Cuantificacin de compuestos

por
cromatografa: Mtodo del
Patrn
Intern
o

Apellidos, nombre

Fernndez Segovia, Isabel

(isferse1@tal.upv.es)

Departamento
Centro

Garca Martnez, Eva (evgarmar@tal.upv.es)

Departamento de Tecnologa de Alimentos
ETSIAMN - Universitat Politcnica de
Valncia

1 Resumen de las ideas clave

La cromatografa de gases y la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)
son dos tcnicas de separacin de analitos que permiten identificar y
cuantificar un gran nmero de compuestos. Para la cuantificacin de
compuestos, existen diversas tcnicas como la normalizacin de reas, el
mtodo de patrn externo o el mtodo de patrn interno. En este objeto de
aprendizaje se va a describir cmo llevar a cabo la cuantificacin de
compuestos por el mtodo de patrn interno.

2 Introduccin
En las tcnicas de cromatografa de gases y HPLC, cuando se realiza un anlisis,
se obtiene un cromatograma. Un cromatograma es la representacin grfica de
la seal que da el detector al paso de los distintos analitos en funcin del
tiempo. En un cromatograma se observan una serie de picos que se
corresponden con los analitos detectados. Cada pico sale a un tiempo de
retencin (tR) determinado y tiene una altura y rea determinadas. El tR es el
parmetro que se emplea para llevar a cabo el anlisis cualitativo. Para hacer
un anlisis cuantitativo se puede utilizar la altura del pico o el rea, siendo
ste ltimo el ms empleado por su mayor precisin.

3 Objetivos
Los objetivos de este artculo son que el alumno sea capaz
de:
Disear el procedimiento a seguir para cuantificar compuestos
por cromatografa en columna mediante el mtodo del patrn interno.
Cuantificar un compuesto presente en una muestra a partir de
los cromatogramas de los patrones y de la muestra.

4 Desarrollo
El anlisis de alimentos y el control de calidad requieren metodologas que sean
exactas, precisas, muy sensibles y con bajos lmites de deteccin. Por ejemplo,
en el campo de control oficial de alimentos, las concentraciones de algunos
compuestos txicos que es necesario determinar son de magnitudes muy
bajas, por lo que se requieren potentes tcnicas de anlisis que permitan la
identificacin y cuantificacin de estos compuestos. En este sentido la
cromatografa de gases y la cromatografa lquida de alta resolucin son
dos de
las tcnicas ms adecuadas. Debido a la importancia de estos
mtodos de anlisis, es necesario saber disear procedimientos adecuados
para la cuantificacin de compuestos analizados por ambas tcnicas.

4.1 Preparacin
de
patrones
de
los cromatogramas

obtencin

Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el

mtodo del patrn interno, los pasos a seguir son los siguientes:
1.

Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes,

del patrn correspondiente al compuesto a cuantificar. El intervalo de
concentraciones ha de ser similar a la concentracin del analito en la
muestra problema.
2. Aadir a cada uno de los patrones y a la muestra una misma cantidad o
concentracin de patrn interno. El patrn interno ha de ser un
compuesto de naturaleza similar al analito a determinar, pero que no
est presente en la muestra. Por ejemplo, en un anlisis de azcares en
fresas un patrn interno podra ser lactosa, ya que se trata de un
azcar, pero no est
presente
en
las
fresas.
3. Inyectar el mismo volumen en el cromatgrafo de cada una de las
disoluciones patrn que contienen el patrn interno, as como del
extracto de la muestra que tambin contiene el patrn interno. De
esta forma tendremos los distintos cromatogramas de los patrones (un
cromatograma para cada disolucin patrn) y el cromatograma de la
muestra.
Ejemplo 1: Si se quiere determinar un analito cuya concentracin en el extracto
de la muestra, se espera que est comprendida en un margen de 350 a 550
mg/L, se podran preparar e inyectar en el cromatgrafo 4 disoluciones patrn
que adems contuvieran una misma concentracin de patrn interno (p.i.), con
las siguientes concentraciones:
Patrn 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L
p.i. Patrn 2: 400 mg/L analito + 350
mg/L p.i. Patrn 3: 500 mg/L analito +
350 mg/L p.i. Patrn 4: 600 mg/L
analito + 350 mg/L p.i.
A la muestra se le adicionara patrn interno, de forma que la concentracin de
patrn interno en el extracto de la muestra fuera la misma que en las
disoluciones patrn
y
se
inyectara
en
el
cromatgrafo.
As,
la
muestra
tendra
una concentracin desconocida de analito y 350 mg/L de
patrn interno:
Muestra: ? mg/L analito + 350 mg/L
p.i.
Los cromatogramas obtenidos al inyectar cada una de las disoluciones patrn y
la muestra seran los que se muestran en las Figuras 1 a 5.