PRÁCTICA : PREPARACIÓN designados para aislar un desean aislar.

La mayor parte de contiene el medio de de petróleo, como en la

DE MEDIO DE CULTIVO organismo específico. Los los microorganismos requieren cultivo. Los biosurfactantes son incorporación en la
Los medios de cultivo se utilizan agares verde brillante y sulfito un medio enriquecido o  Esparcir todo el líquido en compuestos producidos por formulaciones de aceites (4).
para una variedad de propósitos de bismuto se designan para suplementado por substancias toda la placa. microorganismos y presentan Entre otras aplicaciones
en el laboratorio. Se utilizan para aislar específicamente especies como sangre, suero, vitaminas,  Si hay exceso de líquido se una alta actividad de superficie y relacionadas con la industria del
propagar bacterias, hongos, de Salmonella de las heces, etc. saca por un costado con propiedades emulsificantes, petróleo están los procesos de
virus y en algunos casos, mientras que los medios de Los medios líquidos se pueden una torunda de algodón además de tener baja toxicidad y biorremediación y dispersión de
parásitos animales. Campylobacter tienen una transformar en sólidos, mediante  Flamear los bordes de la ser biodegradables. Estas derrames petroleros, tanto a
serie de antibióticos que la adición de agar. Esto significa placa propiedades los hacen útiles en nivel del suelo como de las
I. Requerimiento impiden el crecimiento de la que conservan la misma fórmula  Rotular y envolver en papel varios procesos biotecnológicos, aguas, la remoción y
Nutricionales de los mayoría de la flora fecal. nutritiva crac entre los cuales están su movilización de petróleo pegado
Microorganismos: Las bacterias se cultivan en el aplicación en la biorremediación en el interior de los tanques y
III. PROCEDIMIETO laboratorio en materiales d). actividades de ambientes contaminados. En también en la recuperación
Los microorganismos varían en Medio agar sabouraud nutritivos denominados medios Esquematizar este trabajo se estudió la mejorada de petróleo (5-7). Un
sus requerimientos de de cultivo, cuyos componentes Siembra en cuadrícula: producción de biosurfactantes segundo e importante mercado
crecimiento, pero todos El agar Sabouraud es un tipo de son muy variados. La elección El objetivo de esta técnica es por cepas pertenecientes al de los biosurfactantes se
requieren fuentes de nitrógeno, medio de cultivo selectivo que del medio se basa en el propósito hacer recuento de unidades grupo de Pseudomonas encuentra en la polimerización y
carbono y sales minerales. contiene peptonas.1 Es utilizado del estudio. formadoras de colonias (UFC) fluorescentes aisladas de emulsión de pinturas. También
para el cultivo de hongos, El material que se inocula en el 1. Obtener la muestra con asa muestras de emulsiones de se describen otro uso de los
 Fuentes de Carbono: Son las especialmente dermatofitos, medio se denomina inóculo. El calibrada o pipeta automática petróleo pesado. Los surfactantes en la formulación de
principales fuentes de energía, aunque también pueden aislamiento de las especies que dispense una cantidad biosurfactantes fueron asfaltos, cementos, textiles y
son los azucares como los desarrollarse en él cierto tipo de bacterianas, es decir la exacta y distribuirla con el asa en detectados mediante el registro manufacturación de fibras,
monosacáridos y disacáridos bacterias filamentosas tales como separación de unas especies de línea recta por todo el centro de la disminución de la tensión adicionalmente en tratamientos
(glucosa, lactosa, sacarosa), Nocardia. otras, se logra mediante 2. Hacer estrías de extremo a superficial de los cultivos y de metales, minería, tratamientos
tambien se puede usar diferentes técnicas. Por ejemplo, extremo en sentido contrario a la también mediante sus de agua y como preservativos de
polisacáridos como el  Composición típica por el método de “siembra por línea de inóculo capacidades hemolíticas y madera (8). Pueden ser usados
almidón. Contiene normalmente: estría cruzada en placa”, las 3. Girar la placa y hacer estrías emulsionantes. Su en la industria de los alimentos,
 40 g/L glucosa células quedan separadas de extremo a extremo, en sentido caracterización se realizó los cosméticos y como productos
 Fuentes de nitrógeno: Menos  10 g/L pluripeptona individualmente, al inocular (al contrario a las anteriores mediante la determinación de de limpieza. En la agricultura
energéticos que las de  15 g/L agar sembrar) un medio sólido con azucares y de proteínas, así como diluyentes y dispersantes
carbono, además de participar  0,05 g/L [cloranfenicol] agar, contenido en cajas de Petri; como también mediante de fertilizantes y pesticidas (3),
en el metabolismo energético,  pH 5.6 en esta técnica, durante la espectroscopia de infrarrojo IRTF así como en el mejoramiento de
sirven para la formación de incubación, las células e). cuestionario y espectroscopia de RMN. Los la penetración de compuestos
proteínas. Algunos  Materiales: microbianas individuales al 1. ¿Qué es una cepa? mejores sustratos para el activos dentro de las plantas,
organismos pueden utilizar reproducirse rápidamente, en 18 Una variante fenotípica de una crecimiento de las cepas y para todas estas aplicaciones
un medio químicamente - Medios de cultivo - a 24 horas producen masas especie o, incluso, de un taxón la producción de los dependen del tipo de función
simplificado tales como Tapón para matraz visibles a simple vista, inferior, usualmente propagada biosurfactantes resultaron ser los que presente el compuesto (9).
amonio o nitrato, mientras - Probeta de 100ml - denominadas colonias. clonalmente, debido al interés en aceites vegetales estudiados en En este trabajo se reporta la
que otros pueden fijar Papel crack b). descripción la conservación de sus este trabajo. Los resultados producción de biosurfactantes
nitrógeno libre. - Matraz de 250ml - cualidades definitorias. De una obtenidos permiten concluir que por especies del grupo de
Pabilo manera más básica puede estos compuesto son glicolípidos Pseudomonas fluorescentes,
 Sales minerales: Como el - Mecheros - Estría cruzada definirse como un conjunto de que tienen, entre otras, la también se realiza la
sodio, potasio, magnesio, Agua destilada especies bacterianas que características de formar caracterización química de esos
azufre y fosforo. A - Bagueta comparten, al menos, una rápidamente emulsiones acuosas compuestos.
concentración más baja esterilización de la característica. de petróleo pesado, disminuyen Materiales y Métodos
(elementos traza): zinc,  Preparación: asa la tensión superficial entre 28,51 Microorganismos
magnesio, cobre, etc.  6,5gr ----------- Siembra en placas: 2. ¿Cómo es el asa de digarsky y y 30,5 dinas/cm y forman Se utilizaron 4 cepas aisladas de
100ml. Siembra por agotamiento para qué sirve? emulsiones estables de parafina muestras de emulsiones de
 Factores de crecimiento:  Prerar placas petri y tubos Siembra por estría por La espátula de Drigalski puede líquida en agua durante varios crudo pesado venezolano
Algunos aminoácidos como de cultivo asepticos. agotamiento: Con éste ser metálica o de vidrio fusible. meses a temperatura ambiente. procedentes del Laboratorio de
la cisteína, o iones en forma o  Pesar 6,5 gr de agar procedimiento se puede Al igual que la aguja y el asa, Por medio de los resultados de Biotecnología de
presentes en la sangre, suero, sabouraud. conseguir una buena separación cuando son metálicas, consisten los análisis de espectroscopia Microorganismo “Sixto David
extracto de levadura, etc. de las colonias y aislarlas en un alambre de platino o de IRTF y RMN se establecieron las Rojo” de la Universidad de Los
 Disolver el agar en 100ml fácilmente. Para ello se funde el nicrón, insertado a un cabo estructuras químicas de los Andes. Estas fueron
 Factores inhibidores: Como de agua destilada. medio de cultivo, se vuelca en metálico, pero con la biosurfactantes producidos por identificadas y designadas en
los antibióticos, tales como caja de Petri y se deja solidificar. particularidad de que el extremo la cepa de P. aeruginosa BIOMI trabajos anteriores (10,11)
cloranfenicol, vancomisina,  Agitar y calentar hasta en Con el asa previamente terminal tiene la forma de un E5, los cuales resultaron ser como: Pseudomonas putida BIOMI
neomisina, colorantes de baño de agua hirviedo. esterilizada se toma material de triángulo. Se esteriliza a la llama rhamnolípidos. E1, P. aeruginosaBIOMI E3, P.
anilina (verde brillante,  Luego que enfriw un cultivo heterogéneo y se del mechero de igual manera Introducción putida BIOMI E4 y P.
eosina), metales pesados ligeramente, sumergir una descarga sobre la superficie del que la aguja y el asa. Los biosurfactantes son aeruginosa BIOMI E5. Las
(bismuto, etc.) tira de ph para comprovar medio formando estrías. Esto Las de vidrio fusible, consisten moléculas producidas por bacterias fueron conservadas a
que el ph este en 6,8 +- 0,2. puede realizarse de varias en un tubo fino de varios mm de microorganismos y presentan 20°C en cuñas de agar nutritivo.
II. Tipos de medios formas: diámetro por unos 12cm de una alta actividad de superficie y Preparación de los inóculos
de cultivo:  Autoclavar a 121°C durante a- Al comienzo se coloca el largo, el cual está doblado por propiedades emulsificantes, Las bacterias se cultivaron en
15 minutos. inoculo, luego se continúa con uno de sus extremos en forma de generalmente son metabolitos caldo nutritivo previamente
 Medios enriquecidos, las estrías. Cuando se quiere un triángulo equilátero, que secundarios excretados por los esterilizado por autoclave e
incluyen agar sangre, agar PRÁCTICA: SIEMBRA, obtener colonias muy separadas mide unos 2 cm por cada uno de microorganismos, su principal incubadas a 30°C durante 24
chocolate enriquecido y RECUENTO Y AISLAMIENTO se puede utilizar dos o tres sus lados. Para su esterilización papel fisiológico es el de permitir horas. Para las suspensiones
varios medios basados en DE BACTERIAS placas de Petri, para lo cual se la parte triangular de la espátula crecer a los microorganismos en celulares y la producción de los
infusiones, que luego son a). introducción repite la operación sin tomar con se introduce en un recipiente que sustratos inmiscibles en agua biosurfactantes se utilizó el
enriquecidos con aditivos. El crecimiento de los el asa nuevo material. contenga alcohol y de inmediato mediante la reducción de la medio mínimo salino de Davis
microorganismos no se puede b- Se puede dividir la placa de se aproxima a la llama par que se tensión superficial de la interfase (12) Este medio fue modificado
 Medios diferenciales, estudiar individualmente debido Petri en cuatro cuadrantes; una encienda y flamee el triángulo de (1). Pueden ser clasificados ya que se utilizó CuCl2 en vez de
incluyen los agares Mac a su tamaño tan pequeño, por lo vez depositado el material en el la espátula. Cuando la llama se principalmente por su CuSO4, tampoco agregamos
Conkey y azul de metileno que es necesario recurrir a primero, siguiendo el sentido de apague, se debe esperar unos composición química, por NiCL2 como lo señala el autor.
eosina, los cuales contienen medios nutritivos artificiales, las agujas del reloj, se hace una segundos para que se enfríe y en consiguiente la mayor clase de La fórmula del medio por cada
colorantes, azúcares e donde se puedan desarrollar estría luego en el segundo, esas condiciones utilizarlas en la biosurfactantes comprenden a litro de agua destilada es la
indicadores que denotan rápidamente y producir grandes tercero y cuarto cuadrante sin realización de la siembra. los glicolípidos, lipopéptidos y siguiente: fosfato de potasio
respuestas bioquímicas poblaciones. En estas cargar nuevamente el asa; en el 3. ¿Para Qué se emplea el agar lipoproteínas, fosfolípidos y dibásico 5,23 g/L, fosfato de
características (usualmente condiciones se pueden último cuadrante aparecerán las SIM? ácidos grasos, surfactantes potasio monobásico 1,91 g/L,
color) y se utilizan para manipular y efectuar las colonias aisladas  Es un medio semisólido poliméricos y partículas de sulfato de magnesio 0,09 g/L y
grupos diferenciales de investigaciones deseadas. c- El inóculo se extiende sobre destinado a verificar la surfactantes (2). sulfato de amonio 1g/L así como
organismos, tales como Los materiales nutritivos donde una pequeña zona de la placa, movilidad, producción de La enorme demanda del 1mL/L de solución de trazas de
fermentadores de lactosa se desarrollan y multiplican los próxima al borde, se esteriliza el indol y de sulfuro de mercado de los surfactantes ha elementos (Cloruro de cobalto 20
de los no fermentadores, o microorganismos contienen los asa y se traza otra estría a partir hidrógeno en un mismo provocado un incremento en la mg/L, ácido bórico 30 mg/L,
para inhibir el crecimiento nutrientes necesarios para su del depósito y así sucesivamente. tubo. preparación por síntesis de sulfato de cinc 10 mg/L, sulfato
de organismos crecimiento, y se denominan Medio de cultivo: solido en placa numerosos surfactantes de cobre 1 mg/L, molibdato de
 Es útil para diferenciar
Grampositivos. medios de cultivo, cuyos de Petri químicos, principalmente con sodio 3 mg/L, sulfato de hierro
miembros de la familia
componentes son muy variados. Instrumento. Asa aplicación de la industria 10 mg/Ly sulfato de magnesio
Enterobacteriaceae.
 Medios selectivos, en La elección del medio se basa en Finalidad. Obtener colonias petrolera. Ahora bien, los 2,6 mg/L). El pH del medio fue
4. ¿Cómo se interpreta los
adición a componentes de el propósito del estudio. aisladas rápidos avances en la ajustado a 7,3. Las células
reultados de un cultivo?
los diferenciales, tienen Los medios de cultivo pueden biotecnología e incremento de la obtenidas, previa centrifugación
agentes que inhiben la ser sintéticos, es decir de necesidad del consumidor de a 5.181 x g durante 15 minutos a
composición química conocida, o c) procedimiento proteger el medio ambiente, partir de los caldos nutritivos,
mayoría de entero- CARACTERIZACIÓN DE
pueden ser complejos, en los Sangre por dilución provee un buen futuro para fueron lavadas dos veces con el
bacteriácea e incluso para BIOSURFACTANTES
cuales por lo menos hay un  Reactar las cepas en agua considerar seriamente a los mismo medio salino,
seleccionar algunas cepas PRODUCIDOS POR
componente de composición estéril surfactantes biológicos como recuperándose en cada caso
resistentes a altas PSEUDOMONAS
concentraciones de algunos desconocida.  Flamear las cepas posibles alternativas para la mediante centrifugaciones. Estas
FLUORESCENTES AISLADAS
componentes selectivos. En general, los medios son ricos  Agregar la cepa a 300 DE EMULSIONES DE producción de éstos (3). se dejaron carenciando por un
en proteínas no específicas, con microlitos (3veces) PETRÓLEO PESADO Los biosurfactantes tienen día en 5 mL de medio salino sin
 Medios de un propósito, son el fin de estimular el crecimiento  Vaciar las cepas ya variadas aplicaciones en el fuente de carbono,
altamente selectivos y de los microorganismos que se reactadas en la placa que Resumen mercado, tanto en la producción
constituyendo los inóculos para
las pruebas posteriores.
Selección de las cepas
productoras de biosurfactantes
y sustratos que inducen su
producción
Se inocularon los medios con
0,2% v/v de las suspensiones
celulares obtenidas
anteriormente en el medio
mínimo salino. La fuente de
carbono utilizadas incluyen:
Glicerol, parafina líquida,
glucosa, melaza, vinaza, sacarosa
y aceites vegetales de maíz,
ajonjolí, resino y otras mezclas
comerciales (Coposa), estos
sustratos se agregaron a una
concentración de 1% y 10 % v/v.
Los cultivos se incubaron a 30°C
± 2 sujeto a agitación constante,
en un agitador rotatorio a 156
r.p.m. Transcurridos 3 días, los
cultivos se centrifugaron a 5.181
x g durante 15 min. Se determinó
la tensión superficial de cada
sobrenadante con respecto a su
control, con la ayuda del
tensiómetro de superficie Fisher
Modelo 20.
Como controles se dispusieron
medios con su respectiva fuente
de carbono sin inocular, esto en
el caso de las fuentes de carbono
solubles en agua. Para el caso de
las fuentes de carbono no
solubles en agua se utilizó como
control solamente el medio
salino sin inocular, ya que
previamente habíamos
determinado que la presencia de
estos sustratos hidrófobos no
influyen en las medidas. Se
registró en todos los casos la
aparición de espuma estable en
los cultivos. Denominamos
espuma estable a aquella que
permanece luego de la agitación.
Este criterio fue tomado en
cuenta para la selección de los
productores de biosurfactante.
Otro criterio considerado fue la
capacidad hemolítica de cada
una de las cepas bacterianas.
Para lo cual se realizó la pruebas
clásica de capacidad hemolítica
en placas de agar sangre. Las
mismas fueron incubadas a 30 ±
2°C durante 2 días; al cabo de
este tiempo se verificó la
presencia de halos alrededor de
las colonias.
Producción de biosurfactantes a
partir de glicerol
Se prepararon cultivos en
matraces de 1 L que contenían
300 mL del medio mínimo salino
con glicerol como fuente de
carbono a una concentración del
1% v/v. Se cultivaron durante
tres días a 30°C ± 2 y bajo
agitación constante.
En todos los cultivos la biomasa
fue eliminada por
centrifugación, previa
esterilización, a 30.100 x g
durante 15 min, a 4°C lo cual
permitió eliminar
completamente los restos
celulares facilitando la obtención
de biosurfactantes más puros.
Antes de guardar los
sobrenadantes bajo congelación a
–20°C, se hizo un registro, de la
tensión superficial y la
formación de espuma obtenida
mediante los procedimientos
señalados anteriormente.
Extracción y concentración de
los biosurfactantes
Los biosurfactantes fueron
extraídos con acetato de etilo,
con un volumen de 1,5 del
sobrenadante en un embudo de
separación de 1 L, previa
acidificación del medio hasta un
valor de pH igual a 2 con HCL
1N (12). Luego de la
concentración de las muestras de
biosurfactantes en el rotavapor,
un alícuota de cada una fue
pesada, debido a su alta
viscosidad, para luego ser bacteriano. Las bacterias suelen aparición de la ecología de visualización la de y se lava enseguida con agua
disuelto en una solución de adoptar fundamentalmente alguna de bacteria. microorganismos. abundante.
bicarbonato de sodio 0,1M; se las formas siguientes: esférica,  Los Se observarán preparaciones
Elementos 7. Se cubre la preparación con
ajustó la concentración hasta un cilíndrica, helicoidal, filamentosa o Obligados son la membrana bacterianas bajo la coloración de un colorante de contraste, como
valor del 1% p/v. Otra alícuota formas intermedias de los casos plasmática, la pared, el citoplasma, gran que permitan establecer la safranina, durante un minuto.
fue conservada bajo anteriores. los ribosomas y el cromosoma diferencias morfológicas y 8. Se lava con agua y se seca
congelamiento a –20°C, para  Cuando la bacteria tiene forma bacteriano. estructurales entre y dentro de al aire, observándose a
análisis espectroscópicos IRTF y esférica recibe el nombre de coco  Los los microorganismos.
Elementos continuación con el objetivo de
posterior elucidación de la y a su forma se la denomina Facultativos son las inclusiones Material: inmersión.
estructura mediante RMN. El cocoidea. En los cocos aislados citoplasmáticas (gránulos de Portaobjetos. 3º) Observación de las tinciones
control, medio salino, sin su esfericidad puede oscilar reserva y vacuolas), flagelos, pilis o Mechero Bunsen. de bacterias al microscopio.
inocular y con glicerol como entre formas esferoides, ovoides, fimbrias y cápsulas.  Asa de siembra. Las bacterias Gram-positivas
sustrato, recibió el mismo lanceoladas y reniformes.  Tubos con cultivos de presentarán una coloración
tratamiento que las muestras.  Cuando la bacteria adopta forma COLORACION bacterias Gram-positivas y violeta mientras que las Gram-
Detección de los biosurfactantes cilíndrica recibe el nombre de Cuando se requiere conocer los Gram-negativas. negativas la presentarán roja o
mediante cromatografía de capa bacilo y a su forma se la detalles morfológicos de las  Cubetas de tinción o similar. rosa. La identificación de las
fina (TLC) denomina bacilar. Las formas bacterias es necesario recurrir  a Colorantes para las bacterias Gram-positivas puede
Se realizó sobre laminas para alargadas de los bacilos aislados técnicas de coloración. Los tinciones: Cristal violeta, ser problemática, solamente
capa fina preparativas pueden ser rectas, ahusadas, colorantes empleados pueden ser Lugol, Alcohol-Acetona (1:1) cuando las bacterias Gram-
elaboradas con Silicagel 60 ramificadas, curvas y espirales. naturales o sintéticos. Entre los y Safranina. positivas se encuentran en
F254 de 0,25 mm de espesor con  Cuando adoptan formasnaturales suele utilizarse el carmín crecimiento exponencial
Método:
indicador de fluorescencia filamentosas suelen presentar al y la hemotalilina pero son más (cultivos jóvenes) la reacción es
1º) Realización del frotis y la
(Merck). Las soluciones de los microscopio óptico un aspecto utilizados los sintéticos, en fijación su clara; en fase estacionaria
de los diferentes cultivos
biosurfactantes con bicarbonato muy similar al de los hongos. mayoría derivados de la anilina. (cultivos viejos) las bacterias
de bacterias Se procederá tal y
de sodio y las muestras controles Estas formas son características Las coloraciones pueden ser Gram-positivas pueden parecer
como se ha descrito
provenientes se agregaron con de las bacterias llamadas directas (contacto de la suspensión Gram-negativas.
anteriormente.
pipetas pasteur. Se desarrollaron filamentosas. bacteriana con el colorante) 2º) o Tinción: Conclusión:
sobre la placa con el sistema de indirecto (utilización de TINCIÓN DE GRAM es la El tamaño de las bacterias
La
solventes metanol-cloroformo en AGRUPACIONES mordiente). dificulta su visión al
tinción diferencial más utilizada
una proporción de 1,3 A las agrupaciones bacterianas las Así, las bacterias Gram positivas microscopio, por eso la tinción
en Bacteriología pues permite
volúmenes de metanol y 7 vamos a clasificar en dos grandes aparecen teñidas de violeta y las de estas en la microbiología es
separar las bacterias en dos
volúmenes de cloroformo. El grupos: las agrupaciones Gram negativos se tiñen de rosado. un apartado sumamente
grandes grupos, las Gram-
revelado de las placas se realizó microscópicas y las agrupaciones trascendente. La técnica de
positivas y las Gram-negativas.
con luz UV mediante una macroscópicas. BACTERIA CUPRIAVIDUS tinción tiene como finalidad
La tinción de Gram requiere
lámpara mineral Light UV lejano Agrupaciones microscópicas: Cupriavidus metallidurans es el crear un contraste entre la célula
cuatro soluciones:
y cercano del tipo UVSL-25, y Si la forma de una bacteria aislada nombre de una bacteria que y el medio que la rodea, y una de
1. Primer colorante. Es un
posteriormente con una mezcla depende de la rigidez de su pared presenta una sorprendente las más importantes, tanto por su
colorante básico que en contacto
reveladora conteniendo 70% de celular, la agrupación depende capacidadde biomineralizadora. Es aplicación clínica para hacer una
con las células cargadas
ácido sulfúrico, 20% de ácido cómo se lleva a cabo la fisión capaz de precipitar oro en forma identificación preliminar de la
negativamente, reacciona con
acético y 10% agua. binaria de la célula y que las células mineral. bacteria causal de la infección y
ellas coloreándolas. El más
descendientes queden unidas o no. por su practicidad, es la tinción
utilizado es el cristal violeta.
PRÁCTICA: Son visualizables por microscopíaHace y varios años un grupo de Gram. Es por eso que esta
2. Solución mordiente. Fija las
CARACTERIZACION CULTURAL corresponde a lo que realmente investigador se australiano aisló técnica se vuelve fundamental en
tinciones y aumenta la afinidad
CEPA N°13 entiende por agrupación dicha bacteria de la superficie de el estudio de la microbiología, y
entre el colorante y las células.
bacteriana, es decir, la tendencia pepitas de oro. Lo que les llamó el conocimiento de su correcta
Los mordientes empleados
OBJETIVOS que presentan los distintos tipos la atención es que dicho realización es prácticamente
suelen ser sales metálicas, ácidos
 Utilizar técnicas para reconocer bacterianos para asociar las células microorganismo podía aislarse obligatorio para todo aquel que
o bases, como, por ejemplo, una
el tipo de cultivo del mismo tipo entre sí formando en explotaciones auríferas que se encuentra en el aprendizaje
solución diluida de yodo.
 Caracterizar bacterias por grupos de 2 o más bacterias. estaban alejadas entre sí por más las ciencias médicas. El estudio
3. Agente decolorante. Es un
sus colonias Agrupaciones macroscópicas: de 3.500 kilómetros. Sin embargo disolvente orgánico, por de la literatura acerca de la
 Aislar bacterias por Estas agrupaciones no se comprendía muy bien el
son tinción de Gram nos permite
ejemplo, alcohol- acetona (1:1).
siembra en estrías visualizadas a simple vista porqué y dicha bacteria colonizaba 4. Colorante de contraste. Es un tener un preámbulo para poder
corresponden al crecimiento en un tan preciado metal. Ahora el diferenciar frente al microscopio
colorante básico de distinto color
EL TAMAÑO, FORMA Y TIPOS DE punto de una única línea celular misterio parece haber sido los diferentes tipos de
que el primer colorante, como,
AGRUPACIONES BACTERIANAS hasta formar una colonia (todas las resuelto. microorganismos. Sin embargo,
por ejemplo, la safranina. Los
Entre las principales características de células que componen la colonia no hay que pasar por alto que es
dos grupos bacterianos a los que
las bacterias se encuentran su tamaño, provienen de una única célula). Los El iones metálicos son unos de suma importancia tener un
anteriormente nos referíamos
forma, estructura y tipo de cultivo se realiza en un medio tóxicos de muy potentes porque completo estudio previo de los
difieren en el color con el que
agrupación. Todas estas características cultivo sólido para formar colonias suelen actuar como inhibidores organismos y su reacción a la
finalmente aparecen. Las
van a constituir la morfología propia que serán distintas y características enzimáticos. Además, los iones tinción para poder dar una
bacterias Gram positivas se
de las células bacterianas. Dicha para cada tipo bacteriano; el medio metálicos son solubles en agua. respuesta certera ante el
teñirán de azul por el cristal
observación como se verá en las sólido impide el Esa es la razón de que se
posible cuestionamiento de la naturaleza
violeta y no perderán esta
siguientes unidades de trabajo puede movimiento de los individuos defumigue la con sulfato de cobre a de un microorganismo.
coloración durante los pasos
llevarse a cabo mediante exámenes colonia y favorece las
su viñas, o de que se utilice Actividad lipolitica
sucesivos. Las bacterias Gram
directos en fresco o por medio de agrupamiento. Para cromo
obtener como agente EFECTO DEL pH y LA
negativas perderán la coloración
tinciones más o menos específicas colonias bacterianas nunca anticorrosivo. se Pero muchos TEMPERATURA SOBRE LA
inicial del cristal violeta en los
según los casos. empleará directamente un medio microorganismos son capaces de siguientes pasos y se teñirán de ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA
Existen también algunas especies de de cultivo líquido. resistir la acción de dichos iones Y LIPOLÍTICA DE
rosa debido a la safranina. La
bacterias que presentan otrasTRANSPARENCIA deY una forma muy simple. BACTERIAS AISLADAS A
diferencia está determinada por
características además de las ya COLORACIÓN. Reducen el ion y de esa forma el PARTIR DE AGUAS
la composición de su envoltura
mencionadas y que pueden ser En general es frecuente algún tipo metal pasa a tener carga neutra, RESIDUALES DE LAS
celular. Las bacterias gram
detectadas a través de técnicas de color en las colonias; esto puede es decir, pasa a estado metálico y positivas poseen una malla de FÁBRICAS PESQUERAS DE
específicas de tinción, como es la ser debido a la elaboración en de esa forma suele precipitar. CHIMBOTE
peptidoglicano en su parte más
presencia de diferentes elementos algún tipo de pigmento, a la Objetivos Generales:
externa, mientras que las
facultativos: flagelos, cápsulas, formación de alguna sustancia por Algo similar se ha observado en bacterias gram negativas,
esporas, corpúsculos meta cromáticos, parte de la bacteria o por la este caso. Se preparó una Obtener cultivos puros de
recubriendo una fina capa de
etc.; y que igualmente forman parte deutilización de algún sustrato del solución de complejos de bacterias proteolíticas y
peptidoglicano, presentan una
la morfología de las bacterias, pero medio que acidifique o alcalinicehidroxicloruro a conteniendo el lipolíticas a partir de aguas
membrana externa que envuelve
que estudiaremos en el apartado éste de forma que, ante la presencia ion de oro: Au III. Dichos residuales de fábricas pesqueras.
toda la célula.
dedicado a estructura bacteriana. de indicadores de pH que están complejosen son bastante tóxicos. Afianzar las destrezas en el
La morfología nos da una información el medio, cambia de color, hecho C. metallidurans respondía trabajo de laboratorio en cuanto
El método de tinción es el
primaria sobre el tipo de bacteria, no que nos ayuda a conocer acumulando la rápidamente dicho a aislamiento, cultivo y ensayo
siguiente:
de forma concluyente pero sí como utilización de ese sustrato por parte compuesto en su interior. Lo de la actividad de bacterias
1. Se prepara el frotis, se seca y
paso previo a cualquier proceso de de la bacteria siguiente que se observó es que
(tipificación Objetivos Específicos:
se fija.
identificación y clasificación bioquímica). La transparencia se inducía una serie de genes 2. Se cubre con cristal violeta
taxonómica. puede ser completa, en cuyo caso, para resistir el stress oxidativo y Determinar el pH y temperatura
durante un minuto.
TAMAÑO se habla de colonias translúcidas, las altas concentraciones de óptimos para la actividad de
Las bacterias son de pequeño tamaño, semitransparentes metales
o pesados. Se producían bacterias Lipolíticas y
3. Lavar suavemente con agua
por lo que para su observación es completamente entonces una serie de reacciones
opacas, proteolíticas
destilada para eliminar el exceso
necesario el microscopio. Su tamaño dependiendo del tipo bacterianobioquímicas o que provocaban la de colorante.
se mide en micras (1 μm = 10-6 m) y del medio de cultivo utilizado. reducción del oro y la CONCLUSIONES
oscila entre 0,2 μm de algunos cocos y ESTRUCTURA BACTERIANA precipitación en forma de 4. Se traza con lugol un minuto.
las 5-8 μm de largo por 1,5 μm deLas bacterias nanopartículas de oro metálico
están Se logró aislar bacterias
El lugol actúa como mordiente
ancho de los bacilos. El tamaño es una estructuralmente constituidas por (Au 0). proteolíticas y lipolíticas a partir
aumentando la afinidad del
característica para cada tipo dos tipos de elementos: elementos de sanguaza y obtener cultivos
colorante por la bacteria.
bacteriano y se puede medir con gran obligados y elementos facultativos. PRÁCTICA: COLORACIÓN DE 5. Lavar con agua el exceso de puros, a partir de los cuales se
exactitud y fiabilidad. Los elementos obligados están GRAM realizaron pruebas
lugol.
FORMA presentes en todas las bacterias y microbiológicas que nos
6. Se gotea alcohol-acetona de
La forma de una bacteria como son indispensables para la vida Objetivos de ayudaron a demostrar su
forma continua hasta que la
organismo individual viene dada por éstas. Los facultativos pueden estar Con esta práctica se pretende actividad proteolítica por medio
preparación deje de perder color
la rigidez de su pared. Es igualmente o no presentes y depende familiarizar su con el manejo del de la licuefacción de la gelatina y
una característica de cada tipo microscopio óptico para la la actividad lipolítica por la
degradación del aceite que
estaba contenido en un
biorreactor. De tal manera los
resultados que se lograron
obtener fueron positivos,
determinando así que tanto
bacterias proteolíticas y
lipolíticas que se encuentran en
residuos de fábricas como
sanguaza pueden desarrollarse
teniendo como condiciones
óptimas a pH acido y
temperaturas ambientales, como
pH neutro y temperaturas
ambientales respectivamente.