Está en la página 1de 1

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas


Laboratorio de Bioquímica II EQUIPO II

Introducción Procedimiento
Las células de la gran mayoría de los organismos vivos llevan a cabo un conjunto de
reacciones de óxido-reducción que les permiten obtener una gran cantidad de energía a 3. Traspasar la masa
través de la degradación a tres tubos de 5.Agregar al tubo 3
1.Pesar 1 gr. de
de moléculas orgánicas, dicha energía es almacenada en moléculas denominadas ATP. ensaye. Marcar cada sólo 2 gotas de azul
Reactivos: hígado de pollo
tubo con el número de metileno.
Es decir, llevan acabo una respiración celular. -Ác. Succínico al 3% o rata.
La respiración celular se divide fundamentalmente en cuatro etapas: glucólisis, oxidación 1,2 y 3.
neutralizado con NaOH 2. Molerlo en 6. Incubar los tubos
del piruvato, ciclo de Krebs y la fosforilación oxidativa. Material:
al 10% hasta 7.4 mortero con 3 ó 4ml 4.Agregar al tubo 2, 10 min. en un baño
El ciclo de Krebs es una ruta metabólica anfibólica, ya que participa tanto en procesos -2 tubos de ensaye. 1 ml de Fenol al maría a 50°C.
-Fenol al 90% de ác. succínico
catabólicos como anabólicos. La última fase del ciclo(la regeneración del oxalacetato) -1 pipeta de 5 ml. 90% y 2 gotas de Retirarlos y observar
-Azul de metileno al 0.1% hasta obtener una
inicia con el sustrato succinato que se oxida a fumarato por la acción de nuestra enzima -Un baño maría a 50° C. masa. azul de metileno. los cambios.
-Aceite mineral
de interés, la succinato deshidrogenasa. -Cinta masking.
-Hígado fresco (pollo)
La enzima succinato deshidrogenasa tiene como función en la reorganización de
moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración del oxalacetato. Para que
eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un Resultados
carbonilo.
La enzima succinato deshidrogenasa es una oxidoreductasa que cataliza la oxidación del
succinato para formar fumarato sien-do la coenzima el FAD. Esta enzima se localiza en la
membrana mitocondrial interna de las células eucariotas.

Conceptos
Enzimas.- Proteínas globulares especializadas en la catálisis de reacciones biológicas,
presentan residuos estructurales, tienen un lugar donde interactúan con el sustrato
(reactivo) denominado sitio activo y en este se encuentran los residuos catalíticos. La
función de una enzima, básicamente, es incrementar la velocidad de una reacción. Discusión de resultados
Coenzima.- Molécula orgánica pequeña necesaria para la actividad de una enzima.
Oxidoreductasas.- Enzimas que catalizan reacciones de oxidación-reducción, que en el Para poder llevar acabo el análisis de la acción enzimática del hígado de pollo primero procedimos a obtener
medio biológico tienen lugar a través de la transferencia de electrones o átomos de nuestra enzima mediante la trituración de 1g de este con el acido succínico. Una vez obtenida nuestra enzima
hidrógeno de un dador (reductor) a un aceptor (oxidante). Algunas veces la reacción se proporciono esta a los tubos de ensaye de manera equitativa para posteriormente agregarle los reactivos
consiste en la incorporación de átomos de Oxígeno en el substrato. correspondientes.
Deshidrogenasas.- Oxidoreductasas que realizan la transferencia de electrones a través Podemos observar claramente que en el tubo 1 no hubo cambio de coloración ya que no hubo factor que
de átomos de hidrogeno. influyera en esta, por lo tanto no hubo oxidación y no cambio de color, es decir fue nuestro tubo patron. En el
Ciclo de Krebs.- Ciclo metabólico de importancia fundamental en todas las células que segundo tubo después del baño maría se observa del mismo color que tenía ya que no se llevó acabo la
utilizan oxígeno durante el proceso de respiración celular, conocido también como ciclo de actividad enzimática, puesto que al agregar fenol se ha desnaturalizo la enzima, inhibiendo su función
los ácidos tricarboxílicos o ciclo del ácido cítrico. Anillo de conjunción de las rutas biológica, causando que las 2 gotas agregadas de azul de metileno no sufran reducción y por lo tanto no
metabólicas responsables de la degradación y desasimilación de los carbohidratos, las cambie su color. En el tercer tubo se observó un cambio de color , lo cual nos indica que la enzima Succinato
grasas y las proteínas, que forma muchos precursores para rutas de síntesis. deshidrogenasa cataliza la oxidación estéreo específica del enlace - CH2 –CH2 – del Succinato a doble
Azul de metileno.- Colorante orgánico cuyo nombre científico es cloruro de metiltionina. enlace trans, dando el fumarato, con la ayuda de la coenzima FAD. Al adicionar el azul de metileno, este
actúa como aceptador de electrones, el H2 cedido por el Succinato puede ser transferido del FADH2 al azul de
Fundamentos metileno quedando entonces FAD oxidado y azul de metileno reducido el cual es incoloro, en este caso el
color no fue incoloro ya que a causa del hígado se tornó de color café rojizo. El aceite mineral nos ayudo a
La enzima succinato deshidrogenasa cataliza la oxidación estéreo específica del enlace - CH2 –CH2 – prevenir otras reacciones (como la oxidación temprana del FADH2) ya que aisló nuestra reacción del medio.
del succinato a doble enlace trans, dando el fumarato, de manera reversible esta se asociada a un
grupo prostético flavínico (FAD) mediante el cual los equivalentes de reducción del succinato son
transferidos a la ubiquinona, componente de la cadena de transporte de electrones .
Conclusión
La actividad de la enzima succinato deshidrogenasa se logró determinar por el cambio de color en el azul
de metileno.

Una vez formado el fumarato + FADH2, al


adicionar el azul de metileno ( color azul) este
Cuestionario
actúa como aceptador de electrones, el H2 ¿Cuales son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y reducido?
cedido por el succinato puede ser transferido del El azul de metileno en su forma oxidada presenta una coloración azul intensa mientras
FADH2 al azul de metileno quedando entonces que en su forma reducida se torna incoloro.
FAD oxidado y azul de metileno reducido el cual
es incoloro. ¿Cual es la función del fenol en la reacción?
Bibliografía: Ayuda a inhibir la actividad de las enzimas por desnaturalización de las mismas.
• Clark J. M. Jr 1964. Experimental Biochemistry. W. H. Freeman and
Company E.U.A. ¿En que vías metabólicas esta involucrada la enzima succinato deshidrogenasa?
Objetivos • Lehninger, PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA, quinta edición, 2009,
editorial Omega.
Tiene su función en el ciclo de Krebs así como en la cadena transportadora de electrones.
-Observar la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa mediante una reacción colorimétrica. • HORTON, MORAN, Bioquímica 1ª edición México Prentice Hall
-Relacionar la presencia de esta enzima con el ciclo de Krebs y el transporte de electrones. Hispanoamericana, S.A
• Voet, Pratt. Fundamentos de bioquímica 2°edición. Editorial
Panamericana.