Disminución de la función testicular en el semental que envejece: opciones de manejo y terapias

futuras

RESUMEN

La disminución de la fertilidad en asociación con la disminución de la función testicular se

considera comúnmente como la edad de los sementales y puede ser la causa de pérdidas
económicas significativas en la industria de la cría de equinos. Este manuscrito describe cómo
reconocer clínicamente los signos de deterioro de la función testicular relacionada con la edad
(degeneración testicular) y también proporciona estrategias de manejo de yeguas y sementales
para mejorar los resultados reproductivos. Finalmente, se presenta la comprensión actual de la
fisiopatología de la enfermedad, incluidos los resultados de estudios recientes que están
comenzando a descubrir las causas subyacentes de la disminución de la función testicular
relacionada con la edad en los sementales. Estos nuevos hallazgos proporcionan una base para
posibles tratamientos futuros que podrían retrasar los efectos del envejecimiento en los testículos.

Introducción

Las disminuciones de la fertilidad relacionadas con la edad se observan comúnmente en

sementales de mediana edad y mayores en asociación con una disminución de la función
testicular. Esto a veces se denomina degeneración testicular (TD) o, más específicamente,
degeneración testicular idiopática o relacionada con la edad (ITD) para diferenciarla de la
degeneración testicular que ocurre después de una agresión testicular conocida (como
traumatismo, choque térmico, administración de andrógenos, etc.). A medida que los testículos
envejecen, sus dos funciones principales, la producción de gametos y la producción de hormonas,
se ven afectadas negativamente. En los sementales, donde el valor del animal a menudo se define
por su capacidad para producir descendencia, la atención se centra en la disminución de la
producción de gametos y la disminución asociada de la fertilidad, que generalmente preceden
durante mucho tiempo a cualquier disminución notable en la producción de andrógenos o la
libido. En los sementales con libros grandes, incluso una pequeña disminución en la eficiencia
reproductiva puede resultar en pérdidas económicas sustanciales derivadas de la pérdida de
derechos de reproducción, menos crías, mayores costos de manejo y la pérdida de valiosa
genética masculina. A medida que avanza el problema, la ineficiencia reproductiva generalmente
progresa a subfertilidad o infertilidad, lo que hace que incluso los sementales con libros más
pequeños sean incapaces de competir en el mercado comercial y eventualmente obligue al animal
a retirarse (Blanchard y Varner, 1993; Gehlen et al., 2001; Watson et al ., 1994). Los animales en
las etapas tempranas o medias de la afección a menudo pueden "superar" el problema. Un
manejo más intensivo +/− el uso de técnicas de reproducción asistida puede ayudar a reducir la
cantidad y la calidad de los espermatozoides que se requieren para la fertilización y, por lo tanto,
puede extender las carreras de reproducción de los sementales afectados, a veces durante años.
Sin embargo, no se ha identificado un tratamiento real para la enfermedad. Aunque hay algunos
fabricantes que comercializan productos que afirman retrasar o prevenir la aparición de la función
testicular en declive, hay poca o ninguna información controlada que respalde estas afirmaciones.
Una mejor comprensión de la fisiopatología de la enfermedad será el primer paso hacia el
desarrollo de métodos efectivos para prevenir o ralentizar el curso de la DT relacionada con la
edad. Estudios recientes están avanzando hacia estos objetivos.
2. Reconocimiento de la degeneración testicular relacionada con la edad en el ámbito clínico

2.1. Señalización e historial

El inicio de la TD relacionada con la edad se aprecia con mayor frecuencia en sementales de finales
de la adolescencia o principios de los veinte, aunque algunos sementales siguen siendo muy
fértiles hasta bien entrados los veinte, mientras que otros comienzan a experimentar una
disminución de la fertilidad relacionada con la edad a mediados de la adolescencia. o antes. Por lo
tanto, además de mantener excelentes registros de reproducción, recomendamos que todos los
sementales reproductores, pero especialmente aquellos que tienen 15 años de edad o más, sean
monitoreados cuidadosamente de año en año y eventualmente de mes en mes para detectar
signos clínicos de DT. Esto debe incluir una evaluación regular de las características del semen y el
número de espermatozoides, así como el examen físico y la medición de los testículos. Clínica e
histológicamente, la TD puede ser indistinguible de la hipoplasia testicular (Watson et al., 1994).
Dado que, por definición, la degeneración testicular es una afección adquirida, mientras que la
hipoplasia testicular es congénita, se puede hacer un diagnóstico preciso de DT solo si el semental
tiene antecedentes de disminución de la eficiencia reproductiva, disminución del tamaño de los
testículos, disminución de las características del semen o alguna combinación de estas cosas (es
decir, una historia que indica que el semental fue una vez más fértil de lo que es ahora). Como tal,
la información sobre los tamaños de libros anteriores del semental, las tasas de preñez estacional,
el número promedio de ciclos de celo por preñez, las medidas testiculares y los análisis de semen
anteriores, todo puede ser muy útil. Debido a que la mayoría de los casos de DT comienzan
gradualmente, las primeras etapas de la enfermedad a menudo se manifiestan como una
disminución en la eficiencia reproductiva que al principio puede pasar desapercibida. El número
promedio de ciclos por preñez (CPP, definido como el número de ciclos estrales reproducidos
durante la temporada dividido por el número de yeguas preñadas) es una medida muy sensible de
la eficiencia reproductiva. Como resultado, es probable que sea un indicador más sensible de la
disminución de la fertilidad que, por ejemplo, la tasa de preñez estacional (SPR, definida como el
número de yeguas preñadas dividido por el número de yeguas criadas) (Love, 2011). Por lo tanto,
siempre que sea posible, se deben mantener registros de reproducción detallados y se debe
calcular el CPP para identificar cualquier tendencia a la baja. Particularmente para los sementales
con libros más pequeños, no es raro ver un aumento en el CPP, incluso cuando el SPR permanece
sin cambios. Mirar solo la SPR o la tasa de partos puede hacer que disminuciones más sutiles en la
eficiencia reproductiva pasen desapercibidas. Aunque la DT relacionada con la edad es
típicamente un problema de progresión lenta, tenga en cuenta que algunos casos pueden
presentarse por un inicio agudo de infertilidad o subfertilidad. A menudo no está claro si esta
disminución "aguda" de la fertilidad relacionada con la edad es real, o si solo se percibe porque las
características del semen y los parámetros testiculares no se monitoreaban de manera rutinaria y,
por lo tanto, las primeras etapas de la enfermedad pasaron desapercibidas. Debido a que no todos
los casos de degeneración testicular son idiopáticos, es importante establecer a partir de la
historia si podría estar presente alguna causa que incite al deterioro de la función testicular. El
trauma testicular, la fiebre reciente, la administración de esteroides anabólicos u otras sustancias
potencialmente dañinas pueden causar degeneración testicular. Si alguno de estos es parte de la
historia del semental, su resolución o eliminación puede permitir la restauración de la función
testicular completa. En estos casos, el pronóstico para la fertilidad futura suele ser mucho mejor
que para la DT relacionada con la edad.

2.2. Examen de los testículos

Los exámenes seriados de los testículos son importantes para identificar la DT relacionada con la
edad. Una disminución del volumen testicular, a veces asociada con cambios en la textura palpable
de los testículos, son características distintivas de la enfermedad. Idealmente, las mediciones
testiculares de rutina deben obtenerse en todos los sementales reproductores, comenzando
cuando el semental está en su mejor momento para establecer el volumen testicular normal de
referencia. Las mediciones testiculares deben ser realizadas con precisión e idealmente por el
mismo operador experimentado cada vez, de modo que los resultados sean altamente repetibles
(Love et al., 1991). Dado que el volumen es una medida cúbica, incluso los pequeños errores en
cada medida lineal tendrán un efecto significativo en el volumen calculado. Cuando la medición se
realiza incorrectamente, se pueden identificar tendencias falsas y se pueden pasar por alto las
tendencias reales. ¿Con qué frecuencia se deben examinar los testículos? En algunas granjas se
realizan exámenes testiculares mensuales como parte del cuidado de rutina del semental. Cuando
las mediciones se obtienen mensualmente, tenga en cuenta que es normal ver pequeñas
disminuciones estacionales en el tamaño de los testículos durante los meses de otoño e invierno y
pequeños aumentos estacionales asociados en el tamaño de los testículos durante los meses de
primavera y verano (Clay y Clay, 1992) . Como mínimo, las mediciones testiculares deben
obtenerse anualmente, preferiblemente en la misma época del año para que los cambios
estacionales normales en el tamaño testicular no confundan los resultados. En general, cuanto
más frecuentemente se obtengan las mediciones, más fácil será identificar un cambio de
tendencia en el tamaño testicular. Dado que la TD relacionada con la edad afecta con mayor
frecuencia a sementales de mediana edad y mayores, es razonable examinar a los sementales más
jóvenes con menos frecuencia y aumentar la frecuencia de los exámenes a medida que el
semental alcanza la adolescencia media o tardía. Se pueden obtener mediciones precisas ya sea
manualmente con calibradores o ecográficamente. Tenga cuidado de no distorsionar la forma de
los testículos por tracción agresiva durante la medición. Aunque no es necesario en todos los
casos, la sedación del semental a menudo facilita la medición testicular precisa al permitir que los
testículos desciendan pasivamente al escroto. La sedación también hace que la situación sea más
segura para el examinador. Se debe medir el largo, ancho y alto de cada testículo, teniendo
cuidado de no incluir el epidídimo. El ancho escrotal total debe obtenerse con ambos testículos
descendidos y uno al lado del otro en el escroto. Las medidas de longitud, ancho y altura deben
usarse para calcular el volumen testicular para los testículos izquierdo y derecho usando la
siguiente fórmula para el volumen de un elipsoide:

Los volúmenes de los testículos izquierdo y derecho se suman para determinar el volumen
testicular total (Love et al., 1991). La producción de esperma diaria esperada (DSO) se calcula
utilizando la siguiente ecuación de regresión:
El aspecto ecográfico del parénquima testicular no suele ser notable en sementales con DT. No
obstante, se recomienda la evaluación ecográfica de los testículos tanto para obtener medidas
testiculares precisas como para descartar la presencia de patologías testiculares menos frecuentes
como neoplasias, abscesos, formación de hematomas, etc.

2.3. Examen del eyaculado

Los cambios en las características del semen pueden preceder a cambios físicos identificables en
los propios testículos. Específicamente, los estudios sobre las tasas de pérdida de células
germinales en sementales indican que la TD puede estar presente antes de que se pueda apreciar
cualquier disminución clínicamente significativa en el tamaño de los testículos (Blanchard y
Johnson, 1997). Por lo tanto, los análisis de semen en serie también son importantes para
identificar la DT. Se deben controlar tanto el número total de espermatozoides como las
características del semen. Debido a que los sementales pueden almacenar una gran cantidad de
espermatozoides en los epidídimos y ampollas, el número total de espermatozoides en la
eyaculación puede ser muy variable cuando se evalúa el semen después de un período de
descanso sexual. Esto puede dificultar la identificación de tendencias descendentes sutiles en el
número total de espermatozoides. De manera similar, las características del semen pueden verse
afectadas por la duración del descanso sexual, lo que dificulta la identificación de las tendencias
cambiantes en los porcentajes de espermatozoides móviles y morfológicamente normales. Por lo
tanto, particularmente cuando el análisis de semen no se realiza con frecuencia, se recomienda
que el número de espermatozoides del semental y las características del semen se evalúen
después de que las reservas de esperma del semental se hayan agotado y el número de
espermatozoides en el eyaculado sea representativo de DSO. Esto requiere recolecciones
frecuentes de semen para agotar los espermatozoides almacenados (2-3 eyaculaciones / día
durante 3-5 días o una eyaculación / día durante 5 días; Dinger y Noiles, 1986). Una vez que se
alcanza el DSO, el número de espermatozoides eyaculados y la calidad del esperma se vuelven más
consistentes, lo que hace que los cambios sutiles en el número y la calidad sean más evidentes.
Cuando las características del semen se examinan anualmente en DSO, las disminuciones en las
características del semen y el número de espermatozoides, como lo demuestra una disminución
en el número de espermatozoides progresivamente móviles y morfológicamente normales
(PMMN) pueden preceder a cualquier disminución medible en el volumen testicular y, por lo
tanto, puede ser uno de los primeros indicadores de la aparición de la enfermedad (Fig.1)
(Blanchard et al., 2013). Aunque se prefiere el examen en DSO, aún se pueden obtener datos
significativos incluso con el semental en reposo sexual. Si es posible, se deben examinar los
eyaculados múltiples a lo largo del año y se deben calcular las medias anuales para los parámetros
del semen. En nuestras manos, la evaluación de los promedios de fin de año ha sido una forma
muy eficiente de identificar los primeros signos de DT en sementales envejecidos, sin la necesidad
de evaluar al semental en DSO (Fig. 2). Otro sello distintivo de la DT relacionada con la edad es la
aparición de células espermatogénicas inmaduras (células redondas) en el eyaculado. En una
muestra de semen sin teñir, estas células a veces se pueden confundir con glóbulos blancos. Sin
embargo, debido a que las diferentes etapas de las células espermatogénicas generalmente
aparecen en un solo eyaculado, las células espermatogénicas generalmente varían en tamaño,
mientras que los glóbulos blancos son más homogéneo. El análisis de la muestra de semen teñida
con Diff-Quik puede facilitar la identificación de neutrófilos y linfocitos y, por lo tanto, puede
ayudar en la identificación de células espermatogénicas. También pueden estar presentes células
gigantes multinucleadas (Blanchard et al., 2000, 2001; McEntee, 1990; Watson et al., 1994). Tenga
en cuenta que se puede encontrar un número bajo de células espermatogénicas inmaduras en los
eyaculados de sementales normales, particularmente al comienzo de la temporada de
reproducción (Swerczek, 1975).

Fig. 1. Tasa de embarazo por ciclo (%), eficiencia espermatogénica (%), porcentaje del volumen
testicular inicial (máximo) registrado en el primer examen y número total de espermatozoides
progresivamente móviles morfológicamente normales (PMMN) en los eyaculados a la producción
diaria de espermatozoides en tres sementales de pura sangre envejecidos. Los datos se normalizan
al año de jubilación debido a la infertilidad de cada semental y se promedian entre los sementales.
Las disminuciones en el número de espermatozoides PMMN, la eficiencia espermatogénica y la
tasa de embarazo por ciclo parecen preceder a una disminución medible en el volumen testicular.
Reimpreso directamente de Blanchard, T.L., Brinsko, S.P., Varner, D.D., y Love, C.C., 2013.
Progresión de los cambios reproductivos que acompañan a la disfunción testicular en sementales
de pura sangre que envejecen: estudios de caso. Actas de la 59ª Convención Anual de la
Asociación Estadounidense de Médicos Equinos, (59): 532 - 536. Reimpreso con permiso de la
Asociación Estadounidense de Médicos Equinos.
Fig. 2. Tendencias en las características del semen, el número de espermatozoides y el volumen
testicular en sementales de envejecimiento representativos. Estos sementales se utilizaron en
programas de semen refrigerado y transportado y se criaron con libros de yeguas pequeños a
moderados cada año. Como resultado, se recolectaron y evaluaron varios eyaculados cada año,
pero los eyaculados se obtuvieron esporádicamente, después de diferentes períodos de descanso
sexual. Los gráficos muestran promedios anuales de concentración de espermatozoides, número
total de espermatozoides, motilidad total (%), motilidad progresiva (%) y espermatozoides
morfológicamente normales (%), así como una única medición anual del volumen testicular total.
Los datos se muestran como porcentaje de los promedios iniciales calculados en el año en que se
examinó por primera vez al semental. Aunque ninguno de estos eyaculados representó la
producción diaria de espermatozoides, las tendencias siguen siendo obvias cuando se observan a
lo largo del tiempo. Los gráficos de los sementales 1 y 2 muestran claras tendencias a la baja en la
mayoría de los parámetros, indicativos de la TD progresiva temprana. Por el contrario, ninguno de
los parámetros medidos para el semental 3 está en declive, lo que indica que la función testicular
de este animal sigue siendo sólida.

A medida que avanza la degeneración, se hacen evidentes los signos clínicos anteriores de
disminución del número de espermatozoides, disminución de las características del semen y
disminución del tamaño de los testículos. Otros signos incluyen ablandamiento palpable del
parénquima testicular y DSO bajo por ml de testículo (calculado dividiendo el número total de
espermatozoides en el eyaculado en DSO por el volumen testicular total) (Love et al., 1991). En
casos avanzados, los sementales pueden volverse azoospérmicos. Debido a que el tamaño del
epidídimo generalmente no cambia en los casos de DT, el epidídimo puede parecer
desproporcionadamente grande con respecto al tamaño testicular (Blanchard y Varner, 1993). En
la DT grave en etapa terminal, los testículos pueden volverse demasiado firmes (Varner et al.,
1991). Más recientemente, se ha sugerido que la hormona antimulleriana (AMH) es un marcador
de la función gonadal en caballos. En este sentido, se ha informado un aumento de AMH en
sementales con degeneración testicular aguda inducida médicamente (Pozor et al., 2018). Será
interesante determinar si la concentración de AMH también resulta útil como biomarcador para la
degeneración testicular relacionada con la edad.

2.4. Evaluación endocrinológica

Aunque los cambios en los niveles hormonales se discuten con frecuencia en el contexto de la DT
relacionada con la edad, en nuestra experiencia, la evaluación de los niveles hormonales
circulantes es una herramienta diagnóstica poco gratificante. Existen variaciones diarias y
estacionales significativas en los niveles de hormonas plasmáticas, incluso en sementales normales
y fértiles, que pueden hacer muy difícil distinguir los niveles "normales" de los "patológicos" en la
DT temprana a moderada (Blanchard y Johnson, 1997). En casos graves de DT, se pueden observar
FSH y LH elevadas, así como estradiol plasmático bajo. De manera similar, la testosterona
persistentemente baja generalmente se observa solo en casos muy avanzados. En el momento en
que estos cambios hormonales se vuelven constantes y aparentes, la afección generalmente está
avanzada y se puede diagnosticar según el tamaño y el carácter testicular, así como las
características del semen y el número de espermatozoides sin la necesidad de análisis hormonales.

2.5. Evaluación histopatológica

La histopatología de los testículos afectados revela un grupo común de anomalías
espermatogénicas que incluyen vacuolización citoplásmica, ausencia de etapas posteriores de
células germinales y pérdida de la arquitectura normal del epitelio seminífero (McEntee, 1990). El
diámetro de los túbulos seminíferos puede estar disminuido y las células espermatogénicas
inmaduras pueden desprenderse en la luz del túbulo seminífero, apareciendo finalmente en el
eyaculado. En los casos más extremos, puede haber tejido fibroso y los túbulos pueden quedar
casi desprovistos de células espermatogénicas y quedar sólo con células de Sertoli y pocas
espermatogonias. También se pueden observar fibrosis y calcificación del parénquima testicular
(Humphrey y Ladds, 1975). Debido a que los hallazgos histopatológicos pueden ayudar a definir la
DT (e hipoplasia testicular), la evaluación de una muestra de biopsia testicular proporciona
evidencia definitiva de estas afecciones. Sin embargo, en la práctica, la biopsia testicular rara vez
está indicada. Una vez que el médico ha obtenido una historia adecuada y ha realizado un examen
físico y reproductivo completo, generalmente se puede hacer un diagnóstico de DT con cierta
confianza y no es necesaria una muestra de biopsia. Además, existe la preocupación de que una
sola muestra de biopsia no sea representativa de la condición de todo el testículo y, por lo tanto,
no tenga un valor pronóstico significativo. Si se va a tomar una muestra de biopsia, los testículos
deben examinarse ecográficamente antes de obtener la biopsia (Turner, 1998). La apariencia
ecográfica del parénquima puede ayudar al médico a elegir un sitio representativo para la toma de
muestras. Varios informes han indicado que la obtención de muestras de biopsia testicular en el
semental se puede realizar de forma segura y con un daño permanente mínimo al parénquima
testicular restante (DelVento et al., 1992; Faber y Roser, 2000). Sin embargo, muchos de estos
estudios se realizaron en sementales normales y, por lo tanto, el riesgo para un testículo ya
comprometido (por ejemplo, un testículo en degeneración) es más difícil de determinar. El
beneficio diagnóstico adicional que proporciona una muestra de biopsia testicular a menudo no
supera los riesgos potenciales y, por lo tanto, rara vez se justifica en casos de DT relacionada con la
edad.

3. Manejo del semental envejecido con fertilidad en declive

La investigación actual ha demostrado que la patología subyacente a la DT se encuentra dentro del

testículo mismo y no en el entorno extratesticular. Como era de esperar para una enfermedad
autóloga tisular, los tratamientos diseñados para impulsar la función testicular han demostrado
ser ineficaces. Aunque existen algunos informes sobre el uso exitoso de la terapia con GnRH como
tratamiento para la infertilidad en sementales (Evans y Finely, 1990; Shiner et al., 1993), estos
logros no se han duplicado en estudios controlados (Blue et al., 1991; Douglas y Umphenour,
1992; Roser y Hughes, 1994). La terapia con GnRH ha tenido mucho éxito en el tratamiento de
hombres con hipogonadotropichypogonadism, pero esta condición no se ha documentado
claramente en sementales y nuestros estudios sugieren firmemente que la falta de
gonadotropinas no es la causa subyacente de la DT relacionada con la edad en el caballo. Además,
nuestros estudios de xenoinjertos de testículos degenerados no han mostrado ninguna mejora en
la condición de los testículos después del tratamiento de ratones hospedadores con
gonadotropinas exógenas o la provisión de ratones con una fuente de hormonas endógenas de
xenoinjertos de testículos normales y funcionales (Turner et al., 2006). Si se toma toda esta
información en conjunto, el uso de implantes de GnRH o la administración pulsátil de GnRH como
tratamiento para la infertilidad del semental en general o la TD relacionada con la edad
específicamente se vuelve altamente cuestionable. Si se va a intentar esta terapia, se ha sugerido
que el tratamiento debe comenzar temprano, antes de que el testículo haya alcanzado un estado
de degeneración grave (Brinsko, 1996). Existe respaldo en la literatura sobre los efectos
beneficiosos de los antioxidantes solubles en grasa (p. Ej., Ácido docosahexaenoico (DHA)) sobre
las características del semen en sementales (Brinsko et al., 2005). Sin embargo, los beneficios
probados hasta ahora se han limitado a una mayor longevidad de la motilidad del esperma en
muestras de semen almacenadas y refrigeradas y en muestras de semen criopreservadas. No se ha
probado si esta mejora se traduce o no en un aumento de las tasas de preñez, particularmente en
sementales subfértiles. Según el conocimiento de los autores, no hay evidencia de que los
antioxidantes solubles en grasa mejoren la función de un testículo enfermo, ni hay evidencia de
que su administración mejore la fertilidad en individuos subfértiles. En este sentido, utilizamos el
modelo de xenoinjerto para estudiar los efectos de la suplementación con DHA en la apariencia
histológica de testículos de sementales degenerados y no hemos identificado ningún beneficio
(Turner et al., 2006). A pesar de la falta de evidencia de algún beneficio de la DT relacionada con la
edad, es una práctica común complementar a los sementales subfértiles con nutracéuticos que
contengan DHA o sustancias similares. En casos de daño o degeneración testicular unilateral,
algunos han recomendado la extirpación del testículo afectado. El razonamiento detrás de esta
recomendación es que el tejido testicular dañado podría resultar en la producción de anticuerpos
anti-espermatozoides que hipotéticamente podrían afectar adversamente a los espermatozoides
producidos por los testículos normales (Zhang et al., 1990). Además, la extirpación de un testículo
a menudo da como resultado la hipertrofia del testículo restante y un aumento resultante en el
número de espermatozoides. Sin embargo, es muy probable que esta hipertrofia compensadora se
produzca solo en un testículo normal. Si un testículo que ya está en camino a la degeneración
sufriría hipertrofia compensatoria es muy discutible y parece poco probable. Por lo tanto, la
práctica de la castración unilateral es cuestionable cuando existe la sospecha de que el testículo
restante puede ser anormal. Además, existen numerosos casos de fertilidad aceptable en
sementales con DT unilateral en los que no se extirpó el testículo afectado (Blanchard y Varner,
1993). En razas que permiten la inseminación artificial, se recomienda la criopreservación de
semen para cualquier semental genéticamente valioso cuando el animal está en la cima de su
fertilidad. Esto proporciona una "póliza de seguro" genética contra la pérdida reproductiva en caso
de que la fertilidad de un semental se vea comprometida por la ITD a medida que envejece. A
pesar de los intentos de desarrollar una "cura para el envejecimiento" en los testículos,
actualmente no existe un método probado que mitigue los efectos del envejecimiento en los
testículos del caballo. Por lo tanto, solo nos queda la opción de manejar nuestro camino a través
del deterioro asociado en la función testicular. En primer lugar, el veterinario debe determinar la
cantidad de espermatozoides morfológicamente normales y progresivamente móviles que el
semental es capaz de producir mientras se encuentra en un programa de reproducción similar al
que se espera durante la temporada de reproducción. El libro de yeguas del semental debe
ajustarse en consecuencia para garantizar que el número de espermatozoides del semental no se
agote hasta el punto de que las yeguas reciban una dosis de reproducción inferior a la óptima. Si
es posible, se deben controlar el número de espermatozoides y las características del semen de
cada eyaculado. La adición de un diluyente de semen al eyaculado puede ayudar a mejorar la
longevidad de la motilidad de los espermatozoides en algunos casos. Para los sementales que se
crían por cobertura natural, la cría de refuerzo es muy recomendable para maximizar el número
de s esperma entregado a la yegua (Blanchard et al., 2006). El uso de la cría de refuerzo de cuerno
profundo puede aumentar aún más las posibilidades de embarazo cuando se trata de una
pequeña cantidad de espermatozoides. El semen de sementales con DT relacionada con la edad
debe manipularse con especial cuidado. Las yeguas deben ser inseminadas lo más rápido posible
después de la recolección de semen y cerca de la ovulación. En muchos casos de DT moderada a
severa, la longevidad de la motilidad de los espermatozoides se mantiene mal y las tasas de
preñez pueden reducirse significativamente en yeguas criadas con semen almacenado refrigerado.
Si este es el caso, puede ser prudente suspender el uso de semen enviado y solo criar yeguas en el
sitio con semen fresco extendido o con cobertura natural. Las técnicas de procesamiento del
semen se pueden utilizar en un intento por mejorar las características del semen. Para sementales
con plasma seminal de mala calidad, la centrifugación del semen con extracción del plasma
seminal y la posterior resuspensión del sedimento de esperma en el diluyente de semen puede
aumentar la longevidad de los espermatozoides. En los casos en los que hay un alto porcentaje de
defectos morfológicos de los espermatozoides, la separación en gradiente de los espermatozoides
puede resultar en una dosis de inseminación de mayor calidad. Sin embargo, el número de
espermatozoides suele reducirse considerablemente. En nuestra clínica, recomendamos que se
realicen una o más pruebas de laboratorio de separación en gradiente antes de criar yeguas con
esperma separado en gradiente. Esto nos permite determinar si el proceso parece beneficiar las
características del semen de ese semental individual y determinar si es probable que la reducción
en el número total de espermatozoides sea compensada por estos beneficios. También se puede
utilizar un manejo más intensivo de la yegua para mejorar las tasas de preñez. Con un uso
prudente de los agentes de inducción de la ovulación, las yeguas se pueden criar de manera
confiable muy cerca del momento de la ovulación y, en casos extremos, dentro de las 6 h
posteriores a la ovulación, minimizando así el requisito de longevidad del esperma. El uso rutinario
de inseminación de bajo volumen y cuerno profundo puede aumentar las tasas de embarazo
cuando la cantidad de espermatozoides es limitada. Una última opción para el manejo es el uso de
técnicas de reproducción asistida como la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI).
ICSI permite la producción de descendientes incluso de sementales severamente oligospérmicos.
Sin embargo, el gasto es significativo y no todos los registros de razas aprueban esta técnica.

4. Investigaciones actuales sobre el envejecimiento en los testículos del semental

Hemos utilizado un modelo de xenoinjerto de tejido testicular para demostrar que restaurar el
testículo de semental envejecido y degenerado a un entorno extratesticular "joven" no produce
ninguna mejora en la función testicular. Esto, junto con estudios endocrinológicos anteriores, es
una fuerte evidencia de que el defecto primario en estos testículos envejecidos y degenerados se
encuentra dentro del testículo mismo, y no en el hipotálamo, la pituitaria o el ambiente
extratesticular (Turner et al., 2010a; Stewart y Roser , 1998). La naturaleza del defecto testicular es
casi con certeza compleja e implica cambios degenerativos que afectan a múltiples tipos de
células, así como a los factores que componen el nicho local de cada célula. Los datos del sistema
de modelo de ratón muestran que el envejecimiento tiene efectos adversos en la propia célula
madre espermatogonial (SCC) (Schmidt et al., 2011), y también en el nicho de SSC. El nicho
describe el microambiente local complejo y en constante cambio de la SSC y está compuesto por
una variedad de componentes celulares y moleculares. En los roedores, el nicho está influenciado
en parte por la presencia de vasos sanguíneos intersticiales, por la información de las células de
Leydig y las células de Sertoli, y por una serie de otros factores que aún no se han determinado
(Oatley et al., 2009). . Estudios de Ryu et al. han demostrado que, si las SSC murinas se
mantuvieran en un entorno de nicho somático `` joven '' mediante un retransplante en serie en
animales jóvenes, su función (incluida la autorrenovación y la diferenciación potencial a través de
la espermatogénesis) podría mantenerse mucho más allá de lo que se definiría como vejez en el
donante (Ryu et al., 2006). Estos estudios muestran que, si se pueden evitar los efectos del
envejecimiento en el nicho, el SSC puede continuar funcionando normalmente mucho más allá de
la vida útil natural del huésped. Los estudios sobre el envejecimiento testicular en el caballo son
mucho más difíciles, ya que debemos lidiar con cantidades significativas de variación genética,
diferencias en el manejo, una vida útil naturalmente larga y una escasez de herramientas
moleculares. Nuevamente recurrimos a un modelo de xenoinjerto de tejido testicular como un
método burdo para determinar si la exposición del tejido testicular envejecido (incluidas las SSC
envejecidas) al tejido testicular joven podría mejorar la función del tejido envejecido y las SSC
envejecidas asociadas. Pequeños fragmentos (1-2 mm3) de equinos jóvenes normales Se
injertaron tejido testicular y tejido testicular equino degenerado envejecido bajo la piel del dorso
de ratones macho NCR nu / nu anestesiados, castrados, a través de pequeñas incisiones como se
describió anteriormente (Honaramooz et al., 2002). En los ratones de control, los injertos jóvenes
y envejecidos se colocaron de tal manera que no hubo contacto físico entre los injertos. En los
ratones experimentales, los injertos jóvenes y envejecidos se colocaron en estrecho contacto
físico. La ubicación exacta de cada injerto se registró cuidadosamente para poder determinar la
identidad de cada pieza de tejido en el momento de la recuperación del injerto. Los injertos se
incubaron en los hospedadores de ratón durante 3 a 6 meses. En el momento de la recuperación
del injerto, los ratones huéspedes fueron sacrificados por inhalación de CO2. El tejido de la piel
que contenía los injertos se diseccionó y los injertos de todos los experimentos se fijaron, se
incrustaron en parafina y se procesaron para tinción H&E o para inmunofluorescencia indirecta.
Encontramos que los injertos de testículos envejecidos y degenerados que estaban en contacto
físico con tejido testicular joven contenían más túbulos seminíferos por unidad de peso que los
injertos de testículos envejecidos y degenerados que no estaban en contacto físico con tejido
testicular joven. Además, la inmunofluorescencia indirecta usando un anticuerpo marcador para
espermatogonias mostró que los túbulos seminíferos en los injertos envejecidos en contacto con
tejido testicular joven contenían más células espermatogénicas por túbulo que los injertos
envejecidos que no estaban en contacto con tejido joven (Fig.3)
Fig. 3. El contacto físico con el tejido testicular joven mejora la condición del tejido testicular
envejecido y degenerado y favorece la supervivencia de las espermatogonias envejecidas. (A) y
(B): Diagramas esquemáticos que ilustran el modelo experimental. Se injertaron pequeños trozos
de tejido testicular joven y sano (Y) y tejido testicular degenerado (TD) envejecido bajo la piel de la
espalda de ratones inmunodeprimidos. En los ratones de control (A), los trozos de tejido joven y
degenerado se separaron físicamente. En los ratones experimentales (B), los trozos de tejido joven
y degenerado se injertaron en estrecho contacto físico. Los paneles (C) y (D) muestran el aspecto
histológico de los injertos TD después de varios meses de incubación en los ratones hospedadores.
En los injertos TD que no estaban en contacto físico con tejido joven, la degeneración había
progresado de tal manera que quedaban muy pocos túbulos seminíferos (C). Además, un
marcador de anticuerpos fluorescentes para espermatogonias (anti-PGP 9.5) no identificó
espermatogonias (E). Por el contrario, los injertos TD que estaban en contacto con tejido joven
contenían numerosos túbulos seminíferos (D). Aunque la mayoría de estos túbulos estaban
degenerados, las espermatogonias todavía estaban presentes a lo largo de la membrana basal (F).
Concluimos que el contacto con tejido testicular joven (es decir, un intento muy burdo de
reconstruir un entorno de células somáticas jóvenes) apoya la supervivencia de espermatogonias
envejecidas en el testículo equino. Estos hallazgos sugieren que el propio SSC puede ser
relativamente resistente al envejecimiento y plantea la posibilidad de que se puedan desarrollar
terapias basadas en células como un medio para mitigar los efectos adversos del envejecimiento
sobre la espermatogénesis en el testículo equino. Aunque las terapias basadas en células pueden
proporcionar resultados transformadores para algunos procesos patológicos, estas terapias están
plagadas de dificultades que incluyen el aislamiento y el almacenamiento de células terapéuticas,
técnicas de administración celular complicadas y a veces invasivas y el mantenimiento de la
población de células terapéuticas en el receptor (rechazo inmunológico, muerte celular, etc.). Si se
pudieran identificar y aislar las proteínas específicas que son responsables del efecto beneficioso
de la población de células jóvenes en los testículos envejecidos, es posible avanzar hacia un
método de tratamiento más estándar que pueda involucrar, por ejemplo, proteínas sistémicas
periódicas u hormonas. administración. Además de conducir a posibles enfoques terapéuticos
para la DT, estos estudios también nos llevan a una mejor comprensión de la fisiopatología de la
DT y, por lo tanto, proporcionan medios para identificar la afección en sus primeras etapas y / o
desarrollar métodos para prevenir su aparición y progresión. En este sentido, recientemente
aplicamos la tecnología de perfiles de transcripción de ARN al estudio de la TD relacionada con la
edad en el caballo. La secuenciación de ARN (RNA-seq) es una técnica de perfil de transcriptoma
completo que ofrece numerosas ventajas sobre la tecnología de microarrays (t Hoen et al., 2008).
Mediante la secuenciación directa de cDNA amplificado transcrito de forma inversa, RNA-seq
representa la próxima generación de transcriptómica. A diferencia de las micromatrices, RNA-seq
no está limitado por la calidad de la micromatriz, la capacidad de cada sonda para hibridar con
secuencias en la micromatriz o el número de secuencias en la micromatriz. Estas ventajas son
particularmente notables en el caballo donde, según nuestro conocimiento, solo hay disponibles 2
microarrays patentados, y uno de estos arreglos se basa en el genoma de una yegua, un factor
limitante significativo cuando se estudia la infertilidad masculina, ya que se encuentran muchos
genes de fertilidad masculina en el cromosoma Y Al comparar el transcriptoma de tejido testicular
de semental adulto sano con el del tejido testicular de semental envejecido y degenerado,
identificamos varios genes individuales y vías genéticas que parecen estar alteradas en los
testículos del caballo envejecido. Varias de estas vías son objetivos prometedores para terapias
que podrían retrasar la progresión de la enfermedad. En este sentido, nuestros estudios futuros
estarán dirigidos a modificar estas vías alteradas y determinar si estos tratamientos prolongan o
no la función testicular robusta en sementales envejecidos.

Funding Portions of this work were supported by the Grayson Jockey Club Research Foundation,
Inc. [grant number 30014629]