UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

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FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS
CARRERA DE BIOQUIMICA
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA II
DOCENTE: Dra. Katty Terrazas Día Lab: lunes
UNIV.: Ana Camila Zenteno Illanes Fecha: 8-10-2019

DETECCION DE ANTICUERPOS anti HIV

INTRODUCCIÓN
A medida que el cuerpo combate el VIH, el sistema inmunológico desarrolla anticuerpos contra el
virus. La prueba de anticuerpos contra el VIH no mide ni detecta al virus, pero sí detecta la
reacción del cuerpo contra el virus (la presencia de anticuerpos anti-VIH). Existen tres análisis de
anticuerpos que se usan comúnmente para realizar el diagnóstico: ELISA, Western Blot e IFA.
ELISA
La prueba de ELISA (también llamada EIA) generalmente es la primera prueba que se hace; no
es cara y es muy sensible para detectar la presencia de anticuerpos anti-VIH. En la mayoría de
los casos se analiza una muestra de sangre, pero existen otros tipos de ELISA que analizan
saliva y orina. La prueba de ELISA tarda de 3.5 a 4 horas en dar resultados, pero la mayoría de
los sitios de prueba envían las muestras a un laboratorio que las analiza en camadas y por lo
tanto hay que esperar de una a dos semanas para obtener los resultados.
Después del «período ventana» rara vez las pruebas de ELISA dan resultados «negativos
falsos». Ésto significa que si obtiene un resultado negativo y se hizo la prueba al menos seis
meses después de la última exposición al virus, usted es realmente VIH negativo. Rara vez la
prueba ELISA puede dar resultados «positivos falsos». Un resultado positivo falso puede ocurrir si
la persona se hace la prueba justo después de haber tenido una estimulación temporal del
sistema inmunológico, debido a una infección viral o a una vacunación. También pueden ocurrir
debido a errores del laboratorio o debido a la alta sensibilidad de la prueba (ver a continuación).
Por este motivo, los resultados positivos a la prueba de ELISA siempre deben ser confirmados
con una prueba de Western Blot o IFA. En los sitios serios de diagnóstico ésto se hace
automáticamente, lo que quiere decir que no tiene que volver a dar sangre.
Existe una prueba relativamente nueva llamada «detuned» ELISA, que se viene usando en el
área de investigación y que pronto estará ampliamente disponible. La prueba «detuned», que se
usa sólo después de que se confirmó la presencia de anticuerpos mediante una prueba Western
Blot, puede determinar si la infección es reciente (dentro de los últimos seis meses), lo que puede
contribuir a tomar decisiones sobre tratamiento temprano.

OBJETIVOS GENERAL
Detectar la presencia de anticuerpos anti HIV mediante el método de ELISA.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Realizar un ELISA para detectar anticuerpo anti HIV para el diagnóstico de VIH.
- Interpretar el resultado obtenido respecto a los controles empleados.
METODOLOGÍA: ELISA
MATERIALES:
- Muestra ( suero o plasma)
- Controles (positivo, negativo)
- Buffer de lavado
- Diluyente de la muestra
- Conjugado 1
- Conjugado 2
- Cromógeno/Sustrato.
- Solución Stop
RESULTADOS
Para la validación
CONTROL POSITIVO > 0,700
CONTROL NEGATIVO < 0,200

Formula para el cálculo de COV

COV = CONTROL NEGATIVO + 0,125

Tabla 1. Interpretación de los resultados obtenidos mediante ELISA de cuarta generación en el

Laboratorio de Virología del Instituto SELADIS.
DETECCIÓN DE HIV
M C (-) C (+) COV Interpretación Inmunocromatografia
Muestra 1 0,070 0,079 1,785 0,204 Negativo No reactivo
Muestra 3 2,850 0,204 1,785 0,329 Positivo Reactivo

Imagen 1. Resultados obtenidos mediante ELISA de cuarta generación en el Laboratorio de

Virología del Instituto SELADIS.

DISCUSIÓN

La certeza de los análisis médicos depende de dos factores: la sensibilidad y la especificidad. La

prueba ELISA es extremadamente sensible (aprox. 99.5%), lo que significa que puede detectar
pequeñas cantidades de anticuerpos anti-VIH. Esta alta sensibilidad disminuye las posibilidades
de obtener resultados «negativos falsos» cuando los anticuerpos están presentes. Asumiendo
que se haga la prueba después del período ventana de seis meses y que no ha participado en
actividades que lo ponen a riesgo de infectarse, si el resultado de la prueba ELISA es «negativo»,
prácticamente no hay posibilidades de que usted tenga el VIH.
La alta sensibilidad de la prueba hace que tenga menos especificidad. Ésto significa que puede
dar «positivos falsos» (con poca frecuencia). Para compensar, se hacen pruebas
confirmatorias automáticamente, después de un ELISA positivo. Las pruebas WB e IFA son de
alta especificidad para los anticuerpos anti-VIH, por lo que descartan cualquier ELISA positivo
falso.
Los CDC establecen que la prueba ELISA más, ya sea la prueba WB o IFA, tienen una certeza
combinada mayor al 99%.
Los CDC recomiendan repetir dos veces cualquier prueba ELISA positiva; si cualquiera de esas
repeticiones da positiva (reactivo), luego se hace una prueba confirmatoria. Sólo cuando los
resultados de la prueba confirmatoria también son reactivos, se comunica el diagnóstico al
paciente. Los sitios serios siguen este procedimiento automáticamente por lo que se puede
confiar en cualquier resultado positivo que informen. También es importante tener en cuenta que
si obtiene un resultado positivo a partir de una prueba rápida de VIH (que brinda resultados en 20
minutos o menos), su resultado es aún preliminar. Se debe realizar una prueba confirmatoria para
verificar si está infectado con el VIH y ésto puede llevar varios días.

Si el paciente está fuera del período ventana y obtuvo un resultado VIH negativo mediante la
prueba ELISA, y no se puso a riesgo de contraer el VIH, debe considerarse VIH negativo. Quizás
tenga ansiedad sobre las remotas posibilidades de que esté infectado y sin embargo obtener un
resultado negativo. Si bien ésto es técnicamente posible y de hecho ha sido documentado en
varias personas, las probabilidades son tan pequeñas que van más allá de la imaginación. Piense
que se han administrado decenas de millones de pruebas para el VIH y que sólo un puñado de
personas con VIH no tienen anticuerpos detectables. Si esa pequeña probabilidad aún le molesta,
piense en qué otros problemas está teniendo. ¿Se siente culpable por haber tenido una
experiencia que lo puso a riesgo, o que siente que lo puso a riesgo, aunque no haya sido así?
¿Existen otras fuentes de ansiedad que otras pruebas de VIH no aliviarán? Si quiere explorar
estas cuestiones (por ejemplo, quiere averiguar si cierta actividad lo pone a riesgo de contraer el
VIH) Visite las oficinas ITS/SIDA más cercanas a su localidad o busque una persona que le
oriente.
Algunas personas, teniendo en cuenta la diminuta probabilidad de un resultado «negativo falso»,
o quizás queriendo obtener resultados sin esperar que pase el período ventana, pueden querer
saber sobre las pruebas PCR u otras pruebas de carga viral (ARN) que miden al virus
directamente. Las pruebas de carga viral permiten que los doctores sigan con certeza el progreso
del VIH en el cuerpo (lo que ayuda a los pacientes con VIH a tomar decisiones apropiadas de
tratamiento). La mayoría de las personas que no conocen su estado de VIH no necesitan una
prueba de carga viral. La prueba de anticuerpos es la más barata, y en general, la manera más
confiable para conocer el estado de VIH de una persona.
Dicho lo anterior, las personas que se han expuesto al VIH recientemente y que tienen síntomas
consistentes con la conversión serológica (síntomas de gripe), pueden solicitar una prueba de
carga viral junto a la de anticuerpos anti-VIH. Ésto puede ayudar a identificar una infección
durante el período ventana (antes del desarrollo de anticuerpos), sin embargo, debe tenerse en
cuenta que se requiere un análisis de anticuerpos para confirmar si una persona está infectada
con el VIH.

CONCLUSIONES
Se realizó la detección de anticuerpos anti HIV teniendo como resultado una muestra negativa
Se logró interpretar el resultado obtenido teniendo en cuenta los siguientes puntos
Un resultado positivo (reactivo) significa:
- Usted es VIH positivo (es portador del virus que causa el SIDA)
- Puede infectar a otros que entren en contacto con su sangre, semen o fluidos vaginales.
Debe tomar las precauciones necesarias para evitar transmitir el VIH a otros.
Un resultado positivo NO significa:
- Que usted tiene SIDA.
 - Que desarrollará SIDA
- Que es inmune al SIDA, a pesar de que tiene anticuerpos.
Un resultado negativo (no reactivo) significa:
- No se encontraron anticuerpos en la sangre.
Un resultado negativo NO significa:
- Que no esté infectado con el VIH (podría estar en el «período ventana»).
- Que es inmune al SIDA.
- Que es «resistente» a la infección.
- Que nunca tendrá SIDA.
Un resultado indeterminado (muy raro) significa:
- El resultado de la prueba Western Blot no es claro. Se debe repetir la prueba de VIH
usando una nueva muestra de sangre, obtenida semanas después de la primera muestra.
- Los resultados indeterminados también pueden obtenerse si la persona acaba de tener la
conversión serológica.
-
CUESTIONARIO
a) ¿Qué son los inhibidores de la transcriptasa inversa?

Clase de medicamentos antirretrovirales (ARV) contra el VIH. Estos inhibidores bloquean la

transcriptasa inversa (una enzima producida por el VIH). El VIH emplea la transcriptasa inversa
para convertir su ARN en ADN (transcripción inversa). Al bloquear la transcriptasa inversa y la
transcripción inversa se evita la multiplicación del VIH. [CITATION Dep19 \l 3082 ]
b) ¿Cuál es el mecanismo de los análogos nucleósidos, no nucleósidos, proteasas e
integrasas?

El grupo de drogas que actúan inhibiendo a la transcriptasa reversa (inhibidores nucleósidos y no-
nucleósidos) evitan la conversión de ARN viral a ADN viral. Estos grupos de drogas han sido
evaluadas en el tratamiento de VIH.
La Zidovudina (ZDV) es un análogo nucleósido muy estudiado en el gato, con buena tolerancia en
esta especie. Con este tratamiento se reduce el número de copias virales y mejora el estado
clínico del paciente
Otro inhibidor de la transcriptasa inversa, pero del grupo de los no-nucleósidos, es la Nevirapina
(Nevi) que es efectiva para disminuir la carga viral y mejorar los signos neurológicos, pues
atraviesa la barrera hematoencefálica [ CITATION Góm13 \l 3082 ]
Los primeros fármacos inhibidores de integrasa actuán en el sitio catalítico, evitando la
incorporación de la cadena de ADN viral en el ADN del huésped, como ejemplo tenemos al
raltegravir, elvitegravir y dolutegravir. [ CITATION Flo \l 3082 ]
La proteasa, una enzima codificada, es la responsable del ensamblaje de las poliproteínas
necesarias para la maduración y replicación de los viriones infecciosos (ensamblaje). Los
inhibidores de la proteasa (IP) poseen una estructura química que imita el substrato proteico
endógeno. Por tanto, los IP pueden bloquear el proceso de postraslación de la proteína del VIH,
lo que conduce a la producción de partículas virales inmaduras, no infecciosas (2).Los IP se
encuentran entre los agentes antirretrovirales más potentes, debido a su habilidad de romper el
ciclo de replicación y de prevenir que el VIH infecte otras células. Estos agentes son activos
contra las células afectadas tanto de forma aguda como crónica. [CITATION Sán99 \l 3082 ]
BIBLIOGRAFÍA
Departamento de salud y servicios humanos de E.E.U.U. (8 de Octubre de 2019). Info Sida.
Recuperado el 8 de Octubre de 2019, de https://infosida.nih.gov/understanding-hiv-
aids/glossary/4501/inhibidor-de-la-transcriptasa-inversa-analogo-de-los-nucleosidos

Flores, J. (s.f.). Eficacia de la combinación de dos nucleósidos inhibidores de integrasa.

Gómez, N. y. (2013). Eficacia de la combinación de dos nucleósidos inhibidores. InVet, 102.

Sánchez, N. (28 de Octubre de 1999). Biblioteca Virtual De Vigilancia En Salud. Recuperado el 8

de Octubre de 2019, de http://www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/vigilancia/rtv0699.pdf