UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA N° 6
PREPARACIÓN DE MATERIALES Y
MEDIOS DE CULTIVO

➢ ASIGNATURA: Microbiología
➢ DOCENTE: BARRENECHEA BUSTAMANTE, Dante Moisés
➢ ESTUDIANTE: RAMOS VIZCARRA, Katherine Liseth
➢ CÓDIGO: 02192109
➢ GRUPO DE PRACTICA: Lunes 2 a 5 p.m
➢ FECHA: 14/11/2021

AYACUCHO-PERÚ
2021
I. OBJETIVOS

o Aprender y conocer el procedimiento sobre la correcta preparación de

materiales.
o Aprender sobre uso correcto de la autoclave con respecto a la
esterilización de materiales, como laminas, portaobjetos, pipetas, etc.
o Conocer los pasos correctos para preparar los medios de cultivo. Además,
diferenciar las clases de medio de cultivo.
II. INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la
variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.
La resistencia de estos microorganismos presenta diferentes grados y está
relacionada con su estructura, con su capacidad de producir esporas, o con la
presencia de ciertos componentes en su pared celular (lípidos, proteínas) o de
su grosor. Por ello, los distintos materiales, placas, medios de cultivos deben de
pasar centrales de esterilización para evitar la contaminación de medios,
cultivos, placas etc.
 III. PROCEDIMIENTO

o El personal debe estar provisto con su guardapolvo.

PRELAVADO o Preparación del detergente a utilizar.
o Sumergir los materiales utilizados en agua .

o Se debe cepillar interna y externa cada ítem de cepillo para lavado

LAVADO de materiales.
o Una vez finalizado el cepillado, se debe enjuagar bajo con abundante
agua.

FINALIZACIÓN Descartamos la solución de detergente utilizada.

Limpiar y secar cuidadosamente los materiales.
1. Verificar que el equipo contenga agua destilada de 1 a 2 cm desde la base hasta la
superficie.
2. Colocar los materiales y/o medios de cultivo dentro de los contenedores de
manera ordenada y taponeados correctamente.
3. Posteriormente se procederá a cerrar herméticamente (en cruz si es el caso) y se
mantendrá la espita abierta (hacia arriba).
4. Finalmente se enchufa y se enciende (ON) la autoclave, se esperará hasta que la
T° sea de 100°C.
5. Se procederá a cerrar la espita y recién empezará a subir la presión.
6. Dejar que finalice el autolavado.
7. Cuando finalmente tenga una T° de 121°C (paralelo en 15 LB) se podrá
controlar 15 minutos en material estéril y 20 minutos en material contaminado.
8. Concluido el tiempo requerido se procederá a apagar (OFF) y desenchufar la
autoclave.
9. Dejar que la T° baje hasta 60° C después se procederá abrir la autoclave con
precaución.
10. Limpiar y dejar agua destilada en la autoclave para su posterior uso.
 Los medios de cultivo son soluciones de nutrientes utilizadas para cultivar microorganismos.

Solidos

Placas

Proporción Semisólidos Tubos

en agar

Líquidos

Nutritivos

Componentes
adicionales

De
enriquecimiento
Nutrientes básicos

Utilidad
Componentes
inhibidores

Selectivos

Componentes
diferenciales
Diferenciales
 IV. CONCLUSIÓN
Durante la práctica aprendimos sobre los medios de cultivo, su preparación, etc.
Es importante resaltar que este permite el crecimiento de microorganismos en el
laboratorio, y que es necesario aportarles un medio con nutrientes y condiciones
fisicoquímicas adecuadas para su desarrollo. El medio de cultivo es aquel que
contiene agua y una serie de nutrientes, necesarios para su metabolismo, sin
embargo, no todos los microorganismos son cultivables en el laboratorio, pero sí
una enorme cantidad de ellos.

V. CUESTIONARIO
1. Señale 3 ejemplos (en cada caso) de medios de cultivos líquidos,
semisólidos y sólidos y describa para qué tipo de estudios se utilizan.
M Liquido M semisólido M solido
Caldo Dextrosa Sabouraud Agar SIM Agar SS
Es un medio líquido para el Medio semisólido destinado a Adecuado para el aislamiento de
cultivo de levaduras, verificar la movilidad, producción microorganismos Gram negativos
hongos y microorganismos de indol y de sulfuro de tolerantes a la bilis.
acidúricos que contaminan hidrógeno por los Permite distinguir fermentadores de
los productos microorganismos. lactosa y productores de H2S.
farmacéuticos. EJEMPLOS: EJEMPLOS:
Estudio Salmonella Shigella E. coli o Salmonella, Shigella: colonias
Motilid. (+) (-) (+) transparentes Lac-
H2S (+) (-) (-) o Proteus y Salmonella
Indol (-) (-) (+) thyphimurium: colonias
transparentes con centro negro
(productora de SH2 - formación
FeS).
o E. coli: colonias pequeñas, rojas o
rosadas si fermentan lactosa
(Lac+ ).

2. Averigüe la composición del agar nutritivo, caldo nutritivo y agar

Sabouraud
Agar nutritivo Caldo nutritivo Agar Sabouraud
Peptona de carne Peptona Peptona de Carne 5.0 g
Composición Extracto de carne Extracto de Peptona de Caseína 5.0 g
NaCl carne Dextrosa
Agar NaCl
Agua destilada Agua destilada
 3. Señale la composición del medio TSI y explique la función que cumplen
cada uno de los ingredientes.

COMPOSICIÓN
o Peptona de Caseína
Aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
o Peptona de Carne
o Cloruro de Sodio. Mantiene el balance osmótico.
o Lactosa
o Sacarosa Son los hidratos de carbono fermentables.
o Dextrosa
o Sulfato de Amonio Férrico. Indica producción de H2S a partir de tiosulfato.
o Rojo de Fenol. Indica fermentación de azúcares. Amarillo = Acida Rojo = Alcalina
o Agar. Actúa como agente solidificante.
o Tiosulfato de Sodio. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de
ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se
combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro.

4. ¿Qué es la peptona?; indique su función en un medio de cultivo

Las peptonas se utilizan como sustrato para el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos involucrados en numerosos procesos como la fermentación o
el cultivo. A su vez, son utilizados como fuente de nitrógeno, fósforo y azufre orgánicos
o como fuente de carbono y energía.
5.Explique por qué, en algunos casos, no se debe esterilizar un medio de
cultivo en autoclave; describa su preparación.
El proceso de esterilización en la autoclave en medios de cultivo se realiza porque los
microorganismos se encuentran en todos los ambientes y es necesario trabajar con
cultivo puros. Sin embargo, hay medios de cultivo como es el caso de Agar Salmonella
– Shigella (Agar SS), que no se realiza el proceso de esterilización. Este es un medio
de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de
algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia, su temperatura de incubación y almacenamiento se
encuentra a temperatura ambiente.
6. Indique en cada caso, el nombre de medio de cultivo o el microorganismo
que se cultiva.

MEDIO DE COMPOSICIÓN QUÍMICA FUNDAMENTO INTERPRETACIÓN

CULTIVO
Extracto de carne 5.0 La inhibición de Los pocos microorganismos fermentadores
Mezcla de peptonas 5.0 bacterias Gram de lactosa capaces de desarrollar, acidifican
Lactosa 10.0g Mezcla de positivas se obtiene el medio haciendo virar al rojo el indicador de
Agar SS sales biliares 8.5g Citrato de por una mezcla de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas
(Salmonella sodio 8.5g Tiosulfato de sales biliares y verde sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y
y Shigella) sodio 8.5g Citrato férrico brillante.; también otros microorganismos no fermentadores de
1.0g Agua 13.5g Rojo inhiben el crecimiento lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y
neutro 0.025mg Verde de la mayoría de los producen colonias transparentes. La
brillante 0.330mg coliformes y del producción de ácido sulfhídrico se evidencia
invasor Proteus spp. como colonias con centro negro debido a la
formación de sulfuro de hierro.
7.Describa las características físicas y químicas del agar-agar; explique
porque es de mayor uso en microbiología.
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a
los medios de cultivo, los cuales deben estar exentos
de todo microorganismo contaminante para facilitar
la identificación, crecimiento y desarrollo de otros
microorganismos que crecen en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en laboratorios,
denominados cultivo.
CARACTERÍSTICAS
o Es un hidrocoloide completamente soluble en agua a 100°C.
o Se puede disolver a bajas temperaturas.
o Al contacto con agua fría se hincha y puede aumentar hasta 30 veces su volumen.
o No aporta sabor ni aroma y carece de color.
o Es un poderoso agente gelificante.
o Es un gel termorreversible.
o Gelifica entre 35°C y 43°C y se derrite entre 85°C y 95°C.
o No aporta calorías.
o Es ligeramente saciante y laxante.
o Es el único hidrocoloide que ofrece gelatinas que pueden soportar temperaturas de
esterilización.
8.Explique los principales usos del medio de cultivo solido en
microbiología.
Medios Sólidos. se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias
sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las colonias,
lo que no permiten los medios líquidos. Ejemplos: Agar Común, Agar SS, Agar Cerebro
Corazón

9.Describa como acondicionaría pipetas y placas de Petri para su

esterilización si se requiere 500 pipetas y 500 placas de Petri. (puede usar
esquemas)

PIPETAS Y PLACAS PETRI

1. Se acomoda una fibra de
algodón en la boquilla de la
pipeta y placas Petri.
2. Las pipetas son bastantes y por
eso colocamos en cilindros
metálicos, de acuerdo a la
cantidad que pueda entrar en
ella.
3. Si aún falta esterilizar pipetas o
placas Petri, se realiza los
mismos pasos.
4. Una vez esterilizado, se guardan
correctamente. Dé manera que
no estén amontonadas.
VI. BIBLIOGRAFIA
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Lifeder.com. https://www.lifeder.com/agar-nutriente/
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SIM-MEDIBAC-LAB.pdf