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Una síntesis eficiente de tenofovir (PMPA): un intermedio clave que

conduce a los medicamentos contra el VIH basados en tenofovir
Brenden P. Derstine, John W. Tomlin, Cheryl Peck, Jule-Phillip Dietz, Brenden T
Herrera, Flavio Cardoso, Dinesh J. Paymode, Andrew C Yue, Anthony J Arduengo, Till
Opatz, David Snead, Rodger W. Stringham, D . Tyler McQuade y B. Frank Gupton
Org. Proceso Res. Dev., Manuscrito recién aceptado • Fecha de publicación (web): 29 de mayo de 2020

Descargado de pubs.acs.org el 29 de mayo de 2020

Recién aceptado

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es una publicación de la American Chemical Society. 1155 Sixteen Street NW,

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producidas por empleados de cualquier gobierno de la Corona del reino de la Commonwealth en el curso de sus
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7 Una síntesis eficiente de tenofovir (PMPA): una clave
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Intermedio que conduce al VIH basado en tenofovir
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Medicamentos
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Brenden P. Derstine, † John W. Tomlin, † Cheryl L. Peck, † Jule-Phillip Dietz, ‡ Brenden T. Herrera,
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23 † Flavio SP Cardoso, † Dinesh J. Modo de pago, † Andrew C. Yue, † Anthony J. Arduengo III, § Hasta
24
25 Opatz, ‡ David R. Snead, † Rodger W. Stringham, † D. Tyler McQuade *† y B. Frank Gupton *†
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28
†Departamento de Ingeniería Química y Ciencias de la Vida, Virginia Commonwealth University,
29
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31 Richmond, Virginia 23284, Estados Unidos
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34 ‡Departamento de Química, Universidad Johannes Gutenberg, Duesbergweg 10–14, 55128 Mainz,
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36 Alemania
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§Departamento de Química, Universidad de Alabama, Tuscaloosa, Alabama 35487, Estados
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3 Abstracto: En este documento, informamos mejoras adicionales en la síntesis de tenofovir. 1, el precursor de
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6 tenofovir disoproxil fumarato (TDF) y tenofovir alafenamida fumarato (TAF). Empezando desde
7
8 precursor acíclico diaminomalononitrilo 12, un protocolo de cuatro pasos para tenofovir 1 permitirá
9
10 integración vertical para más fabricantes. La transformación clave es un paso convergente
11
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procedimiento de 6 en comparación con el proceso comercial actual, con un rendimiento mejorado de
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15 59% (dos pasos) a 70%. Otras mejoras incluyen la eliminación de la necesidad de
dieciséis

17 magnesio tert-butóxido (MTB) y reducción significativa de solvente al evitar un intermedio

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trabajo. Dado que los costos de los tratamientos contra el VIH / SIDA siguen siendo un obstáculo para los más necesitados,
20
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22 reducir los costos de procesamiento / materia prima y aumentar la seguridad del suministro puede aumentar
23
24 acceso del paciente.
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28 Palabras clave: tenofovir • hidroxipropil adenina • hidroxipropil imidazol • diaminomaleonitrilo
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30 • fabricación continua
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33 INTRODUCCIÓN:
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En 2018, la Organización Mundial de la Salud (OMS) informó que solo el 60% de los 25 millones de personas
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39 en el mundo en desarrollo que viven con el VIH / SIDA están recibiendo tratamiento.1a Mientras que el régimen de drogas
40
41 los costos son bajos desde una perspectiva occidental: $ 60-70 / paciente / año, los costos siguen siendo demasiado altos para garantizar
42
43
que todos los que necesiten los medicamentos tengan acceso. Con la dramática caída de los precios de estos regímenes
44
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46 ha aumentado el impacto relativo de los costes de formulación y envasado. Dicho esto, el costo del
47
48 El ingrediente farmacéutico activo (API) todavía constituye un porcentaje significativo del fármaco.
49
50 producto.1b La reducción de costos se puede lograr utilizando materias primas de menor costo y racionalizando
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53 los procesos de fabricación. Predecimos que las nuevas rutas que aprovechan los materiales de partida alternativos
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55 incentivará un espectro diferente de participantes del mercado en relación con el estado actual de la práctica.
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3 Por ejemplo, la mayoría de los procesos de fabricación de TDF utilizan adenina y carbonato de propileno como
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6 materiales para empezar. Un nuevo proceso que comienza con cianuro de hidrógeno y una amina quiral podría
7
8 apelar a un grupo diferente de productores con experiencia en el manejo de cianuro de hidrógeno.
9
10 Se sabe que el número de fabricantes de ingredientes intermedios y activos se correlaciona con la
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precio de los productos: una mayor competencia fomenta precios más bajos en estos medicamentos de alto volumen
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15 mercados.
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33 Esquema 1. Estrategias sintéticas para tenofovir disoproxil fumarato y
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tenofovir alafenamida fumarato.
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38 Tenofovir disoproxil fumarato (2) es un profármaco del análogo de nucleótido inverso
39
40 inhibidor de la transcriptasa (NRTI) tenofovir (PMPA, 1) que fue desarrollado para el tratamiento de
41
42
VIH / SIDA y hepatitis B (esquema 1).2-4 El TDF se utiliza actualmente como tratamiento de primera línea para
43
44
45 pacientes con VIH / SIDA y más de 1600 TM se produjeron en 2019 con una demanda prevista de
46
47 más de 1700 TM en 2020.5,6 El proceso de fabricación de primera generación para TDF fue
48
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descrito por Gilead Sciences Inc. (Esquema 2).2 La adenina se transformó en TDF en tres
50
51
52 etapa, secuencia de cuatro pasos. El estereocentro solitario se instala en la Etapa 1 mediante alquilación de adenina
53
54 con (R) -carbonato de propileno (5). Alquilación mediada por bases del alcohol secundario resultante
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3 con dietil (hidroximetil) fosfonato tosilado (DESMP, 8) dio el intermedio
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6 éster de fosfonato (no mostrado). El ácido fosfónico libre PMPA (1) está formado por la acción de TMSBr
7
8 y luego esterificado con clorometil isopropil carbonato (CMIC, 9) para producir tenofovir crudo
9
10 disoproxilo (TD, 10). El tratamiento de TD crudo con ácido fumárico da TDF cristalino en un 13%
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rendimiento global.
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29 Esquema 2. El proceso CHAI para tenofovir disoproxil fumarato.
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El proceso de fabricación descrito en el Esquema 1 fue mejorado por Clinton Health Access
35
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37 Iniciativa (CHAI) para dar TDF con un rendimiento del 24%.7 Actualmente, TDF se sintetiza comercialmente
38
39 por al menos 17 fabricantes, incluidos Gilead, Mylan, Hetero, Zhejiang Huahai, Stride, Lupin,
40
41
Laboratorios Aurobindo y Laurus. Aunque se han realizado mejoras incrementales significativas en
42
43
44 En la fabricación de TDF, la química básica para producir este API sigue siendo la misma. La corriente
45
46 El proceso de fabricación continúa ofreciendo oportunidades de mejora, en particular las dos primeras
47
48 etapas. En la Etapa 1, la alquilación de la adenina da como resultado una impureza regioisomérica (7) - aproximadamente el 10%
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51 del material se pierde a no deseado norte-alquilación.5 El perfil de pureza se puede mejorar con tolueno.
52
53 como antidisolvente pero el regioisómero no deseado todavía está presente (7-8%); sin embargo, la recristalización
54
55 usando 1: 1 MeOH /IPrOH proporcionó el material deseado con un rendimiento total del 66% con un 1,7% de
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3 regioisómero restante.7,8 Una encuesta de las bases de datos de importación / exportación como Datamyne o Zauba
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6 reveló que el precio de la adenina ha fluctuado en los últimos años, lo que sugiere que las rutas que evitan el uso
7
8 la adenina podría mejorar la solidez general del mercado.
9
10 Las transformaciones en la Etapa 2 plantean nuevos desafíos.7-11 Las dos reacciones son telescópicas
11
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debido a que el éster de fosfonato intermedio es soluble en agua, propenso a la hidrólisis en el monoéster
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15 y difícil de cristalizar. Otro problema es la base utilizada en la Etapa 2a para acoplar el (R) -1- (6-amino-
dieciséis

17 9H-purin-9-il) propan-2-ol (HPA) con DESMP. La base reportada con mayor frecuencia, Mg (OtBu)2,
18
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proporciona excelentes conversiones (> 90%)8 pero tiene inconvenientes que incluyen: (1) alto costo, (2) pobre
20
21
22 reproducibilidad - variación de lote a lote y (3) tratamiento y purificación de mayor costo.7 Buscamos
23
24 crear un proceso que evite la adenina, el carbonato de propileno y el Mg (OtBu)2. Aquí, describimos
25
26 nuestro enfoque que ofrece alta calidad 1 utilizando materiales de partida alternativos a un costo
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29 comparable a la ruta de fabricación existente.
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33 RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
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53 Esquema 3. Asignaciones TDF Atom basadas en Low Cost,
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55 Materias primas básicas.
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3 Realizamos un análisis retrosintético de PMPA donde restringimos nuestros materiales de partida a
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6 materias primas de bajo costo (esquema 3). Cada fragmento propuesto se puede obtener de forma simple, de alta
7
8 volumen de materias primas como cianuro de hidrógeno, Ltreonina, tricloruro de fósforo, amoniaco
9
10 y formaldehído. Además, definimos un proceso que facilita la síntesis de ambos
11
12
medicamentos tenofovir TDF y TAF. Como1 es un intermedio común tanto en TDF como en TAF
13
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15 síntesis, focalización 1 para la mejora se consideró una alta prioridad.
dieciséis

17 Consideramos muchas estrategias y se identificó la más prometedora para incluir 5-amino-4-

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cianoimidazol con un brazo de hidroxipropilo quiral en N1 (HPI, 15) como intermedio. Japón
20
21
22 Soda Company describió la síntesis de 15 de 12 en una patente que nos da la esperanza de que un mercado para
23
24 este material podría ser posible.12 La ruta original de The Nippon Soda Company se proporcionó en general
25
26 rendimientos modestos (~ 50%) y en nuestras manos tuvimos un trabajo muy desafiante donde el policianuro viscoso
27
28
29 Los polímeros obstruían los filtros y las soluciones coloreadas de un color rojo intenso que era difícil de eliminar.
30
31 producto. Si bien estos tipos de sustratos (incluidos15) se utilizan comúnmente para construir
32
33 imidazoles funcionalizados y nucleobases,13-15 las rutas sintéticas suelen sufrir lo mismo
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desafíos. La ruta necesitaba mejoras en el proceso para que la química fuera más viable.
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48 Esquema 4. Síntesis de HPI (15) Utilizando reactivos de bajo costo
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3 El esquema 4 describe nuestra ruta mejorada a 15. El proceso comienza condensando
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6 diaminomaleonitrilo (DAMN), un tetrámero de HCN disponible comercialmente, y
7
8 ortoformiato de trimetilo (TMOF) que produce formimidato 13 en buen rendimiento. La suma de (R) -1-
9
10 aminopropan-2-ol (14 - a un paso de L-treonina)dieciséis produjo el intermedio de formamidina que
11
12
cicla a (R) -5-amino-1- (2-hidroxipropil) -1H-imidazol-4-carbonitrilo, (HPI, 15) con un rendimiento del 85%
13
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15 usando Ba (OH)2.17 Sustitución de la base utilizada en la patente original de Nippon Soda Company
dieciséis

17 (NaOH) con Ba (OH)2 eliminó los alquitranes de policianuro durante la cristalización permitiendo más fácil
18
19
aislamiento, mayores rendimientos y producto con poco color. Si bien no se observó evolución de HCN en
20
21
22 Este proceso, se deben considerar medidas de precaución debido a la posible generación de HCN en el
23
24 manipulación de estos materiales.
25
26 Procedimos a investigar las condiciones de ciclación para formar el núcleo de adenina (esquema 5). Inicial
27
28
Los estudios se llevaron a cabo utilizando acetato de formamidina en diglyme proporcionando 6 con alta conversión como
29
30
31 monitoreado por HPLC. El uso de diglyme como solvente presentó dos desafíos: 1) cristalización
32
33 del producto era variable, produciendo a menudo un aceite negro; 2) diglyme es caro cuando es alternativo
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Se consideraron disolventes como DMF y NMP.
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Esquema 5. Novedosa síntesis de PMPA que utiliza el HPI Intermedio.
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3 La DMF y la NMP se investigaron con DMF proporcionando mayores rendimientos. Usando DMF, la reacción
4
5
6 procedió a una alta conversión y la purificación se logró fácilmente usando 1: 1 (v: v)
7
8 isopropanol / MeOH7,8 como antidisolvente (proceso CHAI) una vez que se eliminó la DMF. Sin embargo,
9
10 Los estudios iniciales con estas condiciones de aislamiento demostraron no ser traducible a mayor escala debido a
11
12
adición del antidisolvente por encima de su punto de ebullición. Adición del disolvente por debajo de esta temperatura
13
14
15 hizo inviable la eliminación del exceso de acetato de formamidina, lo que justifica una mayor investigación. Pantallas
dieciséis

17 de antidisolventes alternativos y condiciones de cristalización se llevaron a cabo para maximizar el aislamiento

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producir. El isopropanol anhidro a -15 ° C proporcionó HPA con un rendimiento del 93% y una pureza del 99% en un
20
21
22 escala. Más detalles sobre la optimización y reproducibilidad del proceso están disponibles en el
23
24 Información.
25
26 Producción de PMPA a través de una alquilación más eficiente que evitó el Mg (OtBu)2 se convirtió en nuestro
27
28
29 siguiente enfoque. Presumimos que la convergencia podría incrementarse mediante la introducción del fosfonato
30
31 enlace a través del ácido ((tosiloxi) metil) fosfónico. Postulamos que este enfoque también podría permitir
32
33 nosotros para obviar el uso de Mg (OtBu)2.
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46 Figura 1. Papel putativo de Mg2+
47
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49 Contraión en la reacción de alquilación.
50
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52 Probamos nuestra hipótesis examinando la reacción que se muestra en la Tabla 1 donde el tipo de base y
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Los solventes fueron variados. Basado en informes anteriores donde el Mg2+ El contraión demostró ser crítico para
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3 acoplamiento, examinamos una gama de bases derivadas de magnesio de menor costo (Figura 1). Usando 3 - 5
4
5
6 equivalentes a temperatura ambiente en disolventes apróticos polares como DMPU o NMP, no deseado
7
8 se observó producto (entradas 1-5, Tabla 1).7,8 Informes previos de PMPA y derivados del mismo
9
10 discutieron bases con litio o sodio como contraión.18 También se investigó LiHMDS
11
12
porque se sabe que los cationes de litio involucran a múltiples socios de coordinación. El uso de LiHMDS
13
14
15 independientemente del disolvente, proporcionó una conversión más baja (por ejemplo, entrada 6). Extendiendo la pantalla a más
dieciséis

17 temperaturas mientras se mantenían 3 equivalentes de base (70 ° C, entradas 7) dieron trazas de

18
19
PMPA (Tabla 1) con NaOtBu dando los mejores resultados (20 - 25%). Otros estudios indicaron que
20
21
22 el rendimiento de PMPA se mejoró al 64% al aumentar la carga de NaOtBu a 7 equivalentes
23
24 y manteniendo una temperatura de reacción de 70 ° C (Nota: las reacciones se llevaron a cabo en 2,4 mmol
25
26 escala). Los ácidos de Lewis también se investigaron como candidatos potenciales para facilitarO-alquilación vía
27
28
29 activación del grupo saliente. Se seleccionaron una variedad de cationes di y trivalentes, pero se mejoraron
30
31 las conversiones no se realizaron.
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Tabla 1. Cribado de las condiciones de reacción
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Equiv
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Producir
Base
Temperatura
Entrada Solvente Tiempo
. (° C) B

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47 1 MeMgCl 3 DMPU 7h 25 0
48
2 MeMgCl 3 NMP 7h 25 0
49
50 3 IPrMg•LiCl 3 DMPU 7h 25 0
51
52 4 IPrMg•LiCl 3 NMP 7h 25 0
53 5 Mg (HMDS)2 3 DMPU 7h 25 0
54
55 6 LiHMDS 3 DMPU 7h 25 21
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3 7 NaOtBu 3 NMP 12 h 70 25
4
5 8 NaOtBu 5 DMF 7h 70 61
6 7
7 9C NaOtBu DMF 16 h 25
64
8
9 10 KOtBu 3 NMP 3h 70 0
10
11 aDescubrimos que el ácido fosfónico libre es
12 intercambiable con la sal de fosfonato de piridinio. HPA (2,4
13 mmol), ácido tosilfosfónico (4,8 mmol), disolvente (1,5 ml);
14 consulte la información de apoyo.BDeterminado por HPLC.
CLos equivalentes de ácido tosilfosfónico fueron 1,7 para
15
este experimento.
dieciséis

17
18
19
20 En general, observamos que las bases derivadas de sodio condujeron a conversiones más altas y el pKa de la base
21
22 se encontró que era crítico para la quimioselectividad de la reacción de alquilación; estas bases favorecieronO-
23
24
alquilación (formación de PMPA) mientras que otros cationes y bases conducen a más productos secundarios (apoyo
25
26
27 Información, Tabla S8). Finalmente, los solventes apróticos polares (DMF, DMPU, NMP) dieron consistentemente el
28
29 mayor conversión de PMPA. Por lo tanto, avanzamos hacia la optimización del acoplamiento entre HPA y
30
31 el ácido tosilfosfónico usando NaOtBu en DMF. Volvimos nuestra atención a la temperatura.
32
33
34 del acoplamiento de la reacción, postulando que la reacción podría llevarse a cabo en la habitación
35
36 temperatura. Investigación adicional sobre el equilibrio entre los equivalentes de base y fosfónico
37
38 ácido condujo a los parámetros de reacción optimizados: 6 equivalentes de NaOtBu, 1,7 equivalentes del
39
40
ácido tosilfosfónico en DMF a temperatura ambiente durante 16 horas con mayores rendimientos aislados después de
41
42
43 aumentar el tamaño de la reacción de miligramos a una escala de varios gramos (Nota: las bases de alcóxido envejecidas funcionan
44
45 mal, presumiblemente debido a la absorción de agua atmosférica). Los rendimientos han sido reproducibles
46
47
alrededor del 70% y la reacción se ha realizado en una escala de 25 gramos. Más importante aún, el
48
49
50 El proceso convergente es una mejora significativa para los procesos de Gilead y CHAI. El resultado
51
52 es en general mayores rendimientos y menores costos de purificación y procesamiento. Mayor desarrollo de
53
54 esta química en un proceso escalable se describe en la Información de apoyo. Tenemos
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1
2
3 desarrolló descripciones experimentales escalonadas que se presentan en la Información de apoyo
4
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6 y están diseñados para ayudar a quienes deseen implementar el proceso; las hojas de lote anotadas son
7
8 disponible a petición.
9
10 Reconocemos que existen otras modalidades más allá de los enfoques por lotes y exploramos alternativas.
11
12
Nos propusimos desarrollar un proceso continuo para reducir las operaciones unitarias. El esquema 6 ilustra el básico
13
14
15 Acercarse. Elegimos un sistema de reactor comercial basado en bomba peristáltica equipado con una columna sólida
dieciséis

17 de NaOH para demostrar que un proceso continuo de 12 para 15 era posible.

18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34 Esquema 6. Proceso continuo para la preparación de HPI.
35
36
37 El proceso continuo mantiene una secuencia similar de pasos sintéticos en comparación con el lote.
38
39 proceso con un par de diferencias notables. Descubrimos que diglyme era necesario para garantizar
40
41 que todos los materiales de partida seguían siendo solubles y permitían un telescopio completo de un extremo a otro. los
42
43
44 El proceso se inició combinando DAMN (1,38 M en diglyme) con TMOF (4,1 M) y (TFA 3%
45
46 p / p) para formar el imidato seguido de condensación con la amina ópticamente activa. El imidate
47
48 intermedio18) se cicló luego haciéndolo pasar a través de una columna llena de NaOH.
49
50
Si bien este proceso de flujo tiene muchas ventajas (pocas operaciones unitarias, un solo solvente), el proceso
51
52
53 tiene pasivos. Con un rendimiento óptimo, el sistema tenía una productividad de 8 gramos / hora de HPI (15);
54
55 sin embargo, la calidad del HPI se degradó con el tiempo. Presumimos que esta disminución del rendimiento
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1
2
3 resultado de la precipitación de oligómeros de cianuro (subproducto de la anulación19) sobre la superficie
4
5
6 de los gránulos de hidróxido de sodio. Cuando la mezcla de reacción entró por primera vez en la columna de hidróxido,
7
8 el color de la solución fue amarillo pálido durante todo el tiempo de residencia. Después de unos minutos,
9
10 la columna comienza a teñirse con material marrón / rojo / negro. Después de unas horas, el color del
11
12
La solución que salió de la columna se volvió marrón más oscura a medida que la capacidad de carga de la columna se redujo.
13
14
15 excedido. Independientemente, pudimos demostrar que para aquellos fabricantes que aprovechan
dieciséis

17 procesos continuos, las mejoras incrementales en nuestro enfoque general podrían potencialmente producir
18
19
un proceso continuo de principio a fin. El problema de la columna de NaOH podría resolverse utilizando un
20
21
22 reactor de tanque agitado (CSTR) que contiene nuestro Ba (OH)2 enfoque que describimos en la sección de lotes.
23
24 Nuestro objetivo fue demostrar el concepto básico en este caso.
25
26 En resumen, hemos informado de varios avances, tanto en procesos continuos como por lotes,
27
28
29 hacia la síntesis de tenofovir (PMPA, 1). Hemos demostrado que el funcionalizado
30
31 El núcleo de adenina se puede construir a partir de materiales básicos de gran volumen y bajo costo. los
32
33 Las transformaciones son eficientes, prometen un mayor escalamiento (demostramos un mínimo de 25
34
35
g) y aumentar el potencial de participación de nuevos participantes en el mercado. Tenofovir es clave
36
37
38 intermedio en TDF y TAF, siendo el primero producido a 1600 TM por año y vendido
39
40 por $ 140 / kg. Una reducción del 10% en el costo de los bienes equivale a un ahorro de $ 22,4 millones / año -
41
42
recursos que los compradores pueden utilizar para comprar más medicamentos.
43
44
45 EXPERIMENTAL
46
47 Las reacciones se controlaron mediante GC-MS o HPLC utilizando los métodos indicados. Formación de
48
49 MADI, incluido el intermedio de amidina, se controló mediante GC-MS. La columna utilizada fue una
50
51
52 Columna Agilent J&W GC, tipo HP-1 (30 mx 0,320 mm, película de 5 µm). El horno se mantuvo a
53
54 200 ° C y la entrada a 225 ° C durante la duración del método (20 minutos). Una relación de división de 50: 1
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3 se utilizó. El caudal fue de 0,8 ml / min con helio como gas portador. HPI, HPA y PMPA
4
5
6 se controlaron utilizando métodos HPLC idénticos. La fase móvil fue una mezcla de MeOH al 15%.
7
8 y tampón de fosfato de potasio acuoso al 85% (pH 7,6, 10 mM). Los cromatogramas fueron
9
10 adquirido en un sistema Agilent 1100 utilizando una columna Agilent Extend C18 (5 µm, 4,6 mm x 250
11
12
mm) y se monitorizaron a 245 (HPI) y 260 nm (HPA y PMPA). Todos los valores de rendimiento han sido
13
14
15 ajustada por pureza basada en ensayos de% de área o% en peso.
dieciséis

17 Preparación de metilo norte-2-amino-1,2-dicianovinil) formimidato (MADI), 13: A un 2-L

18
19
Se cargó un matraz de fondo redondo de tres bocas equipado con un agitador superior y un termopar
20
21
22 2,3-diaminomaleonitrilo (DAMN), 12, (100 g, 1.0 equiv., 926 mmol) y MeOH de grado reactivo
23
24 (400 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Ortoformiato de trimetilo
25
26 Se cargó (TMOF) (120 ml, 1,2 equiv., 1,11 mol) a la mezcla de reacción en una porción.
27
28
29 Posteriormente, se cargó ácido trifluoroacético (TFA) (50 µL, 0,005 equiv, 4,63 mmol) en el
30
31 reacción en una porción. (Esta reacción es rápida y da como resultado una suspensión espesa en 5 minutos.
32
33 por lo tanto, se requiere agitar por encima de la cabeza. Además, se debe tener cuidado para evitar agregar un exceso
34
35
TFA, ya que esto hace que la mezcla de reacción se espese a una viscosidad donde la agitación es un desafío.
36
37
38 Una mala mezcla da como resultado rendimientos aislados más bajos). La reacción se calentó a una temperatura interna.
39
40 de 40 ° C y se agitó durante 2 horas. Después del consumo de los materiales de partida según lo determinado por GC-
41
42
MS, se cargó hexanos de grado reactivo (600 ml) a la mezcla de reacción en una porción. los
43
44
45 La suspensión se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente en el transcurso de aproximadamente 20
46
47 minutos, luego se enfrió a una temperatura interna de 0 ° C y se agitó durante una hora más. Los solidos
48
49 se aislaron mediante filtración al vacío y se secaron al vacío para producir un sólido de color amarillo pálido, 13, en
50
51
52 Rendimiento del 93% (128,9 g), con una pureza del ensayo GC-MS del 98%. 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ =
53
54 7,98 (s, 1 H), 7,04 (sa, 2 H), 3,82 (s, 3 H) ppm. 13C-RMN (150 MHz, DMSO-d6): δ = 156,8, 123,0,
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1
2
3 114,8, 114,6, 98,2, 54,6 ppm. FTIR (ATR, ordenado) 3466, 3356, 2238, 2196, 1636, 1606, 1369, 1271,
4
5
6 912, 799, 501 cm-1. HRMS (ESI) m / z calculado para C6H6norte4OH [M + H]+ 151.0620, encontrado
7
8 151.0614.
9
10 Preparación de (R) -5-amino-1- (2-hidroxipropil) -1H-imidazol-4-carbonitrilo (HPI), 15:
11
12
A un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con una sonda de temperatura interna se añadió
13
14
15 (R) -1-aminopropan-2-ol, 14, (18,2 ml, 231 mmol, 1,4 equiv.) Y MeCN (25 ml) en la habitación
dieciséis

17 temperatura. La solución se agitó durante 5 minutos. MADI,13, (25,0 g, 167 mmol, 1,0 equiv.)
18
19
se suspendió en MeCN (175 ml) y se cargó en la mezcla de reacción. MeCN adicional (15
20
21
22 mL) para enjuagar las paredes del reactor para enjuagar cualquier sólido adherido. Después de la adición de
23
24 MADI, la mezcla de reacción se volvió marrón oscuro y se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas.
25
26 La conversión al intermedio aminoalcohol deseado se controló mediante HPLC mientras
27
28
29 el consumo de MADI se controló mediante GC-MS. Después de la conversión completa, la reacción
30
31 la mezcla se enfrió a una temperatura interna de 0 - 5ºC usando un baño de hielo. Ba sólido (OH)2
32
33 monohidrato (37,9 g, 200 mmol, 1,2 equiv.) se cargó con H desionizado2O (113,7 ml). los
34
35
la reacción se calentó a temperatura ambiente. A medida que avanzaba la reacción, el color pasó de brillante
36
37
38 rojo a marrón oscuro con precipitado visible agitando en el fondo del matraz. Conversión completa
39
40 al producto de HPI deseado se produjo a 1 hora y 15 min según se rastreó por HPLC.
41
42
Después de 1 hora y 15 minutos, la mezcla de reacción se filtró en un embudo Büchner y el fondo redondo
43
44
45 El matraz se enjuagó con MeCN (3 x 25 ml) para dar un volumen total de aproximadamente 300 ml. Esta
46
47 se concentró a aproximadamente 200 ml mediante evaporación rotatoria a presión reducida a 40ºC.
48
49 ° C. Después, la solución se calentó a 50ºC, momento en el que la mezcla se volvió marrón oscuro. Después
50
51
52 agitando en un baño de aceite a 40 ° C durante 10 minutos, la solución se cargó con DCM (200 ml) en una
53
54 porción y se dejó enfriar a temperatura ambiente en el transcurso de 1 hora. La mezcla se convirtió
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1
2
3 bifásico con un aceite negro visible en el fondo del matraz. A continuación, la solución se enfrió a
4
5
6 temperatura interna de 0 - 5 ° C y se agita durante 1 hora más. Al enfriar, precipitación
7
8 Se observó y la mezcla se filtró en un embudo Büchner con el aceite negro remanente en el
9
10 filtrado para producir HPI como un sólido gris pálido. El sólido se secó al vacío para producir 23,7 g de
11
12
producto con un rendimiento del 82% corregido para una pureza de HPLC del 96% basada en el% de área. 1H-NMR (600 MHz,
13
14
15 DMSO-d6): δ = 7,11 (s, 1 H), 6,07 (s, 2 H), 5,06 (s, 1 H), 3,85 - 3,69 (m, 2 H), 3,65 - 3,50 (m, 1 H),
dieciséis

17 1,03 (d, J = 3,9 Hz, 3 H) ppm. 13C-RMN (150 MHz, DMSO-d6): δ = 147,9, 133,5, 117,6, 90,1,
18
19
64,8, 50,1, 20,6 ppm. FTIR (ATR, ordenado) 3159, 2208, 1570, 1174, 1090 cm-1. HRMS (ESI) m / z
20
21
22 calculado para C7H10norte4OH [M + H]+ 167,0933, encontrado 167,0926.
23
24 Preparación de (R) -1- (6-Amino-9H-purin-9-il) propan-2-ol (HPA), 6: A 500 ml de 3 bocas
25
26 matraz de fondo redondo, la mezcla de (R) -5-amino-1- (2-hidroxipropil) -1H-imidazol-4-
27
28
29 carbonitrilo, 15, (HPI, 97,8% de pureza) (25,0 g, 150 mmol, 1,0 equiv.) Y acetato de formamidinio
30
31 (26,6 g, 256 mmol, 1,7 equiv.) Se añadió en DMF (50 ml). El recipiente de reacción estaba equipado con
32
33 una sonda de temperatura interna J-KEM y la mezcla se calentó a una temperatura interna de 100
34
35
° C durante 16 horas. Una vez completada la reacción, según se controló por HPLC, se activó el calentamiento.
36
37
38 y se añadió alcohol isopropílico (150 ml). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente.
39
40 temperatura (25 ° C). La mezcla de reacción se enfrió a una temperatura interna de -15 ° C y
41
42
se agita durante tres horas a la misma temperatura. La suspensión se filtró y se lavó con agua fría.
43
44
45 (-15°C) isopropanol (38 mL + 37 mL). El sólido aislado se secó en un horno de vacío a 65 ° C durante
46
47 dos horas para pagarR) -1- (6-amino-9H-purin-9-il) propan-2-ol (HPA), 6, como un sólido blanco, (26,67
48
49
g, 93% ajustado con un% en peso de 99% por HPLC. Los datos espectroscópicos están de acuerdo con
50
51
52 valores informados. 1H RMN (600 MHz, DMSO) δ = 8,13 (s, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 7,18 (s, 2 H), 5,04
53
54 (sa, 1H), 4.18 - 4.05 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 2H), 1.06 (d, J = 5,9, 3 H) ppm. 13C NMR (150 MHz,
55
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60 Entorno ACS Paragon Plus dieciséis
Página 17 de 22 Investigación y desarrollo de procesos orgánicos

1
2
3 DMSO) δ = 155,9, 152,2, 149,7, 141,5, 118,5, 64,6, 50,1, 20,9 ppm. HRMS (ESI) m / z calculado
4
5
6 para C8H11norte4OH [M + H]+ 194.1042, hallado 194,1040.
7
8 Preparación de (R) - (((1- (6-amino-9H-purin-9-il) propan-2-il) oxi) metil) fosfónico
9
10 (PMPA), 1: Se equipó un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml con un
11
12
sonda de temperatura, agitador superior y línea de nitrógeno. El matraz se cargó con DMF anhidro.
13
14
15 (400 mL) y se enfrió a una temperatura interna de 2-5 ° C bajo una atmósfera de nitrógeno. Con
dieciséis

17 agitando (300 RPM), sodio tert-butóxido (74,5 g, 776 mmol, 6,0 equiv.) se cargó en el
18
19
recipiente de reacción para producir una solución transparente y se observó un aumento de temperatura de 12 ° C. Para
20
21
22 se añadió la solución clara (R) -1- (6-amino-9H-purin-9-il) propan-2-ol (HPA, 92% de pureza) (25,0
23
24 g, 129,4 mmol, 1,0 equiv.) durante 10 minutos con agitación (porciones de 5 x 5 g). La solución amarilla
25
26 se agitó a una temperatura interna de 5 ° C durante 30 minutos. ((Tosiloxi) metil) fosfónico sólido
27
28
29 ácido, 8, (58,5 g, 220 mmol, 1,7 equiv.) Se añadió durante 10 minutos en cuatro porciones (~ 14,6 g
30
31 porciones), no se permitió que la temperatura interna superara los 15 ° C. Después de la adición fue
32
33 completa, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante la noche (16 horas). Después
34
35
Consumo completo del material de partida, según lo indicado por HPLC, se eliminó el disolvente.
36
37
38 mediante evaporación rotatoria a presión reducida. El residuo se disolvió en 250 mL de agua y se
39
40 Se añadió ácido clorhídrico concentrado (aproximadamente 40 ml) hasta pH = 2,8 - 3,0. Un precipitado
41
42
se formó y la mezcla se agitó a una temperatura interna de 5 ° C durante 3 horas y luego se recogió
43
44
45 filtración al vacío. El sólido blanquecino resultante se lavó con hielo (~ 5 ° C) H2O (25 ml),
46
47 una mezcla helada (~ 5 ° C) 1: 1 H2O / acetona (25 ml) y acetona enfriada con hielo (~ 5 ° C) (25 ml). los
48
49 el sólido se secó al vacío a 75 ° C durante la noche para producir PMPA, 1, como un sólido blanco ajustado por peso%
50
51
52 de 97.1. (26,2 g, 70% ajustado por KF). Titulación KF: 2,4%. Nota: Si el% en peso del aislado
53
54 el material no es deseable, se puede realizar un lavado adicional con agua helada para aumentar la pureza
55
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1
2
3 con una pérdida mínima de producto (consulte la Información de respaldo). Los datos espectroscópicos están en
4
5
6 de acuerdo con los valores informados. 1H RMN (600 MHz, DMSO) δ = 8,15 (s, 2 H), 7,25 (s, 2 H), 4,28
7
8 (dd, J = 14,4, 3,7, 1 H), 4,17 (dd, J = 14,4, 5,6, 1 H), 3,91 (dd, J = 10,7, 5,3, 1H), 3,59 (p, J = 13,2,
9
10 2 H), 1,03 (d, J = 6,2, 3 H) ppm. 13C NMR (150 MHz, DMSO) δ = 155,8, 152,2, 149,7, 141,6,
11
12
13
118,2, 75,3 (d, J = 12,1), 64,4 (d, J = 161,7), 46,4, 16,9 ppm. 31P NMR (243 MHz, DMSO) δ =
14
15 16,6 ppm. cm-1. HRMS (ESI) m / z calculado para C9H14norte5O4PH [M + H]+ 288.0862, encontrado
dieciséis

17 288.0853.
18
19
CONTENIDO ASOCIADO
20
21
22
23 información de soporte
24
25 La información complementaria está disponible de forma gratuita en [enlace].
26
27
Procedimientos experimentales detallados, estudios de optimización y datos de caracterización.
28
29
30
31
32 INFORMACIÓN DEL AUTOR
33
34
35 Autor correspondiente
36
37
38 * Correo electrónico: bfgupton@vcu.edu

39 * Correo electrónico: tmcquade@vcu.edu

40
41
42 Fuentes de financiamiento

43
44 Este trabajo fue apoyado por la Fundación Bill y Melinda Gates y la Familia Gottwald
45
46
Fundación.
47
48
49
50 RECONOCIMIENTO
51
52
53 Agradecemos a Hari. PR Mangunuru, Andrew R. Ehle, Jenson Verghese, Eric Yu, Erin E. Striker,
54
55 Daniel Rivalti, Nakul S. Telang y Saeed Ahmad por brindar información valiosa que condujo a la
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1
2
3 creación de este manuscrito. También agradecemos a nuestros otros miembros del equipo M4ALL dirigidos por el profesor
4
5
6 Timothy Jamison y Oliver Kappe por sus ideas semanales. Además, expresamos nuestro agradecimiento a
7
8 Tai Yue, Trevor Laird y John Dillon por sus reflexivos comentarios y discusiones a lo largo
9
10 este trabajo. También agradecemos a Silpa Sundaram y a la Dra. Susan Hershenson por fomentar un ecosistema
11
12
donde se pueden tomar decisiones difíciles.
13
14
15
dieciséis
REFERENCIAS
17
18
19 (1) una. Organización Mundial de la Salud. Hoja informativa sobre el VIH / SIDA. https://www.who.int/news-
20
21 sala / hojas informativas / detalle / vih-sida. Noviembre de 2019. b. Bumpas J, Betsch E. Estudio exploratorio sobre
22
23
fabricación de principios activos farmacéuticos para medicamentos esenciales. Salud, Nutrición y
24
25
26 Documento de debate sobre población. El Banco Mundial; 2009.
27
28
29 (2) Arimilli, MN; Cundy, KC; Dougherty, JP; Kim, CU; Oliyai, R .; Stella, VJ
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31 Análogos antivirales de fosfonometoxi nucleótidos que tienen una mayor biodisponibilidad oral.
32
33
US5977089A, 2 de noviembre de 1999.
34
35
36
37 (3) Naesens, L .; Bischofberger, N .; Augustijns, P .; Annaert, P .; Mooter, guarida de GV; Arimilli,
38
39 MINNESOTA; Kim, CU; Clercq, ED Eficacia antirretroviral y farmacocinética de la administración oral
40
41 Bis (isopropiloxicarboniloximetilo) - 9- (2-fosfonilmetoxipropil) adenina en Ratones.
42
43
Antimicrob. Agentes Cap.1998, 42, 1568-1573.
44
45
46
47 (4) Robbins, BL; Srinivas, RV; Kim, C .; Bischofberger, N .; Fridland, A. Antihumano
48
49 Actividad del virus de inmunodeficiencia y metabolismo celular de un profármaco potencial del acíclico
50
51 Nucleósido Fosfonato 9-R- (2-fosfonometoxipropil) adenina (PMPA),
52
53
Bis (isopropiloximetilcarbonilo) PMPA. Antimicrob. Agentes Cap.1998, 42, 612–617.
54
55
56
57
58
59 19
60 Entorno ACS Paragon Plus
 Investigación y desarrollo de procesos orgánicos Página 20 de 22

1
2
3 (5) Iniciativa Clinton de Acceso a la Salud. Informe del mercado del VIH, número 10. Septiembre de 2019.
4
5
6
(6) Balzarini, J .; Santo, A .; Jindrich, J .; Naesens, L .; Snoeck, R .; Schols, D .; Clercq, ED
7
8
9 Efectos diferenciales antiherpesvirus y antirretrovirus de los enantiómeros (S) y (R) de acíclicos
10
11 fosfonatos de nucleósidos: actividades antirretrovirales potentes y selectivas in vitro e in vivo de (R) -
12
13 9- (2-fosfonometoxipropil) -2,6-diaminopurina. Antimicrob. Agentes Cap.1993, 37, 332–338.
14
15
(7) Brown Ripin, DH; Teager, DS; Fortunak, J .; Basha, SM; Bivins, N .; Boddy, CN;
dieciséis

17
18
19 Byrn, S .; Catlin, KK; Houghton, SR; Jagadeesh, ST; et al. Mejoras de proceso para el
20
21 Fabricación de fumarato de disoproxilo de tenofovir a escala comercial. Org. Proceso Res. Dev.
22
23
2010, 14, 1194–1201.
24
25
26
27
(8) Riley, DL; Walwyn, DR; Edlin, CD Un proceso mejorado para la preparación de
28
29 Fumarato de tenofovir disoproxilo. Org. Proceso Res. Dev.2016, 20, 742–750.
30
31
32 (9) Vasireddy, UMR; Vellanki, SRP; Balusu, RB; Bandi, NDR; Jujjavarapu, PK;
33
34 Ginjupalli, SR; Pilli, RK Proceso para la preparación de tenofovir. US8049009B2, noviembre
35
36
1 de 2011.
37
38
39
40 (10) Indukuri, VSK; Joga, SR; Gorantla, SR; Chava, S. Proceso para la preparación de
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50 Fumarato de disoproxilo. US8759515B2, 24 de junio de 2014.
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40 (17) Alves, MJ; Stand, BL; Proenç, MFJRP Síntesis de 5-amino-4-
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42 (cianoformimidoílo) -1 H-imidazol: un intermedio reactivo para la síntesis de 6-carbamoílo-1, 2-
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50 Optimización en la síntesis de 9- [2- (Dietilfosfonometoxi) etil] adenina: Reemplazo de
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