UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS. PROGRAMA DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I. LABORATORIO PRÁCTICA No. 12
DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO (VITAMINA C)

Mastrodoménico Betancourt Cesar Camilo (201811756); Mora Najar Gabriel Leonardo

(201722825); Rodríguez Hernández Sebastián Felipe (201722513); Rodriguez Patarroyo
Johan Sebastian (201811814).

1. PRELABORATORIO

a. ¿Qué se entiende por vitaminas?

Las vitaminas corresponden a sustancias orgánicas, estas son micronutrientes esenciales

para el correcto funcionamiento del metabolismo de un organismo en particular. Las
vitaminas no se pueden sintetizar en cantidades suficientes para satisfacer las necesidades
corporales, debido a esto deben ser obtenidas a través de la ingesta. Asimismo, se señala
que en el cuerpo cumplen funciones de naturaleza catalítica o reguladora, facilitando o
controlando reacciones químicas vitales en las células del cuerpo, y al no poseerse
suficiente cantidad de una vitamina en el cuerpo, es probable desarrollar una enfermedad
por deficiencia específica [1][2].

b. ¿Cómo se clasifican las vitaminas?, cite ejemplos.

Tabla 1: Vitaminas [3].

Tipo de Vitamina Especificación Ejemplos
Estas son almacenadas en el Vitamina A.
Vitaminas Liposolubles tejido graso del cuerpo, siendo Vitamina D.
en sí absorbidas más Vitamina E.
fácilmente por el cuerpo en Vitamina K.
presencia de grasas en la
dieta.

Estas no son almacenadas en Ácido Ascórbico.

Vitaminas Hidrosolubles el cuerpo y se tiene que las Ácido Pantoténico.
sobrantes salen del cuerpo a Biotina.
través de la orina, Folacina.
considerándose también que Niacina.
deben ser ingeridas de forma Riboflavina.
regular para evitar el mal Tiamina.
funcionamiento de muchos Vitamina B12.
sistemas en el cuerpo. Vitamina B6.

c. ¿Qué enfermedades causa en el organismo humano la carencia de vitamina C?

1
En términos generales, se indica que una deficiencia significativa de Vitamina C genera una
enfermedad llamada Escorbuto, esta causa “anemia, sangrado de las encías, hematomas y
mala cicatrización de heridas”. De igual forma se tiene en menores niveles la falta de esta
en el cuerpo afecta la formación de colágeno, lo que provoca que “varios tejidos del cuerpo
comiencen a descomponerse, y la salud y la reparación de su cuerpo se vean afectadas”.
Aquí, es señalado que la deficiencia crónica es la que produce escorbuto y que algunos de
los síntomas de la deficiencia en sí suelen ser [4]:

 Cansancio y debilidad.  Pérdida de peso.

 Dolores musculares y articulares.  Piel seca.
 Hematomas en la piel.  Problemas para combatir
 Hemorragias nasales infecciones.
 Hinchazón y decoloración de las  Sangrado en las articulaciones.
encías.  Sangrado repentino e inesperado
 Mala cicatrización de heridas. de las encías.
 Pérdida de dientes.

d. ¿Qué enfermedades causa en el organismo humano el exceso de vitamina C?

Acorde a lo obtenido de las fuentes de investigación, se indica que el exceso de esta

vitamina puede ocasionar Acidez, Calambres abdominales, Diarrea, Dolor de cabeza, Dolor
de estómago, Insomnio, Náusea y Vómitos, siendo el exceso en niños un factor
determinante en el desarrollo de hiperoxaluria, enfermedad en la cual se acumula oxalato
cálcico y se puede dañar la función renal, hepática, generando también hipocalcemia la cual
producir arritmias cardíacas graves [5][6].

2. INTRODUCCIÓN

En la práctica puesta para su realización, se dispondrá de reactivos para el reconocimiento

de la vitamina C, presente en alimentos como: Limón, Naranja y alimentos cítricos, para
esto se dispondrá del colorante 2,6 diclorofenol-indofenol, el cual nos dará la evidencia de
que se presenta la vitamina en la sustancio y/o alimento a analizar, para así poder elucidar
la presencia en los mismos y mediante la colorimetría la cantidad de la misma, si presenta o
no un alto contenido de la vitamina puesta en análisis.

Se dispondrá de dos métodos, en donde uno nos presentará la muestra coloreada y muestra
incolora, para el reconocimiento del ácido ascórbico mediante una reacción tipo Redox,
para así observar la perdida de uno de los hidrógenos del grupo hidroxilo del colorante.

3. REACTIVOS
Tabla 2: Reactivos.
Características Fisicoquímicas Frases R y S
Ácido acético Frases R:
Punto de ebullición: 116 - 118 °C R10: Inflamable.
2
(1013 hPa)
Densidad: 1.05 g/cm3 (20 °C)
Límite de explosión: 4 - 19.9 %(V)
Punto de inflamabilidad: 40 °C
Temperatura de ignición: 485 °C
Punto de fusión: 17 °C
Valor de pH: 2.5 (50 g/l, H₂O, 20 R35: Provoca quemaduras graves.
°C) Frases S:
Presión de vapor: 15.4 hPa (20 °C) S23c: No respirar los vapores.
Viscosidad cinemática: 1.17 S26: En caso de contacto con los ojos, lávense
mm2/s (20 °C) inmediata y abundantemente con agua y acúdase
Solubilidad: 602.9 g/l soluble a un médico.
Cloroformo Frases R:
R37: Irritante para las vías respiratorias.
R38: Irritante para la piel.
R41: Riesgo de graves daños oculares.
Estado físico: Líquido
Frases S:
Color: incoloro
S2: Mantener fuera del alcance de los niños.
Punto de fusión: -63.5 °C
S13: Mantener lejos de alimentos, y bebidas
Punto de ebullición: 61.2 °C
S25: Evita el contacto con los ojos
Densidad relativa(agua=1):
S26: En el caso de contacto con los ojos lavar con
1.483g/cm3
abundante agua y solicitar ayuda médica.
S37: Usar guantes adecuados.
S39: Usar protección para ojos y cara
2,6 diclorofenol-indofenol
Frases R:
Estado físico: solido
R No presenta riesgo aparente.
Color: verde oscuro
Frases S:
Olor: inodoro
S 39: Úsese protección para los ojos / la cara
Propiedades explosivas: No
S45: En caso de accidente o malestar, acúdase
presenta
inmediatamente al médico (si es posible,
Densidad aparante: -320-420
muéstresele la etiqueta).
kg/m3
Ácido ascórbico
Estado físico: Solido polvo Frases R:
cristalino. 
R 36: Irrita los ojos
Color: blanco
Olor: Inodoro
Frases S:
pH: -2.4 (agua 50g/mL a 20°C)
S 24/25: Evítese el contacto con la piel y ojos
Punto de fusión: 190-
192°C (descomposición lenta)
Densidad: 1.65g/cm3

3
 4. PROCEDIMIENTO

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO
ASCÓRBICO

Asegurarse de tener los cálculos necesarios Verificar y/o limpiar los implementos de
para la práctica, si se requiere. laboratorio a utilizar.

Colocar 3mL de muestra en un vaso y 1. Para muestras incoloras

agregar 2mL de ácido acético al 5%.

Titular con una solución de 2,6-diclorofenol- Tomar 3mL de agua como blanco, y
indofenol. repita los pasos anteriores.

Anotar y comentar sobre los Titular la solución patrón de ácido ascórbico

resultados obtenidos. siguiendo la misma mecánica.

2. Para muestras coloreadas Tomar las muestras como en el paso anterior y

agregar 1mL de ácido acético.

Titular con el 2,6-diclorofenol-indofenol. Adicionar 2mL de cloroformo.

Realizar los respectivos cálculos,

observaciones y análisis. Fin.

Gráfico 1: Diagrama de flujo.

5. MARCO TEÓRCO

La vitamina C se necesita para el crecimiento y reparación de tejidos en todas las partes del
cuerpo. Se utiliza para: Formar una proteína importante utilizada para producir la piel, los
tendones, los ligamentos y los vasos sanguíneos. Sanar heridas y formar tejido.
Titulación oxido-reducción
El ácido ascórbico (vitamina C) puede ser determinado químicamente en el laboratorio
gracias a su fuerte capacidad reductora. La cuantificación de vitamina C en el alimento es
dada por la cantidad de ácido L- dehidroascórbico. El método volumétrico recomendado
por la AOAC es la titulación con el indicador redox 2,6-diclorofenol indofenol. El análisis
implica la oxidación del ácido ascórbico con un colorante redox, como el 2,6-diclorofenol

4
indofenol (azul en medio básico y rojo en medio ácido), el cual se reduce en presencia de
un medio ácido, a un compuesto incoloro [16].

Reacción de oxidación del ácido ascórbico

El ácido ascórbico reduce el tinte indicador a una disolución incolora. El punto final de la
valoración con este tinte, de una muestra que contenga ácido ascórbico, el exceso de tinte
no reducido confiere una coloración rosada a la disolución acida. La concentración de tinte
valorante se puede determinar utilizando una disolución patrón de ácido ascórbico. A
continuación, se puede valorar con el tinte las muestras de alimentos en disolución, y
utilizar el volumen consumido en la valoración para calcular el contenido de ácido
ascórbico [14].
Método de Mohr
El método de Mohr, el cual consiste en un proceso de doble precipitación en donde se
presenta la formación de un primer sólido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el
punto estequiometrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie que señala el
punto final de la valoración, este en un método espectrofotométrico, es decir que se basa en
la absorción de radiación ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual
se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energía en forma de
calor.
En la determinación del ácido ascórbico el método funciona de la siguiente manera el ácido
ascórbico presenta un máximo de absorción a 260nm, en este se utiliza como reactivo
principal la 2-nitroanilina, y cuyo máximo de absorción se lee a 540 nm, para la
determinación de la vitamina c total se precisa la conversión del ácido ascórbico en
deshidro-ascorbico. Es relativamente específico y aceptable [15].

5. S

6. RESULTADOS

6.1. Para Muestras Incoloras (muestra orina, limón, naranja o vitamina C):

Tabla 3: Resultados.
Muestras Volumen titulante
Blanco 0,2 mL
Limón 11 mL

5
 Naranja 12,2 mL
Orina 1,2 mL
Patrón 0,4 mL
Tableta de Vitamina C 13 mL

a. Calcular la concentración de vitamina C en la muestra y realizar una tabla de

resultados.

Considerando:

B1 = Volumen en mL de 2,6-diclorofenol-indofenol utilizado para titular blanco.

P = Volumen en mL de 2,6-diclorofenol-indofenol utilizado para titular patrón.
V1 = Volumen en mL de 2,6-diclorofenol-indofenol utilizado para titular muestra.

Se implementa la ecuación expresada en la guía de laboratorio sin la aplicación del factor

de dilución ya que no se realizó ninguna.

mg V 1−B1
Vitamina C ( 100mL
= )(
P−B1 )
∗2∗factor de dilución

Ecuación 1: Cálculo de la concentración de Vitamina C.

Por lo que:

Tabla 4: Resultados.
Muestras Volumen titulante C1
Limón 11 mL 108
Naranja 12,2 mL 120
Orina 1,2 mL 10
Tableta de Vitamina C 13 mL 128

Siendo:

C1= Concentración de la vitamina en la muestra, expresada en mg/100mL.

b. ¿Qué reacción experimento el ácido ascórbico con el colorante redox (2,6-

diclorofenolindofenol)? Escriba la ecuación correspondiente.

C 6 H 8 O 6(ac) +C 12 H 7 N Cl 2 O 2(ac ) →C 6 H 6 O 6(ac ) +C 12 H 9 N Cl 2 O 2(ac )

Ecuación 2: Cálculo de la concentración de Vitamina C.

6
Tomando en cuenta que el 2,6-diclorofenolindofenol es un colorante redox, se presenta la
Ecuación 2, aquí es descrita la reducción que sufre el 2,6-diclorofenolindofenol, la cual es
evidenciada por su cambio de coloración de un tono azulado a un líquido incoloro [7][8][9].

c. ¿Con una dieta normal, es necesario adicionar complementos de vitamina C?

¿Cuál es el contenido recomendado de vitamina C en un adulto y en un niño?

 Contenido recomendado de vitamina C para Adultos

En general, las fuentes de investigación sugieren que en la mayoría de las personas una
dieta saludable proporciona una cantidad adecuada de vitamina C. Esto refiriendo a una
alimentación convencional proporciona suficiente cantidad de vitamina C para el día, esta
ha de incluir la ingesta de por ejemplo: una naranja, una taza de fresas, pimiento rojo,
brócoli, etc (los ejemplos serán presentados en la siguiente sección). Refiriendo ya a los
niveles/cantidades recomendables, diversas fuentes expresan que “la cantidad mínima de
esta vitamina diaria para mujeres y varones adultos es de 60mg”, sin embargo, también se
encuentra que para los adultos la cantidad diaria recomendada de Vitamina C puede ser de
65-90 mg/día (120mg/día para mujeres en embarazo o lactancia), siendo el límite superior
es de 2000 mg/día [6][11], al sobrepasar esta cantidad se presentan complicaciones como las
comentadas en la sección de Prelaboratorio.

De igual forma e indicado que fumadores crónicos necesitan de alrededor de 35mg/día más
de Vitamina C en contraste con no fumadores [10].

 Contenido recomendado de vitamina C para Niños:

En cuanto a niños, son tomados en cuenta variados valores recomendables de contenido de

vitamina, en función de la edad del niño:

Tabla 5: Cantidad Vitamina C recomendada para niños [10].

Edad Cantidad Vitamina C recomendada
0-6 meses 40mg/día (Ingesta adecuada)
7-12 meses 50mg/día (Ingesta adecuada)
1-3 años 15mg/día
4-8 años 25mg/día
9-13años 45mg/día

A partir de los catorce años de edad, la ingesta recomendada ya corresponde a la que un

adulto debería ingerir.

d. Cite por lo menos 10 alimentos ricos en Vitamina C, de nuestro país.

Algunos alimentos reportados con considerables niveles de Vitamina C , corresponde

[12][13]
a:
 Brócoli  Espinaca

7
  Frambuesas  Papa
 Fresas  Papaya
 Guayabas  Perejil
 Kiwi  Pimientos Amarillos Dulces
 Limones  Pimientos rojos
 Melón  Sandía
 Naranjas  Tomillo

7. CONCLUSIONES

 Se observó una relación directamente proporcional entre la concentración de

vitamina C en las muestras y la cantidad de agente titulante gastado en cada
experimento.

 La muestra con mayor contenido de vitamina C fueron las tabletas, esto se explica a
que, en estas, la vitamina C se encuentra altamente concentrada.

 La muestra con menor contenido de vitamina C fue la muestra de orina, este hecho
podría ser explicado en base a que gran parte de la vitamina consumida por las
personas es utilizada activamente en el organismo por lo que éste no puede desechar
esta vitamina en grandes proporciones.

8. REFERENCIAS