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1º Grado en Medicina
Facultad de Medicina
Universidad de Sevilla
TEMA 3: TRANSCRIPCIÓN
ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN
4. TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS
5. TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
1. INTRODUCCIÓN
Las enzimas principales de este proceso son las ARN polimerasas, que van a sintetizar, a partir de una
cadena molde de ADN, una cadena de ARN complementaria.
• ARN de interferencia o microARN: tienen una importante función de regulación (ej: los ARNm se van
a estabilizar por la unión o no unión a estos micro ARN o de interferencia)
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Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
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BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECUALR HUMANA
BLOQUE I: Genética molecular
Carmen Sánchez & Gina tony
• Otros
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A partir de un determinado gen se va a transcribir una región determinada mucho mayor que el
ARNm maduro.
Esto es porque, en el transcrito primario encontramos tanto regiones codificantes (exones) como no
codificantes (intrones). Estos últimos serán eliminados previo al proceso de traducción, en el proceso
de maduración.
Una vez transcrito todo el gen, se va a añadir una caperuza en el extremo 5´del ARNm y en el extremo
3´se añade una cola poli(A) (secuencia de un número elevado de adeninas).
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En la imagen observamos una secuencia en rojo previo al gen, a esta se le denomina secuencia
promotora y va a ser esencial para el inicio del a transcripción.
La secuencia de ARN sintetizada va a ser idéntica a la hebra de ADN que NO hace de molde, va a
tener la misma información (a excepción de que, donde aparece una T en la cadena de ADN, en el ARN
aparecerá U) y sabemos que, a partir de esta secuencia, dependiendo de los tripletes del ARN se va a
codificar una proteína u otra. Es por esto por lo que dicha hebra de ADN se denomina codificante,
informativa, positiva o con sentido y a la que actúa de molde se le denomina no informativa, no
codificante, antisentido o negativa.
Un gen no es una proteína, es la unidad elemental de la herencia que codifica para un producto génico
funcional (proteína o ARN)
3.3. Transcripción
La enzima que va a sintetizar la molécula de ARN es la ARN polimerasa, que va a unirse a una parte
específica de la cadena molde de ADN (en esa región, en concreto, va a existir una burbuja de
transcripción) y va a ir añadiendo las bases nitrogenadas complementarias y respectivas.
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o Van a estar formadas por 4-5 subunidades que siempre van a conformar un núcleo fijo
(enzima mínimo o núcleo) y una subunidad que se va a encontrar temporalmente unido a la
enzima que va a ser el factor sigma (reconocimiento de secuencias de inicio de transcripción)
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o Son más complejas. Además, por sí mismas no son capaces de iniciar el proceso de
transcripción, van a necesitar una serie de factores de transcripción iniciales que van a ayudar
a la polimerasa a recocer el lugar de inicio y van a transformarla (van a necesitar una
fosforilación final) para iniciar el proceso.
Ya hemos referido que un solo ARN polimerasa va a transcribir todos los ARN para la bacteria y
que va a estar formada por distintas subunidades:
o El núcleo del enzima está formado por 2 subunidades alfa, que van a estar implicadas en la
iniciación de la transcripción y la interacción con proteínas reguladoras y promotores
o La subunidad sigma o factor sigma se va a unir al enzima solo para el reconocimiento del
promotor, una vez comenzado el proceso se libera
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4. TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS
• INICIACIÓN
• ELONGACIÓN
• TERMINACIÓN
4.1. Iniciación
• Región -10 (Caja Pribnow): Región con un alto contenido en A y T (por lo tanto, es más fácil de
desnaturalizar). La secuencia consenso sería: (5’) TATAAT (3’).
• Región -35: Región cuya secuencia de consenso sería: (5’) TTGACA (3’).
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4.2. Elongación
La polimerización de la nueva cadena de ARN se realiza en sentido 5’-3’.
Aunque la ARN polimerasa cataliza por si sola todo el proceso, durante esta fase actúan las topoisomerasas,
que se encargan de deshacer el superenrollamiento creado por delante de la burbuja de transcripción y,
también, de recuperar el superenrollamiento del ADN por detrás de la burbuja de replicación. Según se va
sintetizando el ADN se va separando de la cadena molde.
4.3. Terminación
La Transcripción finaliza cuando la ARN polimerasa se topa con ciertas
secuencias específicas del ADN que señalizan el final del proceso. Entonces,
se produce una pausa de la síntesis del mismo ARN y debe empezar de nuevo.
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5. TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
Necesitamos una regulación positiva y para
que se una la ARN polimerasa a su promotor,
vamos a necesitar factores generales (TFIIX),
factores específicos y factores inducibles.
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Eucariotas:
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Esta caperuza se forma por condensación de una molécula de GTP con el trifosfato del extremo 5’ del
transcrito:
Metilación
Después, una polimerasa de ADN, la poliadenilato polimerasa, a partir del extremo OH libre, va añadiendo
adeninas. Hay que destacar que esta polimerasa tiene una característica muy importante y es que no necesita
molde, porque es específica de adeninas.
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El mRNA maduro va a tener un tamaño menor que el trascrito inicial porque los intrones van a ser eliminados.
Dependiendo del tipo de transcrito, (si es mRNA, rRNA, tRNA, RNA mitocondrial…) va a tener un mecanismo
distinto para eliminar los intrones. Concretamente, ocupamos 4 grandes grupos:
Decimos que existen intrones del tipo I, II, III o IV y dependiendo del tipo que sean, van a tener un mecanismo
u otro de eliminación
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Un nucleótido de guanina realiza un ataque nucleofílico sobre el enlace fosfodiéster que hay
entre extremo 3´del exón y el 5´del intrón. (1)
Lo que realmente hace la guanina es competir por el enlace fosfodiéster que existe entre el
uracilo y la adenina, lo rompe y establece un enlace con la adenina del extremo 5´del intrón,
así se libera el extremo 3´ del exón. (2)
En los extremos 3´del primer exón y 5´del exón siguiente también tenemos uracilo.
Si nos fijamos bien, en este tipo de intrones existe una secuencia CAA, pues es el grupo OH
del carbono 2`de una de las adeninas la que va a actuar como un nucleófilo atacando el
enlace que hay entre el extremo 3´del exón y el 5´del intrón (4).
Se forma una especie de globito en el intrón (5). A partir de aquí ocurre lo mismo que la
eliminación tipo I, tenemos un uracilo con un grupo OH libre en su extremo 3´que actúa como
nucleófilo atacando al enlace que tiene a continuación entre el extremo 3´del intrón y 5´del
siguiente exón.
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Estos centros de ayuste se encuentran en el extremo 5´del intrón, cercano al extremo 3´ (a unos 20-
40 nucleótidos de distancia) y otro en el extremo 3´del intrón.
Si nos fijamos en la diapositiva, vemos que en cada centro de ayuste hay 2, 1 y 2 nucleótidos en rojo
respectivamente, esto es porque son esenciales, si se producen mutaciones en estos nucleótidos el
splicing no se va a dar correctamente, nunca cambian. Los morados pueden cambiar algo, pero la
secuencia consenso es la que se muestra y suelen estar bastante conservados.
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Sabemos que los intrones son muy variables en cuanto a su secuencia de nucleótidos. Pueden
acumular gran número de mutaciones porque, al no se codificantes, van a pasar desapercibidas. Pero,
el intrón tiene determinadas regiones que han de tener una secuencia concreta, muy conservada,
porque esa zona va a tener ser reconocida por una ribonucleoproteína que se va a encargar de su
splicing, por lo que, si algún tipo de mutación se encuentra en ese lugar en concreto, el splicing de
dicho intrón no va a poder realizarse de forma correcta.
Las ribonucleoproteínas reciben el nombre de U1, U2, U4, U5 y U6 (no existe U3). Su región de ARN
es complementaria a los centros de ayuste, así interaccionan con estos.
Lo que ocurre es que el primer reconocimiento se va a dar por las ribonucleopoteínas U1 y U2, que
van a reconocer el extremo 5´del intrón y la región que hemos dicho cercana al extremo 3´del intrón,
respectivamente.
A continuación, estas 2 ribonucleoproteínas van a interaccionar formando una especie de lazo (ver en
la diapositiva) y reclutando el resto de ribonucleoproteínas para que se de el corte y empalme.
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FASE A FASE:
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Finalmente, una ligasa va a unir el extremo 3´desfosforilado de un exón con el extremo 5´fosforilado
del otro exón (la ligasa confiere otro fosfato, por lo que se hidroliza otra molécula de ATP, que
posteriormente va a ser eliminado en forma de pirofosfato cuando se produzca el enlace fosfodiéster).
En algunos casos podemos encontrar que, a partir de un único trascrito incial, obtenemos productos
génicos diferentes.
Esto puede ocurrir porque existe una eliminación alternativa de intrones, porque existen distintos
sitios de poli adenilización o por ambas cosas.
Imagen de la derecha: también podemos encontrarnos con que, determinados fragmentos van a ser
eliminados dependiendo del tipo celular, ya que en algunos tipos va a ser no codificante pero en otros
sí va a ser codificante.
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Ej. Si estamos en el músculo liso, se va a considerar como condificante las partes 1,2,3 y
5 (isoforma alfa de la troponina T).
En otros tejidos, se va a considerar como región codificante las partes 1,2,4 y 5 (isoforma
beta de la troponina T)
La diferencia es que, vamos a tener tanto splicing alternativo como sitio de poli
adenilización diferentes.
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En el caso del tiroides, se utiliza el primer sitio de Poli A, por lo que los exones 5 y 6
quedan totalmente eliminados, porque la endonucleasa ha cortado a partir del exón 4 y
ha añadido en el extremo la cola de poli A.
En el cerebro se usa el segundo sitio de Poli A, por lo que incluimos todo el transcrito, y,
además, el trascrito final maduro va tener los exones 1, 2, 3, 5 y 6 (el 4, que era
considerado como exón en el caso de tiroides, aquí se considera un intrón).
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