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26.1.

Defina: a) Elucin Es un proceso en el cual las especies son lavadas a travs de una columna cromatogrfica por el flujo o la adicin del solvente fresco. b) Fase mvil La fase mvil en cromatografa es el que los movimientos encima o a travs de una fase inmvil que se fija en su lugar en una columna o en la superficie de una placa plana. c) Fase estacionaria La fase estacionaria en una columna cromatogrfica es un slido o lquido se fija en su lugar. La fase mvil entonces pasa encima o a travs de la fase estacionaria. d) Constante de distribucin La constante distribucin K en cromatografa es la relacin de la concentracin del analito en la fase estacionaria a su concentracin (actividad) en la fase mvil cuando existe equilibrio entre las dos fases. e) Tiempo de retencin El tiempo de retencin para un analito es el intervalo de tiempo entre su inyeccin en una columna y la aparicin de su pico en el otro extremo de la columna. f) Factor de retencin

El factor k de retencin se define por la ecuacin:

Donde es la constante de distribucin de la especie , y mviles, respectivamente. g) Factor de selectividad

son los volmenes de las fases estacionarias

El factor de selectividad de una columna hacia las especies A y B es dada por , donde es la constante de distribucin de las especies ms fuertemente sostenidas y es la constante de distribucin de las especies menos fuertemente sostenidas. h) Altura de pico La altura de la placa de una columna cromatogrfica se define por la relacin donde es la varianza obtenida de la Gaussiana en forma de pico cromatogrfico y L es la longitud de la columna en centmetros. i) Difusin longitudinal

Es una fuente de banda ampliar en una columna en el cual un soluto difunde desde el centro de concentracin de la banda a las regiones ms diluidas en ambos lados.

j)

Difusin en remolino

Es un fenmeno en el cual las molculas de un analito llegan al final de una columna en diferentes momentos como consecuencia de viajar a travs de la columna por las vas que difieren en longitud. k) Resolucin de la columna La resolucin de una columna hacia dos especies y est dada por la ecuacin donde es la distancia (en unidades de tiempo) entre los picos de las dos especies, y anchuras (tambin en unidades de tiempo) de las cumbres en sus bases. l) Eluyente y son las

El eluyente en cromatografa es la nueva fase mvil que lleva el analito a travs de la columna. 26.2. Describa el problema general de la elucin El problema general de elucin surge cuando cromatogramas se obtuvieron en muestras que contienen especies ampliamente con diferentes constantes de distribucin. Cuando las condiciones son tales que las buenas separaciones de las especies ms fuertemente retenidas se realizan, se observa la falta de resolucin entre las especies que se encuentran dbilmente. Por el contrario, cuando se condiciones favorables que dan separaciones satisfactorias de los compuestos dbilmente retenidas, banda severa ampliacin y se encuentran largos tiempos de retencin para las especies fuertemente unidos. El problema general de elucin se resuelve a menudo en la cromatografa de lquido por gradiente de elucin en cromatografa de gases y por la programacin de la temperatura. 26.3. Enumere las variables que originan el ensanchamiento de banda en cromatografa. Las variables que conducen a la zona de ensanchamiento incluyen (1) dimetro de partcula grande para fases estacionarias; (2) columna de grandes dimetros; (3) altas temperaturas (importantes solamente en GC); (4) para lquidos fases estacionarias, gruesas capas del lquido inmovilizado; y (5) caudales muy altos o muy bajos. 26.4. Cules son las principales diferencias entre la cromatografa gas lquido y lquido lquido? En cromatografa de gas-lquido, las fases mviles son los gases, mientras que en cromatografa de lquidos, son los lquidos. 26.5. Cules son las principales diferencias entre la cromatografa lquido lquido y lquido slido? En la cromatografa lquido-lquido, la fase estacionaria es un lquido que est inmovilizado por adsorcin o unin qumica a una superficie slida. Los equilibrios que causa la separacin son equilibrios de distribucin entre dos fases lquidas inmiscibles. En la cromatografa lquido-slido, la fase estacionaria es una superficie slida y los equilibrios implicados son equilibrios de adsorcin. 26.6. Qu variables tienen ms probabilidad de afectar al factor de selectividad par de analitos? correspondiente a un

Las variables que afectan el factor selectividad incluyen la composicin de la fase mvil, la temperatura de la columna, la composicin de la fase estacionaria, y qumicas interacciones entre la fase estacionaria y uno de los solutos estn separados.

26.7. Explique la manera en que se puede manipular el factor de retencin de un soluto. En GC, el factor de retencin se vara mediante el cambio de la temperatura de la columna como se hace en la programacin de la temperatura. En LC, las variaciones se logran mediante la alteracin de la composicin del disolvente como en el gradiente de elucin. 26.8. Describa un mtodo para determinar el nmero de platos de una columna. El nmero de placas en una columna se puede determinar midiendo el tiempo de retencin un pico en su base . El nmero de placas de es entonces y la anchura de

26.9. Mencione dos mtodos generales para mejorar la resolucin de dos sustancias en la columna cromatogrfica. La disminucin de las anchuras de los picos aumentar resolucin ser el aumento de la separacin de los picos. El aumento de la separacin se puede hacer por el alargamiento de la columna para aumentar el nmero de placas o el aumento de la selectividad. 26.10. Por qu el mnimo en la grfica de la altura de plato frente a tasa de flujo se encuentra a tasas de flujo menores en cromatografa de lquidos que en cromatografa de gases? Difusin longitudinal es mucho ms importante en GC que en LC. Difusin longitudinal es una gran contribucin a H a velocidades de flujo bajas. Los descensos iniciales de H en tramos de altura de la placa frente a la velocidad de flujo son, pues, en gran parte el resultado de la difusin longitudinal. Debido a que los coeficientes de difusin gaseosa son rdenes de magnitud ms grande que los valores de lquidos, el fenmeno se hace evidente a velocidades de flujo ms altas en GC que en LC. El mnimo a veces no se observa en todos en LC. 26.11. Qu es la elucin con gradiente? La elucin en gradiente es un mtodo de llevar a cabo cromatografa de lquido en el que la composicin de la fase mvil se cambia continuamente o en pasos con el fin de optimizar las separaciones. 26.12. Elabore una lista de las variables cromatogrficas que causan la zona de separacin. La zona de separacin est influenciada por (1) embalaje que producen coeficientes de distribucin que difieren significativamente; (2) incrementos en la longitud de la columna; (3) variaciones en la composicin de la fase mvil (LC); (4) optimizacin de temperatura de la columna (GC); (5) los cambios en el pH de la fase mvil (LC); (6) incorporacin de una especie en la fase estacionaria que selectivamente complejos de ciertos analitos (LC). 26.13. Qu efecto causara en un pico cromatogrfico introducir la muestra a una velocidad demasiado baja? Introduccin lenta de la muestra conduce a la ampliacin de la banda.

26.14. Los siguientes datos corresponden a una columna cromatogrfica de lquidos: Longitud del relleno Tasa de flujo 24.7 cm 0.313 mL/min 1.37 mL 0.164 mL

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona los siguientes datos: Tiempo de retencin, min Anchura del pico en la base , min 3.1 0.41 5.4 13.3 14.1 21.6 1.07 1.16 1.72 1.72

No retenida A B C D

Calcule a) El nmero de platos para cada pico Se emplea la siguiente ecuacin: Para A, Para B, Para C, Para D, b) La media y desviacin estndar de N

c) La altura de plato de la columna Usando la ecuacin:

26.15. Con los datos del problema 26.14 calcule para A, B, C y D. a) el factor de retencin Para ello usamos la siguiente ecuacin: Para A: Para B: ( (

) )

Para C:

( (

) )

Para D:

b) La constante de distribucin Para ello usamos la siguiente ecuacin: [


Para A: ( Para B: (

] ) ) ) )

Para C: ( Para D: (

26.16. Con los datos del problema 26.14, calcule para las especies B y C a) La resolucin Se emplea la siguiente ecuacin:
[ ]

b) El factor de selectividad

c) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una resolucin de 1.5.

Pero Entonces: d) El tiempo necesario para separar las dos especies con una resolucin de 1.5.

26.17. Con los datos del problema 26.14 calcule para las especies C y D a) La resolucin
[ ]

b) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una resolucin de 1.5

26.18. Los siguientes datos se obtuvieron mediante cromatgrafo gas lquido con una columna relativa de 40cm: Compuesto Aire Metilciclohexano Metilciclohexeno Tolueno 1.9 10.0 10.9 13.4 0.76 0.82 1.06

Calcule: a) El nmero de platos promedio a partir de los datos

b) La desviacin estndar para el promedio en a)

c) La altura de plato promedio para la columna

26.19. En relacin con el problema 26.18, calcule la resolucin para a) Metilciclohexano y metilciclohexeno: b) Metilciclohexeno y tolueno: c) Metilciclohexano y tolueno: 26.20. Si fuera necesaria una resolucin de 1.5 para separar metilciclohexano y metilciclohexeno en el problema 26.18, a) Cuntos platos se necesitaran? b) Qu longitud debera tener la columna si se utiliza el mismo relleno? c) Cul sera el tiempo de retencin del metilciclohexeno en la columna del inciso b)? 26.21. Si para la columna del problema 26.18 son 19.6 y 62.6 ml respectivamente y el pico de aire no retenido aparece despus de 1.9 min, calcule:

a) El factor de retencin para cada compuesto: b) La constante de distribucin para cada compuesto: c) El factor de selectividad para el metilciclohexano y el metilciclohexeno: 26.22. Las reas relativas de pico para los cinco picos obtenidos por cromatografa de gases en la separacin de cinco esteroides se indican a continuacin. Tambin se proporcionan las respuestas del detector para los cinco compuestos. Calcule el porcentaje de cada compuesto en la mezcla. Compuesto Deshidroepiandrosterona Estradiol Estrona Testosterona Estriol rea relativa, de pico 27.6 32.4 47.1 40.6 27.3 Respuesta relativa, del detector 0.70 0.72 0.75 0.73 0.78

27.1. En qu se diferencian la cromatografa gas lquido y la gas slido? En la cromatografa de gas-lquido, la fase estacionaria es un lquido que est inmovilizado sobre un slido. La retencin de constituyentes de la muestra implica equilibrios entre una gaseosa y una fase lquida. En la cromatografa de gas-slido, la fase estacionaria es una superficie slida que retiene analitos por adsorcin fsica. Aqu separaciones implican la adsorcin / desorcin equilibrios. 27.2. Cmo funciona un medidor de flujo de pompas de jabn? En un medidor de burbuja de jabn, una pelcula de jabn se forma en una bureta de gas a travs del cual el efluente de una columna de GC est fluyendo. La velocidad de flujo se determina entonces a partir del tiempo requerido para la pelcula de viajar entre dos de las graduaciones en la bureta. 27.3. Qu es la programacin de temperatura en cromatografa de gases? Por qu se usa con tanta frecuencia? La programacin de la temperatura consiste en el aumento de la temperatura de una columna de GC como una funcin del tiempo. Esta tcnica es particularmente til para las muestras que contienen constituyentes cuyos puntos de ebullicin difieren significativamente. Constituyentes de bajo punto de Boilin estn separados inicialmente a temperaturas que proporcionan una buena resolucin. A medida que la separacin, la temperatura de la columna se incrementa de manera que los constituyentes Boilin superiores vienen de la columna con buena resolucin y en longitudes de tiempo razonables. 27.4. Defina: a) Volumen de retencin: Volumen de retencin es definido por la ecuacin tasa de flujo volumtrico. b) Volumen de retencin corregido: El volumen de retencin corregido dentro de la columna. Es dada por c) Volumen de retencin especfico: El volumen de retencin especfica de retencin de una especie bien, en grados Kelvin. es definido por la ecuacin es la masa de la fase estacionaria, y donde es el volumen es el volumen de retencin despus de corregir la presin media donde es el factor de correccin de la presin. donde es el tiempo de retencin y es la

es la temperatura de la columna

27.5. Cul es la diferencia entre un detector sensible a la concentracin y un detector sensible a la masa? Los siguientes detectores son sensibles a la masa o a la concentracin? Un detector sensible a la concentracin responde a la concentracin de analito en la fase mvil, mientras que una masa sensible detector responde a la cantidad de analito molculas o iones que entran en contacto con el detector. reas de pico para un detector sensible a la concentracin aumentan como la tasa de flujo disminuye porque el analito est en contacto con el detector durante un largo periodo. reas de pico para un detector sensible a la masa no son afectadas grandemente por caudal. Con CS para concentracin sensible y MS para masa sensible, encontramos para cada uno de los detectores figuran: (a) trmica conductividad (CS),

emisin (b) atmica (MS), (c) termoinica (MS), captura de electrones (d) (CS), (e) llama fotomtrica (MS), ionizacin de llama (f) (MS). 27.6. Explique los principios de funcionamiento de los detectores que se encuentran en el problema 27.5. (a) el detector de conductividad trmica se basa en la disminucin de la conductividad trmica del gas portador helio o hidrgeno provocada por la presencia de molculas de analito. (b) el detector de emisin atmica se basa en la intensidad de las lneas de emisin atmica generados a partir de algunos de los elementos contenidos en las molculas de analito. La atomizacin del analito y excitacin de emisin atmica es propiciada por el eluyente atravesando un campo energtico de microondas. (c) el detector termoinico se basa en las corrientes de iones se produce cuando la fase mvil es quemado en una llama de hidrgeno y luego pas del grano de silicato de rubidio calentada overa. Se utiliza principalmente para los analitos que contienen fsforo o nitrgeno. (d) el detector de captura de electrones se basa en la atenuacin por molculas de analito de un ion de pie actual generada por la ionizacin de las molculas de la fase mvil con un emisor en el efluente. 27.7. Cules son las principales ventajas y limitaciones de cada uno de los detectores que se mencionan en el problema 27.5? (a) las ventajas, conductividad trmica: aplicacin general, amplio rango lineal, la sencillez, no destructiva. Desventajas: baja sensibilidad. (b) Ventajas, emisin atmica: selectividad, amplio rango lineal, alta sensibilidad, aplicabilidad general. Desventajas: altos costos de equipos destructivos. (c) Ventajas, terminicos: alta sensibilidad para compuestos que contienen N y P, buen rango lineal. Desventajas: destructiva, no es aplicable para muchos analitos. (d) Las ventajas, de captura de electrones: alta sensibilidad, selectividad hacia analitos con grupos funcionales electronegativos, no destructivos. Desventajas: la respuesta no lineal en algunas circunstancias, la gama limitada respuesta. (e) Ventajas, llama fotomtrica: la selectividad hacia el S y P que contienen analitos, buena sensibilidad. Desventajas: destructiva, aplicabilidad limitada. (f) Ventajas: Ionizacin de llama aplicabilidad general, amplio rango lineal, buena sensibilidad, bajo ruido, baja sensibilidad a la mayora de los gases portadores y el agua, la sencillez, la facilidad de uso. Desventaja: destructiva. 27.8. Cul es la diferencia entre un cromatograma de iones totales y un cromatograma de masas? Un cromatograma de iones totales se obtiene mediante la suma de las abundancias de iones en cada espectro de masas y el trazado en funcin del tiempo. Un cromatograma de masa se obtiene mediante la supervisin de un valor m / z durante el experimento de cromatografa y el trazado de la abundancia de iones en funcin del tiempo. 27.9. Analice por qu la combinacin de cromatografa de gases y espectrometra de masas es tan potente. La combinacin de GC con MS permite la identificacin de las especies que eluyen de la columna cromatogrfica. El cromatograma de iones totales proporciona informacin similar a un cromatograma GC convencional. Controlando otros iones, se puede obtener informacin acerca de las diferentes especies. Al analizar el espectro de masas durante el experimento de cromatografa, se pueden identificar las especies de elucin en varias ocasiones. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas permite identificaciones an ms especficas a realizar.

27.10. Qu son los mtodos acoplados de cromatografa de gases? Describa brevemente dos de ellos. Mtodos acoplados para GC con una tcnica instrumental diferente, tal como la espectrometra de masas, FTIR, espectroscopa de RMN, o mtodos electroqumicos. El efluente de la columna de la GC es tanto un seguimiento continuo por la segunda tcnica o recogida y medida. 27.11. Cul es el material de relleno que se utiliza en la mayora de columnas empacadas para cromatografa de gases? El material de relleno utilizado con mayor frecuencia son las partculas de tierra de diatomeas con dimetros que van desde 250 hasta 170 micras o 170 a 149 m. 27.12. En qu se diferencian las siguientes columnas tubulares abiertas? (a) Una columna de trama (PLOT) es una capa de la columna tubular abierta porosa, que tambin se llama una columna de soporte recubierto tubular abierta (SCOT). La superficie interior de una columna parcela est llena de una pelcula delgada de un material de soporte, tal como una tierra de diatomeas. Este tipo de columna contiene varias veces una fase estacionaria tanto como lo hace una columna de pared recubierto. (b) Una columna WCOT es simplemente un tubo capilar formado de slice fundida, acero inoxidable, aluminio, cobre, plstico, o vidrio. Sus paredes interiores estn recubiertas con una capa delgada de la fase mvil. (c) La columna SCOT se describe en el apartado (a) de esta pregunta. 27.13. Cules son las columnas megacapilares? Para qu se utilizan? Las megacolumnas son columnas tubulares abiertas que tienen un mayor dimetro interior columnas tubulares abiertas tpicas, que varan en dimetro desde . que

27.14. Cules son las ventajas de las columnas capilares de slice fundida en comparacin con las columnas de vidrio o las metlicas? Las columnas de slice fundida tienen una mayor resistencia fsica y flexibilidad de columnas tubulares abiertas de vidrio y son menos reactivos frente a analitos que el vidrio o las columnas metlicas. 27.15. Qu propiedades debe tener una fase estacionaria lquida en cromatografa de gases? Las propiedades deseables de una fase estacionaria para GC incluyen: baja volatilidad, estabilidad trmica, inercia qumica, y las caractersticas de disolventes que proporcionan valores de k y para los analitos a ser separados. 27.16. Qu efecto tiene el espesor de la pelcula de la fase estacionaria sobre los cromatogramas de gases? Espesor de pelcula influye en la velocidad a la que los analitos se llevan a travs de la columna, con la tasa de aumento a medida que disminuye el espesor. Menos ensanchamiento de la banda se encuentra con pelculas delgadas. 27.17. Por qu las fases estacionarias en cromatografa de gases estn con frecuencia enlazadas o polimerizadas? Qu significado tienen estos trminos? Fases estacionarias lquidas son generalmente unidos y / o reticulados con el fin de proporcionar una estabilidad trmica y una fase estacionaria ms permanente que no se filtrar fuera de la columna. Vinculacin implica la unin de una capa monomolecular de la fase estacionaria a la superficie de embalaje por medio de enlaces qumicos. La reticulacin implica el tratamiento de la fase estacionaria mientras se encuentra en la columna con un reactivo qumico que crea enlaces cruzados entre las molculas que componen la fase estacionaria.

27.18. Enumere las variables que originan a) el ensanchamiento de la banda y b) la separacin de la banda en cromatografa de gas lquido. (a) la ampliacin de la banda se debe a valores muy altos o muy bajos de flujo, las partculas grandes que componen el embalaje, las capas gruesas de la fase estacionaria, la temperatura baja y las tasas de inyeccin lenta. (b) separacin de las bandas se ve reforzada por el mantenimiento de condiciones para que k est en el intervalo de 1 a 10, el uso de partculas pequeas para el relleno, lo que limita la cantidad de fase estacionaria por lo que los recubrimientos de partculas son finas, y la inyeccin de la muestra rpidamente. 27.19. Qu son los ndices de retencin? Explique cmo se determinan. El ndice de retencin para un analito es una medida de la tasa a la cual se lleva a travs de una columna en comparacin con la tasa de movimiento de los alcanos normales dos, uno que se mueve ms rpido que el analito y el otro ms lentamente. Para obtener el ndice de retencin de un analito en una columna dada, se determinan el registro de los tiempos de retencin ajustados para los dos alcanos y el analito. El ndice de retencin para butano es siempre 400 y 500 pentano. El ndice de retencin para el analito entonces se deriva mediante la interpolacin entre los dos ndices de retencin logartmica del alcano 27.20. El mismo compuesto polar se analiza por cromatografa de gases con una columna SE-30 (muy poco polar) y luego con una columna Carbowax 20M (muy polar). Cmo variar entre las columnas? El coeficiente de distribucin para un compuesto polar ser mayor en la columna carbowax de 20 M que la columna SE-30 no polar. 27.21. Utiliza los datos de retencin que se dan a continuacin para calcular el ndice de retencin del 1hexeno. Muestra Aire n-pentano n-hexano 1-hexeno Para el 1-hexeno: Tiempo de retencin, min 0.571 2.16 4.23 3.15

27.22. Se utiliz una columna de GC en las siguientes condiciones de trabajo: Columna: 1.10 m x 2.0 mm rellena con Chromosorb P; peso de fase estacionaria lquida aadida, 1.40g; densidad del lquido, 1.02 g/ml ; presiones: entrada, 26.1 psi por encima de la atmosfrica; atmosfrica, 748 torr; temperatura; ambiente, 21.2C; columna, 102.0C; tiempos de retencin: aire, 18.0 s; acetato de metilo, 1.98 min; propionato de metilo, 4.16 min; n-butirato de metilo, 7.93 min; anchura de picos de los steres en su base: 0.19; 0.39 y 0.79, respectivamente. Datos:

Calcule: a) Tasa de flujo promedio en la columna Sustituyendo en la ecuacin 27-3,

b) Volmenes de retencin corregidos para el aire y para los tres steres. y [ [ ] ]

c) Volmenes de retencin especficos para los tres componentes. Usando la ecuacin: ( ) ( ) ( ) d) Constantes de distribucin de cada uno de los steres Se usa la siguiente ecuacin:

e) Un volumen de retencin corregido y tiempo de retencin para el n-hexanoato de metilo

De la ecuacin por regresin lineal

Para 7 tomos de C:

27.23. Con los datos del problema 27.22, calcule a) b) c) d) factor de retencin k para cada componente factor de selectividad para cada pareja de compuestos adyacentes nmero promedio de platos tericos y la altura de plato de la columna resolucin para cada par de compuestos adyacentes

Usando las siguientes ecuaciones: [ ] ( )( ) ( )

27.24. La fase estacionaria lquida de la columna descrita en el problema 27.23 era didecilftalato, un solvente de polaridad intermedia. Si en lugar de ste se hubiera utilizado un solvente no polar como aceite de silicona. Los tiempos de retencin de los tres compuestos seran mayores o menores? Por qu? Dado que los tres compuestos son relativamente polares, seran menos compatibles con un disolvente no polar tal como un aceite de silicona que con didecilftalato. Puesto que menos tiempo se gastara en la fase estacionaria para el aceite de silicona, sera ms pequeo.

27.25. Un mtodo de determinacin cuantitativa de la concentracin de constituyentes en una muestra analizada mediante cromatografa de gases es el de normalizacin de rea. En este mtodo se requiere la elucin completa de todos los constituyentes de la muestra. El rea de cada pico se mide despus y se correlaciona con las diferencias en la respuesta del detector para los diferentes eluidos. Esta correccin requiere la divisin del rea mediante un factor de correccin determinado de manera emprica. La concentracin del analito se determina a partir del cociente de su rea corregida respecto al rea total corregida de todos los picos. En el caso de un cromatograma que contiene tres picos, las reas relativas determinadas fueron 16.4, 45.2 y 30.2 en el orden en que se incrementa el tiempo de retencin. Calcule el porcentaje de cada compuesto si las respuestas relativas del detector son 0.60, 0.78 y 0.88, respectivamente.

27.26. Determine la concentracin de especies en una muestra a partir de las reas de los picos y las respuestas relativas del detector para los cinco picos de cromatografa de gases de la tabla siguiente. Aplique el mtodo de la normalizacin del rea que se explica en el problema 27.25. Se indican tambin las respuestas relativas del detector. Calcule el porcentaje de cada componente en la mezcla. Compuesto A B C D E rea relativa del pico 32.5 20.7 60.1 30.2 18.3 Respuesta relativa del detector 0.70 0.72 0.75 0.73 0.78

27.27. Cul sera el efecto de los siguientes casos sobre la altura de plato de una columna? Explique su respuesta. a) Aumentar el peso de la fase estacionaria respecto al peso del relleno. Aumento de marcado en conduce a un aumento en el espesor de la pelcula y por lo tanto un aumento en el H. . Este aumento provoca un aumento

b) Disminuir la velocidad de inyeccin de la muestra. La reduccin de la tasa de inyeccin de la muestra dar lugar a la ampliacin de la banda porque todas las molculas no comienzan a atravesar la columna en el mismo instante. Reduccin de la capacidad y un aumento en los resultados de H. c) Aumentar la temperatura de la portezuela de inyeccin. El aumento de la temperatura del puerto de inyeccin tender a disminuir H debido a la misma velocidad de evaporacin se incrementar. Por lo tanto, la muestra se puede poner en la columna en una banda estrecha con zona menos propagacin inicial. d) Incrementar la tasa de flujo. El aumento de la velocidad de flujo puede causar aumenta o disminuye en H dependiendo de la velocidad de flujo. e) Reducir el tamao de la partcula del relleno. La reduccin del tamao de partcula aumenta la superficie y por lo tanto disminuye de espesor de pelcula en el trmino de la en las ecuaciones 26-23 y 26-24. Una disminucin en el tamao de las partculas tambin hace que el trmino ms pequeo. Ambos efectos conducen a una altura plato ms pequeo (Tabla 26-3). f) Disminuir la temperatura de la columna.

Disminuyendo la temperatura disminuir las tasas de difusin . El trmino se convierte ms pequeo y los trminos de y se convierten ms grandes con la disminucin de los coeficientes de difusin. Esto puede conducir a un aumento de H Si dominan los trminos y o una disminucin de si domina el trmino . En la mayora de los casos, H aumenta a medida que la temperatura disminuye. 27.28. Qu tipo de mezclas se separan por cromatografa gas slido? La Cromatografa de gas-slido se utiliza principalmente para separar bajas especies moleculares de masa gaseosas como dixido de carbono, monxido de carbono y xidos de nitrgeno. 27.29. Por qu la cromatografa gas slido no se utiliza tanto como la cromatografa gas lquido? La cromatografa de gases-slidos se ha limitado su aplicacin porque los compuestos activos o polares se conservan ms o menos permanentemente en la fase estacionaria. Adems, se observa a menudo debido a las caractersticas no lineales del proceso de adsorcin fsica.

28.1. Enumere los tipos de sustancias en los cuales son ms aplicables los siguientes mtodos de cromatografa: a) Gas lquido Especies que son un poco voltiles y trmicamente estables. b) Absorcin de lquidos No polares compuestos orgnicos de bajo peso molecular y especies orgnicas particularmente ismeros. c) Reparto lquido lquido Especies moleculares que son permanentes o trmicamente inestables. d) Reparto en fase inversa Especies orgnicas de bajo o moderado peso molecular, no voltiles o trmicamente inestables. e) Intercambio inico Sustancias que no son inicas. f) Penetracin en gel

Compuestos de altos pesos moleculares que son solubles en disolventes no polares. g) Gas slido Gases de bajo peso molecular no polares. h) Filtracin sobre gel Compuestos hidroflicos de alto peso molecular. i) Pares inicos

Iones orgnicos e inorgnicos pequeos. 28.2. Describa tres mtodos generales para mejorar la resolucin en la cromatografa de reparto. Tres mtodos para mejorar la resolucin incluyen: (1) Ajuste de y mediante el empleo de una fase mvil de mltiples componentes y la variacin de la revuelta de los disolventes de encontrar una mezcla ptima. (2) Variacin en la composicin qumica del sistema solvente de manera tal que ms grande. (3) Empleando un relleno diferente en que es mayor. 28.3. Explique una forma de modificar el factor de retencin de un soluto en la cromatografa de reparto. En cromatografa de reparto, k es variada convenientemente usando un sistema componente solvente de dos (o ms) y variando la proporcin de los solventes.

28.4. Cmo se puede modificar el factor de selectividad en a) la cromatografa de gases y b) la cromatografa de lquidos? (a) en cromatografa de gases, es generalmente variada variando la columna del relleno. (b) en LC, columna del relleno y composicin qumica de la fase mvil pueden variar para producir mejores valores . 28.5. Al preparar un gradiente con hexano acetona para una columna de HPLC rellena de almina, es deseable aumentar o disminuir la proporcin de hexano a medida que progresa la elucin en la columna? En cromatografa de adsorcin con un relleno de almina, es generalmente mejor aumentar la polaridad de la fase mvil a medida que avanza la elucin. As la proporcin de acetona con el hexano debe aumentarse a medida que avanza la elucin. 28.6. Qu significa el intervalo de respuesta lineal de un detector? El rango de respuesta lineal de un detector es el rango de concentracin de analito o masa sobre el cual el detector responde linealmente. Es el mismo que el rango dinmico. 28.7. Defina: a) Elucin isocrtica En una elucin isocrtica, la composicin solvente se mantiene constante a lo largo de la elucin. b) Elucin con gradiente En una gradiente elucin, se utilizan dos o ms solventes y la composicin de la fase mvil va cambiando continuamente o en pasos a medida que avanza la separacin. c) Inyeccin a flujo detenido En una inyeccin de flujo detenido, se detiene el flujo de disolvente, se elimina un accesorio a la cabeza de la columna, y la muestra se inyecta directamente en la cabeza de la columna. El accesorio se sustituye a continuacin, y el bombeo se reanuda. d) Relleno de fase inversa Un relleno de fase inversa es un relleno no polar que se emplea en cromatografa de particin con una fase mvil relativamente polar. e) Relleno de fase normal En un relleno de fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase mvil es relativamente no polar. f) Cromatografa de pares de iones

En la cromatografa de pares inicos un gran contra-in orgnico se aade a la fase mvil como un reactivo de apareamiento inico. La separacin se consigue ya sea a travs de la particin neutro par inico o como un resultado de interacciones electrostticas entre los iones en solucin y cargas sobre la fase estacionaria que resulta de la adsorcin de la orgnica contra-in. g) Cromatografa inica En la cromatografa de iones, la fase estacionaria es una resina de intercambio inico y deteccin se logra normalmente mediante un detector de conductividad.

h) Detector de propiedades de la solucin Un detector de propiedad de la solucin responde a alguna propiedad de la fase mvil (tales como la conductividad trmica o elctrica) que se ve alterada por la presencia de analitos. i) Detector de propiedades del soluto

Un detector de propiedad del soluto responde a alguna propiedad de analitos, tales como la absorcin o fluorescencia. j) Purga

Purga es un proceso para la eliminacin de gases disueltos desde una solucin barriendo el lquido con un flujo de burbujas finas de un gas inerte de baja solubilidad. 28.8. Qu es la columna de proteccin en la cromatografa de reparto? Una columna de proteccin es una columna corta a travs del cual la fase mvil fluye antes que la regin de la inyeccin y la columna de anlisis de instrumentos de HPLC. La composicin de la columna de proteccin es similar a la de la columna analtica, excepto que las partculas son generalmente ms grandes para reducir al mnimo la cada de presin. El propsito de la columna de proteccin es para eliminar la materia en partculas y los contaminantes de la fase mvil y para saturar la fase mvil con la fase estacionaria de modo que las prdidas de esa fase de la columna analtica se reducen al mnimo. 28.9. En qu se parecen la cromatografa de reparto en fase normal y la cromatografa de adsorcin? La cromatografa de reparto en fase normal y la cromatografa de adsorcin son similares en el sentido que las fases estacionarias en ambos son polares, mientras que las fases mviles son relativamente no polares. 28.10. Cul es el orden en que los compuestos siguientes saldrn de una columna para HPLC que contiene un relleno de fase inversa? a) benceno, dietilter, n hexano

b) acetona, dicloroetano, acetamida

28.11. Cul es el orden de elucin de los compuestos siguientes en una columna para HPLC con relleno de fase normal? a) acetato de etilo, cido actico, dimetilamina

b) propileno, hexano, benceno, diclorobenceno

28.12. Enumere las diferencias fundamentales entre cromatografa de adsorcin y cromatografa de reparto. En cromatografa de adsorcin, las separaciones se basan en equilibrios de adsorcin entre los componentes de la muestra y una superficie slida. En cromatografa de particin, las separaciones se basan en equilibrios de distribucin entre dos lquidos inmiscibles.

28.13. Enumere las diferencias fundamentales entre cromatografa de intercambio de iones y cromatografa de exclusin por tamao. En cromatografa de exclusin por tamao las separaciones se basan en el tamao y en cierta medida la forma de molculas con poco las interacciones entre la fase estacionaria y los componentes de la muestra que se producen. En cromatografa de intercambio inico, en contraste, las separaciones se basan en reacciones de intercambio inico entre la fase estacionaria y los componentes de la muestra en la fase mvil. 28.14. Qu tipos de especies se puede separar con cromatografa de lquidos de alta resolucin pero no con cromatografa de gases? Por HPLC pero no por GC se pueden separar compuestos inestables al calor y no voltiles. 28.15. Describa las diferentes clases de bombas que se usan en la HPLC. Cules son las ventajas y desventajas de cada una? Bombas neumticas son simples, baratas y pulso gratis. Consisten en un contenedor plegable solvente ubicado en un buque que puede ser presurizado por un gas comprimido. Esta bomba tiene una limitada capacidad y presin de salida y no es adaptable a gradiente elucin. Solvente viscosidad depende de la velocidad de bombeo. Bombas de jeringa impulsada por tornillo consisten en una jeringa grande en el cual el pistn es movido por un tornillo impulsado por motor. Son libres de pulso y la tasa de partos es variada fcilmente. Sufren por la falta de capacidad y son inconvenientes cuando deben cambiarse de solventes. Las bombas reciprocantes son verstiles y ampliamente utilizadas. Consisten en una pequea cmara cilndrica que se llena y luego vaciada por el movimiento de idas y venidas de un pistn. Las ventajas incluyen pequeo volumen interno, presiones de salida alta, adaptabilidad a gradiente elucin y caudales constantes que son independientes de presin viscosidad y espalda. La salida de pulsos debe ser amortiguada. 28.16. Seale las diferencias entre la cromatografa de una sola columna y la cromatografa inica de columna inhibidora. En columna inhibidora de cromatografa de iones es seguido por una columna supresora cuyo propsito es convertir los iones utilizados para la elucin de especies moleculares que son en gran medida no inicos y por lo tanto no interfieran con conductimtrico deteccin de la especie de analito. En una columna de iones, intercambiadores de iones de baja capacidad se utilizan para que las concentraciones de iones en la solucin de elucin puedan mantenerse bajas. Entonces la deteccin se basa en las pequeas diferencias en conductividad causada por la presencia de componentes muestra eluido. 28.17. La espectrometra de masa es un sistema de deteccin extremadamente verstil para la cromatografa de gases. No obstante, acoplar un sistema de cromatografa de lquidos de alta resolucin con un espectrmetro de masa es una tarea a menudo difcil. Proporcione las principales razones por las que es ms difcil combinar la HPLC con la espectrometra de masa que combinar la cromatografa de gases con la espectrometra de masa. Se necesita una muestra de la fase gaseosa por espectrometra de masas. La salida de la columna de LC es un soluto disuelto en un solvente, mientras que la salida de la columna GC es un gas y as directamente compatibles. Como un primer paso para LC/MS, el disolvente debe ser vaporizado. Cuando est vaporizado, sin embargo, el solvente LC produce un volumen de gas 10 - 1000 veces mayor que el gas portador en cromatografa gaseosa. Por lo tanto, tambin debe eliminarse la mayora de los solventes.

28.18. Cul de los detectores de cromatografa de gases de la tabla 27.1 son apropiados para la HPLC? Por qu algunos de los mencionados son inadecuados para la HPLC? Los detectores de GC que son adecuados para HPLC son el espectrmetro FTIR y posiblemente fotoionizacin. Muchos de los detectores de GC son inadecuados para HPLC porque necesitan el componente liberador de analito en la fase gaseosa. 28.19. Aunque la temperatura no afecta las separaciones en cromatografa de lquidos de alta resolucin como lo hace en las separaciones por cromatografa de gases, puede desempear un papel importante. Analice cmo y por qu la temperatura podra no influir en las separaciones siguientes: a) separacin cromatogrfica en fase inversa de una mezcla de esteroides b) una separacin cromatogrfica por adsorcin de una mezcla se ismeros muy relacionados. Una serie de factores que influyen en la separacin es claramente constantes de distribucin incluyendo dependientes de la temperatura y las tasas de difusin. Adems, los cambios de temperatura pueden influir en la selectividad si los componentes A y B son influenciados diferentemente por los cambios de temperatura. Porque la resolucin depende de todos estos factores, la resolucin tambin ser dependiente de la temperatura (a) Para una separacin cromatogrfica de fase inversa de una mezcla de esteroides, la separacin podra ser influenciado por cambios dependientes de la temperatura en los coeficientes de distribucin. (b) Para una separacin cromatogrfica de adsorcin de una mezcla de ismeros, la separacin podra ser influenciado por cambios dependientes de la temperatura en los coeficientes de distribucin. 28.20. En una separacin con cromatografa de lquidos de alta resolucin dos componentes tienen tiempos de retencin que difieren en 15s. El primer pico eluye en 9.0 minutos y los anchos de los picos son casi iguales. El tiempo muerto es 65s. Mediante una hoja de clculo determine la cantidad mnima de platos tericos que se necesitan para alcanzar los siguientes valores de resolucin: . Qu tanto cambiaran los resultados si el pico 2 tuviera el doble de ancho del pico 1?

28.21. Se perfeccion un mtodo de cromatografa de lquidos de alta resolucin para separar y determinar ibuprofeno en muestras de plasma de rata como parte de un estudio del curso de tiempo del frmaco en los animales de laboratorio. Se sometieron a estudios cromatogrficos varios patrones y se obtuvieron los resultados siguientes: Concentracin del ibuprofeno, g/ml 0.5 1.0 2.0 3.0 6.0 8.0 10.0 15.0 rea relativa del pico 5.0 10.1 17.2 19.8 39.7 57.3 66.9 95.3

Luego se administr por va oral una muestra de 10mg/kg de ibuprofeno a una rata de laboratorio. Se tomaron muestras de sangre en diferentes tiempos despus de la administracin del frmaco se sometieron a anlisis de HPLC. Se obtuvieron los resultados siguientes: Tiempo, h 0 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 4.0 6.0 8.0 rea del pico 0 91.3 80.2 52.1 38.5 24.2 21.2 18.5 15.2

Determine la concentracin de ibuprofeno en el plasma sanguneo para cada tiempo dado y grafique la concentracin contra el tiempo. En porcentaje, durante qu periodo de media hora (primero, segundo, tercero, etc) se pierde la mayor parte del ibuprofeno.

De la hoja de clculo la mayor prdida de porcentaje se produce entre 1,0 y 1,5 hrs. 28.22. En una columna de reparto en fase normal, se determin que un soluto tiene un tiempo de retencin de 29.1 minutos y una muestra no retenida tiene un tiempo de retencin de 1.05 minutos cuando la fase mvil contiene 50% en volumen de cloroformo y 50% de n-hexano. Calcule a) para el soluto y b) la composicin de solventes que disminuira a un valor de alrededor de 10. Se usa la ecuacin:
( )

Donde

son los ndices de polaridad de cloroformo y n-hexano, respectivamente.

a) Usando la Ecuacin:

b) Usando la Ecuacin:

Sustituyendo en la ecuacin (1):


( )

Tomando el logaritmo de ambos lados de esta ecuacin da:

Sustituyendo

por

en la ecuacin (3) da

Dnde:

As la mezcla debe ser

el 71% y 29%