Análisis estadístico por líneas paralelas

Realizar el análisis estadístico de líneas paralelas para determinar la potencia de una muestra respecto a un estándar, demostrando que los cálculos
Objetivo:
son correctos y, además la validez del ensayo, a fin de comprobar la consistencia y robustez del análisis estadístico aplicado a la prueba analítica.

a) Coloca en las celdas C18:F18 y C25 :F25 el valor de cada concentración evaluada en la curva de calibración (de mayor a menor concentración)
b Una vez obtenidos los valores de las absorbancia del ensayo organizar los valores de mayor a menor concentración para cada uno de los puntos de la
) curva para el estándar, la muestra y el blanco.
c) Coloca en las celdas C20:F22 los valores de las absorbancias del SRef de mayor a menor concentración (Tabla 1).
d
En las celdas G20:G22 Colocar el valor de las absorbancias del blanco y obtener el promedio del triplicado (Celda G23).
)
Instrucciones para el Coloca en las celdas C27:F29 los valores de las absorbancias de la muestra de mayor a menor concetración con sus respectivos valores por triplicado
llenado: e)
(Tabla 2).
f) Captura el número de diluciones realizadas que conforman la curva de calibración en la celda E113 (FVIII), E106 (FIX) y E103 (Hep).
g) Captura en la celda E114 (FVIII), E106 (FIX) y E104 (Hep) el número de replicados por dilución.
h
Coloca en la celda C164 (FVIII) C162 (FIX) y C154 (Hep) la concentración del vial de la muestra utilizada.
)
i) Verifica en la celda F165 (FVIII), F163 (FIX) y F154 (Hep) que la muestra cumpla con la especificación del método farmacopeico.
j) Firma y fecha en el apartado "Elaboró".

1 Ingreso de los datos crudos (absorbancias o tiempo) en las celdas correspondientes para el estándar, muestra y blanco.
2 Corrección de las absorbancias del Sref y muestra por el valor del promedio del blanco (cuando aplique).
3 Transformación logaritmica de los valores de las absorbancias o tiempo corregidos para el análisis de datos (cuando aplique)
4 Obtención del promedio del logaritmo de las absorbancias para cada concentración (S1-S4 y M1-M4).
Elaboración de la curva de calibración colocando en el eje de las ordenadas el logaritmo de la concentración y en el eje de las abcisas el promedio del
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logaritmo de las absorbancias, obtener el coeficiente de determinación (r2) el cual deberá ser ≥0.95 para cumplir con la aptitud del sistema.
6 Cálculo del promedio del logaritmo de las absorbancias de la sustancia de referencia y la muestra.
7 Obtención del valor de Y media la cual se obtiene del promedio de los datos obtenidos en el paso anterior.
Obtención del los valores de (y-Ymedia)2 éste se obtiene restando el valor obtenido en el punto 7 a cada logaritmo de las absorbancias corregidas del
8 estándar y de la muestra; elevando el resultado al cuadrado. El valor obtenido se considera como el valor de Sstot (error residual total); dicho valor se
utilizará para obtener el error residual aleatorizado (SSres) del método.
Obtención la sumatoria del promedio de los logaritmos de las absorbancias corregidas del Sref para cada nivel de concentración evaluado llamados S1,
9
S2, S3 y S4, este valor se denominará Ps (preparación total del Sref).
Obtención de la sumatoria del promedio de los logaritmos de las absorbancias corregidas de la Muestras para cada nivel de concentración evaluado
10
llamados M1,M2, M3 y M4, este valor se denominará PM (Preparación total de la Muestra).
Cálculo del valor del contraste lineal para el estándar (Ls) y la muestra (LM), dicho contraste relaciona las pendientes en función de la dosis-respuesta,
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estos datos se utilizarán para el cálculo de las fuentes de variación en el análisis de varianza.
Con la finalidad de calcular la suma de los cuadrados y elaborar el análisis de varianza se requiere obtener el valor de Hp, HL y K, cuyas ecuaciones se
12 encuentran desarrolladas en la sección "Fórmulas" en las celdas A28:A37. Para el cálculo se requiere el N° de diluciones (d) y el N° de replicas (n) y el
Orden de las número tratamientos (h) los cuales se insertaran manualmente.
secciones de la hoja 13 Cálculo de la suma de los cuadrados de los promedios de las absorbancias del Sref y de la muestra.
de trabajo: Elaboración de la tabla de "análisis de varianza (ANOVA)" para el diseño y número de tratamientos empleados, y efectuar las formulas indicadas para
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el cálculo de las fuentes de variación (grados de libertad, suma de cuadrados, cuadrados medios y razón de cuadrados medios F-ratio).
15 Obtención del cálculo de la media de los cuadrados dividiendo cada suma de los cuadrados por el número de grados de libertad que le corresponda.
Cálculo del valor de F-ratio (razón de error residual) dividiendo cada cuadrado medio de la regresión y no paralelismo por el cuadrado medio del error
16 residual. El valor de la F-ratio proporciona una idea de la validez o no del modelo aplicado al ensayo, es importante definir la significación estádistica
del F-ratio para las fuentes de variación anteriormente mencionadas; para ello hay que utilizar las tablas de distribución F de Snedecor.
Realizar consulta en la tabla de distibución F de Snedecor de acuerdo a los grados de libertad el valor de F-ratio para la fuente de variación de No
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paralelismo , el valor obtenido con el cáculo no debe ser mayor al obtenido en la tabla.
Corroborar que el valor de significancia para la fuente de variación debida a la regresión debe ser menor a 0.05 (altamente significativa) y el no
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paralelismo debe ser no significativo por lo que son paralelas si (p-valor) del No paralelismo es > 0.05.
Una vez verificada la validez del ensayo, se realiza la estimación de la potencia y de los límites de confianza, para ello registrar el valor de cada
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concentración de la curva y obtener la relación de las diluciones.
Calculó de los valores de Ln de la relación de las diluciones (l), pendiente (b), MM (Potencia de determinada muestra), Error residual medio (s), C
20 (estadistico que refiere al intervalo de confianza), V (coeficiente de varianza en el cálculo de límites de confianza) y t-student (t) el valor se obtiene de
las tablas de distribución de Student para p=0,05 y grados de libertad correspondientes al error residual.
21 Con los resultados obtenidos, realizar el cálculo correspondiente a la fórmula descrita en la celda A48 hoja de "fórmulas".
Determinación de los límites de la potencia relativa de la muestra, al obtener el antilogaritmo de los límites según sea el caso. Si se desea expresar los
22
límites del intervalo en unidades, multiplicarlos por la potencia asignada de la muestra.
Cálculo de la potencia relativa en el vial, registrar en la celda C163 (FVIII y FIX) y C154 (Hep) la presentación de la muestra en el vial, obtener el cálculo
23
de la potencia relativa de la muestra en la celda F164 y verificar si cumple de acuerdo a la especificación farmacopeica.

1. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos duodécima edición, (FEUM 12a Ed.) p.p. 759.
2. European Pharmacopoeia 10 th Edition. Vol I.Stattistical analysis of results of biologicals assays and tests. p.p. 687-697.
Bibliografía
3. Farmacopea de los Estados Unidos de América, USP 42 & NF 37,2019. The United States Pharmacopeia Convention Inc., Rockville, MD. 10852. Vol 5. Análisis de valoraciones biológicas. pp.7418-7431.

4. López, V. (2015). Bioensayos en hemoderivados: aspectos legislativos, estadísticos y analíticos. p.p. 67-85.
 El análisis por líneas paralelas combina el uso de pruebas y parámetros estadísticos básicos
(estadígrafo t para el paralelismo y diferencia entre las intersecciones, coeficiente de correlación de
Pearson), con el análisis de varianza, la cual posibilita evaluar el comportamiento de las curvas
dosis-respuesta en cuanto a la linealidad, paralelismo, significación de la regresión y diferencia
Lineas paralelas:
entre la respuesta media de diferentes preparaciones. De esta forma es posible establecer límites
de calidad que aseguren la calidad de los ensayos, (por ejemplo, r> 0.95; P<0.05 para la prueba de
paralelismo), así como investigar las causas de invalidación de estos, las cuales pudieran radicar en
una mala elección de diluciones u otras causas fácilmente corregibles.

Contrucción del analisis de lineas paralelas:

FEUM 12a Ed. pp 759

Diseño completamente al azar: Si la totalidad de las unidades de prueba (animales, tubos, étc.)
1) Diseño del ensayo parecen ser razonablemente homogeneas, en cuanto a las características que, suponga o sepa,
pueden afectar la respuesta, la asignación de las unidades a los diferentes tratamientos deben
hacerse completamente al azar.

Procedimiento estadístico que permite evaluar si un bioensayo satisface las condiciones del modelo
2) Analisis de varianza de líneas paralelas. Con base a este analisis se determina: 1)Si la relación entre la variable respuesta
o una trasformación de ésta y el logaritmo de la dosis, es de tipo lineal (en un bioensayo de tres
dosis). 2) si existe desviaciones al paralelismo entre el patrón y la(s) muestra (s), (ensayos de dos o
tres dosis)

La validez del ensayo se estudia mediante el análisis de varianza (ANOVA) donde la variación total
se subdivide en una serie de componentes y, cada uno de ellos, se compara con el error residual,
para saber si son o no son debidos al azar, durante éste analisis las preparaciones de las muestras
son comparadas con el estándar.

3) Validez del ensayo Para efectuar el cálculo de la potencia, es necesario asegurar que el ensayo satisface las condiciones
del modelo de líneas paralelas. Si el ensayo cumple con dichas condiciones se dice que es válido
para el cálculo de la(s) potencia(s) de las muestra(s). Un ensayo a dos dosis es válido si: 1) la
relación logdosis-respuesta es de tipo lineal. 2) Las relaciones log dosis-respuesta de las
preparaciones son paralelas. Cuando se haya establecido la validez del ensayo, es posible calcular la
potencia de la muestra y sus intervalos de confianza.

1) Calcular la media de la variable de respuesta de cada preparación.

4) Estimación de la potencia y limites de
confianza
2) Calcular el logaritmo de la razón de las dosis sucesivas(I). Razón de las diluciones
3) Calcular el valor de la pendiente b.
4) Calcular el logaritmo de la potencia relativa de las muestras.
5) Obtener la potencia relativa de la(s) muestra (s)
Si se desea expresar la potencia en unidades, multiplicar la potencia relativa de la muestra por la
potencia asignada de la muestra
El cálculo de la potencia del intervalo de confianza al 95%, para el verdadero valor de la potencia
relativa y la potencia en unidades de la muestra, se estima con los parametros:
a) Calcular el valor de la media de la regresión (C) Donde: SCr= Suma de los cuadrados de la
regresión, Cme= Cuadrados medios de la tabla del error, t= Valor de t de student, el cual se
determina en el anexo II. Con base en los grados de libertad del error del análisis de varianza
b) Calcular los límites del intervalo de confianza para el logaritmo de la potencia relativa
c) Determinar los límites de la potencia relativa de la muestra, al obtener el antilogaritmo de los
límites según sea el caso. Si se desea expresar los límites del intervalo en unidades, multiplicarlos
por la potencia asignada de la muestra.

La estimación de la precisión de la potencia relativa mediante el cálculo de los intervalos de

confianza y la varianza, basado en el uso de réplicas en un mismo ensayo, es una ventaja
importante del método articulo
1) Codificar los tratamientos según la tabla 1. dependiendo si se trata de un ensayo a dos dosis o a
tres dosis, y del número de preparaciones (un patrón, una muestra o un patrón, dos muestras)
2) Seleccionar el formato de registro de datos para el diseño y número de tratamientos empleados
según la tabla II, y efectuar los cáculos indicados (suma total, suma de los cuadrados y suma de los
cuadrados totales)
Procedimiento. 3) Construir la matriz de totales de los tratamientos y contraste para el ensayo empleado y efectuar
los cáculos indicados (totales y contrastes)
Procedimiento.

4) Construir la tabla de análisis de varianza para el diseño y número de tratamientos empleados, y

efectuar los cálculos indicados (grados de libertad, suma de cuadrados, cuadrados medios y razón
de cuadrados medios F-ratio).
5) Determinar el valor crítico de la razón de cuadrados medios F para cada fuente de variación,
exceptuando la del error, tomando en cuenta tanto los grados de libertad de la fuente de variación
respectiva (numerador) como los grados de libertad del error (denominador).
Cálculo de potencia por método estadístico de líneas paralelas (Logaritmo versus
Logaritmo)
Hoja de
Fecha: Cálculo:
Folio: Clave: HC-BT-001/1.0
Cliente:
Prueba:
Producto:
Lote:
Registro de la información referente al estándar A

Estándar Lote Concentración Caducidad Clave

Tabla 1. Absorbancias Sustancia de Referencia (S)

Concentración UI/mL

S1 S2 S3 S4 Blanco

Absorbancia

S.E.D.
Tabla 2. Absorbancias de la Muestra (M)
Concentración UI/mL

M1 M2 M3 M4

Absorbancia

Absorbancias - promedio blanco

S1 S2 S3 S4
Absorbancias
corregidas de la S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
Sustancia de S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
referencia
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
Absorbancias S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
corregidas de la
Muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Log de cada valor de absorbancia

S1 S2 S3 S4
Log de las S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
absorbancias del
estándar S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
Log de las S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
absorbancias de
la muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

#N/A
 Promedio de los logaritmos de cada nivel del estándar y muestra
S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Valores para la obtención del gráfico

Log de la Sustancia
Concentració de Muestra
n Referencia
S.E.D. S1 S.E.D. M1 S.E.D.
S.E.D. S2 S.E.D. M2 S.E.D.
S.E.D. S3 S.E.D. M3 S.E.D.
S.E.D. S4 S.E.D. M4 S.E.D.

Estándar
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Muestra
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Promedio de la Sustancia de
referencia=
S.E.D. Promedio de la muestra = S.E.D.

Promedio de todos los logaritmos de las replicas de la sustancia de referencia y de las muestras.

Y media= S.E.D.

(y-Ymedia)2= S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Suma (y-Ymedia)2= 0.00000

#N/A
 (PS) Suma total= 0.00000 (PM) Suma total= 0.00000
PS = S1+S2+S3+S4 PM=M1+M2+M3+M4

(Ls) Contraste Lineal= S.E.D. (LM) Contraste Lineal= S.E.D.

LS=(1*S1)+(2*S2)+(3*S3)+(4*S4)-(((d+1)PS)/2) LM=(1*M1)+(2*M2)+(3*M3)+(4*M4)-(((d+1)PM)/2)

Suma de cuadrados= S.E.D.

(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42)

d =(N° de diluciones diferentes)

n= (N° de replicados por dilución)
h =(referencia + N° de muestras) 2
Hp= (n/d)= S.E.D.
HL =((12*n)/(d3-d))= S.E.D.
K= ((n(PS+PM)2)/hd)= S.E.D.
Ssprep= (Hp*(PS2+PM2)-K)= S.E.D.
SSreg= (1/h*HL*(LS+LM)2) = S.E.D.
SSpar= ((HL*(LS2+LM2))-SSreg)= S.E.D.
SStrat =(n*(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42))-K=
S.E.D.
Sslin= (SStrat-SSprep-SSreg-SSpar)= S.E.D.
SStot =(SUMA(y-Ymed)2)= 0.00000
SSres= (SStot-SStrat)= S.E.D.

Análisis de Varianza (ANOVA)

G de Suma de Cuadrado
F
Fuente de variación Libertad cuadrados medio (p-valor)
(F-ratio)
(g.l.) (SS) (MS)
Preparaciones (h-1) SSprep 1 S.E.D. S.E.D. NA
Regresión (1) SSreg 1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Paralelismo (h-1) Sspar 1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Linealidad (h( d-2)) SSlin -4 S.E.D. S.E.D. Dictamen:
*Regresión lineal no
Tratamientos (hd-1) SStrat -1 S.E.D. S.E.D. significativa
*No se cumple el paralelismo
Error residual (aleatorizado) SSres 0 S.E.D. S.E.D.
TOTAL -1 S.E.D.

Valores significativos < 0.5

Son lineales si (p-valor) de la regresión ≤ 0.05
Son paralelas si (p-valor) del No paralelismo > 0.05
Diluciones (UI/mL)
Razón de Diluciones S.E.D.

I= (ln Razón de Diluciones)= S.E.D.

Pendiente= (b=HL(LS+LM)/I*n*h)= S.E.D.
MM= ((PM-PS)/(d*b))= S.E.D.
t= (t student p=0.05 GL=error res)= S.E.D.
s= (error residual medio)= S.E.D.
C= (SSreg/(SSreg-s2t2))= S.E.D.
V= (SSreg /(b2*n*d))= S.E.D.

#N/A
Ln de Limites de Confianza (C*MM ± (C-1*(C*MM2+2V))0.5)= S.E.D. ± S.E.D.

Tomando antilogaritmos de los Limites de Confianza, la S.E.D. S.E.D. S.E.D.

razón de potencias será:

Potencia Muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Relativo al Estimado (%) S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Concentración real en Vial Potencia de Concentración calculada

Dilución Cumple/No
(UI/Vial) la Muestra en Vial (UI/Vial)
cumple
Límite inferior S.E.D. S.E.D.
100 S.E.D. S.E.D. No Cumple

Límite superior S.E.D. S.E.D.

Potencia UI/Vial
80% 0
125% 0

Especificación

La potencia estimada es de 80 a 125 % de la actividad declarada.

Realizó:_________________________ Revisó:_________________________
Firma y Fecha Firma y Fecha

#N/A
 Cálculo de potencia por método estadístico de líneas paralelas (Factor IX)

Hoja de
Fecha: Cálculo:
Folio: Clave: HC-BT-001/1.0
Cliente:
Prueba:
Producto:
Lote:
Registro de la información referente al estándar

Estándar Lote Concentración Caducidad Clave

Tabla 1. Tiempos del Estándar (S)

Concentración UI/mL

S1 S2 S3 S4 Blanco

Tiempo (seg)

S.E.D.
Tabla 2. Tiempos de la Muestra (M)
Concentración UI/mL

M1 M2 M3 M4

Tiempo (seg)

Log de los tiempos obtenidos para muesta y estándar

S1 S2 S3 S4
Log de los S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
tiempos del
Estándar S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
Log de los S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
tiempos de la
muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Promedio de los logaritmos de cada nivel del estándar y muestra

S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

#N/A

Valores para la obtención del gráfico

Log de la Log del Log del
Concentració tiempo del tiempo de
n Estándar la muestra
S.E.D. S1 S.E.D. M1 S.E.D.
S.E.D. S2 S.E.D. M2 S.E.D.
S.E.D. S3 S.E.D. M3 S.E.D.
S.E.D. S4 S.E.D. M4 S.E.D.

Estándar
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Muestra
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Promedio de la Sustancia de
referencia=
S.E.D. Promedio de la muestra = S.E.D.

Promedio de todos los logaritmos de las replicas de la sustancia de referencia y de las muestras.

Y media= S.E.D.

(y-Ymedia)2= S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Suma (y-Ymedia)2= 0.00000

(PS) Suma total= 0.00000 (PM) Suma total= 0.00000

PS = S1+S2+S3+S4 PM=M1+M2+M3+M4

(Ls) Contraste Lineal= S.E.D. (LM) Contraste Lineal= S.E.D.

LS=(1*S1)+(2*S2)+(3*S3)+(4*S4)-(((d+1)PS)/2) LM=(1*M1)+(2*M2)+(3*M3)+(4*M4)-(((d+1)PM)/2)

#N/A

Suma de cuadrados= S.E.D.

(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42)

d =(N° de diluciones diferentes)

n= (N° de replicados por dilución)
h =(referencia + N° de muestras)
Hp= (n/d)= S.E.D.
HL =((12*n)/(d3-d))= S.E.D.
K= ((n(PS+PM)2)/hd)= S.E.D.
Ssprep= (Hp*(PS2+PM2)-K)= S.E.D.
Ssreg= (1/h*HL*(LS+LM)2) = S.E.D.
Sspar= ((HL*(LS2+LM2))-SSreg)= S.E.D.
SStrat =(n*(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42))-K=
S.E.D.
Sslin= (SStrat-SSprep-SSreg-SSpar)= S.E.D.
SStot =(SUMA(y-Ymed)2)= 0.00000
Ssres= (SStot-SStrat)= S.E.D.

Análisis de Varianza (ANOVA)

G de Suma de Cuadrado
F
Fuente de variación Libertad cuadrados medio (p-valor)
(F-ratio)
(g.l.) (SS) (MS)
Preparaciones (h-1) SSprep 1 S.E.D. S.E.D. NA
Regresión (1) SSreg 1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Paralelismo (h-1) Sspar -1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Linealidad (h( d-2)) SSlin 0 S.E.D. S.E.D. Dictamen:
*Regresión lineal no
Tratamientos (hd-1) SStrat -1 S.E.D. S.E.D. significativa
*No se cumple el paralelismo
Error residual (aleatorizado) SSres 0 S.E.D. S.E.D.
TOTAL -1 S.E.D.

Valores significativos < 0.5

 Son lineales si (p-valor) de la regresión ≤ 0.05
Son paralelas si (p-valor) del No paralelismo > 0.05

Diluciones (UI/mL)
Razón de Diluciones S.E.D.

I= (ln Razón de Diluciones)= S.E.D.

Pendiente= (b=HL(LS+LM)/I*n*h)= S.E.D.
MM= ((PM-PS)/(d*b))= S.E.D.
t= (t student p=0.05 GL=error res)= S.E.D.
s= (error residual medio)= S.E.D.
C= (SSreg/(SSreg-s2t2))= S.E.D.
V= (SSreg /(b2*n*d))= S.E.D.

#N/A

Ln de Limites de Confianza (C*MM ± (C-1*(C*MM2+2V))0.5)= S.E.D. ± S.E.D.

Tomando antilogaritmos de los Limites de Confianza, la S.E.D. S.E.D. S.E.D.

razón de potencias será:

Potencia Muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Relativo al Estimado (%) S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Concentración real en Vial Potencia de Concentración calculada

Dilución Cumple/No
(UI/vial) la Muestra en Vial (UI/Vial)
cumple
Límite inferior S.E.D. S.E.D.
100 S.E.D. S.E.D. No Cumple

Límite superior S.E.D. S.E.D.

Potencia UI/Vial
80% 0
125% 0

Especificación

La potencia estimada es de 80 a 125 % de la actividad declarada.

 La potencia estimada es de 80 a 125 % de la actividad declarada.

Realizó:_________________________ Revisó:_________________________
Firma y Fecha Firma y Fecha

#N/A
 Cálculo de potencia por método estadístico de líneas paralelas (Absorbancia
versus Logaritmo de la concentración)
Hoja de
Fecha: Cálculo:
Folio: Clave: HC-BT-001/1.0
Cliente:
Prueba:
Producto:
Lote:

Registro de la información referente al estándar

Estándar Lote Concentración Caducidad Clave

Tabla 1. Absorbancias Sustancia de Referencia (S)

Concentración (UI/mL)
S1 S2 S3 S4 Blanco

Absorbancia

S.E.D.
Tabla 2. Absorbancias de la Muestra (M)
Concentración (UI/mL)
M1 M2 M3 M4

Absorbancia

Absorbancias - promedio blanco

S1 S2 S3 S4
Absorbancias
corregidas de la S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
Sustancia de S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
referencia
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
Absorbancias S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
corregidas de la
Muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Promedio de las absorbancias corregidas de

cada nivel
S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
 M1 M2 M3 M4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

#N/A

Valores para la obtención del gráfico

Log de la
Concentració Referencia Muestra
n

S.E.D. S1 S.E.D. M1 S.E.D.

S.E.D. S2 S.E.D. M2 S.E.D.
S.E.D. S3 S.E.D. M3 S.E.D.
S.E.D. S4 S.E.D. M4 S.E.D.

Estándar
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Muestra
m= S.E.D.
b= S.E.D.
R2= S.E.D.

Promedio de la Sustancia de
S.E.D. Promedio de la muestra = S.E.D.
referencia=

Promedio de todos las absorbancias de las replicas de la sustancia de referencia y de las muestras.

Y media= S.E.D.

(y-Ymedia)2= S1 S2 S3 S4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.

M1 M2 M3 M4
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
 Suma (y-Ymedia)2= 0.00000

(PS) Suma total= 0.00000 (PM) Suma total= 0.00000

PS = S1+S2+S3+S4 PM=M1+M2+M3+M4

(Ls) Contraste Lineal= S.E.D. (LM) Contraste Lineal= S.E.D.

LM=(1*M1)+(2*M2)+(3*M3)+(4*M4)-(((d+1)
LS=(1*S1)+(2*S2)+(3*S3)+(4*S4)-(((d+1)PS)/2) PM)/2)

#N/A

Suma de cuadrados= S.E.D.

(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42)

d =(N° de diluciones diferentes)

n= (N° de replicas por dilución)
h =(referencia + N° de muestras)
Hp= (n/d)= S.E.D.
HL =((12*n)/(d3-d))= S.E.D.
K= ((n(PS+PM)2)/hd)= S.E.D.
SSprep= (Hp*(PS2+PM2)-K)= S.E.D.
SSreg= (1/h*HL*(LS+LM)2) = S.E.D.
SSpar= ((HL*(LS2+LM2))-SSreg)= S.E.D.
SStrat =(n*(S12+S22+S32+S42+M12+M22+M22+M42))-K=
S.E.D.
SSlin= (SStrat-SSprep-SSreg-SSpar)= S.E.D.
SStot =(SUMA(y-Ymed)2)= 0.00000
SSres= (SStot-SStrat)= S.E.D.

Análisis de Varianza (ANOVA)

G de Suma de Cuadrado
F
Fuente de variación Libertad cuadrados medio (p-valor)
(F-ratio)
(g.l.) (SS) (MS)

Preparaciones (h-1) SSprep 1 S.E.D. S.E.D. NA

Regresión (1) SSreg 1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Paralelismo (h-1) SSpar -1 S.E.D. S.E.D. S.E.D. S.E.D.
No Linealidad (h( d-2)) SSlin 0 S.E.D. S.E.D. Dictamen:
*Regresión lineal no
Tratamientos (hd-1) Sstreat -1 S.E.D. S.E.D. significativa
Error residual (aleatorizado) SSres 0 S.E.D. S.E.D. *No se cumple el paralelismo

TOTAL ((d*n*h)-1) -1 S.E.D.

 Valores significativos < 0.5
Son lineales si (p-valor) de la regresión ≤ 0.05
Son paralelas si (p-valor) del No paralelismo> 0.05

Diluciones (UI/mL)
Razón de Diluciones S.E.D.

I =(ln Razón de Diluciones)= S.E.D.

Pendiente =(b=HL(LS+LM)/I*n*h)= S.E.D.
MM= ((PM-PS)/(d*b))= S.E.D.
t= (t student p=0.05 GL=error res)= S.E.D.
s =(error residual medio)= S.E.D.
C =(SSreg/(SSreg-s2t2))= S.E.D.
V= (SSreg /(b2*n*d))= S.E.D.

#N/A

Ln de Limites de Confianza (C*MM ± (C-1*(C*MM2+2V))0.5)= S.E.D. ± S.E.D.

Tomando antilogaritmos de los Limites de Confianza, la

S.E.D. S.E.D. S.E.D.
razón de potencias será:

Potencia relativa de la Muestra S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Relativo al Estimado (%) S.E.D. S.E.D. S.E.D.

Concentración real en Vial Potencia de Concentración calculada Cumple/No

Dilución en el Vial (UI/Vial)
(UI/vial) la Muestra cumple
Límite inferior S.E.D. S.E.D.
100 S.E.D. S.E.D. No Cumple
Límite superior S.E.D. S.E.D.

Especificación
La preparación a examinar no contiene más de la cantidad de heparina indicada en la etiqueta. Y
en ningún caso más de 0.5 UI de heparina por Unidad Internacional de factor IX.

Realizó:_________________________ Revisó:_________________________
Firma y Fecha Firma y Fecha
 Anexo I. Historial de Revisión
"Registro de Control de alta, modificación y baja de valores de las celdas reguladas"
Usuario de la acción Fecha Hora Hoja y celda modificada Valor nuevo Valor Antiguo Motivo del cambio
 Nombre Fórmulas

Promedio

Sumatoria

Ecuación de la recta

Pendiente

Intersección al eje y

Coeficiente de
determinación, R²

Y media
(y-Ymedia)2

Preparación total del Sref

Preparación total de la
muestra

Contraste Lineal del

estándar
Contraste Lineal de la
muestra

Suma de cuadrados

Multiplicadores utilizados
en el análisis de varianza

Término de corrección
utilizado en el cálculo de
sumas de cuadrados en el
análisis de varianza
Suma de cuadrados de las
preparaciones

Suma de cuadrados de la
regresión

Suma de cuadrados del no

paralelismo

Suma de cuadrados de los

tratamientos

Suma de cuadrados de la
no linealidad

Suma de cuadrados del

error total

Suma de cuadrados del

error residual

Cuadrado medio

F-ratio

ln Razón de Diluciones

Pendiente

Potencia determinada de
la muestra
t= (t student p=0.05
Consultar valor en tabla t-student
GL=error res)

s= (error residual medio)

C= estadistico que refiere

al intervalo de confianza

V= (SSreg /(b2*n*d))

Limite de confianza