Taller G4 Jhon Ortiz Y Greis Mestizo

Jhon Ortiz Greis Mayerly
INGENIERÍA GENÉTICA
1-1-2020
GREIS MAYERLY MESTIZO

JHON ORTIZ NASCON
UNIVERSIDAD DEL CAUCA SEDE

SANTANDER DE QUILICHAO CAUCA
FACULTAD DE CIENCIAS
AGRARIASINGENIERIA
AGROINDUSTRIAL 2020
INGENIERÌA GENETICA
INGENIERÍA GENÉTICA
GREIS MAYERLY MESTIZO

JHON ORTIZ NASCON
BIOTECNOLOGIA
ROCIO BONILLA
UNIVERSIDAD DEL CAUCA

SEDE SANTANDER DE QUILICHAO CAUCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
2020
TALLER EVALUATIVO DE INGENIERÍA GENÉTICA (4)

PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
UNIVERSIDAD DEL CAUCA
1. ¿En qué consiste la mutación por sustitución, deleción y adición de bases? Esquematiza.
¿Cuál es su importancia en el proceso evolutivo?
Mutación
Adición de bases Deleción Sustitución
Una inserción de un par de Falta de material

bases (cambio en el marco de genético: -Cambio de un
lectura) - Un par de bases aminoácido por otro en
la lectura del código de los una proteina
- Fragmento de un gen
pares de bases de tres en tres se -Cambio de un
- Gen entero nucleótido por otro en
desplaza esto hace que la
proteína varie haciendo que se - Parte de un el ADN o ARN
presente por ejemplo un cromosoma (Austin, 2019).
defecto de (Muenke, 2019)
nacimiento( Muenke, 2019 )
2. ¿Qué son genes constitutivos y en qué se diferencian de los genes inducibles?

Los genes constitutivos son los que codifica para una proteína indispensable para la función
celular. Se expresa en todas o la mayoría de las estirpes celulares y también se les conoce como
genes estructurales, en oposición a los genes específicos de tejido [ CITATION Ins20 \l 3082 ] , los
cuales los se diferencian de los genes inducibles porque son aquellos en los que la presencia de
una sustancia (un inductor) en el medio ambiente, enciende la expresión de uno o más genes
(genes estructurales) involucrados en el metabolismo de tal sustancia.[ CITATION Gen20 \l 3082 ]
3. ¿Cuáles fueron los experimentos de Griffith, Avery-McLead-McCarty y Harshey-Chase

y cuál fue su contribución en los avances de la Ingeniería genética?
Experimento de Griffith Experimento de Avery- Experimento de Hershey-

McLead-McCarty Chase
Griffith realizó una serie de Recrearon el experimento de Realizaron unos
experimentos en el que Griffith llegando a los experimentos destinados
infectaba ratones con la mismos resultados y a dilucidar si el ADN o
bacteria Streptococcus adicionalmente tomaron proteínas era el material
pneumoniae la cual una muestra de la cepa S hereditario.

provoca neumonía la muerta por calor y la Marcaron el ADN y
separó en cepas: emplearon en los
-Cepas S se caracterizó por siguientes ensayos
formar colonias de empleando tubos de
aspecto liso, células ensayo:
rodeadas por cápsulas -Introdujeron el precipitado de
externas y altamente la cepa S muerta por calor,
letales al producir una enzima que digería
neumonía carbohidratos y el
-Cepa R se caracterizó por resultante lo mezclaron
formar colonias de con cepa R viva, lo que
aspecto rugoso, células produjo la transformación
sin cápsula externa y no bacteriana de R en S.
producen neumonía -Introdujeron el precipitado de proteínas con isotopos
(Inocuas). cepa S muerta por claro y radiactivos en un cultivo
El experimento consistió en: sin carbohidratos más una de virus para así
a. Inocular bacterias de la enzima que digería identificar cuál de los dos
cepa S en ratones sanos proteínas y el resultante lo entraba en la bacteria y
los cuales adquieren mezclaron con cepa R este sería el material
neumonía y murieron viva, se produjo la hereditario (factor
b. Inocular bacterias de la transformación bacteriana transformador de
cepa R en ratones sanos de R en S. Grifftih), como el ADN
los cuales no adquieren -Introdujeron al precipitado de contiene fosforo (P) lo
neumonía y vivieron cepa S muerta por calor, marcaron como fosforo-
c. Hirvió un cultivo de sin carbohidratos ni 32 radiactivo y las
bacterias de la cepa S proteínas, agregaron una proteínas contiene
matándolas por calor e enzima que digería ARN y azufre(S) lo marcaron
inoculo el fluido alcohol se obtuvo ADN como azufre-35;
obtenido en ratones los puro de la cepa S el cual encontrando que el
cuales vivieron. lo mezclaron con cepa R azufre-35 quedo fuera de
d. mezcló bacterias de la viva y también se produjo la célula y el fosforo-32
cepa S muertas por calor la transformación en el interior con lo cual
con bacterias vivas de la bacteriana de R en S. se señaló que el ADN es
cepa R e inyectó la el soporte físico de la
mezcla en ratones los De este modo se concluyó que herencia. [ CITATION
cuales adquirieron el agente transformante de Qui18 \l 9226 ]
neumonía y murieron. las bacterias era e ADN el
cual contenía la [ CITATION Kha18 \l 9226 ]
información necesaria que
hacía letal a la cepa R y la
cepa S[ CITATION
Esc201 \l 9226 ]
Griffith notó que cuando

mezcló la cepa
R(inocua) con la cepa S
muerta por calor “algo”
transformaba la cepa R
en cepa S provocando la
muerte del ratón y
multiplicación de cepa S
en el ratón, él no puedo
explicar este fenómeno
y lo llamó
“transformación
bacteriana” [ CITATION
[ CITATION San11 \l 9226 ]
Esc20 \l 9226 ]
[ CITATION Rom12 \l 9226 ]
CONTRIBUCIÓN EN LOS AVANCES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

 Griffith identifico el material genético
 Avery-McLead-McCarty identificaron el “principio transformante” de Griffith
 Hershey-Chase concluyeron que el ADN constituía el material genético
(Khan academy, 2018)
4. Entre los integrantes del equipo de trabajo realicen un video tik-tok donde expliquen
concretamente las ciencias ómicas: genómica, transcriptómica, proteómica y
metabolómica.
5. ¿Para qué información codifican los plásmidos y cuál es la importancia de estos

elementos en la ingeniería genética?
Los plásmidos son moléculas de material genético (ADN) [ CITATION Her20 \l

9226 ] que en muchos casos codifican para enzimas capaces de degradar
algunos antibióticos, permitiendo que la bacteria sobreviva a la acción de los
mismos [ CITATION Bet02 \l 9226 ]. La importancia de los plásmidos en la ingeniería
genética tiene que ver con la aplicación en el control de enfermedades debido a
que pueden ser auxiliares (vectores) por otro lado también pueden ser usados
en biorremediación [ CITATION Her20 \l 9226 ].
6. Se tiene una cepa de Aspergillus productora de la enzima proteasa alcalina que es usada a
nivel industrial para la producción de hidrolizados proteicos. Para incrementar la productividad
en la obtención de la enzima, se quiere insertar en E. coli el gen responsable de producirla. Para
la obtención de la nueva cepa de E.coli recombinante se aplicó un proceso de clonación TOPO®
TA usado para la inserción directa de productos de Taq polimerasa amplificados por PCR, dentro
de un plásmido. La siguiente figura muestra el vector usado, este posee tres sitios indicadores
como son el gen LacZ que codifica para la enzima B-galactosidasa, Ampicilin que codifica
resistencia a ampicilina y Kanamycin que codifica resistencia a kanamicina. A continuación, se
muestra la secuencia que contiene el gen de interés en el microorganismo de origen.
a. Si el gen se encuentra en la posición 415 a 708, seleccione de las siguientes enzimas de

restricción la que usarías y señala el sitio de corte respectivo: BamHI: GGATCC, SacI:
GAGCTC, HindIII: AAGCTT.
*Corte Cohesivo.
b. Esquematiza el proceso de verificación de aislamiento del gen.
c. Si la inserción del gen de interés se realiza en la secuencia LacZ, consulta y realiza un
esquema gráfico representando los pasos de evaluación de la inserción del gen y transformación
celular.
5’ 3’
1 tactccacgg actctaccgt tccttcagcc agcgccagcg agcttatcga tcacgcgctg
61 caaatgaaca agtttgaagt cgagaaagac acaatcggcg acatcatcat tctgccgcgc
121 gagcaagcgg tgctgatgac ctactatcgc aacaacattg cgcatatgtt ggtgctgcct
181 tcgctgatgg cggcaatcgt cacccagcat cgcgatatct cccgcgacgt attgatggag
241 cacgtcaatg tgctttaccc aatgctgaaa gcggagctgt tcctgcgctg ggatcgcgac

301 gagttgccgg acgttattga tgcgctggca aatgagatgc aacgtcaggg gctgattacc
361 cagatggtgc cagtatcggt gatgtttggt cgcgcgccgg aagcttaaaa aggcgaagta
421 aacccgccgc tgcgtatgct taactacgta cagaaatttt tcgccgtact gtggctcggt
481 cgcgacagtt ttgtgcgcat ctcggagctc gtttcgctgc gccgtatggc ggatgaacac
541 ggcacggata aaactatcgc cccgggactg gcgcgcgtgg cgcgtatgca ctttgcccgt
601 caacgtctgg ctgctgtggg cccacgtctg cctgctcgtc aggatctgtt taataagctg
661 ctcgcctccc gcgcgggctc caaagcggta gaagatgaag cgcgcagcaa aaaaatctcc
721 catgaaaaag cgcagcagaa cgcgattgcg ctgatggaag agattgcggc gaagctttct
781 tacgagatga ttcgcctgac tgaccgtatt ctgggcttca cctggaaccg cctttaccag
841 ggcatcaacg tccataacgc cgagcgcgtt cgccagctgg cccacgacgg tcatgagctg
901 gtacgcttgc cttgccaccg cagccacatg gacgacctgc tgctttctta cgtgctgtat
961 caccaggggc tggtgccgcc gcaaaccgcc gctgggacca acctgaacgt ctggccggcc
1021 gggccgatgt tccgccgtct gggggcgttc tttagccgcc ggacgtttaa aggcaataaa
1081 ctccacgcca ccgttttccg tgagtagctc ggcgaacggt taagccgtgg ttagtccgtc
1141 gaggacgtcg tggaaggcgg tcgttcccgc acggggcgtt tgctggaccc gaaaaccggt
1201 acgctgtcga tgaccatcca ggcgatgctg cgtggcggca cgcgtccgat tacgctgatt
Extracción y verificación del

B) DNA
Identificación del gen de

interés
Separar el gen de interés por medio de enzimas de restricción. (HindIII)
Verificación del gen por medio de la técnica de

electroforesis
Tamaño molecular del gen
Secuenciación
Obtención del fragmento

que se desea secuenciar (templado o molde)
Purificación del templado
PCR de secuenciación
Purificación del producto de PCR de

secuenciación con sephadex
Deshidratación de la muestra
Desnaturalización con formamida
Electroforesis de secuenciación
Análisis
[ CITATION Már13 \l 3082 ]
C) PASOS PARA EVALUACIÓN DE LA INSERCIÓN DEL GEN Y

TRANSFORMACIÓN CELULAR
1. Cortar y pegar ADN
2. Transformación y selección bacteriana.
3. Se aplica un choque de calor a las bacterias lo que provoca que algunas recolecten
el plásmido.[ CITATION Kha181 \l 3082 ]
4. Los plásmidos que se usan en la clonación contienen un gen de resistencia a
antibióticos. Por lo tanto, todas las bacterias se colocan en una placa con antibióticos para
seleccionar las que recolectaron plásmido.
5. Las bacterias sin plásmido mueren. Cada bacteria con plásmido da lugar a
una colonia o comunidad de bacterias idénticas que contiene el plásmido.
6. Varias colonias se analizan para identificar una con el plásmido adecuado
(por PCR o con enzimas de restricción, por ejemplo).
7. Una colonia que contenga el plásmido adecuado se deja crecer a mayor escala y
se utiliza para producir proteína o plásmido.[ CITATION Kha182 \l 3082 ]
E. E.Coli
Hi HindIII
plásmido
Corto con las tijeras

HindIII
moleculares para abrir el
plásmido e incorporar el
gen HindIII
plásmido
Inserción del Gen

E.coli
Plásmido
recombinante
Transformación y Selección de celulas
Plac LacZ
Hi HindIII
F1 ori
Puc Ori
Ampicilina gen de
resistencia
Hi las enzimas de restricción

HindIII, abren el vector Plac
Kanamycin
LacZ para incorporar el gen.
Hi HindIII
Hi HindIII
1 3
Inserción del fragmento DNA en el

vector plac Lac Z
No
Recombinante recombinan
te
Transformacion y Selección de celulas
4
5
7. Como hemos visto en clase, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en
inglés) es una de las técnicas más importantes en la ingeniería genética. Para comprender su
fundamento primero debes recordar y entender el proceso de replicación in vivo, que es el
fundamento sobre el cual se desarrolló esta técnica. Revisa este video ilustrativo que te ayudará a
recordar este proceso que ocurre naturalmente en las células.
Para recordar los fundamentos de la técnica de PCR revisa este material.
Ahora que ya has recordado el proceso de replicación in vivo e in vitro:
a. Completa el siguiente esquema indicando, en la casilla correspondiente, cada uno de los

componentes que participan y las etapas de un ciclo.
Componentes:
-Taq polimerasa
-Cebadores
-ADN molde
-Nucleótidos
Desnaturalización
Templado
Extensión
(Khan Academy, 2018)
b. Analiza las etapas que ocurren en cada proceso (in vivo y PCR), revisa los componentes que
participan y realiza un cuadro comparativo donde indiques cuáles son las principales diferencias
entre ambos.
ETAPAS DE LA PCR
INICIO: Se debe calentar hasta una temperatura entre 94 y 98ºc para desnaturalizar la cadena de
ADN
1. DESNATURALIZACIÓN: mediante el calor se separan las dos cadenas de las cuales está
constituido el ADN.
2. ALINEAMIENTO O UNIÓN DEL CEBADOR: El alineamiento sucede cuando la temperatura se
baja a una temperatura entre 40 a 68ºc durante un tiempo entre 20 y 40 segundos y los cebadores
actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada.
3. EXTENSIÓN O ELONGACIÓN DE LA CADENA: la temperatura de la reacción se eleva para que

la Taq polimerasa extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.
ELONGACIÓN FINAL: mediante una temperatura entre 70 y 74ºc durante un tiempo de 5 a 15

minutos se asegure que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado.
CONSERVACIÓN: Se realiza en una temperatura entre 4 y 15 °C durante un tiempo indefinido para
conservar la reacción a corto plazo. [ CITATION Equ08 \l 3082 ]
COMPONENTES
 ADN molde
 Cebadores
 Enzimas Taq polimerasa
 Tampones
 MgCl2
 Nucleótidos
[ CITATION Ben19 \l 9226 ]
ETAPAS DE LA REPLICACIÓN
1. INICIACIÓN: Empieza en la secuencia ORI aquí están las proteínas girasas las cuales
desestabilizan la estructura helicoidal del ADN, abriéndola y fijándola para que no se
desenrolle. Cuando se separan las cadenas las helicasas se encargan de romper los
enlaces de hidrogeno con esto se forma la horquilla de replicación asimétrica.
2. ELONGACIÓN: La ADN polimerasa reconoce el extremo 3’ del cebador y es la
encargada de la síntesis de DNA en dirección 5’ a 3’; se produce la abertura de la cadena
madre (cadena retardada) debido a que en una de las cadenas está el límite y se produce
la elongación discontinua por los fragmentos de okazaki. La cadena líder es continua
hasta encontrar un nuevo punto de iniciación de replicación.
3. TERMINACIÓN: Ingresa la DNA polimerasa de tipo I que tiene actividad
endonucleasa y es la encargada de degradar los cebadores y llenar los huecos empleando
el extremo 3’ de la cadena anterior y la enzima ligasa se encarga de sellar los cortes que
quedan. [ CITATION Ame15 \l 9226 ]
COMPONENTES
 DNA polimerasa
 Primasas
 Antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA)
 Topoisomerasa-II
[ CITATION Riv08 \l 9226 ]
DIFERENCIAS
PCR REPLICACIÓN
Método in vitro de amplificación de ADN Proceso natural que produce dos copias
donde se producen miles o millones de copias idénticas de ADN de una molécula de ADN
de ADN
Requiere de cebadores artificiales No requiere de cebadores artificiales

Las hebras dobles se separan aplicando una Las hebras dobles se separan por la enzima
alta temperatura ADN helicasa
Emplea la Taq polimerasa Emplea la ADN polimerasa

Se produce a tres temperaturas diferentes Se produce a la temperatura corporal dentro del
dentro de una maquina cuerpo de los organismos vivos.
Método in vitro Método en vivo

[ CITATION bcc20 \l 9226 ]
8. ¿Cuáles son las técnicas variantes de la PCR? Realiza un esquema (puede ser un mapa
conceptual, infografía, diagrama, etc.) donde las indiques y plasmes concretamente las
diferencias más importantes frente a la PCR convencional.
La solución de este punto se encuentra en un archivo de imagen realizado mediante un Mapa

conceptual.
[ CITATION DER99 \l 3082 ]

[CITATION Gon \l 3082 ]
[ CITATION Cas97 \l 3082 ]
[ CITATION NEW20 \l 3082 ]
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Obtenido de Estructura y función de la unidad fundamental de replicación del DNA
(replicón) en eucariontes.: https://www.redalyc.org/pdf/104/10415305.pdf
Romero, N. (30 de noviembre de 2012). algo de genética. Obtenido de Experimento de Griffith:
http://geneticaumbiomedicac1.blogspot.com/2012/11/experimento-de-griffith.html
Sanchez, R. (marzo de 2011). SlideShare. Obtenido de Apredizaje esperado :
https://es.slideshare.net/ProfeBiologiaMedia/material-gentico-12948041
Austin, C. (03 de diciembre de 2019). National Human Genome Research Institute. Obtenido de
Sustitución: https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Sustitucion
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%20un%20fragmento%20de%20cromosoma.
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https://sites.google.com/site/replicaciondeladn/etapas-de-la-replicacion-del-adn

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UNIVERSIDAD DEL CAUCA

TALLER EVALUATIVO DE INGENIERÍA GENÉTICA (4)

Adición de bases Deleción Sustitución

Una inserción de un par de Falta de material

2. ¿Qué son genes constitutivos y en qué se diferencian de los genes inducibles?

3. ¿Cuáles fueron los experimentos de Griffith, Avery-McLead-McCarty y Harshey-Chase

Experimento de Griffith Experimento de Avery- Experimento de Hershey-

pneumoniae la cual una muestra de la cepa S hereditario.

Griffith notó que cuando

[ CITATION Rom12 \l 9226 ]

CONTRIBUCIÓN EN LOS AVANCES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

5. ¿Para qué información codifican los plásmidos y cuál es la importancia de estos

Los plásmidos son moléculas de material genético (ADN) [ CITATION Her20 \l

a. Si el gen se encuentra en la posición 415 a 708, seleccione de las siguientes enzimas de

241 cacgtcaatg tgctttaccc aatgctgaaa gcggagctgt tcctgcgctg ggatcgcgac

Extracción y verificación del

Identificación del gen de

Separar el gen de interés por medio de enzimas de restricción. (HindIII)

Verificación del gen por medio de la técnica de

Tamaño molecular del gen

Obtención del fragmento

Purificación del templado

Purificación del producto de PCR de

Desnaturalización con formamida

[ CITATION Már13 \l 3082 ]

C) PASOS PARA EVALUACIÓN DE LA INSERCIÓN DEL GEN Y

Corto con las tijeras

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ELONGACIÓN FINAL: mediante una temperatura entre 70 y 74ºc durante un tiempo de 5 a 15

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[ CITATION DER99 \l 3082 ]

Romero, N. (30 de noviembre de 2012). algo de genética. Obtenido de Experimento de Griffith:

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