ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MÉDICA

DOCENTE: LIC NELCI ALBURQUEQUE OVIEDO

CURSO: HISTOQUÍMICA

GRUPO IV:
INTEGRANTES:

• CLEMENTE TORRES VIANEY GEOVANNA

• JUAREZ VILLEGAS VANESSA PAOLA
• OBANDO RAMÍREZ JHOSELYN ANALIZ
• PRADO LÓPEZ RICHARD SMITH
• TAMARA MILLA YOMIRA JERALDINE

2021-II
 CARBOHIDRATOS

El concepto de
carbohidratos se forma a
partir de dos términos:
Carbono e hidrato, por lo
tanto es un hidrato de
carbono, los hidratos son
aquellas sustancias que
contienen agua
Son biomoléculas también
llamados glúcidos,
azucares y sacáridos.
 Carbohidratos, la fuente de energía

Son la fuente preferida de combustible del cuerpo

humano. Los músculos, el cerebro y otros tejidos como
el hígado se basan en un aporte continuo de
carbohidratos para satisfacer las demandas de energía
del organismo.
En la alimentación humana, los glúcidos son la fuente
principal de aporte energético, el 50% de las calorías
provienen de los hidratos de carbono.
 SE CLASIFICAN EN:

Polisacáridos: Son sustancias mucho más

Monosacáridos: También llamados
complejas que los glúcidos. Están constituidos
azúcares simples, ellos son:
Disacáridos: Es la unión de dos por numerosas unidades de monosacáridos,
monosacáridos. algunos de ellos son polímeros de un solo tipo de
Glucosa (dextrosa), es el más abundante y
monosacáridos y reciben el nombre de
fisiológicamente más importante de los
Maltosa, también llamada azúcar de la homopolisacáridos mientras otros, son polímeros
monosacáridos. Es el principal combustible
malta. Está formada por la unión de 2 de más de una clase de monosacáridos y se los
útil para las células. Se lo encuentra libre
glucosas. Es el producto de la denomina heteropolisacáridos. Constituyen el
en los frutos maduros y también en sangre.
hidrólisis del almidón y catalizada por mayor porcentaje de la ingestión diaria de
La digestión de todas las formas de
la enzima amilasa. Fuentes: Cereales, carbohidratos.
carbohidratos produce glucosa, lo mismo
cerveza, licor de malta. • Almidón, es una sustancia que cumple el
que el proceso de emisión de glucosa par
Lactosa, esta formada por la unión de papel de reserva nutricia en vegetales. Se
parte de lo acumulado en el músculo o en el
la galactosa con la glucosa. Fuentes: deposita en las células, el almidón es el
hígado (glucogenolisis) o la formación de
Aparece naturalmente en la leche (en principal hidrato de carbono de la
glucosa por parte de otras sustancias como
grandes cantidades). alimentación humana.
aminoácidos y ácidos grasos
Sacarosa, está formada por la unión de • Fibra, existen solo en las plantas, la fibra
(gluconeogenesis).
glucosa y la fructosa. Es el azúcar aumenta la velocidad de la digestión y
Fructosa (levulosa), se encuentra en frutos
habitualmente usado como edulcorante absorción contribuyendo a la saciedad y en
maduros y en la miel. Tiene mayor poder
en la alimentación. Fuentes: Se la algunos casos puede reducir la absorción total
edulcorante que la glucosa.
obtiene del azúcar de caña y de la de grasa.
Galactosa, se encuentra libres en la
remolacha. • Glucógeno, es el polisacárido de reserva en
naturaleza y se une con la glucosa para
células animales. El hígado y el músculo son
formar un disacárido.
los tejidos más ricos en glucógeno.
 CARACTERÍSTICAS

- Son abundantes en las células

- Estructura químicamente mas simple que las proteínas

- Presentes en todas las especies vivientes

- Adaptados a una diversidad de funciones biológicas

- Conocidos como glúcidos, almidones y azúcares

- Formado por C, H y O

- Considerados el combustible celular

- Fuente primaria de la energía químicas para las células

- Proporcionan energía hasta 4 kcal/gr (glucosa)

- Almacenan energía (almidón, glucógeno)

 FUNCIONES

Son la principal fuente de energía y

proporcionan el C que se necesita
para la biosíntesis de proteínas,
lípidos, ácidos nucleicos y
carbohidratos, producidos en
nuestras células.
Los polímeros de los carbohidratos
cumplen funciones muy especificas:

• Formación de estructura en
vegetales. Celulosa
• Reserva de energía. Almidón
(Vegetales) Glucógeno (Animales)
 HISTOQUIMICA
conjunto de técnicas y
procedimientos usados para la
localización de moléculas,
dependiendo donde estemos
trabajando se llamara:
• histoquímica (tejidos).
• citoquímicas (célula).
aplicados a un material
biológico (animal o vegetal)
con la finalidad de prepararlo
y conferirle las condiciones
óptimas para poder observar,
examinar y analizar sus
componentes morfológicos a
través de los microscopios
fotónicos y electrónicos.
 Fijación en formol al 10%

Técnica histológica Inclusión en parafina

ordinaria

Clasificación Tinción con

Hematoxilina y Eosina

Técnicas histológicas
especiales
Son las técnicas que no
cumplen con la técnica
histológica ordinaria.
 PASOS

Obtención de Infiltración
Fijación Deshidratación Aclaramiento
la muestra
Inclusión Corte Rehidratación Tinción montaje
Obtención de la muestra:
Estado vital del organismo
 Vivo: biopsia
 Muerto: necropsia/autopsia

Necropsia: las muestras

se obtienen de seres
muertos: En este caso es
La biopsia puede ser:
 incisional
recomendable que los
 Excisional tejidos y órganos se
 por sacabocados obtengan
 por punción y absorción inmediatamente
 por raspado después de producida la
 por trepanación
muerte.
 FIJACION:

Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es detener la

vida de las células e impedir las modificaciones post morten que
pueda sufrir la célula (procesos autolíticos), manteniendo la
estructura morfológica de células y tejidos sin que ocurran
cambios notables en ellos. Esto se consigue inmovilizando (por
coagulación o precipitación) las moléculas proteínicas e
inhibiendo principalmente las enzimáticas haciéndolas insolubles.
Esta acción garantiza la integridad de las células y tejidos; se
efectúa por mediante agentes químicos denominados fijadores.
Los fijadores se clasifican en dos  el alcohol etílico absoluto
grandes grupos: conserva el glucógeno
a) Oxidantes:  el bicloruro de mercurio
• el tetra óxido de osmio (ácido provoca que las anilinas
ósmico) coloreen de manera más
• el bicromato de potasio brillante a las fibras
• ácido crómico colágenas
• bicloruro de mercurio o  el bicromato de potasio
“sublimado corrosivo” facilita la coloración de las
• ácido pícrico mitocondrias
• Ácido acético  el ácido acético permite
una mejor tinción de los
b) Reductores: núcleos
•el formaldehído  el cloruro de calcio
•el glutaraldehído conserva e insolubiliza
•El alcohol etílico parcialmente a los lípidos.
•El alcohol metílico
 Los fijadores son:
Gaseosos: como el
formaldehído.

líquidos: como el ácido
acético, al alcohol etílico,
la acetona, etc.

sólidos: como el bicloruro
de mercurio, el bicromato
de potasio, etc.
fijadores compuestos o mezclas fijadoras que se emplean
con mayor
frecuencia:
Formol - fosfato (formol tamponado):
-solución de formaldehído (37% a 40%)--------------100 ml
-agua destilada ------------------------------------------- 900 ml
-fosfato de sodio monobásico (NaH2PO4 - H2O)-----4.0 gr
- fosfato de sodio dibásico (Na2HPO4)------------------6.5 gr
Suele emplearse como un fijador de rutina, al igual que el
formol al 10%. Posee un pH de 6.8 a 7.0 aproximadamente.
Es ligeramente hipotónico.
 Formol - bicloruro de mercurio.
- solución de formaldehído (37% a 40%)--------------150 ml
- agua destilada--------------------------------------------850 ml
- bicloruro de mercurio-------------------------------------50 gr

Es recomendable usarlo para fijar tejidos hematopoyético

y linfáticoreticular. El material nuclear se fija de manera
precisa y nítida. Facilita la tinción de fibras colágenas y
células conjuntivas mediante el empleo de colorantes
que tienen como base a las anilinas. Se utiliza para los
tejidos en los que se aplicará técnicas
inmunohistoquímicas. Los tejidos no deben mantenerse
mucho tiempo en fijación (no más de 48 horas) porque se
endurecen demasiado. HgCl2 es una sustancia que
corroe el instrumental metálico. Antes de aplicar una
tinción es necesario eliminar los pigmentos precipitados
del bicloruro de mercurio en los tejidos.
 Formol - cloruro de calcio.

- solución de formaldehido (37% a 40%)---------------100 ml

- cloruro de calcio--------------------------------------------10 gr
- agua destilada----------------------------------------------900ml

Se recomienda fijar las muestras en esta solución cuando se

desean preservar lípidos, especialmente fosfolípidos: Antes
de obtener los cortes, las muestras se incluyen en gelatina o
se congelan directamente para seccionarlas empleando
microtomos de congelación o el criostato.
Líquido fijador de Boüin.
- solución acuosa saturada de ácido pícrico-------------750 ml
- solución de formaldehido (37% a 40%)---------------250 ml
- ácido acético glacial--------------------------------------- 50 ml

Es un buen fijador de uso rutinario. Tiene un buen poder de

penetración y de difusión. Ofrece resultados satisfactorios
con ciertos tricrómicos como el de Masson. Pueden fijarse
piezas de un centímetro de grosor y dos o tres centímetros
de longitud. Se le emplea con resultados óptimos en la
fijación de embriones y fetos pequeños pues ejerce cierto
poder descalcificante. Dependiendo del volumen de la
muestra, el tiempo de fijación será de 12, 24 a 48 horas.
 Líquido fijador de Zenker ( Solución madre o stock)

- bicloruro de mercurio-------------------------------------50 gr
- bicromato de potasio--------------------------------------25 gr
- agua destilada ------------------------------------------1000 ml

La solución “madre” se puede guardar durante mucho

tiempo.
 Fijador de Carnoy
-alcohol etílico absoluto------------------------------------60 ml
-cloroformo--------------------------------------------------30 ml
-ácido acético glacial---------------------------------------10 ml

Posee un excelente poder de penetración y de difusión. Las

muestras delgadas de tejidos y órganos se fijan en dos o tres
horas. Produce lisis de los eritrocitos. Es el fijador adecuado
cuando se desea demostrar glucógeno y la tinción de
núcleos y especialmente cromosomas.
MÉTODO DE COLORACIÓN DE PAS
DEFINICIÓN

La tinción de PAS (Periodic Acid-Schiff) es una de las tinciones más comúnmente

utilizada en histología y se utiliza para evidenciar la presencia de grupos aldehídos
formados por oxidación previa de los hidratos de carbono.
 FUNDAMENTO

Consiste en oxidar los tejidos mediante el ácido peryódico para incrementar el

número de grupos carbonilos (aldehídos o cetonas) presentes en ellos.
Posteriormente, se trata la muestra con el reactivo de Schiff que reacciona con dos
grupos aldehídos contiguos dando lugar a una coloración rojo-púrpura
característica.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
 Elpar de la solución Q Path reactivo de Schiff y de la solución Q
Path ácido periódico se utiliza en el marco de un procedimiento
de tinción especial que variara en función de los usuarios y
puede ser adaptado por el patólogo que realiza el diagnostico
para alcanzar la intensidad y la especificidad requeridas.

 Estemétodo es repetitivo y reproducible dentro de los limites del

carácter subjetivo del procedimiento.
• La tinción excesiva o la tinción deficiente que solamente
podrán apreciarse al finalizar el procedimiento requerirán
repetir la tinción de una sección, procurando respetar los
tiempos indicados en el protocolo debido al carácter
subjetivo de la tinción, resulta imposible preveer los tiempos
exactos de cada etapa.

• Las soluciones de tinción muy usadas perderán su poder de

coloración y los tiempos de tinción deberán ser prolongados
o será preciso utilizar soluciones nuevas.
TÉCNICA DE TINCIÓN PAS
PARA REALIZAR UNA TINCIÓN PAS DEBEMOS
CONTAR CON LOS SIGUIENTES REACTIVOS

Código Descripción

256676 Kit de PAS para diagnóstico clínico

(*)

251769 Xileno, mezcla de isómeros para

diagnóstico clínico (*)

251085 Etanol 96% v/v para diagnóstico

clínico (*)
25108 Etanol absoluto para diagnóstico
clínico (*)
253681 Eukitt ®, medio de montaje para
diagnóstico clínico
COMPONENTES DEL KIT

Nombre Composición

Reactivo A Ácido peryódico

Reactivo B Reactivo de Schiff

Reactivo C Potasio meta-Bisulfito solución

Reactivo D Solución fijadora

Reactivo E Hematoxilina de Mayer
 PROCEDIMIENTO

1. Una vez los cortes hayan sido desparafinados y rehidratados, enjuagar con agua
destilada
2. Depositar sobre el corte 10 gotas de Reactivo A. Dejar reaccionar durante 10 minutos.
3. Lavar con agua destilada.
4. Depositar sobre el corte 10 gotas de Reactivo B. Dejar reaccionar durante 20 minutos.
5. Lavar con agua destilada.
6. Depositar sobre el corte 10 gotas de Reactivo C. Dejar reaccionar durante 2 minutos.
7. Escurrir el portaobjetos.
8. Sin lavar, depositar sobre el corte 10 gotas de Reactivo D. Dejar reaccionar durante 2
minutos
9. Lavar con agua destilada.
10. Depositar sobre el corte 10 gotas de Reactivo E. Dejar reaccionar durante 3
minutos.
11. Hacer virar en agua corriente durante 5 minutos.
12. Deshidratar utilizando la serie creciente de alcoholes.
13. Aclarar con Xileno.
14. Montar con medio de montaje.
15. Observar al microscopio.
 Al leer la muestra al microscópio
podemos observar que el núcleo
se torna de color Violeta-negro.
Mientras que los Polisacáridos
simples (glucógeno),
mucopolisacáridos neutros,
mucoproteínas, membrana basal,
glucolípidos se torna de un color
Rojo-Púrpura.
TINCION DE PAS
Nota técnica: El microscopio usado debería corresponder a los
requisitos de un laboratorio de diagnóstico clínico. Si se utiliza un
aparato automático de tinción, deben tenerse en cuenta las
instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del software.
Preparación de las muestras Todas las muestras deben tratarse de
acuerdo con el estado de la tecnología. Todas las muestras deben
estar rotuladas inequívocamente.
Preparación de las muestras: Todas las muestras deben
tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.
Todas las muestras deben estar rotuladas
inequívocamente.

Diagnóstico: Los diagnósticos deberán ser establecidos

solamente por personas autorizadas y cualificadas.
Cada aplicación debería implicar controles
adecuados para descartar resultados erróneos.
 Almacenamiento: La solución de tinción debe almacenarse a temperatura entre
+2 y +8 ºC.

 Caducidad: El producto almacenado a la temperatura indicada y en envase

bien cerrado, es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.

 Notas sobre el empleo: Para evitar errores, la tinción ha de ser realizada por
personal especializado. Solamente para uso profesional. Deben cumplirse las
directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y aseguramiento de la
calidad.
 Indicaciones para la eliminación de residuos:

Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como desecho
peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de residuos. Si se
presentan más preguntas acerca de la eliminación, éstas podrán ser tramitadas a
través de E-Mail: info.es@itwreagents.com. Dentro de la UE tienen validez las
prescripciones basadas en la Directiva 67/548/CEE del Consejo relativa a la
aproximación de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas en
materia de clasificación, embalaje y etiquetado de sustancias peligrosas, en la
correspondiente versión vigente.
 Clasificación de sustancias peligrosas:
Tener en cuenta la clasificación de sustancias peligrosas en la etiqueta y las
indicaciones en la ficha de datos de seguridad.