Parámetros mínimos necesarios para realizar la validación de un método analítico

con matriz biológica, bajo la NOM-177-SSA1-2013

PARÁMETRO DEFINICIÓN DESCRIPCIÓN CRITERIO DE ACEPTACIÓN
Capacidad de un Demostrar la no interferencia de compuestos endógenos de la matriz ● La respuesta analítica de las interferencias próximas al
método analítico para biológica, mediante la evaluación individual de al menos 6 unidades tiempo de retención debe ser menor al 20% para el
Selectividad diferenciar y de ésta. Analizar la matriz biológica normal, la lipemia y la hemolizada. límite inferior de cuantificación del analito y del 5% para
cuantificar el Considerar posibles interferencias de fármacos de uso común, el EI.
compuesto a analizar, metabolitos, anticoagulantes u otras sustancias que puedan estar ● Para métodos donde el fármaco de interés sea una
presentes en la matriz biológica.
en presencia de otros entidad endógena, la evaluación de la selectividad se
compuestos en la centra en que el método sea capaz de diferenciar la
muestra. cuantificación del fármaco de interés adicionado
intencionalmente del endógeno, presente en la matriz
biológica que pueda interferir en la cuantificación.

Analizar individualmente, al menos 6 unidades de matriz blanco, ● El CV% del FMN calculado de las 6 unidades de la
adicionalmente considerar al menos matriz biológica lipémica y matriz no debe ser mayor que el 15%.
Efecto de matriz hemolizada. Esta determinación debe ser realizada con la MCB y

para métodos Extraer cada muestra blanco de matriz, posteriormente adicionar el MCA
analito y el EI en solución para obtener la respuesta analítica
por
correspondiente. Comparar las respuestas analíticas obtenidas
espectrometría respecto a las respuestas del analito y el EI en solución. Para cada
de masas unidad se debe obtener un FMN por el EI, conforme a la siguiente
fórmula:

Efecto generado por Realizar un mínimo de 3 inyecciones de la misma muestra blanco ● La respuesta analítica de las interferencias próximas al
la aparición o siendo una antes y dos después de una inyección del límite superior de tiempo de retención debe ser menor al 20% para el
Efecto de aumento de la señal cuantificación. Los resultados deben ser comparados respecto a la límite inferior de cuantificación del analito y del 5% para
del analito o respuesta del límite inferior de cuantificación. el EI.
acarreo para
estándar interno
métodos por Límite inferior de cuantificación.
causado por la
espectrometría contaminación de Se debe determinar con base en el 5% del C máx. reportado
para el analito de interés, a menos que los objetivos del
de masas. muestras anteriores.
estudio especifiquen otra cosa, por ejemplo, un muestreo
truncado, una distribución rápida o alta variabilidad
 farmacocinética.

Conjunto de 1. Establecer el intervalo de la curva de calibración en función a las ● Los datos de concentración recuperada de la curva de
concentraciones que concentraciones esperadas del (os) analito(s) a cuantificar calibración deben estar dentro del 15% de la
Curva de describen el intervalo durante el análisis de las muestras. concentración nominal en cada nivel de

calibración en el cual 2. Caracterizar por lo menos seis concentraciones distintas sin incluir concentración, excepto para el límite inferior de
se cuantifica el las muestras blanco. cuantificación, ya que puede ser menor o igual que el
compuesto por 3. Definir un modelo matemático que describa adecuadamente la 20%. Al menos el 75% de las concentraciones de la
analizar. relación entre la concentración y la respuesta, la cual debe ser curva de calibración con un mínimo de 6 puntos deben
continua y reproducible en el intervalo de trabajo de la curva de cumplir con este criterio.
calibración. Linealidad del método ● Cuando un punto de la curva de calibración no
4. Cada curva de calibración debe incluir una muestra de blanco de cumpla con el criterio de aceptación, debe
matriz (muestra procesada sin la adición del analito y del EI) y ser rechazado y la curva de calibración debe ser
muestra cero (muestra procesada con la adición del EI). recalculada sin modificar el modelo matemático.
5. Deben ser evaluadas un mínimo de 3 curvas de calibración e ● Del total de las curvas evaluadas, al menos el 50% de
incluir los resultados de la concentración recuperada y el cada nivel de concentración debe cumplir con el
por ciento de desviación. criterio del 15% de la concentración nominal y 20% para
el límite inferior de cuantificación.
● Para métodos inmunológicos la curva de calibración se
considera válida si el valor absoluto del % de la
desviación relativa son menores o iguales que el 20%,
en cada nivel de concentración, excepto para el nivel
más bajo, ya que para este punto el valor puede ser
menor o igual que el 25%.

Analizar en un mismo día al menos por El CV% del valor promedio no debe ser mayor que el 15%,
quintuplicado las siguientes muestras control LIC, excepto para el límite inferior de cuantificación, el cual
MCB, MCM, MCA y MCD. Calcular la debe ser menor o igual que 20% para métodos
concentración obtenida para cada nivel cromatográficos y para métodos inmunológicos, no debe
Grado de
Repetibilidad interpolando su respuesta analítica en la curva de ser mayor que el 20%, excepto para el límite inferior de
concordancia entre
calibración.
resultados analíticos cuantificación, el cual debe ser menor o igual que 25%.
La MCD debe ser realizada para cada factor de
individuales cuando el
dilución que será aplicado a las muestras durante
Precisión procedimiento se
el estudio. La dilución debe ser realizada con la
aplica repetidamente
matriz biológica exenta del fármaco.
a diferentes porciones
de una muestra
homogénea; se Analizar al menos por quintuplicado en tres corridas El CV% del valor promedio no debe ser mayor que el 15%,
evalúa como analíticas diferentes y en al menos 2 días, las excepto para el límite inferior de cuantificación, el cual
repetibilidad Reproducibili muestras control LIC, MCB, MCM y MCA. debe ser menor o igual que 20% para métodos
y reproducibilidad cromatográficos y para mé todos inmunológicos, no debe
dad  Para cada MC calcular la concentración
ser mayor que el 20%, excepto para el límite inferior de
recuperada interpolando la respuesta analítica en
cuantificación, el cual debe ser menor o igual que 25%.
la curva de calibración. La adición de otro analista
o el uso de otro equipo, debe cumplir con los
criterios de reproducibilidad.
 Concordancia entre 9.1.9.7.1 De los datos de repetibilidad y reproducibilidad calcular la El valor promedio del % de desviación no debe ser mayor
el valor obtenido desviación de la concentración obtenida respecto al valor nominal (% que el 15%, excepto para el límite inferior de cuantificación,
Exactitud experimentalmente y de desviación) empleando la siguiente ecuación. el cual debe ser menor o igual que 20%. Para métodos
el valor de referencia. inmunológicos, no debe ser mayor que el 20%, excepto para
el límite inferior de cuantificación, el cual debe ser menor o
igual que 25%

Determinar las condiciones de temperatura y tiempo Las muestras control son interpoladas en una curva de
entre otros, en las que el fármaco permanezca calibración recién preparada y las concentraciones
estable en la matriz biológica, durante su manejo, obtenidas son comparadas contra la concentración
Estabilidad toma de muestra, almacenamiento y procesamiento nominal. La concentración promedio de cada nivel debe
de la muestra analítico. estar dentro del 15% de la concentración nominal.
Evaluar por triplicado la respuesta del analito a las
concentraciones de las MCB y MCA, las cuales son
La estabilidad es la analizadas inmediatamente después de su
preparación y después de ser sometidas a
capacidad de un
las condiciones del ensayo evaluadas.
fármaco, biofármaco
o un medicamento de Estabilidad a Evaluar la estabilidad del (os) analito(s) en la matriz
permanecer dentro corto plazo. biológica a la temperatura y
de las tiempo de procesamiento de la muestra.
especificaciones de
Estabilidad calidad establecidas,
Evaluar la estabilidad del (os) analito(s) en la matriz
en el envase que lo
biológica, bajo las condiciones de almacenamiento
contiene durante su
Estabilidad a en las que se mantendrán las muestras, por un
periodo de vida útil.
largo plazo. periodo de tiempo por lo menos equivalente al que
transcurre desde la obtención de la muestra hasta su
análisis
Estabilidad a largo
plazo: propiedad del Estabilidad Evaluar la estabilidad del (os) analito(s) en la muestra
compuesto por procesada a temperatura ambiente o bajo las
de la muestra
analizar en una matriz condiciones de almacenamiento a ser usadas
procesada
biológica, durante el estudio.
de conservar sus
características, desde  Estabilidad Evaluar la estabilidad del (os) analito(s) en la muestra
el momento del en el auto procesada a la temperatura del inyector o auto
muestreo hasta el muestreador. muestreador
análisis de todas las
muestras, así como  Estabilidad Evaluar la estabilidad del(os) analito(s) en la matriz
reanálisis (en caso de ciclos de biológica, almacenadas a la temperatura
realizarse este último). congelación- de congelación en que estarán las muestras reales
descongelac por al menos 12 h, descongelarlas completamente
ión. a temperatura ambiente y volver a congelar por al
menos 12 h bajo las mismas condiciones. El número
de ciclos de congelación-descongelación debe ser
 al menos de 3 ciclos.

En caso de no utilizar una solución de referencia de ● Las soluciones serán consideradas estables si la
manera inmediata, demostrar la estabilidad del (os) desviación de la respuesta analítica promedio con
Estabilidad
analito(s) y EI (si aplica), en al menos una muestra respecto a la obtenida con muestras recién
en solución. inyectada por triplicado de una solución preparadas, no es mayor que 10%.
de referencia principal (de mayor concentración) y
● Todas las respuestas analíticas obtenidas deben ser
de una solución de trabajo (de menor
incluidas en el cálculo del valor promedio y sólo se
concentración) por triplicado por un tiempo igual o
pueden eliminar aquellas que presentaron problemas
mayor al periodo de uso o almacenamiento que
por alguna causa asignable, exclusivamente al sistema
será utilizado durante el análisis de las muestras.
analítico.
Las estabilidades de la solución de referencia
principal y de trabajo deben ser evaluadas con una
dilución apropiada, teniendo en consideración la
linealidad y detector de medición utilizado.
El valor promedio de la respuesta analítica del o las
soluciones en estudio deben ser comparadas con
respecto al valor promedio obtenido por el análisis
por triplicado de una solución recién preparada.

 En el caso de que sea empleado un isotopo estable

como EI en espectrometría de masas, no es
necesario realizar un estudio de estabilidad en
solución, siempre y cuando se compruebe la
ausencia de reacciones de intercambio de isotopos
a las mismas condiciones de estabilidad que fueron
demostradas para el analito de interés.

ABREVIATURAS

● EI Estándar interno
● FMN Factor Matriz Normalizado
● LIC Límite inferior de cuantificación de la Curva de Calibración.
● LSC Límite superior de cuantificación de la Curva de Calibración
● MC Muestra control
● MCA Muestra control alto
● MCB Muestra control baja
● MCD Muestra control diluida
● MCM Muestra control medio
● CV% Coeficiente de variación.