UNIVERSIDAD MICHOACANA DE

SAN NICOLAS DE HIDALGO

FACULTAD DE QUIMICO FARMACOBIOLOGIA
BIOLOGIA I

EQUIPO 1

ARACELI CHAVEZ RODRIGUEZ

MARIA ISABEL DIMAS CAHUE
MARICRUZ GASPAR RAMIREZ
SANDY AMPARO GONZALEZ LEN

TECNICAS DE LA
MICROSCOPIA PARA EL
ESTUDIO DE LA CELULA

MICROSCOPIA
Es el conjunto de tcnicas
y mtodos destinados a
hacer visible los objetos de
estudio que por su
pequeez estn fuera del
rango de resolucin del ojo
normal.
TECNICAS:
Tcnicas de preparacin y
manejo de los objetos de
estudio, tcnicas de salida,
procesamiento,
interpretacin y registro de
imgenes, etc.

INTRODUCCION
Las
clulas
son
las
unidades bsicas de los
seres vivos. La mayora
de ellas son de pequeo
tamao por lo que es
indispensable el uso de
instrumentos como los
microscopios para su
visualizacin.
En 1665 Robert Hooke
utilizando un microscopio
ptico simple, descubri
la clula.

INTRODUCCION
El ojo humano slo puede
discriminar
dos
puntos
separados por ms de 0,1 mm
100 micrmetros (mm). La
mayora de las clulas son
mucho ms pequeas y se
necesita
del
microscopio
ptico
cuyo
lmite
de
resolucin es de 0,2 mm. Para
estructuras ms pequeas,
que midan entre 0,4 y 200
nanmetros (nm), se requiere
del microscopio electrnico.

TECNICAS DE LA MICROSCOPIA PARA EL

ESTUDIO DE LA CELULA
MICROSCOPIA
OPTICA

MICROSCOPIA
ELECTRONICA.

Existen dos tipos bsicos

de microscopios: PTICOS
y ELECTRNICOS.

-Medidas utilizadas en microscopia

Unidad
SmboloEquivalencia en Utilizacin principal en
metro (m)
citologa
Centmetro cm
0,01 metro
Objetos macroscpicos a
simple vista. Huevos
grandes.
Milmetro

mm

0,001m

Objetos macroscpicos a
simple vista. Clulas muy
grandes.

Micrmetro

mm

10-6 m

Microscopia de luz
(ptica)Casi todas las clulas
y organelos grandes.

Nanmetro

nm

10-9 m

Microscopia
electrnica.Organelas
pequeas, macromolculas
grandes.

Angstrom

10-10 m

Microscopia electrnica.
Mtodos de difraccin de
rayos X. Molculas y tomos.

Comparacin entre un Microscopio ptico y

Electrnico

MICROSCOPIA OPTICA
Principio: fsica ptica
geomtrica.
Visualizacin de estructuras
biolgicas
(clulas) cristalinas mediante
un
instrumento ptico:
* Clulas sin teir
* Clulas teidas
* Microcristales

MICROSCOPIO OPTICO
Los microscopios pticos o
de luz pueden aumentar
efectivamente alrededor de
1000 a 1500 veces el
tamao de la muestra real;
si se incrementase el
aumento la imagen
proyectada sera borrosa. La
luz visible pasa a travs de
la muestra y de las lentes
de vidrio por donde la luz es
refractada (doblada) de
tal manera, que la imagen
del espcimen es
amplificada cuando se
proyecta en el ojo. Tamao
del espcimen deber ser
mayor a 0,2mm

MICROSCOPIA ELECTRONICA
La microscopa
electrnica es una
tcnica que requiere
instrumentos de alta
complejidad y personal
altamente
especializado.
Se utilizan la
microscopa electrnica
*de transmisin o
convencional y la

MICROSCOPIO
ELECTRONICO

TRANSMICI

El MET permite develar

la ultraestructura de las
clulas y de la matriz
extracelular. El haz de
electrones es desviado
por un campo
electromagntico (que
actuara como lente). En
este tipo de microscopia
se requiere que las
muestras tengan un
grosor de 100 nm.

El MEB til para estudios de

superficie del espcimen. El
haz de electrones explora la
superficie de la muestra la que
usualmente se recubre con una
pelcula de oro. El haz excita a
los electrones sobre la
superficie de la misma muestra
y estos electrones secundarios
se recolectan y enfocan sobre
una pantalla. Esto forma una
imagen de la topografa del
espcimen. Un importante
atributo del MEB es su gran
profundidad de campo, la cual
resulta en una imagen
tridimensional.

BARRIDO

Tcnicas para Preparar una Muestra en Microscopia ptica y Electrnica

Paso
OBTENCIN: Se hace

Microscopia ptica

Microscopia Electrnica

cuidadosamente con
instrumental adecuado.

Esto se conoce como

se destina a
Pueden usarse
coloracin o contrastado.
impedir la
fijadores qumicos
autodegradacin
(formol, etanol,
enzimtica
metanol o mezclas
(autlisis)de las
fijadoras).
clulas tratando de
evitar, en lo posible, la
alteracin de las
estructuras originales
y su autodigestin.
FIJACIN:

DESHIDRATACIN:
Pasajes sucesivos por
retira el agua de las
alcoholes de
piezas fijadas, para que
concentracin
luego
puedan
ser
creciente.
incluidas en un elemento
que es insolubles en
solventes acuosos.

ACLARACIN

Se realiza para
eliminar de la muestra
restos de alcohol y
toda sustancia
hidrosoluble. Se
impregna la muestra
con un solvente no
acuoso, orgnico y
soluble en parafina,
como xileno, tolueno o
benceno.

Baos con alcohol o

acetona.

No requiere

INCLUSIN

CORTE

Se incluye el material Se utilizan resinas

en parafina o
sintticas tipo epoxi
celoidina previamente que luego de secarse
calentada, la que al se transforman en un
solidificarse sirve de
material muy duro,
sostn de la muestra apto para que se le
y posibilita su corte.
efecten cortes
Se forma el taco.
extremadamente
delgados.
Es lo suficientemente Debe obtenerse un
delgado como para
corte de la muestra
ser atravesado por la
tal que el haz de
luz. Esto se logra
electrones logre
utilizando el
atravesarla. El
micrtomo con el que ultramicrtomo realiza
se realiza cortes
cortes de 20 a 100 nm
uniformes del tejido a
de espesor con
un dado espesor.
cuchillas de vidrio o
diamante.

COLORACIN

Las clulas y los tejidos

son coloreados para
lograr mayores contrastes
facilitando la observacin.
La coloracin de
hematoxilina-eosina es
una de las ms
comnmente utilizadas.
Tie el ncleo de azul y el
citoplasma de rosa.

MONTAJE
El corte se monta sobre Estas muestras se montan
El corte se coloca sobre
un portaobjetos. El
en pequeas grillas de
ciertas
clases
de
cubreobjetos puede
cobre
estructuras.
colocarse por encima para
proteger el preparado.
Este puede conservarse
durante dcadas si el
cubreobjetos se sella.
CONTRASTADO
La pieza se impregna en
acetato de uranilo, citrato
de plomo u otras
sustancias.

CONCLUSION
LOS TIPOS DE MICROSCOPIA TANTO
OPTICA COMO ELECTRONICA SE
UTILIZAN PARA EL ESTUDIO DE LA
CELULAS PERO DEPENDIENDO EL
TAMAO Y DE LO QUE SE REQUIERE
SABER DE ESTA SE ELIGE UNA DE
LAS DOS.