UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN

“EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DE KALANCHOE DAIGREMONTIANA EN LA

DIABETES MELLITUS TIPO II”

AUTOR:

LUIS ALBERTO MARTÍNEZ RODRÍGUEZ

5° SEMESTRE

CATEDRÁTICO:

MARGARITA VIRGINIA SAAVEDRA VELEZ

Friday, 3 de September de 2021

Índice
Resumen:..................................................................................................................................................3

Introducción:............................................................................................................................................3

Antecedentes...........................................................................................................................................4

Planteamiento del problema:................................................................................................................7

Hipótesis:..................................................................................................................................................7

Objetivos generales:...............................................................................................................................7

Objetivos específicos:............................................................................................................................7

Metodología:.............................................................................................................................................7

Diagrama de trabajo...............................................................................................................................9

Cronograma de trabajo........................................................................................................................10

Bibliografía:............................................................................................................................................10

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Resumen:
La diabetes mellitus tipo II es una de las enfermedades crónicas de mayor prevalencia
en el mundo, siendo la segunda causa de muerte en el país. Esta enfermedad se
caracteriza por el aumento anormal de los niveles de glucosa en sangre, debido a una
resistencia a la insulina. Es por ello que existen diversos métodos para tratarla, siendo
el más común en la población, la medicina herbolaria. Por lo tanto, es de gran
importancia evaluar los efectos hipoglucemiantes de algunas plantas medicinales. El
objetivo de esta investigación es demostrar el efecto hipoglucemiante de la planta
Kalanchoe daigremontiana mediante el uso de modelos diabéticos inducidos
químicamente en ratas de la cepa wistar, comparando su efecto contra un fármaco
eficaz y económico para este tratamiento.

Introducción:
El empleo de plantas medicinales está aumentando de forma exponencial tanto para
mejorar el estado de salud general como para tratar enfermedades crónicas. En el
contexto de este crecimiento, existe una gran incertidumbre sobre la eficacia y
seguridad de dichas plantas medicinales. En nuestro país, las plantas medicinales han
sido empleadas por varias generaciones para tratar diversos malestares, como, por
ejemplo, malestar gastrointestinal y dolores musculares. Actualmente todavía es muy
notorio el uso frecuente de estas plantas medicinales, ya que una gran parte de la
población prefieren recurrir a métodos fáciles y baratos, que costosos y complejos
(Gallego Muñoz, 2016).

Sin embargo, una de las principales enfermedades que afecta a una gran parte del
país, teniendo prevalencia cerca del 70 % (Encuesta Nacional de Salud y Nutrición,
2012) es la Diabetes Mellitus, que se caracteriza por ser un grupo de trastornos
metabólicos caracterizados por la hiperglucemia debida a defectos en la secreción o
acción de la insulina. A pesar de que existen tratamientos farmacológicos eficaces para
reducir los niveles de glucosa en sangre, se acompañan de efectos secundarios. Por lo
que es necesario buscar alternativas terapéuticas más seguras y eficaces. Es por ello
que el objetivo de este proyecto es evaluar la actividad hipoglucemiante de la planta
Kalanchoe daigremontiana, ya que al ser una especie fácilmente cultivable (también

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considerado como plaga) y de bajos requerimientos, se pueden obtener varios extractos
de ella en un corto periodo de tiempo.

Con dicho objetivo se pretende informar a la población el uso y propiedades de esta

planta.

Antecedentes
La diabetes mellitus (DM) es una de las cuatro enfermedades no transmisibles
prioritarias identificadas por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Esta
enfermedad se manifiesta con un trastorno metabólico de hiperglicemia (McCune y
Johns, 2002), causada por la secreción anormal de insulina (DM tipo 1) por parte de las
células B pancreáticas, incremento de la producción de glucosa hepática y la
resistencia a la insulina (DM tipo 2). La DM tipo 1 es controlada mediante la
administración de insulina y una alimentación restringida en azúcares (Tiedge et al.,
2000; Aguilar, 2008), en tanto que la DM tipo 2 se controla con una alimentación
balanceada en azúcares y el uso de medicamentos hipoglicemiantes como la
glibenclamida; sin embargo, el consumo de esta puede provocar efectos secundarios
como visión borrosa, temblores, náuseas, diarreas e inclusive está relacionada con
ictericia colestásica (Lisson Abanto, 1999).

Según la OMS, la DM tipo 2 representa al 90% de los casos mundiales y se debe en

gran medida al excesivo peso corporal y a la inactividad física. La Federación
Internacional de Diabetes cita que los casos diagnosticados de DM hasta 2011 fueron
de 316 millones y que llegará hasta los 552 millones en 2030 (Carlos Justil G, 2015).

En México, aproximadamente el 10% de la población padece diabetes, se estima que el

90% de los casos son del tipo II. En nuestro país, la diabetes es una enfermedad
bastante frecuente entre los ancianos y entre las personas obesas, no es una
enfermedad contagiosa, siendo la principal causa de mortandad, y causando el 12% de
las muertes (Forga y Zulet, 2002; Cabrera et al., 2008).

Para el tratamiento farmacológico de la diabetes tipo 2, los fármacos clásicos eran las
sulfonilureas y la metformina, pero estos fármacos no han logrado detener la progresión
de la diabetes tipo 2, de esto se deduce la necesidad de desarrollar nuevos fármacos,

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es así que progresivamente en los últimos años se han desarrollado las
tiazolidinedionas, inhibidores de dipeptidilpeptidasa 4 (iDPP- 4) y los inhibidores del
SGLT-2 (Tsang MW,2012). En la actualidad se buscan y ensayan diversas estrategias
médicas mediante una combinación de la dieta, educación, ejercicio físico,
inmunoterapia, incluso trasplantes pancreáticos; no obstante, la investigación está
orientada principalmente en la obtención de nuevas drogas hipoglucemiantes que
puedan ayudar al control de la diabetes.

El uso de las especies de Kalanchoe en la farmacopea tradicional malgache, africana y

brasileña ha ido encaminado principalmente al tratamiento de enfermedades
infecciosas, inflamatorias y cancerosas. Estudios recientes, realizados principalmente
en K. pinnata, K. daigremontiana y K. brasiliensis, han demostrado su capacidad
antitumoral, antihistamínica, antiinflamatoria e inmunomoduladora. En nuestro
laboratorio hemos puesto de manifiesto su actividad especialmente citotóxica sobre
células procedentes de la leucemia linfoblástica, su poder inhibidor de la formación de
tubos capilares y su capacidad antiinflamatoria independiente de ciclooxigenasa-2. La
demostración de todas estas propiedades biológicas confirma el valor de su aplicación
empírica y justifican la puesta en marcha de nuevas investigaciones.

Kalanchoe daigremontiana, también conocida como espinazo del diablo, mala madre,
madre de miles, etc., es una especie originario de Madagascar, perteneciente a la
familia Crasulácea que ha sido catalogada últimamente como una especie invasora.
Puede llegar a medir 1,5 m de altura, sus flores son tubulares de color rojo-anaranjado
que se agrupan en una inflorescencia tipo umbela, con plántulas en los bordes de las
hojas (Puertas Mejía, 2014).

Las sustancias más notables biosintetizadas por las diferentes especies de este género
pertenecen a dos familias químicas: los glucósidos de flavonoides, un conjunto de
pigmentos vegetales, y los bufadienólidos, cuyo nombre se debe a que se aislaron por
primera vez de las secreciones de piel de sapo. Los bufadienólidos son esteroides
cardioactivos cuya eficacia en el tratamiento de enfermedades cardíacas ya era
conocida por los antiguos egipcios. Poseen el núcleo tetracíclico típico de los esteroides
(ciclopentanoperhidrofenantreno) al que se le une un anillo pentadienólido, una

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estructura química semejante a otros compuestos con actividad biológica, como el
ácido ursólico, un triterpeno pentacíclico presente en muchas plantas medicinales que
ha sido descrito como inhibidor de varios pasos clave de la angiogénesis (proceso
morfogenético en el que se generan nuevos capilares a partir de vasos sanguíneos
preexistentes).

Los flavonoides han presentado diversas actividades biológicas y farmacológicas a nivel

experimental entre las que se destacan: antioxidante, antitumoral, antiviral anti H1N1,
tripanomicida y lehismanicida, en cuanto a las actividades farmacológicas se han
reportado: antidiabéticas, hipoglucemiante y antihiperglucemiante, antiinflamatoria,
antitrombótica, hepatoprotectora, ansiolítica y anticonvulsivante, antiamilodogénica,
neuroprotectora, antilipidémica y antihipertensiva (González Sánchez, 2011).

Desde el punto de vista medicinal, diferentes especies de Kalanchoe (pinnata,

daigremontiana, brasilienses) han presentado diversas actividades como son
antitumoral, antihistamínica, antiinflamatoria e inmunomoduladora. La especie K.
daigremontiana ha sido utilizada en la medicina tradicional contra diversas infecciones,
como antiinflamatorio y en el tratamiento de varios tipos de cáncer (Kruk J., 2011).

La Metformina es una biguanida eficaz en el control metabólico de la diabetes mellitus

tipo II, no insulinodependiente cuando el control dietético falla. Dada su probada
eficacia y actual accesibilidad en el mercado de medicamentos en varios países de
Latinoamérica.

Es el fármaco de primera elección solo o combinado, para el tratamiento inicial de la

gran mayoría de los pacientes diabéticos tipo II o no insulinodependientes. Se obtienen
efectos no inmediatos como las sulfonilureas, pero ya a las 48-72 h se puede evaluar
los resultados iniciado el tratamiento. Numerosos estudios han demostrado que su uso
asociado a medidas que cambian el estilo de vida puede disminuir la proporción de
personas con intolerancia a los glúcidos que de otra manera evolucionarían a una
diabetes, además de su eficacia en el enfermo en sí. (Salazar Yohana, 2011).

La metformina mejora el control glucémico, empleada en monoterapia reduce del 1-2 %

el valor de la hemoglobina glucosilada (Hb A1c), no causa hiperinsulinemia, tiene un

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efecto favorable sobre los lípidos ya que reduce los niveles de LDL colesterol
aproximadamente 10 mg/dL y los triglicéridos; no modifica el peso corporal aunque se
ha visto que en algunos pacientes obesos es ideal por la anorexia que causa con
pérdida de peso secundariamente, por lo cual es la droga de elección como terapia
inicial en los diabéticos tipo II no insulina dependientes y frecuentemente obesos
(Stargardt T., 2009).

Planteamiento del problema:

La diabetes mellitus tipo II es la enfermedad de mayor prevalencia en el país, existiendo
diversos fármacos que ayudan a tratarla. Sin embargo, gran parte de la población
recurre a tratamientos con remedios herbolarios, ya sea por acceso económico o por
creencia, para controlar esta enfermedad. Es por esto que resulta relevante evaluar el
efecto hipoglucemiante de algunas plantas medicinales, como lo es Kalanchoe
daigremontiana, siendo ésta de fácil cultivo y cuidado.

Hipótesis:
Kalanchoe daigremontiana reduce los niveles de glucosa en sangre en ratas
hiperglicémicas de la cepa Wistar.

Objetivos generales:
Evaluar la actividad hipoglucemiante de la planta Kalanchoe daigremontiana en ratas
Wistar tratadas con aloxano.

Objetivos específicos:
 Determinar la dosis media efectiva (DE 50) del extracto de Kalanchoe
daigremontiana que reduce los niveles de glucosa en ratas wistar
 Comparar la eficacia de Kalanchoe daigremontiana versus metformina

Metodología:
Recolección, identificación y obtención de los extractos.

Se buscará geográficamente y se colectarán 3 ejemplares completos de Kalanchoe

daigremontiana que serán llevados al departamento de botánica de la facultad de
biología, UV., para su autentificación taxonómica.

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Posteriormente, se seleccionarán hojas de K. daigremontiana de acuerdo a las
siguientes características: carnosas, lanceoladas, opuestas, de color verde por el haz y
manchadas de marrón por el envés (Garcés y col., 2007; Anisimov y col., 2009).
Después, se procederá a obtener los extractos en Hexano, Etanol y Acetato de Etilo,
pesando 50 gramos de la planta con 250 ml del solvente por 48 horas y transcurrido
este tiempo, se retirarán los solventes para obtener el extracto puro de la planta y
calcular el rendimiento obtenido.
Se tomará una muestra de cada uno de los extractos los cuáles se disolverán en agua,
etanol y/o hexano para el análisis fitoquímico, siguiendo los procedimientos reportados
por Domínguez (1979). Los metabolitos que se analizarán son: alcaloides (test de
Wagner), coumarinas (NaOH), flavonoides (test de Salkowski), sesquiterpenlactonas
(test de Baljet), esteroles, metilesteroles y saponinas (test de Liebermann-Burchard),
azúcares (test de Molish), quinonas (test de Bôrntrager) e insaturaciones (KMnO4).
Posteriormente se realizará el corrimiento de cada extracto mediante cromatografía en
capa fina, para la identificación de los alcaloides, los cuales se revelarán con el reactivo
de Dragendorff.

Inducción de Diabetes mellitus tipo II en ratas wistar

Se pesarán las ratas y se administrará aloxano vía intraperitoneal a 25 ratas

normoglicémicas en dosis de 100 mg/kg p.v. disuelto en agua destilada. Los niveles de
glucosa se medirán a las 24 horas y se considerarán hiperglicémicas si el valor de
glicemia es mayor de 250 mg/dL. Las ratas tendrán un periodo de ayuno de 12 horas
previo a la inducción de DM.

Grupos y tratamientos

Se utilizarán 25 ratas diabéticas y 5 ratas normoglicémicas que serán distribuidas de

acuerdo a la siguiente tabla:

Grupo Tratamiento Dosis

Normoglicémicas Vehículo (agua) 20, 40, 100, 200 y 300
mg/kg de peso
Hiperglicémicas Vehículo (agua) 20, 40, 100, 200 y 300
mg/kg de peso

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 Hiperglicémicas Extracto hexánico de K. 20, 40, 100, 200 y 300
daigremontiana mg/kg de peso
Hiperglicémicas Extracto etanóico de K. 20, 40, 100, 200 y 300
daigremontiana mg/kg de peso
Hiperglicémicas Extracto con acetato de 20, 40, 100, 200 y 300
etilo de K. daigremontiana mg/kg de peso
Hiperglicémicas Metformina 20, 40, 100, 200 y 300
mg/kg de peso

Todos los tratamientos serán administrados: vía oral cada 24 hr por 4 semanas, y
posteriormente se medirán los niveles de glucosa a los 7, 15 y 30 días después de
administradas las dosis.

Diagrama de trabajo

Recolección de la Inducción de diabetes Agrupación y

planta en ratas wistar distribución

Identificación Administración de los

Análisis fitoquímico
taxonómica tratamientos

Selección de las Obtención de Análisis de los

hojas extractos resultados

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Cronograma de trabajo

Bibliografía:
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