LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I EQUIPO 3:

JUEVES 12:00 - 14:00 PM

NRC: 23075
¿ Se puede determinar la actividad de la enzima catalasa Bret Almazán Alisson
Bielma Santiago Juliana E.
PRIMAVERA 2021
LETICIA GEORGINA GARCÍA por la cantidad de oxígeno liberado? Carreto Moo Heber
Marín Díaz Yessica
ALBARRÁN

conceptos
Procedimiento Exclusivo para tubo 2
Enzima: Sitio activo:
Es una proteína globular que funciona como un catalizador biológico. Aumentan Es la agrupación ordenada espacialmente pero Cortar los tejidos en
hasta un millón de veces la velocidad de las reacciones que catalizan. estructuralmente asimétrica de un pequeño número de trozos delgados del
De cada tejido, separar
Características:
residuos aminoacídicos responsables de la actividad catalítica Competencia mismo tamaño y
de la enzima. una porción, ponerla en
1.- Son proteínas. Evalúa la actividad de la enzima ponerlos en papel
2.- Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las Cofactor:
Catalasa de diferentes fuentes
un tubo y cubrirla con
Es un ión metálico que ayuda a estabilizar la conformación absorbente anotando
reacciones celulares ocurren a una velocidad alrededor de un millón de veces
activa de las enzimas. Sirve como puente de unión entre el sitio biológicas, comparando el efecto agua destilada, introducir
más alta de lo que serían en ausencia de enzimas. el nombre
3.- La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa
activo y el sustrato. -son responsables directos de la catálisis y de la temperatura y de algunos en el agua hirviendo
puede ser metales como Cu2+, Zn2+, Mg2+ etc.
inhibidores como el Pb y el CN correspondiente
que cada conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un producto es
Coenzima: durante 5 minutos. Al
catalizada por una enzima determinada.
Son moléculas orgánicas que actúan como intermediarios No debe sacarla, colocarla sobre
4.- Quizá una de las más notables características es que las acciones de muchas
metabólicos y su unión con la enzima es no covalente. tocarse con papel absorbente
enzimas están reguladas de modo que pueden cambiar de un estado de baja
actividad a uno de alta actividad, dependiendo de las condiciones celulares en Enzima Catalasa:
Material y Reactivos los dedos,
Preparar una
las que se encuentren. serie de tubos
La catalasa es una enzima antioxidante usar las Marcar con el
12 tubos de ensaye Cianuro de sodio X de para cada a p
Criterios de clasificación: presente en la mayoría de los organismos
pinzas 1 a 5, segú e lp e:
1 gradilla al 5% n se tejido, según la En n t
rbe
El número de clasificación de las enzimas consta de 4 dígitos separados aerobios. Se clasifica como
Baño María 100ºC aprecie la so ue
por puntos. A . B . C . D oxidorreductasa porque cataliza la Nitrato de plomo
tabla y ab r q
El primer dígito es la CLASE. Indica el tipo de reacción descomposición del peróxido de hidrógeno Pinzas largas al 5% intensidad n dica ida y
i
El segundo dígito es la SUBCLASE. Indica el sustrato (H2O2) en agua y oxígeno. La reacción que Papel absorbente burbujeo e
de mezlarlos bien herv
á
El tercer dígito es la SUB SUB CLASE. Indica el cosustrato. cataliza es: 2 H2O2 -----------> 2 H2O + O2
2 goteros n cada est otar su
El cuarto dígito es el NÚMERO DE ORDEN. Características: Cuchillo
serie de tu
bos an bre
no m
La mayoría de estas enzimas catalasas son homotetrámeros
con un grupo hemo en cada subunidad.
El alumno:
Las gotas se
Algunas catalasas tienen subunidades pequeñas (masa
H2O2 agregan con
molecular ≈ 60 kDa) y otras grandes (masa molecular > 80
kDa). Papa gotero
Las catalasas pequeñas son menos resistentes a la Hígado de pollo Los reactivos se
desnaturalización, unen NADPH, tienen hemo b y se inhiben Manzana
e inactivan por sustrato.
ponen en el
*Todo crudo
En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra en orden de la tabla
el C-terminal que es semejante a la flavodoxina, son muy
NaCN y Pb(NO3)2
resistentes a la desnaturalización, tienen hemo d, presentan
enlaces covalentes cercanos al sitio activo. se manipulan en
Desnaturalización: Proceso o serie de procesos en el que la campana
se altera la disposición espacial de las cadenas Hojas de Seguridad
polipeptídicas dentro de la proteína.
Cianuro de sodio Nitrato de plomo Peróxido de Hidrogeno
Las proteínas se desnaturalizan por: Factores que afectan la actividad enzimática: Consejos de prudencia - prevención: Llevar guantes, gafas de Consejos de prudencia - prevención: Usar guantes y gafas de
Consejos de prudencia - prevención: Llevar guantes, gafas de protección,
Temperatura: Temperaturas mayores de 450C – 600C Concentración de enzima: Manteniendo la concentración de sustrato protección, traje completo si es posible y botas. seguridad.
respiradores aprobados por NIOSH si fuera posible con suministro de aire en
Otras medidas de protección: Hacer períodos de recuperación. Precauciones relativas al medio ambiente: Mantener el
pH: A valores de pH menores de 6 y mayores a 8. constante la velocidad de reacción es directamente proporcional a la concentraciones altas.
Precauciones relativas al medio ambiente: Mantener el producto producto alejado de los desagües y de las aguas superficiales
β Mercaptoetanol: Reduce los puentes disulfuro. Otras medidas de protección: Mantenga siempre los Kits de Antídoto de
concentración de la enzima alejado de los desagües y de las aguas superficiales y subterráneas. y subterráneas.
Cianuro a mano. No respire el polvo, el rocío ni el gas de cianuro. Los niveles de
Detergentes: Disminuyen el efecto hidrofóbico. Temperatura: La temperatura afecta a las reacciones químicas. Las exposición deben ser mantenidos bajo los límites Precauciones para una manipulación segura: Prever una ventilación Precauciones para una manipulación segura: Prever una
Agitación vigorosa: Ruptura de Fuerzas de Van Der suficiente. ventilación suficiente.
reacciones enzimáticas no son la excepción. Pero debido a que las enzimas Precauciones relativas al medio ambiente: Mantener el producto alejado de los
Recomendaciones sobre medidas generales de higiene en el trabajo: Recomendaciones sobre medidas generales de higiene en el
Waals y puentes de hidrógeno. desagües y de las aguas superficiales y subterráneas.
son proteínas se presenta una desnaturalización térmica. Lavar las manos antes de las pausas y al fin del trabajo. Manténgase trabajo: Lavar las manos antes de las pausas y al fin del
Cloruro de Guanidina: (4 ó 6 M) o Urea (6 u 8 M): Rompen Precauciones para una manipulación segura: Prever una ventilación suficiente.
pH: El pH óptimo de una enzima no es necesariamente idéntico al pH de su lejos de alimentos, bebidas y piensos. trabajo. Manténgase lejos de alimentos, bebidas y piensos.
Recomendaciones sobre medidas generales de higiene en el trabajo: Lavar las
puentes de hidrógeno propios de la molécula. Condiciones de almacenamiento seguro, incluidas posibles Condiciones de almacenamiento seguro, incluidas posibles
entorno intracelular normal. manos antes de las pausas y al fin del trabajo. Manténgase lejos de alimentos,
incompatibilidades: Almacenar en un lugar fresca y bien ventilada, incompatibilidades: Almacenar en un lugar fresco, bien
Inhibición bebidas y piensos.
Concentración de sustrato: La velocidad máxima se presenta debido a la alejado de los materiales combustibles y materiales orgánicos. ventilado, y seco. Alejarlo de fuentes de calor
Condiciones de almacenamiento seguro, incluidas posibles incompatibilidades:
enzimática: ocupación del sitio activo de todas las enzimas presentes , es decir se han Es un agente oxidante fuerte, reacciona con peróxido de hidrogeno, Primeros auxilios:
Almacene en contenedores bien etiquetados en áreas secas, bien ventiladas y
agentes reductores, carbón pulverizado, hipofosfito de plomo, Notas generales: Quitar las prendas contaminadas.
Otra forma de hacer que saturado los sitios activos. seguras. Mantenga los contenedores cerrados y secos. No almacene con ácidos
tiocianato de amonio, acetato de potasio y metales pulverizados. En caso de inhalación: Proporcionar aire fresco. Si aparece
la actividad de una o sales ácidas contenedores con agua o álcalis débiles o agentes oxidantes. No
Efectores: Las enzimas alostéricas pueden tener efectores que activarán (+) Primeros auxilios: malestar o en caso de duda consultar a un médico.
manipule ni almacene comida, bebidas ni tabaco en las áreas con cianuro o
enzima se pierda o o inhibirán(-) la actividad enzimática. Notas generales: Quitar las prendas contaminadas. En caso de contacto con la piel: Corrosivo a concentraciones
almacene cerca de combustibles ni inflamables ya que el consecuente
disminuya es a través En caso de inhalación: Proporcionar aire fresco. Si aparece malestar mayores a 10%. Aclararse la piel con agua/ducharse. En caso
procedimiento para apagar incendios con agua puede llevar a fugas de cianuro.
del uso de ¿Qué tipos de inhibidores son el Plomo y el Primeros auxilios: o en caso de duda consultar a un médico. de irritaciones cutáneas, consultar a un dermatólogo.
Cianuro? En caso de contacto con la piel: Aclararse la piel con agua/ducharse. En caso de contacto con los ojos: Mantener separados los
INHIBIDORES. Notas generales: Quitar las prendas contaminadas.
En caso de irritaciones cutáneas, consultar a un dermatólogo. párpados y enjuagar con abundante agua limpia y fresca por
Plomo: El plomo es un ejemplo de inhibidor no En caso de inhalación: Si hay pérdida de conciencia, se debe administrar
En caso de contacto con los ojos: Mantener separados los párpados lo menos durante 15 minutos.
oxígeno y nitrito de amilo. Traslade al paciente a una atmosfera no
competitivo. Forma enlaces covalente con los En caso de ingestión: Enjuáguese la boca con agua (solamente
contaminada, mantenga al paciente abrigado y tranquilo y enjuagar con abundante agua limpia y fresca por lo menos
grupos sulfhídrilos de la cisteína en las durante 10 minutos. si la persona está consciente). No inducir el vomito.
En caso de contacto con la piel: Si el trabajador esta inconsciente, se debe
proteínas. Reacciona con la ferroquelatasa, En caso de irritación ocular: consultar al oculista. Llamar a un médico.
administrar oxígeno y nitrilo de amilo. Lave inmediatamente con grandes
En caso de ingestión: Enjuáguese la boca con agua (solamente si la Principales síntomas y efectos, agudos y retardados:
enzima que incorpora hierro a la síntesis del cantidades de agua durante por lo menos 5 minutos después del contacto o
persona está consciente). Irritación de nariz y garganta, dolor de cabeza, dolor
sospecha de contacto, saque completamente toda la ropa contaminada.
grupo hemo de la hemoglobina y otras muscular y articular, cólicos, calambres musculares, daño
(Incluyendo los zapatos y botas). Lave con agua por lo menos 5 minutos para Llamar a un médico.
hemoproteínas. sacar el cianuro de la piel del paciente. Principales síntomas y efectos, agudos y retardados: Irritación de renal y cerebral, anemia.
nariz y garganta, dolor de cabeza, dolor muscular y articular, Es carcinógeno y teratógeno.
En caso de contacto con los ojos: Lave inmediatamente los ojos con grande
cólicos, calambres musculares, daño renal y cerebral, anemia. Consultar a un médico.
Cianuro: Inhibidor enzimático no específico; cantidades de agua durante por lo menos 5 minutos manteniendo los ojos
abiertos. No trate de neutralizar con ácidos o álcalis. El contacto con los ojos va Es carcinógeno y teratógeno.
inhibe varias enzimas, tales la
a requerir una evaluación en más profundidad y posiblemente un tratamiento. Consultar a un médico.
succinildeshidrogenasa, la Continúe lavando los ojos durante el traslado al hospital.
superóxidodismutasa, la anhidrasa carbónica, En caso de ingestión: Si hay pérdida de conciencia, el oxígeno y el nitrilo de
la citocromooxidasa y otras, bloqueando amilo deberán administrarse. Si el paciente está inconsciente, suministre de
irreversiblemente la producción de ATP e inmediato un preparado de agua con carbón. No haga tragar nada por la boca.
EN TODOS LOS CASOS LLAMAR UN MEDICO.
induciendo hipoxia celular.

FUNDAMENTOS CUESTIONARIO
1. Reacción que cataliza la enzima catalsa
Cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno (H2O2) en oxígeno y
1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática? RESULTADOS
agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo. La temperatura afecta a las
reacciones químicas. Las reacciones
2H2O2 → 2H20 + O2 enzimáticas no son la excepción.
La reacción química se produce en dos etapas: La catalasa es oxidada por Pero debido a que las enzimas son
el peróxido siendo el resultado una molécula de agua y el compuesto I, proteínas se presenta una
intermediario de la reacción global y formado por un grupo ferroxilo y un desnaturalización térmica
radical catiónico de porfirina.
Manteniendo [S], [E], pH =
H2O2 + Fe(III)- E → H2O + O=Fe(IV)-E constantes
CONCLUSIÓN
La otra molécula de peróxido restante reduce al complejo I, es decir
devuelve a la catalasa a su forma original. De esta reducción se origina una
molécula de agua y otra de oxígeno. El efecto de un
inhibidor competitivo
H2O2 + O=Fe(IV)-E → H2O + Fe(III)-E + O2 sobre la actividad
puede invertirse 2. ¿Qué es el factor Q-10?
2. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad de la
aumentando la Es el método utilizado más corrientemente para cuantificar el efecto de la temperatura sobre
catalasa? concentración de cualquier proceso biológico (Rome et al., 1992). Se define como la razón obtenida de un parámetro
La temperatura ejerce un doble efecto, sobre la conformación de la enzima
sustrato. A [S] cuando este se determina a dos temperaturas que difieren en 10ºC. Los coeficientes Q-10 pueden ser
y sobre la propia reacción. La velocidad de la reacción se incrementa al
aumentar la temperatura dentro de un determinado rango (20°-48°),
elevadas, todos los calculados aunque no exista una diferencia exacta de 10ºC entre las dos temperaturas, aplicando la DISCUSIÓN
sitios activos están corrección de van’t Hoff (Hill y Wyse, 1992):
alcanzando un valor máximo a la denominada temperatura óptima. A
llenos de sustrato y
valores superiores la actividad disminuye debido a que la enzima, como
la velocidad de
cualquier otra proteína, sufre procesos de desnaturalización y, por lo tanto,
reacción alcanza el
de inactivación.
valor que se observa
3. ¿Qué tipo de inhibidores son el CN y el Pb y a que parte de la
sin un inhibidor El coeficiente de temperatura refleja la sensibilidad térmica del parámetro K. Cuando el valor de Q10
catalasa se unen?
CN La adición de más se mantiene constante en un intervalo amplio de temperaturas significa que
La acción de la catalasa es por vía de la reacción directa del ión Fe(III) con el sustrato a la
oxígeno, para liberar el peróxido y formar agua. La elevada constante de reacción da lugar 3. Escribir el complejo que se forma con el Fe y el CN- .
formación de complejos de hierro trivalente y divalente con aniones a un aumento del
cianuro es debida al fuerte enlace sinérgico originado por la suma de dos grado de
El hierro y el cianuro , el hierro forma parte de la estructura química de la enzima catalasa y el
cianuro se une con el hierro que este forma parte de la enzima de la catalasa.
BIBLIOGRAFÍA
efectos: inhibición. A [S]
Donación de e-: por parte del ligando en enlace s. elevadas, todos
Retrodonación de e-: por parte del metal en enlace p. Ya que el cianuro los sitios activos
se une por enlaces covalentes al grupo funcional de la enzima, su están llenos de
inhibición es irreversible. sustrato y
Plomo consecuentement Aguilar, P. Avila, R. Davila, R. Flores, G.
El plomo ejerce sus efectos a través de su unión con grupos sulfhidrilos de e el inhibidor Garcia, L. Gonzalez, F. Lazcano, M. Mena, A.
proteínas y en las enzimas produce una inhibición de enzimas asociadas a tiene más Morales, L. Rode, A. Perez, I. Ramos, E. Vera,
membranas, La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhidrilo complejos a los
O. Ayudas didácticas Bioquímica I (2018)
libres de las cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente, por lo que puede unirse.
Departamento Bioquímica-Alimentos