PRÁCTICA N°5

“RECONOCIMIENTO DEL PROCESO DE FOTOSÍNTESIS Y EXTRACCIÓN DE

CLOROFILA”

COMPETENCIA
Reconoce la función, metabolismo celular, familiarizándose con las funciones
metabólicas que sostienen la materia viva.

I. INTRODUCCIÓN
La fotosíntesis es un mecanismo basado en reacciones de óxido-reducción;
donde el agua se oxida liberando electrones y oxígeno, mientras el CO2 se reduce
para formar carbohidratos. Estos mecanismos representan una entrada de energía
para la biósfera.

Los primeros organismos fotosintéticos datan de hace tres mil quinientos millones
de años aproximadamente, y establecieron gradualmente el aspecto que manifiesta
hoy en día nuestro planeta. Los primeros organismos ancestrales vivían en un medio
anaeróbico, donde la energía era adquirida por procesos como la fermentación o la
glucólisis. Esto debió propiciar la acumulación paulatina de dióxido de carbono en
esta atmosfera primitiva. Si estos seres vivos utilizaban directamente la energía solar,
usando dióxido de carbono y liberando oxígeno, seguramente aprovechaban los
recursos de su medio de forma más eficiente, marcando un hito en la historia y
evolución de la vida en el planeta.

Para que el proceso fotosintético se lleve a cabo debe haber absorción de fotones
por parte de ciertos pigmentos; en las plantas superiores la clorofila a y clorofila b son
los principales pigmentos fotosintéticos, siendo la clorofila a la que cumple la mayor
función fotosintética. Estas moléculas absorben longitudes de onda azules y rojas. Su
estructura está compuesta de una cola hidrófoba una cabeza de anillo de porfirina la
cual absorbe la luz (Figura 1).
 Figura 1. Esqueleto en 2D de la clorofila. Fuente: Ben Mills.

Los cloroplastos son los organelos celulares donde ocurre la fotosíntesis, estos
varían en tamaño y forma. Poseen doble membrana que controlan el transito
molecular, estroma donde se realiza la conversión de CO 2 a carbohidratos y los
tilacoides donde se absorbe la luz y se forma el ATP.

La presente práctica tiene por finalidad evidenciar dicho proceso de forma sencilla
empleando materiales y procedimientos que poseemos en casa, así mismo realizar
una caracterización de los pigmentos fotosintéticos que participa en dicho proceso.

Los objetivos planteados son: Reconocer el proceso de fotosíntesis a través de la

medición fotosintética de forma indirecta. Así mismo, extraer clorofila de hojas de
espinaca empleando disolventes orgánicos como el alcohol y acetona estableciendo
con cuál de ellos se obtienen mejores resultados.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1 Material:
 Material biológico:
Hojas verdes de cualquier especie de planta (espinaca, hiedra, lechuga), para
primer experimento.
Hojas de espinaca frescas para proceso de extracción de pigmentos.
 Agua
 Dos Frascos de vidrio contenedores.
 Recipientes con graduación.
 Lámpara o dispositivo que proporcione luz
 Cronómetro
  Perforador
 Morteros o dispositivos para triturar
 Dos Jeringas de 10 mL.
 Papel filtro o papel toalla
 Bicarbonato de sodio
 Alcohol 96o
 Acetona.
 Jabón líquido

2.2 Procedimiento para reconocimiento del proceso de fotosíntesis a través de

la tasa fotosintética:
a. Preparación de solución de jabón líquido: En un recipiente graduado que
contenga 1/2 litro (2 tazas) de agua de caño dispensar 35 mL (dos cucharadas
y media) de jabón líquido aproximadamente. Rotular dicho recipiente con el
nombre “Solución Control”.
b. Preparación de solución de bicarbonato de sodio: En otro recipiente que
contenga 1/2 litro de agua, agregar 25 g. (5 cucharitas) de bicarbonato de sodio
aproximadamente y revolver. Luego agregar 250 mL. de la “solución control”
obtenida en procedimiento “a”, mezclar. Rotular con el nombre “Solución de
CO2”.
c. Obtenido ya las dos preparaciones, etiquetar a la solución control con el
siguiente nombre: “Solución control”, y al que colocamos al inicio como solución
de CO2, etiquetarlo con el nombre “solución de CO2”.
d. Con las hojas verdes, proceder a perforar hasta obtener 10 discos (cuadrados)
para cada prueba que vamos a realizar (en total 20 discos).
e. Retirar el embolo de la jeringa (Figura 2) y transferir con cuidado los discos de
las hojas al cuerpo o cilindro de la jeringa. 10 discos para cada tratamiento que
estamos desarrollando.
f. Colocamos nuevamente el embolo empujando hasta que quede pequeño
empujar el émbolo hasta que quede un pequeño volumen de aire y discos de
hojas en el cilindro. Se debe tener cuidado de no dañar los discos de hojas.
 Figura 2. Nombre de las partes que contienen las jeringas.
g. Con otra jeringa que nos sirva como pipeta, introducir un pequeño volumen de
solución de bicarbonato de sodio (4-5 ml) tratando de suspender los discos en
la solución agregada. Colocar un dedo que tape el orifico para que no se salga
el contenido y girar la jeringa, así mismo generar un vacío (con el embolo de la
jeringa, retrocediéndolo) entre la solución agregada en la jeringa con los discos
y tenerlo por 10 segundos (Figura 3).

Figura 3. Colocación de émbolo, agregación de discos y modo de sostener jeringa.

h. Los pasos deben repetirse de las veces que sean necesarias hasta que queden
de tal forma que nos permita efectuar el experimento (Figura 4).
 Figura 4. Modelo en que debe quedarnos los procedimientos efectuados en los
pasos anteriores.

i. Retiramos el émbolo y vertimos rápidamente los discos en el vaso etiquetado

como "Luz de 15 cm-Solución de CO2. En caso los discos se queden pegados
a las paredes de la jeringa, agregar solución de bicarbonato de sodio
preparado al inicio del experimento hasta que caigan.
j. Repetir los pasos para los discos agregados en la “solución de control de luz”.
k. Ambos vasos deben ser colocados a 15 cm de distancia de la fuente luz, es
decir la lampara. Por 30 minutos los cuales deben ser monitoreados y anotar
los datos en las Tablas 1 y 2, registrando minuto a minuto la cantidad de discos
que están flotando.

2.3 Procedimiento para extracción de clorofila:

a. Separar los peciolos y venas grandes de las hojas de espinaca y
posteriormente picarlas haciendo uso del cuchillo. Pesarlas.
b. Colocar en un mortero o algún dispositivo que permita triturar y agregar alcohol,
aproximadamente 50 mL. hasta obtener un líquido verde, el cual será filtrado
para separar los residuos sólidos del extracto.
c. Realizar el mismo procedimiento, pero empleando la acetona. Recuerde que
debe considerar la misma cantidad de material biológico y de extractante.
d. Al momento que usted tiene los dos extractos de clorofila realice la
comprobación de color colocando a contra luz (recuerde que debe uniformizar
los recipientes y deben ser de material vidrio) para poder establecer
 conclusiones, así mismo tome en consideración la pureza de los extractantes
que empleó (el alcohol de 96 o y la acetona de acuerdo a lo que usted
consiguió).

III. RESULTADOS
Anote los resultados obtenidos, en el caso del primer experimento, emplear la Tabla 1 y
2 para llenar los datos. Para el segundo experimento registrar resultados con fotos.

Tabla 1. Medición de cantidad de discos flotantes en tratamiento control denominado

“Solución control de luz”.
No de discos flotantes
Minuto Luz directa Luz de 15 cm-
Solución control solución de CO2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

IV. DISCUSIÓN
 Establecer la discusión de los resultados obtenidos empleando bibliografía pertinente,
la cual deberá ser agregada al apartado de referencias bibliográficas.

V. CONCLUSIONES
Establecer conclusiones.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Cogua, J. (2011). Curso virtual de fisiología vegetal. Bogotá, D. C.: Universidad

Nacional de Colombia. Disponible en:
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000051/lecciones/cap01/06_08.htm
2. Curtis, H. y Barnes, S. (2001). Biología. Editorial Panamericana, Pp. 961- 964.
3. Khan Academy. Luz y pigmentos fotosintéticos. Disponible en:
https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-plants/the-light-
dependent-reactions-of-photosynthesis/a/light-and-photosynthetic-pigments
4. Saenz, J. (2012). Fotosíntesis, concepciones, ideas, alternativas y analogías. Tesis
para optar título de Magister en Ciencias exactas Universidad Nacional de
Colombia, Bogotá.
5. SALISBURY, Frank y ROSS, Cleon. Fisiología vegetal. Editora Iberoamérica,
México, 1994. 759 p.
6. BIOTED “Biología educativa”. Ministerio de Ciencia e Innovación, Gobierno de
España [https://www.bioted.es/]. Citado 2020 octubre 25. Disponible en:
https://www.bioted.es/protocolos/FOTOSINTESIS.pdf