe ser usado para asegurar que los productos sensitivos al etileno no sean
expuestos al mismo a) frutas que produzcan etileno (como manzanas,
avocados, bananas, melones, melocotones, peras y tomates) deberán ser
situados separadamente de los que son sensibles al etileno (bróculi, col,
coliflor, hojas verdes, lechugas, etc.); ademas, etileno es emitido por motores
que usan propano, diesel y gasolina, estos producen etileno en cantidades
suficientemente abundantes para producir daño a los mencionados productos
que son sensitivos al etileno, b) Ventile el lugar de almacenamiento, preferible
hacia la parte de afuera del deposito en una forma continua o regular para
limpiar el aire de etileno c) Remueva etileno con filtros de absorción de etileno.
Esta comprobado que esto reduce y mantiene bajo nivel de etileno. Si se
sospecha de daño de etileno, una manera rápida y fácil de detectar niveles de
etileno es con un sensor manual de tubos, esto indicara si los pasos arriba
mencionados tendrán que ser aplicados.

EL ETILENO ES EXPLOSIVO EN CONCENTRACIONES ALTAS.

Sin embargo, cuando usa los productos de Catalytic Generators como se
indica, alcanzar el nivel explosivo es imposible. El nivel explosivo es 200 veces
más grande que el que se encuentra en el cuarto de maduración. De hecho,
tomara de 20 a 30 generadores Easy Ripe en el mas alto nivel en un cuarto de
maduración de una carga para que alcance este nivel.
El etileno es usado para cambiar el color del citrus.
Este es un proceso natural que promueve el cambio de los pigmentos, la
perdida del color verde en la cascara removiendo la clorofila, lo cual permite
que el anaranjado o amarillo cubra completamente la cascara. No causa
perdida de sabor esto es simplemente la continuación del proceso natural de la
planta.

PREGUNTAS FRECUENTEMENTE HECHAS ACERCA DEL ETILENO

˜





  
  ˜

˜ ˜
 
  ˜  ˜


     

 

˜
 ˜ 

 
 
 


rCUÁL ES EL EFECTO DE ETILENO EN LA MADURACIÓN DE FRUTAS?

Etileno puede promover la maduración de los tomates, bananas, cítricos,
piñas, dátiles, peras, manzanas, melones, mangos, avocados, y papayas, una
indicación clara que la acción de etileno es general y extendida entre un
numero de frutas. Es claro que etileno es una hormona que hace posible la
maduración, una sustancia química producida por frutas con el especifico
fenómeno biológico de acelerar el proceso de maduración de fruta y
envejecimiento.

rES EL ETILENO UN COMPUESTO DAÑINO O TOXICO PARA LA SALUD

HUMANA?
No. En realidad, etileno fue usado históricamente como un importante
anestésico hasta que compuestos menos fácil de prenderse en fuego fueron
desarrollados. Etileno es un gas sin color con un olor dulce parecido al éter.
Como anestésico, fue usado en una concentración de 85% con 15% de
oxigeno. Etileno es un gas hidrocarburo y muy fácil de prenderse en fuego,
ademas explosivo en concentraciones sobre 3%. Recuerde, un anestésico para
humanos no toxico a concentraciones de 85% o más alto, sin embargo una
hormona que hace posible la maduración de fruta, el gas etileno es efectivo de
0.1 a 1 PPM. Una parte de etileno por millón partes de aire, esto es una taza
llena de etileno gas en 62,000 galones de aire, es suficiente para promover el
proceso de maduración de fruta.

rQUE ES LO QUE QUIERE DECIR PROMOVER EL PROCESO DE

MADURACIÓN?
Usando tomates como un ejemplo, la vida de un fruto de tomate comienza con
la fertilización de los ovulo de la flor. Después de la fertilización, la fruta
pequeña pasa por un corto periodo de división celular la cual es luego seguido
por un rápido periodo de crecimiento y estas células crecen. Durante la etapa
final de crecimiento y desarrollo, la fruta de tomate alcanza su tamaño
completo y esta ahora desarrollado, este periodo de crecimiento y desarrollo,
desde la fertilización hasta el desarrollo de la fruta, requiere de 45 a 55 días,
dependiendo en la cultivación y la temporada. Durante el periodo de
crecimiento y desarrollo, hay muchos cambios químicos y físicos que tienen un
impacto en la calidad de la fruta y manejo de la maduración después de ser
cosechada. La maduración es el paso final del proceso, cuando la fruta cambia
el color y desarrolla el sabor, textura y aroma que hace lo que nosotros
definimos como calidad optima de consumo. El agente biológico llamado
etileno el cual es producido naturalmente inicia este proceso de maduración
después que la fruta esta completamente desarrollada. Esta hormona de la
planta descrita y entendida mas de 40 años atrás. Mientras existen otros
factores envueltos en la estimulación del proceso de maduración usando
etileno, esto es esencialmente una hormona universal de maduración. Cuando
esta interna concentración de producción natural de etileno aumenta alrededor
de 0.1-1.0 PPM, el proceso de maduración es iniciado irreversiblemente. El
proceso puede ser brillante, pero no se puede dar marcha atrás una vez que se
empezó. Entonces, la clave es aplicar etileno externamente con la condición
que sea antes que la concentración interna natural alcance el nivel de 0.1-1.0
PPM, lo cual va a iniciar o promover este proceso natural prematuramente.

AUN ASÍ, rNO VIENE HA SER ESTO UN PROCESO ARTIFICIAL? No, el

etileno adicional aplicado externamente (el gaseo como frecuentemente se
refieren a este proceso) simplemente acelera el proceso normal de
maduración.

SIN EMBARGO EL USO DE ETILENO PERMITE AL NEGOCIANTE

ENGAÑAR AL CONSUMIDOR CON UN PRODUCTO INFERIOR.
Por ejemplo, la fruta de tomate no esta y no puede ser artificialmente
enrojecido por el etileno. El proceso normal de la maduración de tomate, el
cual incluye el cambio de pigmento- la perdida de la clorofila verde y
conversión a pigmentos rojos puede ser acelerado y dar resultados mas
rápidos si se aplica etileno externamente, pero este es un proceso normal.
Realmente se benefician algunos componentes de calidad nutritiva, como
vitamina C, ya que la fruta sera consumida a corto tiempo después que fue
cosechada debido al tratamiento de etileno, y por consiguiente, el nivel inicial
no tomara tanto tiempo. Etileno es usado comercialmente en solo algunas
cosechas, incluyendo bananas, cítrico (para remover el color verde), casi todos
lo melones, avocados, mangos, piñas, y tomates.

rCUALES SON LOS FACTORES QUE INFLUYEN EN LA BAJA CALIDAD DE

LOS TOMATES QUE VEMOS EN EL MERCADO?
Aunque muchos factores pueden ser listados, existen cuatro que juegan un
papel predominante para determinar la calidad de la fruta que es presentada al
cliente en las tiendas tales como variedad, desarrollo al tiempo de la cosecha,
temperatura en la cual fueron almacenada durante el envío y manejo, y daño
físico.

tilno

_
   
  






No
 (IUPAC) sisttico



Gn
al


 

  P0Q P0

 
 H
 


 
 0P2

Idntificado
s
 !_  QQ$2%8"QQ 

P
opidads físicas
  
  B 
!) 

 C 


   8&$K5IR5  
  
  0%#85

9
  "#*G&L"&G*0S '
9 



  "&G*2&L"#*$S '
F)   
 0%0GLS '
 P
opidads qíicas
!
:)L '  22
_



    



T
oqíica
TP#   5KM5

#
TP

 5KM5

_#

"  5MU
"UL" 
H

_C 



#S " '



  
*
/




tilnotno )
-
 )-  

: 


*
) 
-
) 




*_(

  

)
 *

trtr

, 
3 
) 




--



)
*
-


  (
""$V)/


"0#V )
  (


)0*

  tr] t   

, 





 

 
 
 



')
  
 

 



 '  3

 

*

)
)

: 
 
(
 *

F 
3) 

   
(
 
')    
I)
 
-
 
-



-

  

: *, 



*

!
 )
  

: -

)



')( 

  (

 
)    *

  tr]Ot  

, 

)
 



 ) 

  

   
) 
  
>/
 
 )

( > '*

F 
3) 
 
W
>-


/


!
(
*
  tr] 
 

,  ) 


)
 )  
 
)
*


)


:
 

politilno
 
 
 + 
 *F 
3
 






)  





)


: 

)




(
  
 *!-)( 
 
  )   

  
3
))


:  
)


*

_)
  ) ) 

 )
 



 


)  
 
  )











 
 3


/


' -
-

 
)



*







:  

 (
    
  


:  ) 

  (
 (  )





* 
 

9

9)


 
 

)
 
  (   

)
 )





 




 
)
 

 



)  
/



 
)
 
)


: *







 
3
  


/


))
 
)  


3



)  )
 
 
'
) *


 
) 


(
 



)
  
 



3



) *F 
3
)   3

))

(
-
))


(

))

*9/




 
 
(

 
)
 


  
-
 3
*




   

)
  
3)
 )  ) 

 

 *  

  
    

   )
 )) : 

 

)
 +

) *

Ot    t  
m


)
 

 

)`
echig


-)
' 


   


-


)
  

 )
 



*
 


: 
  )
  ) ) 
 

4) 
 

- ))  

 


   
  -

 0 '*_ (
/
 -

 

*
   

 

  
  +
  : 
 
 
 -

) 
): *
4r  t  
m


ÿ


ë re IUP=
Eti 

ÿrt r t  m



 

 )/3
*


 )






 
*9

 
 
  )  

  ) 
 ) 

    *

*

—
  t  
m


P
i
os sos (s. XX) ;

 <

!)

)



XX
 

 

)
 )



 

+: 


 
:)





  
 + *,
)   (   
3)
 
 




 

    
   
   3

   
)

+-

)
   ) 


 
 

 )
   6  
 )   
*


 




:  
-)  
 
)

/


3
)
 

    )
)  (  
2###V

  ) )  
 
 )  
  *, 




  
3 )

)



     )    
 

*_

   

 )  
  

(
    * 

)
a h c

  
  



)

)
     
  
)+ 
  

+ ( (
 

 )  *"

n la actalidad ;
 <


 




:  






*

 





 
  


: 
)
  
 

  
)  (  *###V '
: 
:
 

/
 
*


 

 -) ) 
 
) 



*P  

  

   ) 
) 
  

 

*P )
  :-
) 

 

  
3

*



 






 )   


3



3
  


.))' 
 ) 

 

*
Y 
3


: )


 









')  
)
-

 
 
(
'
)
  (
3
*

Actilno

_
   
  

st a
tíclo t
ata so
 n copsto qíico, y d
ía tn
na ficha con
los datos co

spondints*
9 
)    


(  )
*9  -


) 
 
Z
K
) ?W
*



actilnotino


-


* 
 


) 
-




 
*9  

 (  *###V 
 
)  )  
(   (  
 *

Ot    t  
m


)
 

 

)`
echig


-)
' 


   


-


)
  

 )
 



*
 


: 
  )
  ) ) 
 

4) 
 

- ))  

 


   
  -

 0 '*_ (
/
 -

 

*
   

 

  
  +
  : 
 
 
 -

) 
): *

4r  t  
m


ÿ


ë re IUP=
Eti 

ÿrt r t  m



 

 )/3
*


 )






 
*9

 
 
  )  

  ) 
 ) 

    *

*
—
  t  
m


P
i
os sos (s. XX) ;

 <

!)

)



XX
 

 

)
 )



 

+: 


 
:)





  
 + *,
)   (   
3)
 
 




 

    
   
   3

   
)

+-

)
   ) 


 
 

 )
   6  
 )   
*


 




:  
-)  
 
)

/


3
)
 

    )
)  (  
2###V

  ) )  
 
 )  
  *, 




  
3 )

)



     )    
 

*_

   

 )  
  

(
    * 

)
a h c

  
  



)

)
     
  
)+ 
  

+ ( (
 

 )  *"

n la actalidad ;
 <


 




:  






*

 





 
  


: 
)
  
 

  
)  (  *###V '
: 
:
 

/
 
*


 

 -) ) 
 
) 



*P  

  

   ) 
) 
  



*P )
  :-
) 

 

  
3

*



 






 )   


3



3
  


.))' 
 ) 

 

*
Y 
3


: )


 









')  
)
-

 
 
(
'
)
  (
3
*