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INSTITTUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE LOS RIOS

SECRETARIA ACADEMICA DE INVESTIGACION E INNOVACION

DIRECCION DE DOCENCIA E INNOVACION EDUCATIVA

MATERIA:

ING.DE BIORREACTORES

DOCENTE:

DR. DANIEL PÈREZ PASCUAL

ACTIVIDAD:

PROCEDIMIENTO Y EQUIPOS AUXILIARES EN LA OPERACIÓN DE

BIORREACTOR

SEMESTRE:

SEPTIMO

NOMBRE DEL ALUMNO:

JOEL ALBERTO PÉREZ CRUZ

CARRERA:

ING. BIOQUIMICA

N° DE CONTROL:

18E20196

FECHA DE ENTREGA

29/11/2021
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INDICE
INTRODUCCION..............................................................................................................................3
OPERACIONES AUXILIARES.............................................................................................................5
Aire.............................................................................................................................................5
Vapor..........................................................................................................................................6
Agua de enfriamiento:................................................................................................................6
ESTERILIZACION..............................................................................................................................7
Esterilización continúa:..............................................................................................................7
INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DEL BIORREACTOR.....................................................................8
SENSORES FÍSICOS Y QUÍMICOS.....................................................................................................9
Uso de ordenadores...................................................................................................................9
SENSORES QUIMICOS...................................................................................................................10
pH.............................................................................................................................................10
Medición de oxígeno disuelto..................................................................................................10
Nivel de espuma.......................................................................................................................11
Flujo de aire..............................................................................................................................11
Medidor de nivel......................................................................................................................12
Presión.....................................................................................................................................12
Análisis del gas de salida..........................................................................................................12
Espectrómetros de masa..........................................................................................................13
CONCLUSION................................................................................................................................13
BIBLIOGRAFIA...............................................................................................................................14
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INTRODUCCION
Un biorreactor es un recipiente (dorna) o sistema con condiciones controladas (de
temperatura, oxigenación, presión, pH, concentración de gases y agitación) y
propicias para el crecimiento del microorganismo que se cultiva. Se trata de un
equipo que debe resistir a la corrosión, presión de esterilización y atender las
exigencias de cultivo de diferentes tipos de microorganismos. A pesar de estar
compuesto en su construcción por tecnologías avanzadas, es adaptable a
diferentes materiales y parámetros de control disponibles. (Osorio. O, et al. 2012)

El equipo donde se realiza el proceso se denomina biorreactor o fermentador. El

mismo provee todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como
mezclado, termostatización, suministro de oxígeno, entradas para adición de
nutrientes, control del pH, etc. Por otra parte, cuando se habla de sistemas de
cultivo o, también, métodos de cultivo, se hace referencia al modo de operar del
biorreactor, esto es en forma continua, discontinua o semicontinua. Para un
componente cualquiera del cultivo, incluida la biomasa, se puede plantear el
siguiente balance de materia en el biorreactor. (Baires Analitica. 2018)

Para poder llevar a cabo una fermentación con éxito es imprescindible y

obligatorio tener en todas las etapas cultivos libres de contaminantes, desde el
cultivo preliminar hasta el fermentador de producción. Por lo tanto, el fermentador
y su equipamiento, así como el medio de cultivo deben estar estériles antes de la
inoculación. Además, el aire que se suministra durante la fermentación debe ser
estéril y no deben existir roturas mecánicas en el fermentador que podrían permitir
la entrada de microorganismos. También se deben esterilizar los aditivos
(antiespumantes), sin embargo los ácidos y bases concentrados no es necesario
esterilizarlos. (Osorio. O, et al. 2012)
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Un biorreactor puede ser esterilizado, destruyendo los microorganismos, con algún

agente letal como calor, radiación o un producto químico o bien separando los
organismos viables mediante un procedimiento físico como la filtración. Durante la
fermentación se deben observar dos puntos para asegurar la esterilidad:
 Esterilidad en el medio de cultivo

 Esterilidad del aire que entra y sale

Para lo cual es necesaria una construcción apropiada del biorreactor que facilite la
esterilización, así como la prevención de la contaminación durante la
fermentación.
La importancia de la instrumentación de un biorreactor radica en la necesidad de
tener en los cultivos un control que permita optimizar el proceso. La estrategia de
control comienza con la medición de las variables que proveen un ambiente
adecuado en un proceso de fermentación. El diseño y construcción de los
elementos necesarios para el monitoreo de las variables del biorreactor,
requirieron conocimientos de las necesidades del biorreactor y su operación
específica, así como de los circuitos electrónicos involucrados en los dispositivos
de medición. (Osorio. O, et al. 2012).
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OPERACIONES AUXILIARES
Los servicios auxiliares necesarios en la operación de un biorreactor incluyen aire
comprimido, diversos gases comprimidos (nitrógeno, oxígeno, etc.), agua de
enfriamiento (agua helada y agua de torre), agua para servicios varios, vapor de
planta y energía eléctrica.

Aire
El aire tiene varios usos en un biorreactor, entre ellos por orden de importancia:
1. Proveer oxígeno al medio de cultivo.

2. Como fuerza motriz para la transferencia de momento y masa.

3. Como fuerza motriz para transferir líquidos de un recipiente a otro.

4. Para accionar instrumentación de control de tipo neumático.

5. Como medio de enfriamiento para los recipientes después de la esterilización.

La elección de aire a utilizar del uso que se haga de él. El aire debe ser seco y
libre de aceite. Además, cuando se requiera que el proceso o producto no se
afecte por la introducción de microorganismos ajenos, contenidos en la corriente
de aire, será necesario que este sea estéril. (TEMPLATE DESIGN BY
FREECSSTEMPLATES. 2013).

Vapor
El vapor de planta es utilizado como el medio principal de calentamiento en miles
de industrias, y para la generación de energía eléctrica como uso secundario.
Además, el vapor limpio o puro se utiliza en el procesamiento de alimentos y
medicinas, en la esterilización de productos y equipos, etc. Su uso generalizado se
debe a las siguientes razones:
1. La generación de vapor es una de las formas más económicas de generación
de energía.
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2. El vapor puede controlarse de manera relativamente sencilla debido a que

circula de una zona de alta presión a una de menor presión sin necesidad de otro
equipo.

3. El vapor es fácil de producir, ya que se obtiene del agua que además puede ser
reutilizable.

Un generador de vapor o caldera es aquel que transforma el agua en vapor

aprovechando el calor generado por la combustión de un material combustible,
teniendo como característica principal que es un recipiente cerrado sujeto a una
presión mayor a la atmosférica.

Agua de enfriamiento:
El agua como servicio auxiliar se utiliza como fluido de enfriamiento para el control
de la temperatura del caldo de fermentación en los biorreactores. Esta agua, a
diferencia del agua de proceso, nunca entra en contacto con las materias primas o
productos de la biorreacción, ni con las superficies en contacto con estos, sino que
circula a través de las chaquetas o serpentines según el diseño del biorreactor.

ESTERILIZACION
En todo proceso de fermentación se requiere la esterilización de los equipos a
usar para así evitar la contaminación biológica. La contaminación biológica es la
invasión de microorganismos extraños, sin interés industrial, del proceso. Con ello
se disminuye la productividad porque se da el crecimiento celular de la cepa
productora también del contaminante biológico. Además, si se opera en continuo
el microorganismo extraño puede desplazar al de interés.
A parte de estos problemas, el contaminante biológico puede degradar el producto
final o producir la lisis celular. Se deben de usar inóculos puros, esterilizar el
medio de cultivo, el reactor, conductos, válvulas, aditivos y corrientes del proceso.
Se debe mantener las condiciones de esterilización durante el proceso de
operación.
El proceso de esterilización consiste en la eliminación o destrucción de todos los
microorganismos presentes capaces de competir con el organismo deseado.
Sabiendo las características específicas del cultivo de interés se pueden encontrar
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las condiciones de operación más extremas que permitan desarrollarse a este

cultivo y no a ningún otro microorganismo. Se suele jugar con la temperatura y con
el pH. Este procedimiento sería de desinfección más que de esterilización. La
esterilización puede hacerse mediante calor húmedo o través de la filtración.
(esterilización de biorreactores y fermentadores. 2021)

Esterilización continúa:
La esterilización continua se lleva a cabo normalmente en 30-120 segundos a
140° C. El calentamiento del medio de cultivo para la esterilización continua puede
ser llevado a cabo mediante inyección de vapor o mediante intercambiadores de
calor.
Debido a la formación de condensados la solución nutritiva se diluye; para corregir
esto la solución caliente se bombea a través de una válvula de expansión a un
vaporizador y el condensado se retira mediante bombas de vacío de forma que la
solución esterilizada de nutrientes tiene la misma concentración después del
proceso de enfriamiento que antes. La desventaja de este proceso es la
sensibilidad que presenta a cambios en la viscosidad del medio y a variaciones en
la presión. En el proceso continuo que utiliza intercambiadores de calor, la
solución de nutrientes, en el primer intercambiador de calor, se precalienta a 90-
120° C durante 20-30 segundos por la solución nutritiva previamente esterilizada
que sale. Luego, en el segundo intercambiador de calor, se calienta
indirectamente con vapor a 140° C. Esta temperatura se mantiene durante 30-120
segundos en una tubería de mantenimiento antes de que sea colocada en el
primer intercambiador mediante enfriamiento preliminar y posteriormente en un
tercer cambiador para refrigeración a la temperatura del fermentador. La fase de
enfriamiento es sólo de 20-30 segundos.
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INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DEL BIORREACTOR

La instrumentación y control de un biorreactor requiere de sensores que midan las
variables de un proceso fermentativo, y sistemas que ajusten el equipo a un punto
óptimo de operación. Idealmente, los sensores deben de estar en línea, para
medir las propiedades físicas del cultivo, estos sensores deben ser esterilizables
para asegurar la asepsia del proceso.
Sin embargo, no todas las mediciones pueden ser hechas en línea, algunas
medidas fuera de línea, requieren de tomar muestras y analizarlas, lo cual
consume tiempo y hace lenta la respuesta de control (biomasa, sustrato,
metabolitos, etc.). En la Figura 1, podemos observar los principales instrumentos
de medición en un biorreactor.
Los sensores de propiedades físicas pueden ser monitoreados continuamente, y
son la temperatura, presión, poder de agitación, velocidad de agitación, viscosidad
del medio, flujo y concentración de gases y fluidos, espuma, volumen y masa.
Para la medición de las propiedades químicas se utilizan electrodos esterilizables
al vapor, de pH, redox, oxígeno disuelto y CO2. El más utilizado es el de pH,
aunque no tiene utilidad para todas las fermentaciones, sólo en las de tipo
continuo donde se necesita mantener un valor estable de acidez o basicidad. Para
ello, contamos con sensores de pH y oxígeno disuelto.

SENSORES FÍSICOS Y QUÍMICOS

Para llevar a cabo durante la fermentación medidas para el análisis de datos y el
control del proceso se han desarrollado sensores especiales para biorreactores
que difieren en cierto modo de los de las industrias químicas:
1) Todos los sensores localizados en el área estéril deben ser esterilizables.
2) Algunos sensores deben estar específicamente adaptados a las necesidades
bioquímicas.
Los parámetros físicos y químicos que se indican en la Tabla 2 pueden ser
medidos directamente en muchas plantas piloto o fermentadores de producción o
pueden ser medidos in situ en el laboratorio.
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Uso de ordenadores
Los ordenadores pueden facilitar el control y análisis de un conjunto de funciones
en los procesos de fermentación:
 Optimización mediante ordenador. Los ordenadores se utilizan en el salto
de escala y evalúan los parámetros de la fermentación y miden los efectos
de parámetros individuales sobre el comportamiento metabólico de los
cultivos.

 Control mediante ordenador. Los ordenadores pueden controlar los

procesos de fermentación. El control in situ de la fermentación se utiliza
ampliamente por muchas compañías a escala de producción.
Las aplicaciones de ordenadores en biotecnología se utilizan primariamente para
la adquisición de:
a) Adquisición de datos
b) Análisis de datos
c) Desarrollos de modelos de fermentación

SENSORES QUIMICOS

pH
El electrodo de vidrio es el elemento detector primario de las mediciones de pH. El
principio de medición se basa en el desarrollo de un potencial en la membrana de
vidrio sensible al pH, como resultado de la diferencia en la actividad del ion
hidrógeno en la muestra y una solución estándar de referencia (solución de cloruro
de potasio) contenida dentro del electrodo. El potencial del electrodo proporciona
un voltaje que se expresa como pH. (Mettler-Toledo International Inc. all rights
reserved. 2021).

Medición de oxígeno disuelto

Los sensores de medición de oxígeno disuelto (OD) consisten básicamente de una
camisa de acero inoxidable o de cristal que contiene dos electrodos y un electrolito
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adecuado. Para separar los electrodos y los electrolitos del caldo de fermentación,
el sensor está cubierto por una membrana.
El oxígeno difunde a través de la membrana y se reduce en el cátodo, que está
polarizado negativamente con respecto al ánodo. Esto produce una corriente que
puede ser traducida como concentración de oxígeno. Habitualmente se recurre al
uso de sondas de tipo polarigráfica y galvánica. La diferencia entre ellas es que
éstas últimas son más baratas. Las sondas polarigráficas pueden ser
fraccionablemente más rápidas y tener una vida útil más larga. Realmente las
sondas OD no miden la concentración de oxígeno disuelto, sino la actividad o la
presión parcial del oxígeno. (Osorio. O, et al. 2012).

Por esta razón las sondas OD son frecuentemente calibradas para leer el
porcentaje de saturación utilizando aire y nitrógeno libre de oxígeno como los
puntos de 0-100% de calibración. Es posible sin embargo relacionar la presión
parcial del oxígeno con la concentración de oxígeno disuelto utilizando la Ley de
Henry, ya que la solubilidad del oxígeno en los caldos de fermentación es muy
baja.

Nivel de espuma

La formación de espuma representa un problema serio en las fermentaciones ya

que se fomenta la contaminación mermando el rendimiento u obstaculizando
filtros. Comúnmente muchos medios de cultivo fomentan la formación de espuma,
principalmente en los cultivos aerobios por la producción de agentes espumantes
como proteínas, polisacáridos y ácidos grasos. El control puede realizarse por
métodos mecánicos, químicos o una combinación de los dos.

Nivel de agitación

Son comunes los rotámetros los cuales determinan las revoluciones por minuto
mediante mecanismos de inducción, generación de voltaje, sensores de luz o
fuerzas magnéticas (tacómetros eléctricos). Éstos permiten una medición directa
de las señales para alimentar los instrumentos registradores o controladores de
panel. El tacómetro eléctrico se emplea un transductor que produce una señal
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analógica o digital como conversión de la velocidad de giro de la máquina. (Osorio.

O, et al. 2012).

Flujo de aire
En fermentaciones aerobias el aire es transportado a través del fermentador para
suministrar oxígeno y también para remover CO2, lo cual de otro modo podría
afectar la actividad enzimática. En reactores de columna de burbujeo, promueve la
mezcla del medio de cultivo. Normalmente las velocidades de flujo de aire se
encuentran en el rango de 0.5-1.5 vvm (volúmenes de air por volumen de reactor
por minuto.
La medición de flujo de gas, incluye el suministro de aire al fermentador, para la
toma de muestras de gas para el análisis y para el suministro de gas de amoniaco
en el control de pH. Los instrumentos más usados para la medición de flujo son los
rotámetros u los medidores térmicos de flujo de masa. En los rotámetros la
velocidad de flujo e determina por medio de un flotador que se mueve libremente
en el interior de un tubo graduado, creciente y montado verticalmente.
Los medidores de flujo de aire másico determinan el flujo de gas detectando las
diferencias de temperatura a lo largo de un dispositivo calefactor colocado en el
paso del gas. (Osorio. O, et al. 2012).

Medidor de nivel
Los indicadores de nivel pueden ser de nivel de vidrio y medidores de presión
diferencial. En los indicadores de nivel de vidrio se instala en forma de que el
líquido se comunique con el indicador de vidrio paralelo al reactor. En los
medidores de presión diferencial, una celda de presión diferencial se puede usar
como transmisor de nivel, ya que el nivel del líquido se refleja como una presión
equivalente a la altura del líquido asociado con la densidad de este.
Otra forma de conocer el nivel del líquido, es por medio de un sensor del nivel del
líquido, que mide la capacidad del condensador formado por un electrodo
sumergido en el líquido y en las paredes del tanque. La capacitancia registrada
depende linealmente del nivel del líquido. (Osorio. O, et al. 2012).
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Presión
Las variaciones excesivas de presión no solo pueden provocar pérdidas de
producto sino que también daño a l equipo y al personal de operación. El
biorreactor suele someterse a presiones de esterilización con el fin de prevenir
posibles riesgos de contaminación por residuos remanentes.
Algunas veces el medio de cultivo se esteriliza en el interior del birreactor, por lo
cual es indispensable el control de la presión, con el fin de evitar el deterioro de los
componentes del medio de cultivo. Para el control de la presión suelen usarse
manómetros de presión o de Bourdon.

Análisis del gas de salida

El gas que abandona el reactor contiene diversos tipos de gases, dependiendo del
tipo de reacción. En reacciones biológicas, los principales gases presentes en el
gas de salida con CO2 y O2. La determinación de las concentraciones de estos
gases es un indicativo de la actividad metabólica presente en el interior del reactor
durante la reacción. La diferencia del contenido de oxígeno a la entrada en la
corriente de salida es igual a la cantidad de oxígeno transferido al sistema.
El contenido de oxígeno se puede determinar por medio de analizadores de gas
de tipo paramagnéticos. Los analizadores más populares son los de viento
magnético (termomagnético) y el de deflexión (magnetodinámico). Las moléculas
paramagnéticas tales como el oxígeno presentan electrones no apareados los
cuales giran alrededor del núcleo. Cuando un flujo magnético es aplicado, los
átomos tienen a orientarse en la dirección del campo. (Osorio. O, et al. 2012).

Espectrómetros de masa
Se basan en la separación de las moléculas ionizadas en el vacío. La separación
basada en la relación de masa a carga se consigue en instrumentos magnéticos o
de cuadrapolo. Potencialmente los espectrómetros de masas pueden ser
utilizados tanto para el análisis continuo de gases en línea como de líquidos. Para
el análisis de líquidos, una sonda que soporte una fuerte membrana permeable, se
inserta en el caldo de fermentación y las sustancias disueltas como el O2 y el CO2
y cualquier líquido de suficiente volatilidad son arrastradas fuera de la solución
aplicando vació.
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Los espectrómetros de masas pueden ser utilizados para el análisis

simultáneamente de cualquier componente de la fase gaseosa; sin embargo, en
las fermentaciones está restringido tradicionalmente a oxígeno y bióxido de
carbono como un sofisticado analizador de gases. (Osorio. O, et al. 2012).

La principal desventaja del espectrómetro de masas es su elevado consto,

alrededor de diez veces más que la de cualquier analizador de gas.
Pero el N es más versátil, ya que puede medir también N2, NH3, metanol y etanol
simultáneamente, así como dar información cuantitativa y cualitativa sobre el
intercambio de O2 y CO2. Mediante el uso de membranas permeables a los gases
es posible medir los gases disueltos en el medio nutritivo. Se han desarrollado
instrumentos que analizan hasta 8 gases simultáneamente en la fermentación.
(Osorio. O, et al. 2012).

CONCLUSION
En un biorreactor es donde se realiza el proceso en donde provee los servicios
necesarios para los cultivos y hace referencia su modo de operación ya se de
forma continua o discontinua. En todo proceso se requiere la esterilización de los
equipos a utilizar, para así evitar que haya contaminación hacia mis medios. En
donde la esterilización consiste en la eliminación o destrucción de todos los
microorganismos presentes en el medio. La esterilización puede hacerse mediante
calor húmedo o a través de una filtración.

La importancia de la instrumentación de un biorreactor prototipo radica en la

necesidad de tener en los cultivos un control que permita optimizar el proceso. La
estrategia de control comienza con la medición de las variables que proveen un
ambiente adecuado en un proceso de fermentación. El diseño y construcción de
los elementos necesarios para el monitoreo de las variables del biorreactor,
requirieron conocimientos de las necesidades del biorreactor y su operación
específica, así como de los circuitos electrónicos involucrados en los dispositivos
de medición. Así, se realizó el diseño de todos los dispositivos para la medición,
como también los controladores de las variables tales como agitación,
temperatura, nivel e impedancia. Por último, se llevó a cabo la construcción de la
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estación de trabajo tomando en cuenta las características de funcionalidad,

dimensión, transportación del prototipo. De esta manera, se logró controlar un
proceso fermentativo en un biorreactor prototipo con instrumentos de diseño y
construcción propios. (Rodríguez A, et al. 2003).

Un buen manejo de los biorreactores depende de gran parte de su

instrumentación y control, que estas a su vez son ayudados por sensores que
ayudan a encontrar las variables dentro de un proceso fermentativo. Dentro de los
sensores físicos podemos encontrar lo que son la temperatura, presión,
viscosidad, etc. Dentro de los sensores químicos son el pH, la fuerza iónica.
(Osorio. O, et al. 2012).

BIBLIOGRAFIA
Autoclaves para esterilizacion de biorreactores y fermentadores. (2021, 21 enero). TOMY.

Recuperado 27 de noviembre de 2021, de

https://tomy.amuzainc.com/es/blog/autoclaves-de-carga-superior-para-

esterilizacion-de-biorreactores-y-fermentadores/#:%7E:text=Los%20autoclaves

%20pueden%20ser%20un,qu%C3%ADmicos%20c%C3%A1usticos%20y

%20potencialmente%20contaminantes.

Baires Analitica. (2018, 5 marzo). Biorreactores Tecnal. Baires. Recuperado 26 de

noviembre de 2021, de https://www.bairesanalitica.com/documentos/5/4_Nota-

tecnica-BAIRES%2027-CL.pdf

Osorio, O., Mayoral, U., Santiago, J., & Reyes, R. (2012, diciembre). OPERACIONES

AUXILIARES (N.o 4). INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE

ACAYUCAN. https://es.scribd.com/doc/145789772/Unidad-IV-Biorreactores

Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2021, 25 noviembre). Sensores de pH

para biorreactores de METTLER TOLEDO. Recuperado 27 de noviembre de 2021,

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de https://www.mt.com/mx/es/home/products/Process-Analytics/pH-

probe/bioreactor-ph-probe.html

Rodríguez A, Cabrera L, Valencia F. (2003) Diseño y construcción de los instrumentos de

medición para un biorreactor prototipo. Rev Mex Ing Biomed.;24(1):55-70.

https://www.medigraphic.com/cgi-bin/new/resumen.cgi?IDARTICULO=5273

TEMPLATE DESIGN BY FREECSSTEMPLATES. (2013). Transferencia_de_Oxigeno.

transferencia de oxigeno. Recuperado 27 de noviembre de 2021, de

https://www.uv.es/idiqlab/Lab

%20Biorreactores/Practica_Transferencia_de_Oxigeno.html