UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
BIOLÓGICA Y FISIOLOGÍA ANIMAL

CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

Semana 4. Inhibición de la actividad de la

Succinato deshidrogenasa. . (E.C.1.3.9.1.)

2021 -I
 1. INTRODUCCIÓN

Una oxidorreductasa es una enzima que

cataliza la transferencia de electrones desde
una molécula donante (el agente reductor)
a otra aceptora (el agente oxidante, es
decir, transferencia de hidrógeno (H) o
electrones (e-) de un sustrato a otro, según la
reacción general:

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la

citocromo oxidasa
1. INTRODUCCIÓN
Inhibición Competitiva
 1. INTRODUCCIÓN

La Succinato
deshidrogenasa o Succinato
coenzima Q reductasa, es una
flavoproteína ligada a la
membrana
interna mitocondrial que
interviene en el ciclo de
Krebs y en la cadena de
transporte de electrones y, que
contiene FAD (flavín-adenín-
dinucleótido)
unido covalentemente (grupo
prostético).
 1. INTRODUCCIÓN

Posee un peso molecular de

alrededor de 100 kDa, contiene
FAD, hierro y azufre, lábiles
frente a los ácidos.
El enzima posee dos
subunidades, cuyos pesos
moleculares son 30 kDa y 70 kDa
respectivamente. SUCCINATO DESHIDROGENASA

Estructura cristalina de la succinato deshidrogenasa mitocondrial.

Adaptada de Nicholls y Ferguson, 2013.
1. INTRODUCCIÓN
Clasificación según la CE:
Oxidorreductasas
1.3 Actuando sobre el grupo de donantes CH-CH
1.3.99 Con aceptores fisiológicos desconocidos.
1.3.99.1 succinato deshidrogenasa

Cataliza la siguiente reacción:

 1. INTRODUCCIÓN

El H2 cedido por el succinato puede ser transferido

del FADH2 a un colorante susceptible como el
azul de metileno que al cambiar su estado redox
pasa de coloreado a incoloro o viceversa.
1. INTRODUCCIÓN

AZUL

INCOLORO
FORMA REDUCIDA
• Indicador de óxido
SUCCINATO DESHIDROGENASA reducción (acepta los
electrones provenientes
del FADH2).

FORMA OXIDADA AZUL

1. INTRODUCCIÓN

malonato malato

Ácido Ácido
oxalacético oxalico
2. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

▪ Demostrar el efecto inhibidor del malonato, como un inhibidor

competitivo de la enzima Succinato deshidrogenasa.
▪ Resolver ejercicios de inhibición enzimática.
3. MATERIALES

MATERIAL BIOLÓGICO
• Homogenizado hepático.

MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

• Gradilla para tubos
• Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
• Pipetas de 1 mL, 2 mL, 5 mL

REACTIVOS Y SOLUCIONES
• Buffer fosfato de sodio 0,1 M pH 7,4
• 2,6 diclorofenolindofenol 0,02%
• Solución de succinato 0,1 M
• Solución de malonato 0,1 M
4. Procedimiento
Tabla 1. Sistema de incubación y evaluación del efecto inhibidor del malonato.

Observar y anotar los resultados según el color de cada uno de los tubos.
5. RESULTADOS

En tuno I encontramos buffer fosfato, el indicador (2,6-

diclorofenolindofenol) y Enzima, no se encuentra la S, no se
realiza REDOX; por tanto no hay transferencia de electrones, el
indicador permanece oxidado. AZUL.

SUCCINATO
DESHIDROGENASA

AZUL
5. RESULTADOS

En el tubo II tenemos buffer fosfato, sustrato, enzima (deshidrogenasa

succínica) y el indicador. Hay REDOX, y los electrones llegan a reducir al
indicador. INCOLORO.

SUCCINATO INCOLORA
DESHIDROGENASA
5. RESULTADOS
En el tubo III además del buffer fosfato, sustrato, enzima e indicador.
Se adicionó el inhibidor competitivo (malonato de sodio) en mayor
cantidad que la [S]. Se inhibe la ENZIMA, NO HAY REDOX, el
indicador no es reducido por que no le llega los electrones. AZUL.

Inhibidor

SUCCINATO
DESHIDROGENASA

AZUL
5. RESULTADOS
En el tubo IV tenemos buffer fosfato, sustrato, enzima e indicador,
además presenciamos un inhibidor no competitivo (cloruro de
mercurio). Se inhibe la ENZIMA. No de produce REDOX. El
indicador no se reduce, permanece oxidado. AZUL

Inhibidor

SUCCINATO
DESHIDROGENASA

AZUL
5. RESULTADOS
En el tubo V se agrego Enzima, Sustrato e Inhibidor. La [S] >> [I]. El S
tiene mas probabilidad de llegar al centro activo. Hay REDOX, el
indicador se reduce. INCOLORO.

INCOLORA

SUCCINATO
DESHIDROGENASA
Resolución de ejercicios