Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Métodos de Análisis
Diagrama de flujo Practica 7. Separación De Una Mezcla De Azul De Metileno Y Fluoresceína Usando Cromatografía Por Adsorción
Preparación de la fase estacionaria

Dejar hidratar Aforar a 3.0

alúmina mL

10 g
alúmina
H2O dest. a x30
ácida
30 mL

Empaquetamiento de la columna

Lana de vidrio
humedecido

Drenar a ¼
A ¾ partes parte Lentamente,
adicionar alúmina
H2O dest.
Introducir al fondo
de la columna

Regulación de la velocidad de flujo

Velocidad de elución: Fase móvil a 3 mm Evitar sequedad del

Fase móvil 16-20 gotas/minuto encima de alúmina lecho cromatográfico
a 3-4 cm

Rosales Ocampo Iván

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Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Métodos de Análisis
Diagrama de flujo Practica 7. Separación De Una Mezcla De Azul De Metileno Y Fluoresceína Usando Cromatografía Por Adsorción
Aplicación de la muestra

Llevar altura de fase

Mezcla de móvil a nivel inicial
colorantes 0.1 mL + 1.0 mL H2O dest.
Realizar dos lavados mas

No impregnar paredes
de la columna

Obtener fracciones hasta

que salga el colorante

Separar hasta obtener Cambiar fase móvil a:

eluatos incoloros K2HPO4 0.01 N pH 12

Obtención de los valores de absorbancia

Leer a 493 nm todas las Usar como blanco:

fracciones obtenidas K2HPO4 0.01 N pH 12

Leer a 668 nm todas las Usar como blanco:

fracciones obtenidas agua destilada

Rosales Ocampo Iván

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