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Conceptos en Microscopía
Medidas Microscópicas
Preparaciones
Tipos de Microscopia
Principios de Óptica
Los elementos necesarios para formar una imagen son:
1. Fuente de iluminación
2. Muestra
3. Sistema de lentes
Es un instrumento óptico que se usa para aumentar o amplificar las imágenes de objetos y
organismos no visibles a simple vista. Se utiliza para examinar objetos transparentes o
cortados en láminas tan finas que se transparentan. Esta conformado por tres sistemas:
❧ Iluminación
❧ Óptico
❧ Mecánico
❧ Espejo
Sistema Óptico
❧ Prismas
Sistema Mecánico
Posee los elementos que sostienen a las partes del sistema óptico y de iluminación; esta
comprendido por:
❧ Tubo del ocular: es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera.
Sostiene al mecanismo del revolver con los objetivos en su parte inferior y los
oculares en el extremo superior.
❧ Pinzas de sujeción
La naturaleza de la luz
Luz Visible
Forma parte de una estrecha franja que va desde longitudes de onda de 400nm (violeta)
hasta los 700nm (rojo).
Las Lentes
Son objetos que concentran o hacen divergir los rayos de luz. Existen dos tipos principales
de lentes:
❧ Convergentes: forman imágenes reales.
❧ Divergentes: forman imágenes virtuales.
El objeto está fuera del plano focal, y la imagen se forma detrás de la lente, se observa
aumentada e invertida.
El objeto está dentro del plano focal, la imagen se forma delante de la lente y se observa
aumentada pero NO invertida.
Tipos de Microscopios de Luz
Videomicroscopía digital
Microscopio electrónico
Utiliza electrones en lugar de fotones para formar imágenes de objetos muy pequeños.
Funciona con un haz de electrones de alto voltaje y utiliza lentes magnéticas para formar
la imagen sobre una pantalla. Con el microscopio electrónico es posible aumentar la
imagen des 1000 hasta 25,000 veces. La longitud de onda es más corta.
Posee mayor poder de resolución que el microscopio óptico, cerca de 2000 veces. Existen
dos tipos de microscopio electrónico:
Datos históricos
❧ Rober Hook, en 1965 utilzó la palabra célula al observar una muestra corcho.
❧ Antón van Leeuwenhoek construyo un microscopio simple que aumentaba 300
veces el tamaño de los objetos. Observo células sanguíneas, bacterias y
organismos simples en agua de charcas.
❧ En 1833 Robert Brown descubrió el núcleo.
❧ En 1838 Matthias Scheleiden propuso la hipótesis de que todas las plantas están
formadas por células.
❧ En 1839, Theodor Schwann propuso que los animales también estan formados por
células y que los procesos de vida ocurren dentro de las células.
❧ En 1858, Rudolf Virchow presentó evidencia de que las células se reproducen para
formar nuevas.
Variedad de Células
Las células se clasifican en: procariotas y eucariotas. Se diferencian por su tamaño y por el
tipo de estructuras internas u organelos que contienen.
Procariotas
Células que carecen de envoltura nuclear rodeando su material genético con un tamaño
de 0.2-10 μm. Se dividen en:
❧ Arqueobacterias
❧ Eubacterias
Estructura de la Bacteria
Cápsula Presente en muchas bacterias, sobre todo patógenas. Compuesta por glúcidos,
tiene función protectora contra desecación, fagocitosis y ataque de linfocitos
Pared Estructura rígida para que la bacteria soporte presiones osmóticas, compuesta por
Bacteriana peptidoglucanos y otras sustancias. Su estructura permite diferenciar a las Gram +
y Gram -
Membrana Similar en composición y estructura a la de los eucariontes. Presenta repliegues
plasmática internos llamados mesosomas
Flagelos Estructuras filamentosas con función motriz, formados por fibrillas proteicas
Fimbrias o pili Filamentos largos y huecos con funciones relacionadas con intercambio de
material genético y adherencia a sustratos
La tinción se basa en las propiedades químicas de su pared celular. Las células Gram
positivo retienen el cristal violeta cuando se tratan con etanol mientras que las Gram
negativo no lo tienen y se tiñen entonces del color rojo de la safranina.
Bacterias Gram positivo: se tiñen de color morado. Su pared celular está constituida por
peptidoglucano, proteína y carbohidrato.
Bacterias Gram negativo: estas se tiñen de color rojo o rosado, poseen una pared celular
más delgada y poseen una doble membrana que posee lípidos.
Eucariotas
Su dimensión celular ronda entre 5-200μm. Son células que poseen un núcleo verdadero y
forman los siguientes grupos de organismos:
❧ Protistas (unicelulares)
❧ Hongos (unicelulares y pluricelulares)
❧ Plantas
❧ Animales
Pluricelular: organismos formados por muchas células que constituyen tejidos, órganos y
sistemas.
Célula germinal: célula que sufre meiosis y da lugar a gametos. (óvulo y espermatozoide).
Célula totipotencial
Células pluripotenciales
La masa interna desarrollará todos los tejidos del cuerpo humano, pero no puede formar a
un organismo entero porque no puede dar lugar a la placenta y a los tejidos de soporte
necesarios para el desarrollo del feto en el útero humano.
Estas son llamadas células pluripotenciales, células madre o troncales (ítem cells).
Formación de
célula
totipotencial
Pluripotenciales
Células multipotenciales
Las células madre pluripotenciales sufren una especialización en otro tipo de células
madre que van a dar lugar a células con una función particular. Por ejemplo, las ítem cells
sanguíneas, que dan lugar a glóbulos rojos, los glóbulos blancos y plaquetas. Las ítem cells
multipotenciales también se encuentran en niños y adultos.
Virus
Tipos de Virus
Viroides
Molécula circular pequeña de ARN desprovista de
cubierta protéica, su tamaño oscila entre los 246-375
ribonucleótidos. Son patógenos en plantas (papas,
aguacates, cocos, crisantemos)
Priones
Carbohidratos
La composición molecular de la célula esta distribuida así:
❧ 65-70% es agua.
❧ 24-27% moléculas orgánicas.
❧ 3-7% otros compuestos.
Moléculas Orgánicas
Son consideradas moléculas orgánicas todos aquellos compuestos que contienen carbono.
Son componentes característicos de la célula, son estables, de gran variedad, poseen
diversidad de formas, tamaños y funciones. Entre las moléculas orgánicas tenemos:
❧ Carbohidratos
❧ Proteinas Forman polímeros
❧ Ácidos Nucleicos
Átomo de Carbono
Carbohidratos
Son moléculas orgánicas solubles en agua cuya formula general es: (CH 2O)n. Los
carbohidratos incluyen azúcares simples, disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos.
Funciones
❧ Reserva de energía
❧ Estructurales
❧ Moléculas de señal
Glucosa
Isómeros α y β de la glucosa
Cuando la glucosa forma anillos, el grupo OH del carbono 1 puede observarse orientado
hacia abajo (isómero α) o hacia arriba (isómero β)
Ejemplos de monosacáridos
Aldosas Cetosas
Triosas Gliceraldehído Dihidroxiacetona
Enlaces alfa: fáciles de hidrolizar, presentes en azúcares de reserva energética. (OH hacia
abajo).
Enlaces beta: difíciles de hidrolizar, presentes en azúcares estructurales. (OH hacia arriba)
Oligosacáridos
Polisacáridos
Están constituidos por cientos o miles de monosacáridos unidos. Los más importantes
para la célula son:
❧ Reserva alimenticia
1. Almidón en vegetales.
2. Glucógeno en animales
❧ Estructurales
1. Celulosa: pared celular vegetal
2. Quitina: exoesqueleto de invertebrados
3. Glucosaminoglucanos (animales ➠ matriz extracelular)
Almidón
Glucógeno
Forma como se almacena el exceso de energía química en hígado y músculos de los
animales. Está constituido por monómeros de glucosa unidos por enlaces α (1-4). Posee
puntos de ramificación cada 8 unidades de glucosa con enlaces α (1-6).
Celulosa
Polímero lineal de glucosa unida por enlaces β (1-4), constituye la estructura de las
paredes de las células vegetales. Es un polisacárido indigerible por los animales y
constituye la fibra dietética.
Quitina
Glucosaminoglucanos
Están formados por unidades repetidas de disacáridos. Uno de los azúcares del disacárido
es un azúcar amino (N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina), el azúcar amino tiene
unido uno o más grupos sulfato. Los glucosaminoglucanos forman parte de la matriz
extracelular que rodea a las células.
Son uno de los tres principales macronutrientes que aportan energía al cuerpo humano
(los otros son los lípidos y las proteínas). Actualmente está comprobado que al menos 55%
de las calorías diarias que ingerimos deberían provenir de carbohidratos.
Lípidos
Características
❧ Insolubles en agua.
❧ Solubles en solventes orgánicos como benceno, alcohol, etc.
❧ Están constituidos por carbono, hidrógeno, oxígeno y algunas veces fósforo.
❧ Algunos de ellos deben ingerirse en la dieta por ser nutricionalmente esenciales
(como el omega 3 y omega 6) y otros pueden ser sintetizados por el organismo.
❧ Proporcionan mayor energía por gramo que los carbohidratos.
❧ No forman polímeros
Funciones en la Célula
Están constituidas por glicerol y ácidos grasos. Dependiendo de número de ácidos grasos
que poseen pueden ser: Monoacilgliceroles (un ácido graso), diacilgliceroles (dos ácidos
grasos) o triacilgliceroles (tres ácidos grasos). Los triacilgliceroles es la forma en que se
encuentran las grasas animales. * El glicerol es un alcohol de 3 carbonos, por lo tant puede
enlazarse a 3 ácidos grasos, cuando los ácidos grasos se unen al glicerol se libera agua y se
pierde la antipatía.
Triacilgliceroles
Estructurales – Fosfolípidos
Ceras
Son ésteres de ácidos grasos de cadena larga con alcoholes de cadena larga, son sólidos a
temperatura ambiente e insolubles en agua. Su función principal es proteger superficies
contra la desecación. Ej. Cera de abejas, sobre la piel, pelaje y plumas de animales, sobre
hojas y grutos.
Ácidos Grasos
Proteínas
Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por C,H,O,N, algunos tipos de
proteína pueden contener azufre, fósforo, hierro, magnesio, cobre u otros elementos. Las
proteínas son polímeros de aminoácidos, estas pueden ser de dos clases:
❧ Proteínas simples: solo contienen aminoácidos.
❧ Proteínas conjugadas: contienen además otros compuestos.
Los bloque básicos de todas las proteínas son los aminoácidos. Los aminoácidos se
caracterizan por tener un grupo amino y un grupo R variable que le confiere propiedades
únicas. La fórmula general de los aminoácidos es:
Los aminoácidos esenciales son aquellos que no fabrica el cuerpo o lo hace en cantidades
muy limitadas y que, por lo tanto, deben ingerirse a través de los alimentos o suplentes.
Los aminoácidos esenciales y no esenciales son:
ESENCIALES NO ESENCIALES
Arginina Serina
Leucina Ácido aspártico
Lisina Glutamina
Metionina Ácido glutámico
Valina Glicina
Isoleucina Alanina
Treonina Prolina
Triptófano Cisteina
Fenilalanina Asparagina
Histidina Tirosina
Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos o enlaces amida y pueden dar
lugar a:
Estructura Primaria
Estructura Secundaria
En esta ya se hacen presentes puentes de hidrógeno que pueden dar lugar a dos tipos de
estructuras secundaria:
❧ α hélice (proteína enrollada helicoidalmente)
❧ Lamina β (proteína en forma de zig-zag)
Estructura Terciaria
Estructura Cuaternaria
Es la combinación de dos o más unidades protícas (cadenas peptídicas). Cada una de estas
cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero o monómero y pueden ser:
❧ Con dos subinidades:
-Homodímeros con dos subunidades idénticas.
-Heterodímeros con dos subunidades no idénticas.
Funciones de la membrana:
Es un modelo que sirve para describir a todas las membranas biológicas, este imagina a la
membrana como dos capas de lípidos bastante fluidas con proteinas localizadas dentro y
sobre capas lipídicas y orientadas de forma específica con respecto a las dos superficies de
membrana.
Los lípidos forman una doble capa, en las que las moléculas están orientadas con los
grupos polares hacia el exterior de la célula y los grupos apolares hacia el interior,
mientras que las proteínas se disponen de una manera irregular y asimétrica entre ellos.
Estos componentes no están estructurados de una manera rígida y estable, sino que la
membrana presenta un elevado grado de fluidez debido a la movilidad de sus
componentes.
❧ Carbohidratos
La membrana está
constituida de una
doble capa de
fosfolípidos, combinada
con una variedad de proteínas en un arreglo de mosaico fluido. La superficie de las
membranas celulares son hidrofílicas y el interior es hidrofóbico. Las moléculas hidrofílicas
tienden a interactuar con el agua y una con otra, mientras que las moléculas hidrofóbicas
evitan la interacción con el agua y tienden a interactuar con otras moléculas hidrofóbicas.
Los lípidos forman una doble capa que es el esqueleto de la membrana, en ella se
encuentran incluidas las proteínas que interactúan entre sí y con lípidos. De su estructura
depende la fluidez.
La cantidad de lípidos y proteínas varía considerablemente entre las diferentes
membranas. Las membranas contienen varios tipos de lípidos, todos antipáticos, o sea
que contienen regiones hidrofóbicas e hidrofílicas. Entre los lípidos de membrana
tenemos:
❧ Fosfolípidos
❧ Glucolípidos
❧ Colesterol
Fosfolípidos
Son los más abundantes, forman el esqueleto de la bicapa de lípidos, poseen una cabeza
hidrofílica o polar y dos colas hidrofóbicas o apolares, es decir, son moléculas anfipáticas.
Entre ellos tenemos:
❧ Fosfogliceridos
❧ Fosfatidilcolina
❧ Fosfatidiletanolamina
❧ Fosfatidilserina
❧ Fosfatidilinositol
❧ Esfingolípidos
❧ Esfingomielina
Glucolípidos
Colesterol
El colesterol esta ausente en la mayor parte de células vegetales y en
todas las bacterias. En las membranas animales el colesterol brinda
estabilidad estructural ante los cambios de temperatura. El colesterol
aumenta la flexibilidad de la membrana, aumenta la permeabilidad. El
colesterol es una molécula antipática que disminuye la fluidez a
temperaturas por encima de la temperatura de trancisión y la aumenta
a temperaturas por debajo de la temperatura de trancisión.
Proteínas de Membrana
❧ Las proteínas periféricas, son mucho más hidrofílicas y por ello están localizadas en
la superficie de la membrana y están ancladas de forma no covalente a los grupos
polares de las cabezas de los fosfolípidos o a las partes hidrofílicas de otras
proteínas. Poseen funciones enzimáticas, de comunicación y estructurales.
❧ Finalmente las proteínas ancladas a lípidos son esencialmente hidrofílicas y por ello
residen en la superficie de la membrana, pero están unidas covalentemente a
moléculas de lípido que están incluidas en la bicapa.
Carbohidratos de Membrana
Fluidez de la membrana
La mayoría de los lípidos se distribuyen de forma desigual entre las dos monocapas. Esta
asimetría de la membrana incluye diferencias tanto en las clases de lípidos presentes
como en el grado de instauración de los ácidos grasos de las moléculas de fosfolípidos. La
membrana presenta fluidez, debido al movimiento de las moléculas de fosfolípidos.
La bicapa lipídica es fluida.
*Las membranas funcionan correctamente sólo en estado fluido.
-Temperatura de transición
-Transición de fase
La fluidez de la membrana depende principalmente de las clases de lípidos que contiene.
Hay dos propiedades especialmente importantes para determinar la fluidez:
Balsas Lipídicas