MÁSTER INTERUNIVERSITARIO

EN QUÍMICA

AVANCES EN QUÍMICA ANALÍTICA

Profesor: Daniel A. Sánchez-Rodas Navarro

Facultad Ciencias Experimentales
Universidad de Huelva
 AVANCES EN QUÍMICA ANALÍTICA

Tema 2. Principios generales de la espetrometría de masas orgánicas.

(UHU)
Introducción a MS: Funciones del espectrómetro de masas. GC-MS:
sistemas de introducción de muestras. Sistemas de ionización.
Acoplamientos GC-MS. LC-MS: Interfases. Acoplamientos LC-MS. (UHU 0.5
ECTS).
 1. Introducción a MS

1.1. Funciones del Espectrómetro de Masas

 1. Introducción a MS

1.2. Sistemas de introducción de muestras en MS

 1. Introducción a MS

1.2. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de introducción de muestras

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de ionización

 2. GC-MS

2.1. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)

 2. GC-MS

2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)

EI (Impacto Electrónico)

M+ 351
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización EI (Impacto Electrónico)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización CI (Ionización química)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)

¿Presión y temperatura del gas reactivo?

 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.2. Sistemas de ionización
PCI (Ionización química positiva)
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS Identificación (NIST)
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS
 2. GC-MS
2.3. GC-Q-MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS

M 406
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.4. GC-MS/MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 2. GC-MS
2.5. GC/IT-MS
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES

Dificultades para LC-MS

Si flujo en LC  [0.5-5 ml min-1] Volumen gas 100 -300 cm3 min-1

Disoluciones amortiguadoras Efecto de la matriz sobre MS

 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
Acoplamiento directo LC-MS
(sin interfase)

columna desecho
HPLC
MS
capilar

Vaporización del disolvente  gas reactivo para CI MH+

Flujos pequeños 10 – 20 L
Inconvenientes: Poca información estructural por CI
Pocos compuestos generan MH+ por CI
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES

Interfases en LC-MS

La fase móvil se elimina antes de La fase móvil ayuda a la ionización

la ionización

Termospray
Moving belt (Cinta transportadora)
Particle-beam (haz de partículas) APC (Atmospheric Pressure Chemical Ionization)
FAB de flujo continuo
ES (Electrospray)
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
I. Moving belt (Cinta transportadora)

Eficacia de la transferencia  40 -80%

 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
II. Particle-beam (haz de partículas)

• El eluído pasa a un capilar y un nebulizador donde se mezcla con He

• El spray formado pasa a una cámara de solvatación de paredes calentadas y a presón <1 atm
• Etapa de vacío y expansión supersónica, se forma un haz con un centro de más partículas y menos moléculas
de He y vapor de agua.
• Un sistema de doble skimmer selecciona el centro del haz hacia el analizador
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
III.FAB flujo continuo

• Unión de la salida de la columna con la boquilla del FAB (Fast Atom Bombardment)
• Adición de glicerol (1-5 %) en el eluyente como matriz FAB
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
IV.Termospray

• Calentamiento del eluyente (150ºC) de LC en un capilar

• Spray en una cámara de vacío
• Intercambio de cargas entre el eluyente e iones salinos

Formación de partículas sólidas cargadas en la fase gaseosa

MH+ MX+ X = NH4, Na, K

Aplicación: analitos presentes como iones positivos o negativos

Inconveniente: [analitos] > 1x10—3 M
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
IV.Termospray

• Eluyente: agua o disolución acuosa

• Sales sódicas, potásicas o etanoato de amonio (NH4OCOCH3)
• Haz de electrones a la salida del capilar  CI NH4+
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
IV.Termospray
Ejemplo: vitamina B12 (cianocobalamina)
C66H88CoN14O14P, Peso molecular 1354

 No se forman M+ o MH+
 C+ (pérdida de CN-)

 C2+ (cation doble cargado)

 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
IV.Termospray
Ejemplo: alcaloides
cloroquina

heroína

 Se forman MH+
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
V. APCI (Atmospheric Pressure Chemical Ionization)

• Reacciones ión-molécula en fase gaseosa

• Conversión del eluyente en un spray (Cámara de nebulización +N2)
• Cámara de desolvatación/vaporiación (120 °C)
• Producción de iones primarios por descarga corona en un spray
• Ionización química (MH+)
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
V. APCI (Atmospheric Pressure Chemical Ionization)

 Formación de analitos cargados positivamente:

 Formación de analitos cargados negativamente:

 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
V. APCI (Atmospheric Pressure Chemical Ionization)

Ejemplos: benzodiazepinas
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)

• El eluyente (1-10 Lmin-1) pasa a través de un capilar metálico

(electrodo)
• Contraelectrodo (0.3-2.0 cm)
• Aplicación de un capo eléctrico fuerte (3-6kV)
•  V entre capilar-cono de muestreo : 60 V
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)

Tamaño de gota  1  m

“Explosión”  10 nm

Evaporación

Iones gaseosos
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)

Especies iónicas ya presentes en el eluyente del LC:

Bases protonadas (BH+) y ácidos ionizados

Complejación del analito con iones en disolución:

MH+ (masa = M + 1)
M (NH4+) (masa = M + 18)
M (Na+) (masa = M + 23)
M (K+) (masa = M + 39)
M(HCO2) (masa = M + 45)
M(CH3CO2) (masa = M + 59)
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)

 El grado de fragmentación del analito se controla con la  V entre capilar-cono

Disociación activada por colisión

 V= - 20 V  [M+H]+ m/z 152 (especie mayoritaria)

 V= - 50 V  [M+H]+ m/z 152 (disminuye)

 m/z 110 (aumenta)
 m/z 107 (aumenta)
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)

 Variante de ES  Ionospray
 Empleo de un nebulizador neumático (50-200  L min-1)
 El spray depende menos de la naturaleza del eluyente
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)
 Consideraciones para ES en LC-MS

Ajuste de pH, reactivos, buffers, disolventes

Condiciones habituales en LC

Fosfato, sulfato o borato  precipitados

Reactivos formadores de pares iónicos

Compuestos básicos a pH ácido  se favorece la protonación

Compuestos ácidos a pH básico  se favorece la desprotonación

Compuestos neutros  “cationización”

 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)
 Consideraciones para ES en LC-MS

Condiciones adecuadas del eluyente para ES en LC-MS

Ácido acético, Ácido fórmico, ácido trifluoroacético (TFA) (ES modo positivo)
pH
NH3 (ES modo negativo)

Acetato amónico, formiato amónico,

Buffer, pares iónicos hidróxido de tetrabutilamino (TBAH), ácido heptafluorobutírico (HFBA),
trietilamina

Reactivos de
Acetato potásico, acetato sódico
“cationización”

Metanol, etanol, propanol, butanol (ES modo negativo)

Disolventes
Ácido acético, ácido fórmico, acetona, THF, cloroformo (5-20%)
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)
 Consideraciones para ES en LC-MS
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES
VI. ES (electrospray)
 Consideraciones para ES en LC-MS
 3. LC-MS
3.1. INTERFASES

 Comparación de interfases
 3. LC-MS
3.2. LC-ES-Q-MS
 3. LC-MS
3.3. LC-MS/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS

DBE = double bond equivalent

DBE = 1 + C– 1/2 (H + F + Cl + Br + I) + 1/2 (N + P)
 3. LC-MS
3.4. LC-TOF/MS
 3. LC-MS
3.5. LC-QTOF
 3. LC-MS
3.5. LC-QTOF
 3. LC-MS
3.6. LC-ORBITRAP-MS/MS
 3. LC-MS
3.6. LC-ORBITRAP-MS/MS
 3. LC-MS
3.6. LC-ORBITRAP-MS/MS
 3. LC-MS
3.6. LC-ORBITRAP-MS/MS
 3. LC-MS
3.6. LC-ORBITRAP-MS/MS