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Nch2828-2003 Productos Hidrobiologicos
Nch2828-2003 Productos Hidrobiologicos
Of2003
Preámbulo
La norma NCh2828 ha sido preparada por la División de Normas del Instituto Nacional de
Normalización, y en su estudio participaron los organismos y las personas naturales
siguientes:
I
NCh2828
Esta norma se estudió dentro del marco del Proyecto FDI Optimización de la certificación
de productos pesqueros de exportación para establecer el método de determinación de
Staphylococcus aureus coagulasa positiva, mediante la técnica del Número Más Probable
(NMP) en los productos hidrobiológicos.
- modificar el título;
El Anexo B no forma parte del cuerpo de la norma, se inserta sólo a título informativo.
Esta norma ha sido aprobada por el Consejo del Instituto Nacional de Normalización, en
sesión efectuada el 27 de Diciembre de 2002.
Esta norma ha sido declarada Oficial de la República de Chile por Resolución Exenta N°92,
de fecha 07 de Marzo de 2003, del Ministerio de Economía, Fomento y Reconstrucción,
publicada en el Diario Oficial del 13 de Marzo de 2003.
II
NORMA CHILENA OFICIAL NCh2828.Of2003
1.2 Esta norma se aplica a todos los alimentos de consumo humano y animal, cuando se
estima que el Staphylococcus aureus coagulasa positiva se encuentra en una cantidad
inferior a 100 células/g1) o cuando se espera un alto contenido de especies competitivas, a
menos que exista una norma específica para el producto a ser analizado.
2 Referencias normativas
Todas las normas están sujetas a revisión y a las partes que deban tomar acuerdos,
basados en esta norma, se les recomienda investigar la posibilidad de aplicar las ediciones
más recientes de las normas que se incluyen a continuación.
1) En muestras que se estime tienen una cantidad superior a 100 células/g se debe usar la técnica de
recuento en placa (ver NCh2671).
1
NCh2828
NOTA - El Instituto Nacional de Normalización mantiene un registro de las normas nacionales e internacionales
vigentes.
3 Términos y definiciones
Para los propósitos de esta norma, se aplican los términos y definiciones siguientes:
3.1 lote: conjunto homogéneo de envases o unidades primarias, de peso, tipo y clase
similares, procesadas bajo condiciones semejantes, en una jornada de trabajo, las que se
identifican con una clave de producción
3.4 Staphylococcus aureus coagulasa positiva: bacteria inmóvil, Gram positiva, esférica y
usualmente agrupada en racimos, aerobia - anaerobia facultativa, catalasa positiva,
perteneciente a la familia Micrococcaceae. Produce generalmente la enzima coagulasa y
su crecimiento ocurre en un amplio rango de temperatura (6,5ºC a 50ºC), siendo el
óptimo 30ºC a 40ºC. Tolera altas concentraciones de NaCl (hasta 10%) y es capaz de
desarrollarse aeróbicamente en alimentos con bajo aW (0,86). La presencia de esta bacteria
en alimentos procesados o en equipos, generalmente indica higiene deficiente o
contaminación de origen humano post proceso
3.5 técnica del número más probable: es un método estadístico, basado en la probabilidad
de transferir una célula bacteriana desde una dilución original utilizando muestras múltiples
y se emplea en conjunto con una tabla estadística (tabla NMP), que entrega valores de
NMP para varias combinaciones de tubos positivos.
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NCh2828
4 Aparatos y materiales2)
4.10 tubos o botellas de vidrio borosilicato con tapas herméticas para dilución;
4.11 propipetas;
5.2 caldo soya tripticasa (TSB) conteniendo 10% NaCl y 1% piruvato de sodio
NOTAS
2) Para la preparación de los medios de cultivo se debe seguir las instrucciones del fabricante y cumplir con
lo señalado en NCh2047.
3) En los casos excepcionales, en que fuese necesario preparar algún medio de cultivo en el laboratorio, se
debe cumplir con lo señalado en Anexo A y con lo establecido en NCh2047.
6.1 Una vez recibida la muestra en el laboratorio se debe realizar el análisis lo más pronto
posible.
6.2 En caso de ser necesario postergar el análisis, según el tipo de muestra, ésta se debe
mantener:
7.2.2 Añadir 90 ml, 225 ml o 450 ml de diluyente al vaso de la licuadora o bolsa para
Stomacher (manteniendo la proporción muestra/diluyente 1:9).
7.3.1 La dilución 10-2 se obtiene al traspasar con una pipeta 1 ml del homogeneizado a
un tubo que contiene 9 ml del diluyente o bien, al traspasar 10 ml en 90 ml de
diluyente. Asegurar la homogeneidad de la mezcla.
7.3.2 Tomar 1 ml de la dilución 10-2 y verter en un tubo que contiene 9 ml del diluyente o
bien verter 10 ml en 90 ml de diluyente. De este modo se obtiene la dilución 10-3 y las
diluciones decimales consecutivas que sean necesarias (10-4, 10-5 o más). La preparación
de cada nueva dilución requiere del uso de una pipeta estéril.
8 Inoculación e incubación
Antes de usar cada dilución, se debe agitar bien a fin de asegurar su homogeneización.
8.1.1.1 Tres tubos que contengan caldo TSB que contengan 10% NaCl y 1% piruvato de
sodio, cada uno con 1 ml de la dilución 10-1.
8.1.1.2 Tres tubos que contengan caldo TSB que contengan 10% NaCl y 1% piruvato de
sodio, cada uno con 1 ml de la dilución 10-2.
8.1.1.3 Tres tubos que contengan caldo TSB que contengan 10% NaCl y 1% piruvato de
sodio, cada uno con 1 ml de la dilución 10-3.
NOTA - Se puede inocular diluciones mayores si se considera necesario. La mayor dilución debe dar un
resultado negativo.
8.1.2 Agitar suavemente la gradilla para mezclar la muestra con el medio de cultivo.
8.1.4 Registrar el número de tubos positivos que presenten turbidez, de cada dilución.
8.2.1 Someter todos los tubos de caldo TSB que contienen 10% NaCl y 1% piruvato de
sodio, que presenten turbidez, a la prueba confirmativa.
8.2.2 Traspasar con un asa de cada uno de los tubos positivos y sembrar por aislamiento
en placas con agar Baird Parker.
8.2.3 Agitar en vortex antes de sacar con asa, si el crecimiento es visible sólo en el fondo
o en las paredes del tubo.
8.2.5 De cada placa que presente crecimiento, transferir por lo menos una colonia
sospechosa de ser S. aureus, a tubos que contengan caldo BHI y proceder para efectuar
la prueba de la coagulasa de acuerdo a NCh2671, cláusula 10.
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9.2 El número de tubos positivos por dilución permite obtener una serie compuesta de
tres dígitos, por ejemplo: 3-2-0.
9.3 El NMP de S. aureus coagulasa positiva se expresa como un número entre 1,0 y 9,9 x
10x por gramo de muestra, donde x es la correspondiente potencia de 10 (para x > 0).
10 Informe
10.11 Acreditación para esta técnica, si existe (por ejemplo, ISO 17025).
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Anexo A
(Normativo)
Componente Cantidad
KH2PO4 34 g
Agua destilada 1L
Componente Cantidad
Peptona 1g
Agua destilada 1L
5) Según NCh2047.
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Componente Cantidad
K2HPO4 2,5 g
Dextrosa 2,5 g
Piruvato de sodio 10 g
Agua destilada 1L
Componente Cantidad
Extracto de levadura 1g
Extracto de carne 5g
Piruvato de sodio 10 g
L - Glicina 12 g
Agar 20 g
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A.4.1.1 Preparación
Si es necesario, ajustar el pH de tal forma que después de la esterilización sea 7,2 ± 0,2
a 25ºC.
A.4.2 Soluciones
Usar huevos frescos con la cáscara intacta. Limpiar los huevos con una brocha usando
detergente líquido. Lavarlos bajo el chorro de agua y desinfectar las cáscaras ya sea por
inmersión en etanol (70% fracción de volumen) por 30 s y dejar secar al aire, o por
nebulización de alcohol seguida por esterilización a la llama.
Composición:
Componente Cantidad
Agua destilada 1L
Disolver el NaCl en el agua. Ajustar el pH a 7,0 ± 0,2. Esterilizar en autoclave a 121ºC por
15 min.
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Componente Cantidad
Telurito de potasio 1)
(K2TeO3) 1g
El sólido debería ser fácilmente soluble. Si queda un residuo blanco insoluble en el agua,
descartar el reactivo.
Componente Cantidad
Sulfametacina 0,2 g
Agua destilada 90 ml
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Componente Cantidad
Fundir el medio base, enfriarlo a aproximadamente 46ºC ± 1ºC usando un baño de agua.
Añadir, bajo condiciones asépticas, las otras dos soluciones y si es necesario (si se
sospecha de la presencia de Proteus en la muestra) la solución de sulfametacina. Cada
solución debe ser previamente temperada en un baño de agua a 46ºC ± 1ºC. Mezclar bien
después de cada adición.
Vaciar cantidades adecuadas del medio en placas Petri de modo de obtener una capa de
agar de aproximadamente 4 mm de espesor. Dejar solidificar.
Antes de usar, secar las placas en una estufa a 25ºC a 50ºC, preferentemente destapadas
y con la mitad de la placa con agar hacia abajo, sobre la tapa. Dejar secar hasta que las
gotas de líquido hayan desaparecido de la superficie de medio.
Componente Cantidad
Glucosa 2g
Na2HPO4 2,5 g
Agua destilada 1L
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Ajustar el pH de tal forma, que después de esterilizar sea de 7,4 ± 0,2 a 25ºC.
Agregar una solución de EDTA (ácido etilendiaminotetracético) para dar finalmente 0,1%
EDTA en el plasma rehidratado o diluido, siempre cuando se haya utilizado citrato de
potasio o citrato de sodio como anticoagulante del plasma6).
Antes de usar, chequear cada lote de plasma con cepas de estafilococos coagulasa
positiva y cepas coagulasa negativa.
Anexo B
(Informativo)
Tabla B.1 - NMP por gramo para tres tubos cada uno con 0,1 g; 0,01 g y
0,001 g de inóculo, con intervalo de confianza de 95%
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