Guía de laboratorio

Laboratorio No. 1

Familiarizándonos con el laboratorio de microbiología

1. Introducción

Un laboratorio de microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde se puede

habilitar, manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a
cabo con una buena técnica aséptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y
ordenado.

Además de un ambiente microbiológico, el laboratorio de microbiología requiere una

instrumentación básica para llevar a cabo estudios elementales.

En la presente práctica se describirá detalladamente algunos instrumentos fundamentales

en el laboratorio de microbiología.

La vida microscópica está presente en ambientes tan cotidianos como los

alimentos que ingerimos, el agua que bebemos, los utensilios que empleamos
para cocinar o comer; incluso en nuestro propio cuerpo. Su presencia pasa
desapercibida pero puede ser un factor determinante que, si no es favorable,
representa un riesgo para la salud del ser humano (Murray etal., 2007).

Una de las formas más rudimentarias para poner de manifiesto la presencia de

microorganismos ha sido su desarrollo sobre placas de cultivo (sobre todo los
organismos heterótrofos), manifestándose a modo de colonia bacteriana o fúngica.

Los microorganismos objeto de estudio en este trabajo son heterótrofos, es decir,

se alimentan de la materia orgánica procedente de otros seres vivos o de sus
restos. La fuente de materia orgánica y las sales minerales necesarias para el
correcto desarrollo microbiano se conseguirán a partir de un caldo comercial
concentrado, de los que se utilizan en alimentación para la elaboración de sopas,
y azúcar de mesa.

2. Competencias

2.1. Competencias generales

Conoce y aprende detalladamente cada instrumento utilizado en las prácticas de

microbiología (forma, uso, material con el que está elaborado etc.).

Realiza una primera práctica utilizando los materiales para uso en microbiología,
aplicando técnicas de asepsia y preparando medios de cultivo.

2.2. Competencias específicas

Identifica, usa y reconoce cada uno de los materiales, instrumentos del laboratorio de
microbiología.

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Percibe la existencia de microorganismos en el entorno y como puede hacerlos crecer

con recursos básicos.

Usa y conoce algunas técnicas asépticas usadas en laboratorio.

3. Lista de materiales y reactivos

1. Matraz Erlenmeyer de 500 ml (o frasco de vidrio Pirex®) y probeta de 100

ml.
2. Balanza electrónica.
3. Placas de Petri de plástico o vidrio.
4. Cucharita para pesar los ingredientes.
5. Pastilla de caldo de carne.
6. Disoluciones 1M de HCl y NaOH.
7. Tiras de papel indicador de pH.
8. Algodón.
9. Glucosa o azúcar de mesa.
10. Cloruro de sodio.
11. Agar-Agar.
12. Rejilla y trípode.
13. Mechero Bunsen.
14. Hipoclorito de sodio.
15. Agua destilada

4. Metodología

La metodología para lograr el estudio microbiológico será sencilla y, en todo momento,

llevada a cabo por los estudiantes universitarios. Un cubito de caldo concentrado se
disolverá en un litro de agua destilada, ajustado el pH final del medio al nivel de 7.0±0.2,
con la ayuda de una tira de papel indicador o de un medidor de pH electrónico y los
reactivos: ácido clorhídrico (HCl) 1M o hidróxido de sodio (NaOH) 1M, según proceda. 250
ml de este caldo nutritivo se verterán en el interior de una botella de vidrio Pirex® o
matraz Erlenmeyer de 500 ml provisto de tapón de algodón.

Para la obtención de colonias aisladas es preciso solidificar el medio de cultivo a partir de

la adición de agar (1.2-2.0% de concentración final). Es por lo que, a los anteriores 250 ml
de caldo de cultivo, se les adicionarán 5 gramos de agar comercial (o del que se utiliza en
alimentación como espesante de comidas).

El medio será suplementado con 2 gramos de glucosa (en su defecto azúcar de mesa),
como fuente de carbono, y 0.2 gramos de cloruro de sodio (NaCl) para regular el equilibrio
iónico de la solución final.

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La esterilización del medio es necesaria para la observación de la microbiota que

nos interesa estudiar. Para ello será preciso descartar la contaminación propia de
las placas de cultivo ocasionada por las bacterias “residentes” en los propios
ingredientes utilizados en su confección o los presentes en el botella o matraz
Erlenmeyer donde se está preparando el medio, ya sean formas vegetativas o
estructuras de resistencia microbiana (esporas, estados de latencia microbiana y
depauperación). Para ello, y ya que en los laboratorios no se dispone de un
instrumental de laboratorio complejo, se procederá a la esterilización del medio
mediante dos vías: pasteurización o tindalización. La primera técnica es la que se
recomienda, por el tiempo que se dispone en el laboratorio con los alumnos. La
botella de vidrio Pirex (con el tapón entreabierto) o el matraz Erlenmeyer (tapado
con algodón) provisto del medio de cultivo con agar, se llevarán a ebullición y se
dejará 1 minuto en este estado, previendo del posible vertido que pudiera
ocasionarse con el calentamiento. La segunda metodología de trabajo, la
tindalización, es la que mejor asegura la correcta esterilización del medio e
instrumental. Si se dispone de tiempo, el método de trabajo es igual que el
anterior, dejando 24 horas de espera entre una segunda y tercera ebullición. De
este modo, cualquier fase de resistencia al calor que habitara en el medio en una
primera ebullición, se dejaría desarrollar en el primer enfriamiento para, en un
segundo y tercer calentamiento, destruirla.

Después de la esterilización, se procederá al vertido del medio de cultivo en las

placas de Petri de plástico estéril. Si no se dispone de este material (muy barato y
fácil de encontrar en las empresas de suministro de material de laboratorio), se
puede recurrir a su sustitución por placas de cultivo de vidrio, que sí podemos
hallar en cualquier laboratorio, sumergiéndolas –previamente- en una solución
diluida de hipoclorito de sodio (lejía comercial) para, posteriormente, introducirlas
en un baño de agua caliente (próxima a 100ºC) durante 10 minutos). Esta
tecnología no esteriliza el material por completo, pero mata o daña una
importantísima población de formas microbianas viables.

En cada placa de Petri de 90 mm de diámetro se depositarán unos 25 ml de medio

de cultivo (lo que equivale a llenar la placa a medio centímetro del fondo). Antes
de proceder al vertido, el necesario que el área de trabajo y las manos del alumno
se limpien escrupulosamente con jabón e hipoclorito. A ser posible, se trabajará
cerca de la llama de un mechero Bunsen, sin dirigir la salida de aire, procedente
de la respiración, hacia las placas durante el vertido. Finalmente, el medio se
dejará enfriar y endurecer dentro de la placa, cerrada durante 24 horas a
temperatura ambiente, o unas horas en el frigorífico.

La observación de las colonias microbianas sobre las placas de cultivo es fruto de

la siembra. Para ello, un sujeto control (o varios) abrirá – cuidadosamente- la placa
de Petri y colocará con un asa previamente esterilizada una porción rasgada de
las frutas o la frotará encima del medio, deslizándolos por toda la placa.

En esta experiencia, lo que se va a inocular son todas las formas vegetativas y

estructuras de dispersión o resistencia de bacterias y hongos alojadas sobre la

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superficie de las cáscaras de las frutas. Finalmente, y tras rotular la placa, se

repetirá la experiencia con el mismo alumno (o grupo de alumnos), con otras
frutas. Previo a la incubación, es preciso evitar la contaminación exógena a la
experiencia introduciendo las placas de cultivo inoculadas en una bolsa. La
incubación se llevará a cabo, a temperatura ambiente, durante un tiempo de
cuatro a cinco días.

Materiales e Instrumentos de Laboratorio de Microbiología

Observar el uso de los siguientes materiales:

PIPETA: La pipeta es un instrumento de laboratorio que se utiliza para medir pequeñas

cantidades de líquido. Suelen ser de vidrio. Está formado por un tubo transparente que
termina en una de sus puntas de forma cónica, y tiene una graduación indicando distintos
volúmenes.

TUBO DE ENSAYO: Consiste en un pequeño tubo de vidrio con una abertura en la zona
superior, y en la zona inferior se encuentra cerrado y redondeado. Esta hecho de un
Vidrio Especial que resiste las temperaturas muy altas, sin embargo los cambios de
temperatura muy radicales pueden provocar el rompimiento de tubo En los laboratorios se
utiliza para contener pequeñas muestras líquidas, y preparar soluciones.

ASA BACTERIOLÓGICA: El asa bacteriológica es un instrumento de laboratorio que tiene

una base que puede estar hecha de aluminio y un filamento que termina o en aro o en
punta. Se utiliza para comúnmente para hacer siembras de bacterias en cajas petri o en
medios líquidos.

VASO DE PRECIPITADOS: Un vaso de precipitados es un material de laboratorio de

vidrio que se utiliza para contener sustancias, disolverlas, calentarlas etc. Existen varios
tamaños de vasos de precipitados, desde muy pequeños que suelen tener un volumen
aproximado de 1ml hasta varios litros. Los más comunes son los de 250 y 500 ml. Suelen
ser cilíndricos y con una base plana, con un pequeña boca en la parte de arriba para
poder transferir el liquido que contiene con mayor facilidad.

ESPÁTULA: Material de laboratorio con un mango que comúnmente suele ser de madera
con una placa delgada metálica con una longitud de aproximadamente 8 cm. Este
instrumento permite tomar pequeñas muestras para su posterior pesado en una balanza.

MATRAZ ERLENMEYER: Es un frasco con base redonda, la cual posee una estructura
cónica en la zona del medio y en la zona superior tiene una boca con cuello estrecho. Es
un instrumento graduado que contiene marcas que indican un determinado volumen. Se
encuentran en distintas capacidades. Es utilizado principalmente para la preparación de
soluciones.

PROBETA: Está formado por un tubo transparente de unos centímetros de diámetro, y

tiene una graduación desde 0 ml indicando distintos volúmenes. En la parte inferior está
cerrado y posee una base que sirve de apoyo, mientras que la superior está abierta y
suele tener un pico. Generalmente mide volúmenes de 25 ó 50 ml, pero existen probetas
de distintos tamaños; incluso algunas que pueden medir un volumen hasta de 2000 ml.
Puede estar constituido de vidrio o de plástico. La probeta es un instrumento, que permite

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medir volúmenes superiores y más rápidamente que las pipetas, aunque con menor
precisión.

CAJA DE PETRI. Es un recipiente de cristal o de plástico, que consta de una base

circular, y las paredes son de una altura baja aproximadamente de (1 cm); y una cubierta
de la misma forma pero algo más grande de diámetro para que encaje como una tapa.
Los hay de diferentes diámetros. Se utiliza en los laboratorios principalmente para el
cultivo de microorganismos

5. Cuestionario

1. Listar todos los materiales, instrumentos, sustancias, medios y equipos utilizados

en un laboratorio de microbiología encontrados en el trabajo de investigación.
2. Dibujar o incorporar fotografías de los 10 instrumentos, materiales o equipos más
usados en un laboratorio de microbiología (principalmente los que se usaron en el
laboratorio de la EMI), según el siguiente cuadro.

No. Dibujo o Imagen Descripción - Uso

1.

n.

3. ¿Cuáles son los principales cambios o adaptaciones realizados durante la práctica

y si los mismos satisficieron los propósitos de la práctica de laboratorio?
4. ¿Cuáles son los principales nutrientes que requiere un microorganismo para
crecer?. En la práctica explicar cómo las sustancias utilizadas satisficieron esa
demanda nutricional.
5. Defina que es una técnica aséptica. ¿Por todo lo realizado mencione cuales y en
qué momento se utilizaron técnicas asépticas en la práctica de laboratorio?.

6. Bibliografía – Webgrafía
- http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/01-INTR-
MICROBIOL.pdf
- https://diegolandiaa.files.wordpress.com/2012/06/practicas-de-laboratorio.pdf
- López Pérez - Boronat Gil, José Pedro y Raquel. Prácticas de Microbiología básica
en el laboratorio de Educación Secundaria. 1ra Edición. Región de Murcia –
Consejería de Educación, Juventud y Deportes – España, Mayo de 2018, 184
páginas.

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