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ALIMENTOS
ANALISIS MICROBIOLOGICOS
Hongos, Levaduras, Coliformes,
Salmonelas, Shigellas, E. Coli.
EVALUACION SENSORIAL
Color, Sabor, Textura, Apariencia
21/9/2021
✓Técnicas de
muestreo
✓Toma de
muestra.
✓Preparación de
la muestra.
Análisis Cuantitativo típico
1. Método de análisis
2. Obtención de la
muestra:
El muestreo es el
proceso a través del
cual se recolectan
pequeñas cantidades
de masa de un
material cuya
composición
representa de
manera precisa la
composición del
material que está
siendo muestreado.
Diagrama de flujo que muestra los pasos de un análisis cuantitativo.
3. Preparación de la muestra
Sólido: trituración hasta homogenización y posterior secado
Líquido: Guardar en recipiente cerrado
Gas en líquido: Guardar la muestra dentro de un segundo
contenedor sellado
Disolución de la muestra (ácidos, bases, solventes orgánicos,
calentamiento, etc.)
4. Eliminación de interferencias
Diseñar un esquema para separar al analito de sus
interferencias, o interferentes
5. Calibración y medición de la concentración
CA =kX
6. Cálculo y obtención de los resultados
7. Evaluación de los resultados mediante la estimación de su
confiabilidad
Ejemplo: Venados muertos por compuesto herbicida con arsénico
Sal disódica de
ácido Los
metanoarsénico, investigadores,
CH3AsO(OH)2, colectaron
el cual es muestras del
altamente pasto
soluble en agua decolorado para
y, por lo tanto, se hacer pruebas
usa junto
como con las muestras
componente de los órganos
activo en muchos del venado
herbicidas.
Muestreo, estandarización y calibración
• Es necesario que la
muestra sea
representativa, es
un paso difícil
(líquidas: agua de
un lago), (sólidas:
mineral, suelo,
tejido animal) y
requiere de la
estadística
• Muestra
representativa:
¿p. ej. para conocer
el contenido de plomo
en 100 monedas, se
toman 5 al azar ?.
Military standards
American National Standards Institute (ANSI)/American Society for Quality
(ASQ) Z1.4-2008: Sampling Procedures and Tables for Inspection by Attributes
• Muestra bruta: colección de
unidades o incrementos en el
muestreo
• Para su análisis en el laboratorio, la
muestra bruta es normalmente de
tamaño reducido y homogeneizada
para producir una muestra de
laboratorio.
• Muestreo de
muestras compactas
Las muestras de
compactas se
obtienen al serrar,
moler o perforar.
• Muestreo de disoluciones homogéneas de líquidos y
gases
Estas muestras son homogéneas hasta el nivel molecular,
por lo tanto se necesitan muestras brutas pequeñas.
https://www.youtube.com/watch?v=lKDqSB9myY8
Líquidos
Gases
Muestreo sustancias químicas y residuos en beneficiadoras de animales
https://www.youtube.com/watch?v=V1LLqsSL4pI
Análisis proximal de alimentos:
➢Humedad
➢Cenizas
➢Grasa “cruda” o extracto
etéreo
➢Fibra cruda
➢Proteínas y nitrógeno en
alimentos
➢Carbohidratos
Química y Análisis de Alimentos
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Análisis de Humedad
• Es el contenido de agua presente en una muestra de alimento
• La determinación de humedad es uno de los análisis más importantes en el
control de calidad de los alimentos en general
• La determinación de la humedad ocupa una posición extremadamente
importante entre los métodos analíticos actuales
• Todos los alimentos, cualquiera que sea el método de industrialización a
que hayan sido sometidos, contienen agua en mayor o menor proporción.
• Las cifras de contenido en agua varían entre un 60 y un 95% en los
alimentos naturales.
• En los tejidos vegetales y animales, puede decirse que existe en dos
formas generales: “agua libre” y “agua ligada”.
• El agua libre o absorbida, que es la forma predominante, se libera con gran
facilidad.
• El agua ligada se halla combinada o absorbida. Se encuentra en los
alimentos como agua de cristalización (en los hidratos) o ligada a las
proteínas y a las moléculas de sacáridos y absorbida sobre la superficie de
las partículas coloidales.
Química y Análisis de Alimentos
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Análisis de Humedad
Existen varias razones por las cuales, la mayoría de las industrias de
alimentos determinan la humedad, las principales son las siguientes:
➢ El comprador de materias primas no desea adquirir agua en exceso.
➢ El agua, si está presente por encima de ciertos niveles, facilita el desarrollo
de los microorganismos.
➢ Para la mantequilla, margarina, leche en polvo y queso está señalado el
máximo legal.
➢ Los materiales pulverulentos se aglomeran en presencia de agua, por
ejemplo azúcar y sal.
➢ La humedad de trigo debe ajustarse adecuadamente para facilitar la
molienda.
➢ La cantidad de agua presente puede afectar la textura.
➢ La determinación del contenido en agua representa una vía sencilla para el
control de la concentración en las distintas etapas de la fabricación de
alimentos.
➢ Puede usarse para determinar la calidad y la vida en estantería (shelf life) de
alimentos.
T: 105 - 110ºC
t= 4 - 6 horas
hasta peso cte. (no > 2 mg)
Balanza para Determinación de
Humedad Termobalanza
En diferentes
campos en
industrias, un
analizador de
humedad resulta
una herramienta
clave para el
proceso de control
de calidad
Química y Análisis de Alimentos
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Método de Karl-Fisher
• Hoy día existen auto tituladores Karl Fisher, capaces de
almacenar numerosos métodos de análisis, basados en la
reacción que lleva su nombre, el cual es relativamente
especifico para el agua.
• El reactivo esta compuesto por iodo, dióxido de azufre,
piridina y metanol.
• Es el único método químico comúnmente usado para la
determinación de agua en alimentos que precisamente se
basa en su reactivo. Este reactivo fue descubierto en 1936 y
consta de yodo, dióxido de azufre, una amina (originalmente
se empleaba piridina sin embargo por cuestiones de
seguridad y toxicidad se está reemplazando por imidazol) en
un alcohol (ejemplo metanol).
Método de Karl-Fisher
• Al adicionar este reactivo al agua tiene lugar la siguiente reacción:
https://www.youtube.com/watch?v=013gVQjlCfE
Análisis de
vino blanco
Galactosa
Glucosa
Manosa
Fucosa
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https://www.youtube.com/watch?v=W9pa2f-XS20
Determinación de Fibra
(Carbohidratos)
• Fibra Cruda: se somete la muestra a un
proceso de acción de digestión
simulada.
La muestra se hierve en ácido
(H2SO4), se lava, se hierve en álcali
(NaOH) se lava. Se pesa el residuo y
luego se somete este a ignición y por
diferencia se determina el porcentaje de https://www.youtube.com/watch?v=5bQ7bv-PHUM
fibra cruda.
• Fibra dietaria total, Fibra soluble e
insoluble.
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Se determina enzimáticamente
Determinación de proteínas
Determinación de Nitrógeno por Kjeldahl
✓ El método más comúnmente utilizado para la determinación de nitrógeno orgánico es el
llamado método Kjeldahl, que se basa en una volumetría ácido-base. El procedimiento es
directo, el material necesario es muy simple (aparato de destilación Kjeldahl), y es fácilmente
adaptable al análisis rutinario de un gran número de muestras. Es el método estándar para la
determinación del contenido proteico en grano, harinas, carnes, y en general, en materiales
biológicos
✓ En el método Kjeldahl, la muestra se descompone en caliente medio sulfúrico, en presencia de
un agente reductor catalizador (mercurio, cobre o selenio). También suele adicionarse una sal
neutra para aumentar el punto de ebullición de la disolución de ácido sulfúrico. De esta forma
que aumenta temperatura de trabajo, con lo cual se favorece la descomposición. El tratamiento
transforma el nitrógeno de la muestra en NH4+. La posterior adición de una base fuerte libera el
NH3, que es arrastrado hasta un frasco colector por destilación en corriente de vapor.
✓ El frasco colector contiene un volumen medido de una disolución estándar de ácido, de forma
que una fracción de ácido es neutralizada por el NH3. Al finalizar la destilación se procede a
valorar el ácido no consumido con una disolución de base patrón. El volumen de disolución
básica consumido hasta llegar al punto de equivalencia permite conocer la cantidad de NH3, y de
esta forma, la cantidad de nitrógeno en la muestra, que puede transformarse en contenido
proteico en función del tipo de muestra ya que la mayoría de las proteínas contienen
aproximadamente el mismo porcentaje de nitrógeno.
1. Digestión de la muestra
2. Destilación
3. Titulación
https://www.youtube.com/watch?v=LTddjI6jkp4
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Validación de métodos analíticos
Las características típicas de ejecución que
deberían considerarse en la validación
✓Exactitud
✓Precisión
✓Especificidad
✓Límite de detección
✓Límite de cuantificación
✓Linealidad
✓Rango
✓Robustez
✓Rudeza
Característica analítica
Exactitud
Límite de cuantificación
Es un parámetro para ensayos cuantitativos de bajos niveles de compuestos en matrices de
muestras, tales como impurezas en muestras activas o productos de degradación en
productos terminados. Es la concentración de muestra en un analito que puede ser
determinada con precisión y exactitud aceptables, bajo las condiciones experimentales
establecidas.
En la Guidance for Industry, FDA, 2011, para determinar el límite de cuantificación (LOQ), se
calcula primeramente la altura del pico para el límite de cuantificación (YLOQ) como 10
veces la desviación estándar y posteriormente estos valores son usados para calcular las
concentraciones asociadas con estas alturas del pico. Los valores calculados expresados en
términos de la concentración de la solución deben convertirse a la concentración efectiva en
la matriz.
Característica analítica
Linealidad
Es la cualidad del método para obtener resultados en la prueba
proporcionales a la concentración del analito en muestras dentro de
un rango dado que resultan directamente o mediante una
transformación matemática bien definida. Generalmente se expresa
en términos alrededor de la pendiente de regresión lineal, calculada
de acuerdo a una relación matemática establecida de los resultados
obtenidos de la prueba al analizar muestras de concentración
variable al analito (r2 cercana a 0,999)
Rango
Es el intervalo entre el nivel o concentración más alto y más bajo del
analito en el que se ha demostrado que puede detectarse con
exactitud, precisión y linealidad, tal y como lo indica el método.
Normalmente se expresa en las mismas unidades que los
resultados de la prueba en el método analítico
Característica analítica
Robustez
Es la medida de la capacidad de un método analítico para permanecer
inalterado por pequeñas pero deliberadas variaciones en los parámetros
del método y proporciona un índice de su confiabilidad durante su uso.
Rudeza
Es el grado de reproducibilidad de los resultados de la prueba obtenidos
por el análisis de una misma muestra bajo una variación de las
condiciones normales de prueba, tales como diferentes laboratorios,
analistas, ensayos, temperaturas, lotes de reactivos, días, etc. Es una
medida de la reproducibilidad de los datos de la prueba bajo las
condiciones operacionales normalmente esperadas de laboratorio a
laboratorio y de analista a analista.
Ajuste por mínimos cuadradros
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(ver video)
Métodos de análisis
✓Métodos volumétricos
✓Métodos gravimétricos
✓Métodos espectrofotométricos
✓Análisis por FT-IR
✓Métodos cromatográficos
➢Cromatografía de Capa Fina
(TLC)
➢Cromatografía Líquida de Alta
Resolución (HPLC)
➢Cromatografía de gases (CG)
✓Métodos gravimétricos
▪ Gravimetría de precipitación
▪ Gravimetría de volatilización
✓Métodos volumétricos
▪ Valoraciones ácido-base
▪ Valoración por retroceso
▪ Valoraciones gravimétricas
▪ Formación de complejos.
Métodos gravimétricos
Los métodos gravimétricos son métodos cuantitativos
basados en la determinación de la masa (con una balanza
analítica) de un compuesto puro con el cual está
químicamente relacionado el analito.
• Gravimetría de precipitación
• Gravimetría de volatilización
• Electrogravimetría
• Valoración gravimétrica
Valoración o Titulación
Procedimiento mediante el cual una disolución de
concentración conocida se agrega a otra disolución
cuya concentración se desconoce, hasta que la
reacción química entre los solutos sea completa.
➢ Ley de Lambert-Beer
➢ Colorimetría
➢ Espectroscopia atómica
➢ Espectroscopia molecular
➢ Fotometría de llama
Los instrumentos que se utilizan en las regiones ultravioleta
(UV), visible e infrarroja (IR) tienen varias características en
común, por lo que con frecuencia se les llama instrumentos
ópticos aun cuando el ojo humano es insensible a las longitudes
de onda del ultravioleta y del infrarrojo.
1) Absorción
2) Fluorescencia
3) Fosforescencia
4) Dispersión
5) Emisión
6) Quimioluminiscencia.
➢ Potenciometría
➢ Coulombimetría
➢ Electrogravimetría
➢ Conductimetría
➢ Polarografía
http://apuntescientificos.org/electroquim-uvm.html
Potenciometría
Sirve para detectar y cuantificar analitos (H+,
Li+, Na+, K+, Ca+2) midiendo los voltajes DC
Medición de pH con
potenciómetro
Métodos cromatográficos
✓Fundamentos de la Cromatografía.
✓Clasificación de los métodos cromatográficos
▪ Papel
▪ Capa fina (TLC)
▪ Cromatografía de columna
▪ Cromatografía de gases
▪ Cromatografía iónica
▪ Cromatografía HPLC
Cromatografía en Papel
Galactosa
Glucosa
Manosa
Fucosa
La cromatografía en columna
es una da las operaciones
básicas más utilizadas en
química.
Comúnmente se suele usar como adsorbente alúmina o sílice. Las fases móviles
se usan en función de la polaridad de los compuestos a separar.
Columna de intercambio iónico
Cromatografía de gases
En la cromatografía de gases la
muestra se volatiliza y se inyecta en
la cabeza de una columna
cromatográfica.
Aplicaciones
•Aguas de consumo
•Aguas minerales
•Bebidas
•Productos cárnicos
•Productos vegetales
•Alimentación infantil
Cromatografía HPLC
✓ La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), es una
técnica de separación basada en una fase estacionaria sólida
y una fase móvil líquida.
✓ Las separaciones son obtenidas por partición, adsorción, o
procesos de intercambio iónico, dependiendo del tipo de fase
estacionaria usada.
✓ La HPLC tiene distintas ventajas sobre la cromatografía de
gases para el análisis de compuestos orgánicos. Los
compuestos a ser analizados son disueltos en un solvente
adecuado, y la mayoría de las separaciones toman lugar a
temperatura ambiente, pudiendo ser cromatografiados sin
descomposición o sin la necesidad de preparar compuestos
volátiles, la mayoría de las sustancias que no son volátiles o
aquellos compuestos térmicamente inestables.
Cromatografía HPLC
AMP
AMOX OXA
PEN-G
0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0
Campos de Aplicación de HPLC
CARGA
ANALITO
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Métodos Oficiales de Análisis: AOAC
• La AOAC Internacional es una asociación
científica privada sin fines de lucro fundada
en 1884
• Principales líneas de acción:
– Desarrollo y validación de métodos analíticos a
través de consensos.
– Mejoramiento de los procedimientos de
aseguramiento de la calidad en los laboratorios
– Desarrollo y promoción de criterios para alcanzar
los estándares de acreditación de los laboratorios
analíticos
– Otros servicios: Comités técnicos, cursos,
programas de ensayos interlaboratorios,
auditorías de laboratorios, publicaciones
técnicas (Manual de Métodos Oficiales, Journal
AOAC Int, Revista Inside Lab Manag.
– www.aoac.org