INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
Bitácora de la práctica: “Reacciones enzimáticas de oxido-reducción”
Ruiz Osnaya José Dynarko, 4QV1, Sección: A.
Introducción
En las células, las reacciones enzimáticas redox tienen una gran cantidad de
funciones diferentes, pero de manera general, la mayoría de las oxidaciones
biológicas regularmente están acopladas a la producción de energía celular, los
compuestos de carbono (ej: los carbohidratos) se pueden oxidar hasta dióxido de
carbono (obteniendo energía). Las reducciones biológicas, por otro lado, son
empleadas para almacenar energía en formas químicas (compuestos de alta
energía, ej: ATP) para su posterior uso. Este amplio espectro de reacciones redox
puede servir para accionar bombas, mantener gradientes de concentración a través
de las membranas y generar metabolitos que tienen un alto potencial de
transferencia de grupos y / o son ricos en energía.
La lactato deshidrogenasa (LDH) es una de las enzimas de transferencia de H
(oxidorreductasa) utilizando como coenzima el NAD+, está involucrada en el
metabolismo anaeróbico de la glucosa, cataliza la interconversión de piruvato a
lactato (y NADH a NAD+). La reacción (enzimática) se da al transferir un ion hidruro
de NADH al piruvato (en C2). En el mecanismo molecular se tiene la unión de NADH
a la enzima como primer paso (muchos residuos en el sitio activo están involucrados
en esta unión). Una vez que el NADH se une se facilita la unión del lactato (a través
de una interacción entre el anillo NADH y los residuos de LDH), La transferencia de
un hidruro ocurre rápidamente (en ambas direcciones), formando dos complejos
terciarios; LDH-NAD+-lactato y LDH-NADH-piruvato, seguido de esto, se tiene la
disociación del piruvato y la liberación de NAD+.

Objetivos
- Probar la actividad enzimática de la enzima lactato deshidrogenasa, ante la
ausencia y presencia de diferentes compuestos (NAD+, lactato, agua, KCN
y azul de metileno) en la reacción enzimática.
 Metodología

Obtención de la coenzima NAD+

INICIO
5 min
92 ⁰C

Éter
H2O
Hasta
vol.
original

1g

Triturar
6g

-2500 RPM
Cortar en trozos
pequeños -15 min

Recuperar y
+ 25 mL etiquetar FIN
H2O “coenzima NAD+”

Desecha
r
Determinación de la actividad enzimática: Deshidrogenasa láctica

INICIO

Lactato 1%: 1 mL
C1 mL

1 mL

1 2 3 4 5

KCN 0.5%: 1 mL 1 1 1 1 1
m m m m m
C1 mL L
L L L L
1 mL

1 2 3 4 5

1 1 1 1 1
m m m m m
L L L L L Azul de metileno
0.002M: 0.3 mL
C1 mL

1 mL

1 2 3 4 5

1 1 1 1 1
m m m m m Agua: 1 mL
L L L L L

1 mL

1 2 3 4 5

1 1 1 1 1
m m m m m
L L L L L

Sig.
página
 NAD+: 1 mL

1 mL

1 2 3 4 5

1 1 1 1 1
m m m m m
L L L L L

Aceite vegetal: 1mL

Todos los tubos

37 ⁰C

FIN
Bibliografía
- Punekar, N.S. (2018) Enzymatic Oxidation–Reduction Reactions. Catalysis,
Kinetics and Mechanisms. Springer, Singapore. Disponible en:
https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-981-13-0785-0_33 (Consulta:
11/2021) (Resumen).
- Farhana, A., Lappin, S. L. Biochemistry, Lactate Dehydrogenase, StatPearls.
(2021). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK557536/ (Consulta:
11/2021).