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FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA


LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
GUIA DE PRACTICAS
PRACTICA N 1
DIAGNSTICO HELMINTOLGICO
En el diagnstico de laboratorio y de campo de las helmintosis se puede utilizar
una gran diversidad de mtodos y modificaciones individuales; la
estandarizacin de las tcnicas de laboratorio veterinario, tales como recuento
de huevos/larvas, recuento de vermes, recuento de larvas en el pasto, etc.es
virtualmente inexistente, por lo tanto, la mayora de los servicios de diagnstico
y unidades de enseanza e investigacin aplican sus propios protocolos y
procedimientos.

OBTENCION Y REMISION DE MUESTRAS DE HECES AL LABORATORIO
Por la ubicacin topogrfica de los nemtodos gastrointestinales, el material a
obtenerse sern las heces, para efectuar un diagnstico definitivo emitido por el
Laboratorio de Parasitologa, de esta manera, la presencia o ausencia de los
parsitos adultos, o de distintos estadios evolutivos, nos permitir efectuar un
control o tratamiento adecuado.
La primera consideracin es evitar la contaminacin de las heces con
organismos de vida libre que puedan confundirse con elementos parasitarios.
En animales mayores las heces deben tomarse directamente del recto. En
animales menores, deben tomarse de una superficie limpia, si esto no es
posible, debe tomarse la parte superficial de la deposicin que no haya tenido
contacto con el suelo. La cantidad adecuada de heces es de unos 45 g (unas
tres cucharadas soperas) para animales mayores y de 5 a 10 g (una a dos
cucharadas de t) para animales menores. Como la concentracin de los
elementos parasitarios en las heces flucta de da a da a menudo se obtienen
mejores resultados obteniendo 3 muestras, da por medio. Esta estrategia se
llama comnmente el examen seriado de las deposiciones y es recomendable
particularmente en animales menores donde se tomas muestras ms pequeas

PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCIN Y REMISION DE MUESTRAS DE
HECES AL LABORATORIO
MATERIALES
o Mandiles o mamelucos especiales para el operador
o Botas de jebe
o Caja refrigerante (acero, u otro material)
o Materiales de sujecin (sogas, mochetas)
o Balde de plstico.
o Jabn carblico
o Guantes de polietileno que permita la introduccin de la mano (para
grandes animales) y en caso de animales menores (compaa) recoger
inmediatamente despus de la defecacin (propietario)
o Esptula de plstico.
o Recipientes adecuados, como :
Bolsas de polietileno (10 cm de ancho)
Embase de plstico o de vidrio de boca ancha con tapa con
rosca
Rotulo que debe llevar el frasco en el que debe constar:
Nombre del Propietario o fundo
Identificacin del animal
Fecha y hora de la toma de muestra
o Heces frescas
ALGUNOS CRITERIOS QUE DEBE TOMARSE EN CUENTA:
1. Nmero de Muestra:
o Cuando la cantidades son mayores a 100 animales = 10% (5%
animales en buenas condiciones y 5% de animales en bajas
condiciones fsico sanitarias).
o Cuando las cantidades son menores a 100 = Mnimo de 10 animales
por rebao o manada (por grupo de edad).
o Para el recuento de huevos en heces de majadas, se puede utilizar
una tcnica compuesta, que consiste en:
Muestrear 10 animales por rebao.
Mezclar todas las muestras (de los individuos muestreados).
De esta mezcla tomar 2 a 3 gramos de heces y relaizar el
recuento.
o Las muestras tomadas debern ser analizadas preferentemente de
inmediato, es decir, dentro de 4 horas de recogida las muestras, sino
se preservan; pueden guardarse por 24 a 48 horas en refrigeracin
(en la costa se deber analizarse dentro de las 18 horas como
mximo; y en la sierra dentro de las 48 horas como mximo, pero
para perodos ms largos deben homogenizarse con soluciones que
eviten la proliferacin de microorganismos contaminantes. Las
soluciones fijadoras ms empleadas son:

COMPOSICION
o FORMOL AL 10%.:
- Formol comercial 40% 1 parte
- Agua destilada 3 parte
-------------
4 partes
o F0RMOL SALINO
- Formol comercial 4% 50 cc
- Agua Destilada 950 cc
- Na Cl 10 g

o SUERO FISIOLOGICO
- NaCl 0.85 g
- gua destilada 100 ml

o ALCOHOL POLIVINILICO (PVA) FIJADOR
- PVA en polvo 25 g
- Solucin saturada de bicloruro de mercrio 312 ml
- Glicerina 7.5 ml
- Alcohol etlico (95%) 176 ml
- Alcohol actico glacial 25 ml
Observaciones: Mesclar el bicloruro de mercrio, gliserina, cido actico
glacial y el alcohol etlico cuidadosamente agregando el PVA, agitar por
10 minutos, calentar em bao maria a 75 - 80C por 5 10 minutos.



EXTENSION FECAL DIRECTA

METODO DIRECTO

FUNDAMENTO
Este mtodo, es muy rpida y sencilla de hacer, siempre y cuando los huevos
de los helmintos se encuentran en grandes cantidades en las heces. Es posible
que la pequea cantidad de heces tomada para la extensin, no contenga
ningn huevo. Por consiguiente, si con este mtodo no hay evidencias del
parasitismo, es aconsejable hacer los mtodos de concentracin.
MATERIALES
o Muestra de heces
o Varilla de vidrio
o Laminas portaobjetos
o Laminillas cubre objetos
o Microscopio ptico.
o Agua desmineralizada y/o suero fisiolgico o lugol dbil.
PROCEDIMIENTO Y/O MTODOS
1. Tomar una pequesima cantidad de heces y depositar al centro de un
portaobjeto limpio.
2. Poner 1-2 gotas ms de agua desmineralizada o suero fisiolgico y/o
lugol dbil, sobre las heces y luego mezclarlo completamente,
empleando la varilla de vidrio o palillo de madera.
3. Con la varilla o el palillo de madera apartar la suspensin o estructuras
duras no disueltas anteriormente y quedarse con la parte lquida.
4. Cuidadosamente aplicar la laminilla cubreobjetos sobre la muestra
preparada, evitando que se forme burbujas de aire. Tambin se puede
efectuar un frontis, de manera que la extensin sea fina y transparente.
5. finalmente se deber examinar el rea bajo el microscopio ptico (10x a
40x), en forma sistemtica (depositar una gota de agua en el extremo
del cubreobjeto, para evitar la desecacin y cristalizacin de la muestra).
Las preparaciones con suero fisiolgico se emplean para investigar la movilidad
de formas vegetativas de protozoarios (trofozoitos) y larvas de nemtodos.
El lugol inmoviliza a esta estructura y le da cierta coloracin que permite
precisar mejor sus caractersticas morfolgicas.
Examinar la preparacin a lo largo de un extremo del cubreobjetos, a
continuacin se desplaza la platina del equivalente a la anchura de un campo y
se contina examinando hasta que se haya cubierto todo el cubreobjetos. Para
evitar la desecacin y cristalizacin de la muestra, se puede depositar una gota
de agua en el extremo del cubre objetos
MUESTRA EMPLEADA
Para esta prctica se ha empleado muestra se heces de porcino, por tal razn
es posible encontrar otras evidencias parasitarias, propias de esta especie
animal

RESULTADOS ESPERADOS

Huevo tipo Trichuris









Huevo tipo Ascaris









Balantidium coli
Es un ciliado cuyo hospedador principal es el cerdo. En la observacin de
trofozotos, miden de 40 a 80 micras. En heces frescas pueden observarse
los movimientos activos de los cilios.





















PROTOCOLO
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CIP LA RAYA

PROTOCOLO N .
NOMBRE DEL PROPIETARIO..
PROFESIONAL TRATANTE..
LUGAR..FECHA
ZONA GEOFRAFICA Y TOPOGRAFICA.
CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS ANIMALES
ESPECIE..RAZA..SEXO.
.ESTADO NUTRICIONAL...
TIPO DE CRIANZA..

RESUMEN DE LA HISTORIA CLINICA
SINTOMAS
.
DIAGNOSTICO PRESUNTIVO O APARENTE...
-
DESPARASITACIONES PREVIAS: PRODUCTO UTILIZADO...
DOSIS..FECHA DE TRATAMIENTO
ENFERMEDADES CONCOMITANTES
MORBILIDAD (%)MORTALIDAD (%)
EXAMEN DESEADO
OTROS DATOS
TIPO DE CONSERVADOR.
MEDIO DE TRANSPORTE.
SISTEMA DE REFRIGERACION..


----------------------------------------------
FIRMA Y SELLO DEL REMITENTE
PRACTICA N 2
METODOS DE CONCENTRACION
Estos mtodos se utilizan para concentrar los elementos parasitarios (quistes,
ooquistes, larvas, trofosoitos, huevos, etc.), que estn basados en el hecho por
el cual la densidad de los huevos es considerablemente mayor que la del agua
y restos fecales; por ello, si se suspenden las heces en una solucin con una
densidad mayor que la de los huevos (por ej. En una solucin de azcar
saturada), los huevos de los vermes flotan y se concentran en la superficie de
la suspensin (principio de la tcnica de flotacin); si las heces se suspenden
en agua los huevos sedimentarn ms rpidamente en la mayora de partculas
fecales (principio de las tcnicas de sedimentacin); estas tcnicas permiten
concentrar en un pequeo volumen los huevos o larvas existentes en una gran
cantidad de heces, por lo que pueden ser identificados y contados al
microscopio ms fcilmente; aparte de los huevos de helmintos, tambin flotan
los ooquistes de protozoos (Eimeria, Toxoplasma, Isospora, Cystoisospora,
Hammondia, Criptosporidium, stc.).

METODO DE FLOTACION
Este mtodo se fundamenta en la propiedad que tienen las estructuras
parasitarias de flotar en la superficie de una solucin concentrada,
aprovechando la gravedad especfica de una solucin, para hacer flotar las
evidencias parasitarias fecales.
Para la mayora de los huevos de helmintos, el peso especfico de la solucin
deber estar entre: 1.10 y 1.20. Los huevos de mayor peso como el de
Fasciola, Metastrngylus, Diphyllobothrium, Acantocefalos, flotan en soluciones
cuyo peso especfico varan entre 1.30 y 1.35, como solucin saturada de
sulfato de cinc, cloruro de cinc, sulfato de magnesio, etc., en las que sin
embargo, sufren deformaciones, hacindolas irreconocibles, conforme mayor
sea la densidad, los restos tambin flotan, por lo que la eficacia de la tcnica se
reduce; por ello para detectar huevos de los ltimos grupos de parsitos son
preferibles las tcnicas de sedimentacin.

Soluciones de flotacin comunes
1. Solucin saturada de sacarosa de Sheather o azcar (Densidad: 1.12 a
15C)
Azcar rubia 1,280 g
Agua desmineralizada 1,000 ml
2. Solucin saturada de cloruro de sodio (Densidad: 1.19 a 20C)
Sal comn 360 g
Agua desmineralizada 1,000 ml
Formol comercial (40%) 20 ml (o tambin: Fenol licuado = 10 ml)
3. Solucin saturada de nitrato de sodio (Densidad: 1.18 1.20)
Nitrato de sodio 400 g
Agua desmineralizada 1,000 ml
4. Solucin saturada de sulfato de cinc (Densidad: 1.30 1.47)
Sulfato de cinc 700 g
Agua desmineralizada 1,000 ml
5. Solucin saturada de sulfato de magnesio (Densidad: 1.28 1.32)
Sulfato de magnesio 700 g
Agua desmineralizada 1,000 ml
Como preparar la solucin azucarada
o Disolver el azcar en agua tibia, sin llegar a la ebullicin
o Filtrar (por una gasa)
o Agregar el formol comercial, para evitar la formacin de hongos y otros
microorganismos
Fundamento
o Los huevos son ms pesados que el agua, pero la mayor parte de la
materia fecal es ms pesada que los huevos.
o De este modo, se mezclan las heces con una solucin que tiene una
densidad flotante superior a los huevos, pero inferior a otros componentes
de las heces. Ejemplo:
10 ml de agua pesa 10 gramos
10 ml de solucin flotadora con una gravedad de 1.12 pesa 12 gramos.
10 ml de solucin flotadora con una gravedad de 1.19 pesa 19 gramos.
Algunas ventajas y desventajas de las soluciones flotadoras
La cristalizacin es lenta y los huevos mantienen su morfologa en esta
solucin durante varios das o incluso ms; el inconveniente es que la solucin
es sucia, pegajosa y atrae a las moscas y otros artrpodos; su viscosidad
retrasa la flotacin de los huevos, por lo que es conveniente centrifugar
Nota: Una vez que se han preparado y enfriado las soluciones de flotacin,
llenar una probeta y ajustar la densidad mediante un hidrmetro; comprobar la
densidad peridicamente.
Materiales
Solucin flotadora de sacarosa de Sheather
Embudo (40-60 hilos por pulgada cuadrada)
Mortero y su respectivo mango
Laminas porta-objeto
Laminas cubre o esptula
Tubos de prueba de 10 ml
Viales pequeos (frasquitos de penicilina)
Vasos de precipitados
Balanza de precisin













Procedimiento:
1 De la muestra remitida al laboratorio, pesar
de 2 a 3 gr. de material fecal de cualquier
especie y depositar en el mortero, para
macerar

2 Agregar 10 a 15 ml de solucin flotadora,
esto si las heces tienen forma de pelets,
pero si son pastosas se puede
homogenizar con la ayuda de una vagueta


3 Filtrar a travs de un tamiz o un embudo
con malla a un vaso de precipitacin



4 El filtrado se transfiere a los tubos de
prueba o viales (frasquitos de penicilina),
hasta que forme un menisco convexo, por
encima del borde del vial

5 Colocar la laminilla cubre objetos en
contacto con la superficie lquida (menisco)
y espere unos 15 a 20 min. Luego
transferir esta laminilla al portaobjetos para
su observacin


Nota:
En caso de no haber colocado la laminilla cubreobjetos, se llevarn 1 2 gotas de la superficie lquida hacia el
portaobjeto y luego recin cubrir esta con la laminilla cubreobjetos.
Cuando se quiere observar en forma inmediata se puede colectar el filtrado en tubos de centrifuga y se lleva a
centrifugacin a 1.500 rpm, durante 2 minutos.
Finalmente se lleva a la observacin microscpica, donde se observa a 10X, 40X 100X observacin se realizar
llevando gotas de la superficie liquida hacia el porta-objetos y cubrir con laminilla cubreobjetos.

METODO DE LOS 50
Este es un nuevo mtodo que se viene efectuando en el laboratorio de
parasitologa de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la
Universidad Nacional del Altiplano, el mismo que ha demostrado tener una
efectividad mayor al 95%. De esta manera, el anterior mtodo de flotacin
antes indicada solamente sirve como referencia de lo que se realizaba
anteriormente.
PROCEDIMIENTO
1. De la muestra remitida al laboratorio, pesar 2 a 3 gramos de material fecal
y depositar en el mortero.
2. Agregar en el mortero 15 a 20 ml de agua desmineralizada y desmenuzar
las heces que estn en forma de pelets y, si las heces fueran pastosas,
mezclar con una bagueta.
3. Tamizar el contenido a travs de un embudo con malla metlica, hacia un
vaso de precipitado.
4. Transferirlo a un tubo de prueba de 15 ml de capacidad
5. Llevar a la centrifuga a 2000 rpm durante dos minutos.
6. Eliminar el sobrenadante.
7. Resuspender el sedimento con 15 ml de solucin azucarada saturada (en
tres momentos diferentes) hasta conseguir una homogenizacin completa.
8. Completar el llenado del tubo con solucin flotadora hasta formar un
menisco convexo en el borde superior del tubo.
9. Colocar una laminilla cubre objeto.
10. Llevar nuevamente a la centrifuga a 2000 rpm durante dos minutos.
11. Retirar cuidadosamente la laminilla cubreobjeto en forma recta hacia arriba.
12. Invertir la laminilla cubreobjeto, para luego depositar sobre ella lugol, luego
homogenizar con suaves movimientos.
13. Depositar la laminilla coloreada sobre una lamina portaobjeto.
14. Observar en el microscopio a 10 X para la identificacin de huevos de
parsitos y a 40 X para observar sus caractersticas morfolgicas.



INTERPRETACIN
A menudo los resultados se expresan con +, ++, +++, para indicar la cantidad
de estadios parasitarios. Sin embargo, esta es una apreciacin con una
elevada dosis de subjetividad, que vara de una persona a otra.
Por nuestra experiencia y correlacionando con los mtodos cuantitativos,
hemos credo dar datos valores a los (+, ++, +++), para una mejor
interpretacin con esta metodologa; los mismos que estn sujetos a las
modificaciones, segn criterio del tcnico.

1 Ningn huevo en la muestra completa Negativa (-)
2 1 a 10 Huevos en toda la preparacin Infeccin moderada (+)
3 10 a 20 Huevos en toda la
preparacin
Infeccin mediana (++)
4 20 a ms huevos en toda la
preparacin
Infeccin masiva o grave.



















IDENTIFICACIN DE HUEVOS DE NEMATODOS
GASTROINTESTINALES DE RUMIANTES


ESPECIE MORFOLOGA CARACTERSTICAS



Huevo tipo
Strongylus


o Miden de 70 100 X 40 a 60
o Son de forma ovoide
o Son incoloros
o Son de cscara fina (1 1.5 )
o Poseen de 16 a 32 blastmeros
en su interior.



N. lamae


o Miden de 156 X 76
o Son de forma ovoide (con
bordes romos)
o Son incoloros
o Son de cscara gruesa (1.5
3.0 )
o Poseen de 4 a 8 blastmeros en
su interior.




N. spatiger



o Miden de 200 X 98
o Son de forma ovoide (con
extremos aguzados)
o Incoloros
o Tienen cscara gruesa (1.5
3.0 )
o Poseen de 4 a 8 blastmeros en
su interior



N. filicollis




o Miden de 171 X 88
o Son de forma ovoide (con
extremos aguzados)
o La parte media es ms
ensanchada que el N. spatuger
o Incoloros
o Tienen cscara gruesa (1.5
3.0 )
o Poseen de 4 a 8 blastmeros en
su interior



Huevo de
Lamanama
chavezi



o Miden de 176 X 88
o Son de forma ovoide, con
extremos romos: similar a los
del tipo strongylus
o Son incoloros
o Son de cscara gruesa (2.0
3.5 )
o Poseen ms de 36 blastmeros




Huevo tipo
Trichuris




o Miden de 75 X 35
o Son de forma ovoide, pero en
los extremos poseen unos
tapones polares bien
manifiestos (forma de limn)
o Son de un color pardo
amarillento
o Son de cscara gruesa (2.0
3.5 )
o Son sin segmentar al ser
puesto, observndose
solamente una masa celular
protoplasmtica.




Huevo tipo
Capillaria



o Miden de 50 X 25
o Son de forma ovoide, pero en
los extremos poseen unos
tapones polares achatados
(forma de tonel)
o Son de un color pardo
amarillento
o Son de cscara gruesa (2.0
3.0 )
o Son sin segmentar al ser
puesto, observndose
solamente una masa celular
proptoplasmtica.
Huevo de
Moniezia
expanza



o Son incoloros
o Poseen una cscara gruesa
o Son de forma algo triangular
o En su interior poseen un
aparato piriforme bfido y un
embrin u oncosfera exacanto



Huevo de
Moniezia
benedeni




o Miden de 50 a 60
o Son incoloros
o Poseen una cscara gruesa
o Son de forma tetradrica o
cuadrangular
o En su interior poseen un
aparato piriforme con
proyeccin roma y un embrin u
oncosfera exacanto





Huevo de
Thysanosoma
actinoides







o Miden de 110 a 123
o Son incoloros
o Son puestos en forma de
cpsulas ovgeras
o Poseen 5 a 30 embriones
exacantos, sin aparato piriforme
o A la unin de sus cpsulas, sta
es contnua







Huevo de
Helictometra
giardi





o Miden de 130 a 123
o Son incoloros
o Son puestos en forma de
capsulas ovgeras
o Poseen 3 a 5 embriones
exacantos, sin aparato piriforme
o A la unin de las cpsulas,
estas no son contnuas






Pseudoparsito




o Miden de tamaos diferentes
o Son de formas y colores
diferentes a las evidencias
parasitarias.
o Pueden ser semillas, restos de
pastos, restos de gramineas etc.













PRACTICA N 3
METODOS CUANTITATIVOS POR MUESTRO
FUNDAMENTO
La concentracin de elementos parasitarios en las deposiciones depende
primariamente del nmero de parsitos que existen en el hospedador, pero
est influido grandemente por una gran cantidad de factores.
Probablemente los ms importantes de parte del parsito son la especie,
edad, proporcin de juveniles; y los factores ms importantes de parte del
hospedador probablemente son la edad, resistencia, y dieta del
hospedador.
Muchas veces es conveniente conocer la carga parasitaria. Para ello se
realizan determinaciones cuantitativas, que proporcionan la intensidad del
parasitismo, expresado en nmero de huevos por gramo de heces.
Hay varios mtodos de coprologa cuantitativa. Uno de los ms conocidos
es el que emplea la cmara de recuento, diseada por McMaster; que es el
mtodo estndar de anlisis cuantitativo de huevos en heces (es una
modificacin de la tcnica de flotacin). Existen diversas modificaciones de
la tcnica, todas ellas basadas en el mismo principio; cada laboratorio
debera establecer sus propias normas para realizar esta tcnica e
interpretar los resultados obtenidos.
La cmara de McMaster consiste en un portaobjetos que tiene pegado a
1.5 mm de altura un cubreobjetos, de menor anchura, que forma dos
cmaras. Encima de cada cmara est grabada una cuadrcula, de 10 mm
de lado, de tal modo que el volumen bajo cada cuadrcula es de 1 x 1 x
0.15 = 0.15 ml.
CMARA DE MCMASTER


MTODO MC MASTER: PRIMERA MODIFICACION

MATERIALES
o Microscopio
o Balanza de precisin
o Muestra de heces
o Solucin saturada de sacarosa de Sheather o solucin azucarada
o Cmara McMaster
o Mortero con su respectivo mango
o Bagueta de vidrio
o Gotero
o Frasco graduado
o Embudo colador

PROCEDIMIENTO
1. Homogenizar 3 grs. de heces en 42 ml de agua desmineralizada (utilizar
mortero para heces duras).
2. Tamizar y filtrar para depositarlo luego en un tubo de prueba y llevarlo a
centrifugar
3. Dejar sedimentar por 30 minutos centrifugar 1,000 rpm / por 1 minuto.
4. Eliminar el sobrenadante y remplazarlo con la solucin saturada de
azcar (15ml), Agitar el tubo y con un gotero llenar la cmara de Mc
Master.
5. Esperar por 3 o 5 minutos con el objetivo de que los huevos asciendan o
floten a la superficie del lquido (cara inferior de la lmina superior de la
cmara)
6. Llevar el microscopio,
7. Enfocar la superficie superior del lquido (donde se vean algunas
burbujas microscpicas) donde puede verse las lneas de las cmaras
bien enfocadas, luego efectuar el conteo dentro del recuadro de lectura,
a un aumento de 10X.
8. Guiado por las lneas, cuente el nmero de elementos parasitarios en el
cuadro de cada cmara. Mantenga registros separados para cada clase
de elementos que pueda reconocer (tipo de huevo, quiste, u ooquiste).
9. De los nmeros que obtenga, calcule los hpg para cada elemento
diagnstico.
Interpretacin
a) . Si en 45 ml.3 g/heces
15 mlX
X= 1 g
b) Si en 15 ml.1g/heces
0.15 mlX
X= 0.01 g
c) Entonces:
o 0.15 ml. Representa la centsima parte de 15 ml.
o 0.01 gr. Representa la centsima parte de 1gr./heces
d) Finalmente el factor de correccin para cada rea de lectura ser 100:
pero cuando la lectura se efecta en las 2 reas el factor ser 50.
Pero tambin se puede utilizar una frmula, la misma que es de la forma
siguiente:
HPG: (N de huevos en 1 rea) + (N de huevos en el 2 rea) X 100
2
HPG: (N de huevos en 1 rea) + (N de huevos en el 2 rea) X 50
HPG: (N de huevos en 1 rea) X (100)
e) Como control, es conveniente llenar ambas cmaras con la misma
solucin y contar separadamente cada cmara. Si la diferencia es ms
de 15% uno puede suponer que los elementos parasitarios no estaban
homogneamente repartidos en la superficie original.

METODO MCMASTER: SEGUNDA MODIFICACION
PROCEDIMIENTO
1. Homogenizar 2 grs. de heces en 28 ml de solucin saturada de azcar
(hasta completar un volumen de 30 ml.)
2. Filtrar el homogenizado a travs de un tamiz (embudo colador), u otro
recipiente, que generalmente es un tubo de 15 ml.
3. Agitar ese filtrado con bagueta de vidrio y con un gotera llenar la cmara
de Mc.Master
4. Esperar por 3 o 5 minutos con el objetivo de que los huevos asciendan o
floten a la superficie del lquido (cara inferior de la lmina superior de la
cmara)
5. Llevar el microscopio,
6. Enfocar la superficie superior del lquido (donde se vean algunas
burbujas microscpicas) donde puede verse las lneas de las cmaras
bien enfocadas, luego efectuar el conteo dentro del recuadro de lectura,
a un aumento de 10X.
7. Guiado por las lneas, cuente el nmero de elementos parasitarios en el
cuadro de cada cmara. Mantenga registros separados para cada clase
de elementos que pueda reconocer (tipo de huevo, quiste, u ooquiste).
8. De los nmeros que obtenga, calcule los hpg para cada elemento
diagnstico.
INTERPRETACION:
d) . Si en 30 ml.2 g/heces
15 mlX
X= 1 g
e) Si en 15 ml.1g/heces
0.15 mlX
X= 0.01 g


f) Entonces:
o 0.15 ml. Representa la centsima parte de 15 ml.
o 0.01 gr. Representa la centsima parte de 1gr./heces
d) Finalmente el factor de correccin para cada rea de lectura ser 100:
pero cuando la lectura se efecta en las 2 reas el factor ser 50.
Pero tambin se puede utilizar una frmula, la misma que es de la forma
siguiente:
HPG: (N de huevos en 1 rea) + (N de huevos en el 2 rea) X 100
2
HPG: (N de huevos en 1 rea) + (N de huevos en el 2 rea) X 50
HPG: (N de huevos en 1 rea) X (100)

Para recomendar o no un tratamiento, es necesario correlacionar el numero
de huevos por gramo de heces (HPG), con el estado de salud del animal.
Sin embargo, el HPG es de un valor relativo pudiendo ser significativo y
esta condicionada a los sntomas clnicos de los animales su historia. Nivel
alimentario, edad, sexo, raza, medio ambiente, la patogenicidad de los
parsitos y otras caractersticas propias del hospedador y parasito. Por otro
lado, en la interpretacin debe tener presente que las formas inmaduras
ocasionan daos considerables y estas no estn considerados en el
montaje de huevos.
Sin embargo, se han reportado relaciones entre patogenicidad y huevos
por gramo de heces en ovinos y bovinos
PARSITOS OVINOS BOVINOS
GENERO MODERADA SEVERA MODERADA SEVERA
Haemonchus sp. 2000 3500 8000 200 600 1000
Ostertagia spp. 200 1000 2000 200 500
Trichostrongylus axei 3000 50 300 400-800
Trichostrongylus spp. 100 500 500-2000 500-1000
Cooperia spp. 200-500 3000-10000
Nemathodirus spp. 50-100 300-600
Bunostomum spp. 20-200 300-500
Oesophagostomun spp. 1000 3000 150-500 1000
Chabertia sp. 200 300-1000
Strongyloides sp. 1000
Nematodos mezclados 1000 2000 200-400 700
Fasciola hepatica 50-200 200-500 10-25 30-50
Pero en general en el montaje se consideran valores significativos los
siguientes:
o Huevos tipo strongylus ..1.000 HPG
o Huevos tipo nematodirus...600 HPG
o Huevos tipo Ascaris (neoascaris).800 HPG
o Huevos tipo Trichuris..800 HPG
o Ooquistes de Eimeria 800 1000 OPG
Valores superiores a los indicados, significan que los animales deben recibir
tratamiento, debido a que existen manifestaciones clnicas. Sin embargo
deber tenerse muy en cuenta el tipo de explotacin, as como los sistemas de
manejo principalmente, referidos a las comunidades campesinas, donde la
implementacin de las dosificaciones principalmente en alpacas y llamas,
mayores de dos aos, serian funestos si es que su implementacin esta solo
referido a desparasitar y no se toma en consideraciones el binomio MEDICAR
Y ROTAR., As como se rompera la resistencia natural de esta especie y se
creara nueva dependencia a los frmacos.
EFECTIVIDAD DE LA TECNICA DE MAC MASTER
En los Camlidos Sudamericanos, la efectividad de esta tcnica para los
strongylidos es:
Con 01 examen : de 0 a 41.67% de efectividad
Con 03 exmenes : de 800 91.67% de efectividad
Con 06 exmenes: de 100% de efectividad
Para Eimerias es:
Con 01 examen : de 0 a 41.6 % de efectividad
Con 03 exmenes : de 77 a 87.50 de efectividad
Con 05 exmenes : de 86.670 95.83% de efectividad
Con 08 exmenes : de 100% de efectividad
Para vacunos: son necesarios 15 exmenes seriados, para tener una
efectividad del 100%

CORRECCION A LA CUENTA DE LOS HUEVOS EN HECES

Para heces blandas, el factor ser..1.5
Para heces muy blandas, el factor ser .2.0
Para heces diarreicas, el factor ser4.0
















PRACTICA N 4
METODO CUANTITATIVO POR MUESTREO
STOLL MODIFICADO
FUNDAMENTO
El fundamento de este mtodo es la misma que la del mtodo de McMaster; es
decir, permite efectuar un anlisis cuantitativo de huevos en heces (es una
modificacin de la tcnica de flotacin), con lo cual podemos determinar el
grado de infeccin parasitaria, para recomendar o no un tratamiento, y
correlacionarlo el numero de huevos por gramo de heces (HPG) con el estado
de salud del animal. Sin embargo, el HPG con el mtodo de Stoll, sigue siendo
un valor relativo pudiendo ser significativo; y esta condicionada a los sntomas
clnicos de los animales su historia, nivel alimentario, edad, sexo, raza, medio
ambiente, la patogenicidad de los parsitos y otras caractersticas propias del
hospedador y parasito.
Este mtodo es til para casos de huevos de peso elevado, as como, cuando
no se disponga de cmaras McMaster.
MATERIAL
o Pipeta de 0.5 ml graduada del dcimo una jeringa de tuberculina de
0.5 ml de capacidad.
o Lamina porta objetos
o Lamina cubre objetos
o Muestra de heces positiva
o Balanza
o Solucin saturada de azcar
o Mortero con su respectivo mango
o Frasco graduado
o Embudo colador
o Bagueta de vidrio
o Microscopio



PROCEDIMIENTO
1. Homogenizar los 2 gr de heces en 28 ml de solucin saturada de azucarada,
hasta completar un volumen de 30 ml
2. Filtrar el homogenizado, a travs de un tamiz (embudo colador) a otro
recipiente que generalmente es un tubo de 15 ml.
3. Agitar este filtrado con la ayuda de una bagueta de vidrio y con la ayuda de la
pipeta graduada o la jeringa de tuberculina, separar 0.15 ml.
4. Depositar en el porta objeto y cubrir con una o dos laminillas cubre objetos,
llevando luego al microscopio.
5. Efectuar el contaje en todo el campo de la(s) laminilla cubreobjetos, a un
aumento de 10X, y los resultados se expresan en forma de HPG.
INTERPRETACION
Es idntico al mtodo de MC Master, o sea:
Si en 30 ml.2 gr/heces
15 mlX X= 1 gr.

Si en 15 ml.1gr/heces
0.15 mlX X= 0.01 gr.

Entonces:
o 0.15 ml. Representa la centsima parte de 15 ml.
o 0.01 gr. Representa la centsima parte de 1gr./heces
Finalmente el factor de correccin para el rea de lectura ser 100
Pero tambin se puede utilizar una frmula, la misma que es de la forma
siguiente:

HPG: (N de huevos en el rea de lectura) X (100)




METODOS CUANTITATIVOS POR MUESTREO
DENNIS MODIFICADO.
FUNDAMENTO
Es un mtodo de sedimentacin lenta, basado en la mayor densidad de los
huevos de los tremtodos que el detritus que se hallan en las heces, lo que
permite concentrarlos en el sedimento tras repetidos lavados. La adicin de un
colorante de contraste al sedimento permite destacar el color amarillento
dorado de los huevos. En general es un mtodo que diseado especialmente
para Fasciola, cuyos huevos requieren de un tratamiento cuidadoso y no se le
debe someter a presiones por ejemplo de centrfuga, que tiende a destruirlo.
Aunque tambin, con este mtodo se puede detectar huevos de
Paramphystomum y Metastrngylus.

MATERIALES
o Solucin detergente a una proporcin de 1: 1000 (1 gr de detergente
por un litro de agua desmineralizada).
o Mortero (si las heces estn en forma de pelets)
o Embudo metlico de 3.5 pulgadas de dimetro, con un filtro metlico de
60 a 80 hilos por pulgada (si se v a utilizar tubos de prueba)
o Tubos de prueba de 75 ml. o copas de precipitacin
o Una bagueta de vidrio
o solucin de lugol parasitologico (lugol fuerte)
o Placa petri con fondo rayado a intervalo de 0.5 cm de distancia
o Gradilla para tubos (si se usa tubos o copas de precipitacin)
o Muestra de heces 100 gr
o Microscopio estereoscpico.

PROCEDIMIENTO
1. De una muestra de 100 gr. bien mezclada, tomar en un mortero 3 gr
de heces.
2. Homogenizar o triturar las heces con 50 ml de solucin detergente (si
es pastosa) o desmenuzarlo en el mortero (si es en forma de pelets),
agregando progresivamente los 50 ml. de solucin de detergente,
tratando de no hacer espuma
3. Con la ayuda de un embudo, tamizar a un tubo de prueba o vaso de
precipitacin
4. Dejar sedimentar por 15 minutos (10 a 12) y luego eliminar el
sobrenadante.
5. Resuspender el sedimento con otros 50 ml. de solucin de detergente y
repetir el paso anterior 2 a 3 veces mas hasta obtener un liquido claro
6. Luego de eliminado el ltimo sobrenadante agregar al sedimento 4 a 6
gotas de lugol parasitologico.
7. Verter la solucin a una placa petri y observar al microscopio o tambin
al estereoscopio.
8. El resultado se puede expresar en N de huevos por gramo de heces.
9. El hallazgo de 300 a 600 HPG en ovinos y entre 100 a 200 en vacunos,
indica una infeccin probablemente patgena, que requiere la
aplicacin de un fasciolicida.

INTERPRETACIN
1. Si encontramos 10 huevos de Fasciola heptica
En 3 gr./ heces --------10 huevos
1 gr./heces----------- X
X= 3 huevos /gr/heces.













CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LA FASCIOLA
HEPATICA Y SUS FORMAS EVOLUTIVAS

Fasciola hepatica
1. El tamao es variable, dependiendo su
estado de desarrollo:
. Adultas: 20 a 30 mm X 3 a 8 mm.
. Juveniles: 10 a 20 mm X 1 a 3 mm.
. Inmaduros: 5 a 10 mm X 0.8 a 1 mm.
1. Cuerpo aplanado, en forma de hoja, con
proyeccin cnica anterior, luego se ensancha
en forma de hombros, para luego en la parte
posterior adelgazar a una forma puntiaguda.
2. Color pardo amarillento o caf pardusco.
3. La parte dorsal (epidermis), est cubierto de
espinas crneas.
4. En la cara ventral se observa 2 ventosas: una
oral y otra ventral, ambas se encuentran
separadas de 3 a 5 mm., y en medio de estas
el poro genital comn y el cirro que es muy
pequeo.
Se observa tambin una zona blanquecina
central, ocupada casi en su totalidad por los
testculos que son muy ramificados; a los
lados tiene un color gris que son las glndulas
vitelgenas.
Detrs de las glndulas vitelgenas se
encuentran los intestinos ramificados, que
toman un color oscuro, por la presencia de
sangre digerida en su interior.
En el tercio anterior se observa tambin las
flexuosidades que forma el tero, a manera de
roseta, llena de huevos, de un color amarillo
intenso.
Por detrs del tero se observa una zona
redondeada ocupada por la glndula coclear.















Caractersticas de los huevos de Fasciola
1. Son de tamao grande, es decir miden
de: 150 X 80 .
2. Son de un color caf amarillento.
3. Son de forma ovalada.
4. En uno de los polos presenta un pequeo
oprculo.
5. En su interior se encuentra gran cantidad
de clulas vitelgenas poligonales. Y en
medio de estas clulas se observa un
ovulo fecundado, oscuro y situado ms
cerca de uno de los polos, y que ms


tarde va a dar origen al embrin o larva
miracidio.
6. En su interior no existe cmara de aire,
por estar llenas de clulas vitelgenas.



Caractesticas del Miracidio
1. Miden en promedio de 130 X 30 .
2. Son de forma piriforme, con el extremo
anterior ms ancho que el posterior.
3. El cuerpo est cubierto de por una capa
de cilios o pestaas vibrtiles (rgano de
locomocin).
4. En su extremo anterior, ms ancho, se
observa una prolongacin cnica, aguda,
desprovista de cilios, el que se le
denomina el espoln ceflico o papila
protoplasmtica. Y cerca del extremo
anterior se observa dos manchas
oculares, cuyo pigmento oscuro tiene
forma de una pequea letra x que es de
naturaleza sensorial




Caractersticas del Esporozoito
1. Es una pequea bolsa de tejido, sin forma
especial, pero se indica que
generalmente son de forma alargada o
irregular.
2. Mide aproximadamente 150 .
3. Su interior se encuentra llena de clulas
germinales voluminosas, cuya multiplica-
cin origina a las redias.



Cractersticas de las Redias
1. Miden de 1.3 a 1.6 mm de longitud.
2. Tienen forma alargada, y se parece
bastante aun pequeo gusano.
3. Estn provistas de boca, una faringe
musculosa y un corto intestino ciego.
4. Poseen 2 protuberancias que se
proyectan de los lados y forman los


denominados collares.
5. Presentan 2 apndices laterales en la
porcin posterior, a manera de flecos.
6. En su interior hay gran nmero de clulas
germinales, cuya multiplicacin origina las
redias hijas o las cercarias.




Caractersticas de las Cercarias
1. El cuerpo mide de 0.25 a 0.35 mm.
2. Tienen una porcin anterior gruesa,
tambin denominada cuerpo discoidal.
3. Poseen 2 ventosas claramente
observables.
4. Poseen una cola larga, cuyo tamao es el
doble del cuerpo, mediante cuyo
movimiento pueden nadar.










Caractersticas de las Metacercarias
1. Miden aproximadamente 0.25 mm de
dimetro
2. Sobre las hojas de las plantas, se les
puede apreciar como pequeos puntitos a
la observacin directa.
3. son de forma esfricos o redondeadas.
4. Son de color blanco nacarado o
amarillento.






CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DEL HOSPEDADOR
INTERMEDIARIO DE LA Fasciola hepatica

CARACTERSTICAS DE: Lymnaea truncatula

1. Tiene un tamao pequeo que vara de
0.3 a 1 cm.
2. Poseen un color pardo que va del tono
claro al oscuro.
3. Viven generalmente en el lodo (caracol
aerobio del lodo), aunque tambin se les
puede encontrar en el aguadulce.
4. Su caparazn o concha del caracol tiene
un nmero de espirales de 5 a 6 vueltas,
los mismos que son profundas entre ellas


y tienen forma de torre, son de punta
roma, y son bastante aplanadas.
5. El primer espiral, comenzando de la parte
anterior corresponde a la entrada de la
caparazn, la misma que se encuentra
aproximadamente a la mitad de la altura
de toda la concha.
6. Son dextrgenas, o sea que giran en el
sentido de las agujas del reloj


GUIA DE PRACTICAS N 5
METODO PARA RECUPERAR E IDENTIFICAR LARVAS DE
NEMATODES
FUNDAMENTO
La obtencin de L1 a partir de muestras fecales por procedimientos de
migracin larvaria como el Baerman Wetzel, es un procedimiento habitual. Para
lo cual las muestras deben tomarse directamente del recto de un nmero
representativo de animales del rebao. No hay acuerdo total sobre si el nmero
de larvas en heces guarda correlacin con el de vermes adultos en el pulmn.
Un reducido nmero de L1 en heces, incluso su ausencia, no siempre se
traduce por falta de infeccin, puesto que puede haber perodos inaparentes e
incluso, en casos de evolucin aguda pulmonar, las manifestaciones obedecen
a larvas o fases inmaduras. Hay variaciones muy marcadas en relacin con el
nmero de L1 por gramo de heces; se admite que 40 a 50 larvas indican
infecciones dbiles, mientras que si superan las 100 larvas, significa infeccin
grave para los terneros.

MTODO DE BAERMAN
Su fundamento es la migracin de las larvas desde la materia fecal hacia la
fase acuosa. Para su realizacin se utiliza el aparato de Baerman que consiste
en un embudo grande sostenido por un soporte. El pico del embudo se halla
provisto de un corto tubo de goma que se cierra mediante una pinza de Mohr o
un clamp.
Se utiliza para demostrar la presencia de larvas (L1) de strongylidios bronco
pulmonares de ovinos, bovinos, camlidos sudamericanos y caprinos, as como
larvas de metastrongylos en porcinos. Las heces se deben de tomar
directamente del recto, suelo y tejidos. Es el mtodo de eleccin ms eficiente
para recobrar larvas infectivas.

MATERIALES
1. Aparato de Baerman
2. Gasa mdica
3. Un pabilo
4. Papel filtro circular de 15 cm de dimetro
5. Tubo de centrfuga cnico.
6. Centrfuga.
7. Tubo de goma de seccin pequea para hacer sifn.
8. Solucin de azul de metileno al 1%.
9. Porta y cubreobjetos o placa Petri rayada en su base.
10. Microsciopio
11. Muestra de heces, tomadas directamente del recto.

PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 a 10 g de heces recientes (20 a 30 g), tambin porciones de
tejido pulmonar o filtrado del muestreo del forraje.
2. Colocar la muestra en una doble capa de gasa medica.
3. Anudar las puntas y disponerla a manera de una bolsa amarrada, con un
pedazo de pabilo.
4. Depositar la bolsa en el embudo y cubrirlo con agua tibia (26C)
5. Esperar de 18 a 24 horas, para que las larvas migren al medio lquido y por
gravedad se depositen en el fondo del tubo de jebe presionado por clamp.
6. Abrir el clamp o pinza de Morht y colectar los primeros centmetros cbicos
en un tubo de prueba (10 ml).
7. Sedimentar por 10 minutos o centrifugarlo a 1500 rpm/ por 2 minutos y en el
sedimento buscar larvas.
8. Al sedimento de la centrifugacin se le agrega unas gotas de la solucin de
azul de metileno que colorea las larvas de Dictyocaulus filaria de un color
fucsia a magenta y a las de Dictyocaulus viviparus de un tono lila-violceo.
Las larvas de los nemtodos gastrointestinales y de vida libre no se tien
metacromticamente como las anteriores, lo cual junto a las tpicas
caractersticas morfolgicas permiten reconocer fcilmente a las L1.
9. Si por alguna razn hay demasiado sustancia contaminante que no permita
un estudio fcil y detallado de las larvas, se proceder a preparar un nuevo
equipo de Baerman, pero esta vez colocar en la superficie del agua tibia un
papel filtro, donde se deber depositar cuidadosamente el material que se
desea limpiar y esperar otras 12 horas, para recolectar las larvas que
activamente han atravesadoel papel de filtro.
OTROS MTODOS PRCTICOS
En caso de utilizar heces de ovinos, caprinos o camlidos, cuyas heces son de
forma de pelets, se procede como sigue:
1. Colocar una masa de heces sobre un portaobjetos (en forma de bola
comprimida).
2. Realizar una depresin en el centro de la masa fecal, hasta formar un
espacio en forma discoidal de 5 cm de dimetro.
3. Agregar varias gotas de agua tibia sobre la muestra.
4. Colocar el porta objetos cerca de una fuente calorfica, que puede ser frente
a una ventana con sol o en una estufa, hasta que la larva emigre hacia el
lquido. Si fyera necesario agregar mayor cantidad de agua.
5. Despus de 15 a 20 minutos, retirar las heces, colocar un cubreobjeto y
observar a un menor aumento
Para heces de bovinos y equinos, que normalmente son blandas o para heces
diarreicas de ovinos, se procede de acuerdo a la siguiente tcnica.
1. Colocar una cierta cantidad de heces en una placa petri.
2. Mediante una esptula, comprimir las heces hasta formar un disco de 1 cm
de espesor.
3. Realizar una depresin en el centro de la masa fecal, por medio de una
bagueta de vidrio.
4. Llenar esta cavidad de agua tibia y dejar 15 a 20 minutos, agregando mayor
cantidad de agua cuando se crea conveniente.
5. Con un gotero, extraer las gotas que existan en la depresin y llevarla a un
portaobjeto, colocar un cubreobjeto y observar a un menor aumento.













CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LAS LARVAS DE
PRIMER ESTADO (L1) DE LOS NEMTODES PULMONARES

Gnero y especie Larvas de primer estadio (L1)

Dictyocaulus filaria
Mide de 550 a 580 y alrededor de 20
de ancho
Prominencia protoplasmtica anterior o
botn ceflico
Sus clulas intestinales se encuentran
llenas de grnulos gruesos de materias
alimenticias y de aspecto ms oscuro y
asimtrica
Cola con terminacin cnica roma



Dictyocaulus viviparus
Miden de 280 a 360 .
Carece de prominencia protoplasmtica en
su extremo anterior
Granulaciones intestinales oscuras y
gruesas
Cola con terminacin en punta





Muellerius capillaris
Miden de 250 a 300 de largo
Extremo posterior ondulado
Terminacin de la cola puntiaguda, con
un espoln o espina dorsal bien
marcado
Pocos grnulos





Protostrngylus rufescens
Miden de 200 a 200 de largo y de 16
a 18 de ancho
Grnulos alimenticios pequeos
Extremo posterior presenta una cola
cnica con aspecto ondulante.






CULTIVO DE HECES PARA OBTENER LARVAS INFECTIVAS DE
NEMATODES
FUNDAMENTO
El control de la nematodiasis gastrointestinal en rumiantes, no se puede
desarrollar sin el dominio del ciclo evolutivo de los parsitos, el cultivo en el
laboratorio de sus formas evolutivas, infectantes y por consiguiente la
diferenciacin de ellos. Sin embargo, en la prctica, la determinacin del tipo de
infeccin parasitaria tiene mucha importancia, dado el diferente poder patgeno
de las especies y su desigual sensibilidad frente a la accin de los diversos
antihelmnticos.
El anlisis de materia fecal de los ovinos, caprinos, bovinos, y camlidos,
efectuado solamente en base a la cantidad de huevos de nemtodes
gastrointestinales, no es completo por que no nos permite diferenciar en
muchos casos las especies de parsitos presentes. Varios de ellos tienen
huevos microscpicamente muy parecidos y slo los cultivos de larvas, a partir
del material en examen, nos permite determinar el porcentaje de cada tipo de
larvas presentes, estableciendo as, luego, la cantidad de huevos de cada
grupo por gramo de materia fecal. El principio bsico es dejar que los huevos
presentes en las heces evolucionen y puedan alcanzar el estado larval, hasta
volverse infectante.
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS A CONSIDERAR
Las caractersticas morfolgicas se realizan para orientar la ubicacin y
clasificacin dentro de un grupo o de una especie.
1. La envoltura de la segunda muda vaina, nos sirve como punto de
referencia para la clasificacin de las larvas infectantes de nemtodos
gastrointestinales de los rumiantes.
2. Los orificios naturales (boca, ano) de la larva propiamente dicha estn
encerrados por la vaina de la segunda muda que no se ha desprendido,
pero son igualmente visibles y nos sirve de puntos de referencia y
diferenciacin.
3. La cavidad bucal de las L3 es menor que la de L2, siendo caracterstica
para ciertas especies o faltando en otras (por ejemplo en los
Trichostrongylus).
4. El esfago de la larva infectante es filiforme, sin pronunciada deformacin
bulbosa y sin aparato valvular.
5. Las clulas intestinales dorsales y ventrales, de diferentes formas
(triangulares, rectangulares o pentagonales) son bien diferenciables. La
cantidad de stas, es caracterstica para cada especie.
6. La cola de la vaina larval, a la distancia que media entre el ano de la larva y
la punta de la vaina de la cola.
7. Para la diferenciacin, tambin tiene importancia considerar el largo total de
la larva (vaina) y en ciertos casos el del esfago.

CULTIVO DE LARVAS DE NEMATODES
GASTROINTESTINALES
Existen varios mtodos de cultivo de larvas, partiendo de huevos de
nematodos, que se encuentran en calidad y cantidad variable en las heces, o a
partir de huevos obtenidos de hembras maduras de parsitos.
Todos los mtodos se basan sobre los mismos principios: permitir que maduren
y eclosionen los huevos de nematodos y que desarrollen las larvas, gracias a
condiciones favorables, evolucionando hasta larvas infectantes. El xito del
cultivo depende de tres factores: humedad, temperatura adecuada y
oxigenacin

METODO DE CORTICELLI Y LAI (MODIFICACIN DE ROBERTS
Y O'SULLIVAN)
Materiales
Placa petri de 10 cm de dimetro
Placa petri de 15 cm de dimetro
Estufa (tambin se puede hacer al medio ambiente, entonces el tiempo
requerido ser mayor).
Muestra fecal positivo a nematodos.

Cultivo de larvas de nematodes gastrointestinales
1. En una placa petri pequea (10 cm. Dimetro) colocar aproximadamente 10
grs. de heces.
2. Luego colocar dentro de otra mayor (15 cm dimetro) con agua a altura de 1
cm, La caja menor va sin tapa, la grande, de tal manera que se dispone de
una cmara hmeda
3. Encubar en la estufa oscurecida, a temperatura de 24 a 27C durante 7 a 8
das, o en temperatura ambiente (10 a 15C) durante 10 das. Diariamente
destaparlo para oxigenarlo durante 1 a 2 horas por da, para airear el
cultivo, y adems se deber reponer el agua que se haya evaporado. (El
tiempo depende de la especie de nematodos, generalmente para los
huevos tipo strongylus es de 10 a 12 das y para los nematodirus y la
lamanema de 3 a 4 semanas).
4. Transcurrido este lapso de tiempo, invertir la placa pequea con cultivo en
la placa mayor, que queda parcial mente sumergida.
5. Dejar en tal situacin por unas 12 a 24 horas (siempre dentro de la estufa)
para permitir la migracin de las larvas hacia la parte liquida.
6. Por sedimentacin o centrifugacin se concentran las larvas. En caso de
nematodirus y lamanema, se colectaran los huevos en este momento ya
con larvas infectivas, mediante el mtodo cualitativo de concentracin. Los
huevos colectados se depositan en un frasco al que se le adiciona perlas de
vidrio de 3 a 4 mm de dimetro y mediante la agitacin romper
mecnicamente los huevos y dejar en libertad a la larva infectiva. O
tambin se puede utilizar un estmulo trmico, sometiendo el cultivo a
temperaturas mayores (36 a 38 C) o mediante un cambio brusco alternado,
-2C y 21C. De ambas maneras se logra la eclosin de las larvas
infectantes incluidas en los huevos.
Recuperacin de larvas de cultivo
En casi todos los mtodos la recuperacin de larvas se obtiene utilizando el
clsico aparato de Baerman. Por su hidrotropismo positivo las larvas pasan del
material de cultivo al agua. Procedindose de la forma siguiente:
1. El material cultivado se coloca dentro de una bolsita de gasa sumergida en
un embudo con agua entibiada.
2. Las larvas caen al fondo y son recolectadas a las 24 horas y posteriormente
centrifugadas 3 a 4 minutos a 1,500 revoluciones por minuto
Examen de las larvas recuperadas
El material en examen debe ser lo ms limpio posible, desprovisto de partculas
extraas que obstaculicen el campo visual.
Para poder apreciar los detalles morfolgicos de las larvas se las debe
inmovilizar, utilizando solucin yodoiodurada, las larvas mueren, pero quedan
algo incursadas; sin embargo la coloracin de contraste que ellas toman,
facilita la observacin de los detalles morfolgicos y permite diferenciar a las
larvas infectantes, de los nematodes y larvas de vida libre. Las primeras
protegidas por la vaina de la segunda muda, se conservan mas claras, en
cambio los ltimos se colorean ntegramente de color marrn claro u oscuro.

Clasificacin
Cooperia (oncophora, punctata, axei)
La mayora de nematodes que infectan a los rumiantes pueden ser
diferenciables en base a sus caractersticas constantes, como las mediciones
totales y parciales de rganos. As el mtodo de Wertejuk y de Corticelli y Lai,
se basan sobre las diferencias morfolgicas de las larvas, principalmente sobre
el largo de la cola de la vaina.De esta forma existen tres principales grupos:

1. Larvas con cola de vaina corta
Trichostrongylus (axei, colubriformis, vitrinas)
Ostertagia (circumcincta, ostertagi)

2. Larvas con cola de vaina mediana
Haemonchus (contortus , placei)

3. Larvas con cola de vaina larga
Nematodirus (spatiger, filicollis)
Oesophagostomum (radiatum, venulosum)
Chabertia ovina

4. Larvas con otras caractersticas
Strongyliodes papillosus
Bunostomum spp


CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LAS LARVAS
INFECTIVAS (L3)




Caractersticas morfolgicas de los Trichostrongylus
. Medida del largo total 583 a 785
. Medida del largo del esfago 138 a 181
. Medida del largo cola vaina larval 80 a 110
. La extremidad anterior es muy simple, sin cavidad bucal
. Poseen 16 clulas intestinales
. La cola de la larva termina en 1 2 protuberancias
. Cola de la vaina larval, corta, cnica, aguda








Caractersticas morfolgicas de las Ostertagias
. Medida del largo total 780 a 978
. Medida del largo del esfago 140 a 185
. Medida del largo cola vaina larval 122 a 170
. La extremidad anterior presenta una cavidad bucal
. Poseen 16 clulas intestinales
. Cola de la vaina larval, alargada, puntiaguda, con una
desviacin a la altura de la punta de la cola de la larva.







Caractersticas morfolgicas de los Haemonchus
. Medida del largo total 600 a 805
. Medida del largo del esfago 119 a 175
. Medida del largo cola vaina larval 119 a 149
. La extremidad anterior presenta una cavidad bucal ovalada.
En muchos casos a la altura de la cavidad bucal se observa
una pequea plaqueta quitinosa oscura
. Poseen 16 clulas intestinales
. Terminacin de la cola larval cnica, e muchos casos
arrugada
. Cola de la vaina larval, que adelgaza gradualmente, termina
en una prolongacin filamentosa.








Caractersticas morfolgicas de las Cooperias
. Medida del largo total 666 a 899
. Medida del largo del esfago 140 a 175
. Medida del largo cola vaina larval 97 a 157
. La extremidad anterior presenta una cavidad bucal en forma
de pera
. Poseen 16 clulas intestinales
. En el sitio donde empieza el esfago existe una cinta fibrosa
(2 puntos refringentes), que se observa como un solo punto
ovalado y grande (caracterstico para cooperias).
. Terminacin de la cola larval obtusa, redondeada
. Cola de la vaina larval, recta, reducindose en una
terminacin filamentosa.








Caractersticas morfolgicas de los Nematodirus
. Medida del largo total 940 a 1204
. Medida del largo del esfago 182 a 252
. Medida del largo cola vaina larval 269 a 370
. La extremidad anterior presenta una cavidad bucal, en
forma de tubo recto
. Poseen 8 clulas intestinales
. Cola de la vaina larval, es larga, en forma de ltigo









Caractersticas morfolgicas de los Oesophagostomun
. Medida del largo total 704 a 857
. Medida del largo del esfago 133 a 160
. Medida del largo cola vaina larval 209 a 269
. La extremidad anterior presenta una cavidad bucal recta
con paredes engrosadas.
. Poseen una vaina gruesa, floja y ondulada
. Poseen 16 a 32 clulas intestinales
. Son bastante anchas
. Toman el aspecto incursado, despus de la fijacin.
. Cola de la vaina larval, alargada y filamentosa









Caractersticas morfolgicas de la Chabertia ovina
. Medida del largo total 608 a 889
. Medida del largo del esfago 140 a 178
. Medida del largo cola vaina larval 131 a 220
. Morfolgicamente son muy parecidos a los
Oesophagostomun
. Poseen 28 a 32 clulas intestinales de forma rectangular







Caractersticas morfolgicas del Strongyloides sp.
. Medida del largo total 520 a 710
. Medida del largo del esfago 200 a 275
. Medida del largo cola vaina larval 122 a 170
. Esfago muy largo (1/3 del total de la larva y de color claro)
. Intestino bastante corto formado por clulas no
diferenciables, con oscuras granulaciones.
. Cola de la larva Terminal trifurcada (vista de costado parece
bifurcada).







Caractersticas morfolgicas de los Oesophagostomum
. Medida del largo total 704 a 857
. Medida del largo del esfago 133 a 160
. Medida del largo cola vaina larval 209 a 269
. Cavidad bucal recta, de paredes engrosadas.
. Est provista de una vaina gruesa y floja, que forma bien
visible ondulaciones.
. Esfago bastante largo, con ensanchamiento en la parte
Posterior.
. Poseen 16 a 32 clulas intestinales poco evidentes
. Cola de la vaina larval muy fina, larga en proporcin con el
largo total de la larva.
. Terminacin de la cola de la larva, obtusa.





METODO HARADA Y MORI
Fundamento
Es otro mtodo, que se utiliza para efectos de realizar el cultivo de heces para
obtener larvas infectivas de nemtodes. Este mtodo es particularmente til en
caninos, para obtener larvas de Ancylostoma caninum y Uncinaria
stenocephala.

Materiales
Tubo de prueba de 20 ml de capacidad.
Tiras de papel filtro (30x150 mm)
Esptula
Estufa
Gradilla o soporte para tubos.

Procedimiento
1. Extender una pequea cantidad de heces en la tira de papel, dejando limpio
4 5 cm de un extremo para sumergirlo en el agua
2. Introducir la tira de papel por el extremo limpio en el tubo de prueba, que
tenga 2.5 a 3 cm de agua destilada, filtrada o hervida. El extremo de la tira
no deber tocar el fondo del tubo.
3. Tapar el tubo con un tapn de jebe o de corcho.
4. Conservar el tubo durante 8 a 10 das a temperatura ambiente, protegida
por un tapn, pero destapndolo diariamente por unos minutos para
oxigenarlos. En este tiempo las larvas de strongyloides pueden llegar a ser
infectivas filariformis y/o adultos y tos trichostrongylidos a larvas infectivas.
5. Retirar el papel
6. En el lquido buscar las larvas.





METODO DE LA DOBLE W PARA CALCULAR LARVAS
INFECTIVAS EN LOS CAMPOS DE PASTOREO

Fundamento
Existen tcnicas que permiten determinar el grado de infectividad de las
hierbas por larvas de nemtodes (habitualmente nemtodes pulmonares o
gastrointestinales); estas tcnicas se utilizan para efectuar estudios
epidemiolgicos, cuando se necesita conocer la dinmica de acumulo de larvas
en el pasto (nmero de L3 por kilogramo de materia verde). Sin embargo, el
recuento de larvas en el pasto no es en s mismo un indicador directo de los
brotes de gastroenteritis parasitaria, pero es un indicador del grado de
contaminacin de los campos de pastoreo; el que nos permite efectuar un
manejo adecuado de los pastizales como la rotacin adecuada de los campos
de pastoreo. Este mtodo, se utiliza solo para ovinos y vacunos a excepcin de
los camlidos sudamericanos.

Materiales
Bolsas de polietileno
Baldes y copas de sedimentacin de 500 ml.
Equipo del mtodo de Baerman (opcional)

Procedimiento
1. Recorrer 2 W opuestas en el rea de pastoreo, donde se desea averiguar la
fauna helmntica parasitaria.










2. La longitud en pasos de cada W dividirla entre 100 o 50, dependiendo de la
extensin del campo y la densidad de la vegetacin.
3. El resultado indicara el nmero de pasos y espacios a recorrer, a cuyo final
se colectar la muestra de pastos. Ej. Longitud de 1w = 1000 pasos, 1000 /
100=10; luego cada 10 pasos se colectara la muestra de forraje.
4. La coleccin del forraje consiste en tomar un puado de la parte foliar de los
4 costados en que se detiene el coleccionista y depositarlas en bolsa de
polietileno. Al final se disponen las muestras de una a otra muestra (w),
procesndolas independientemente y el resultado es el promedio de ambas
w.
5. Del forraje muestreado se pesa y se deposita en un balde, se cubre con
agua corriente (tibia), y se lava vigorosamente.
6. Se deja sedimentar por alrededor de 1 hora, luego del cual se transfiere el
forraje a un a un segundo balde, donde se vuelve a lavar y sedimentar por
otra hora, despus de la cual se retira y descarta el forraje.
7. El sedimento de uno y otro balde, se tamiza por malla de 30 hilos por
pulgada (se coloca a una gasa medica amarrndola y pasar a la copa de
Baerman).
8. El filtrado se deposita en la copa de sedimentacin por alrededor de 1 hora
y el sedimento se procesa mediante el mtodo de Baerman, para recuperar
las larvas.
9. En el sedimento existir larvas de vida libre, larvas parasitarias de primer y
segundo estadio (esfago rabditiforme), y larvas infectivas parasitarias (L3)
(esfago filariforme y muda retenida), Para efectos de facilitar el estudio se
adiciona unas gotas de lugol dbil que mata y colorea a las del esfago
rabditiforme y colorea menos y mantiene alguna motilidad a las del esfago
filariforme.
10. Los resultados se expresan en nmero de larvas por kilogramo de forraje.