Tinción de May-Grünwald Giemsa

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La tinción de May-Grünwald Giemsa (MGG) es una técnica
de tinción derivada del método de Romanowsky que se utiliza principalmente
para el coloreo de muestras de frotis sanguíneos o extendidos de médula ósea.
Como el resto de las coloraciones basadas en la técnica de Romanowsky, la
técnica MGG permite diferenciar cualitativa y cuantitativamente los principales
elementos formes de la sangre.
En los laboratorios clínicos de hematología resulta especialmente útil para la
demostración de alteraciones en el número, proporción y morfología de las
células sanguíneas. También puede ser adaptada para su utilización como una
técnica de tinción clásica para cortes histológicos.

Índice

 1Principio de la coloración
 2Particularidades
 3Técnica
o 3.1Fijación
o 3.2Tinción con May-Grünwald
o 3.3Lavado y rehidratación
o 3.4Tinción con Giemsa
o 3.5Observación
 4Bibliografía
 5Enlaces externos

Principio de la coloración[editar]
Como su nombre lo indica, la técnica combina las técnicas de coloración
desarrolladas por May-Grünwald y Giemsa. Estas técnicas a su vez se basan
en el empleo de dos soluciones colorantes:

 La solución de May-Grünwald, que contiene el colorante

aniónico eosina y el colorante catiónico azul de metileno ambos disueltos
en metanol

 La solución de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una

serie de productos de la oxidación de este último tales como el azur A,
el azur B, el violeta de metilo y el azul de metilo.
Todos estos colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se
mantienen en solución de alcohol metílico, pero al añadir agua se ionizan y se
unen selectivamente a los constituyentes celulares precipitando como sales
insolubles.
Los componentes celulares de naturaleza aniónica (ácida) se unen
selectivamente a los tintes catiónicos tiñéndose en variados tonos de azul.
Estos componentes son llamados basófilos:
(ADN, mitocondrias, ribosomas y citoplasma de células ricas en ARN).
Los componentes celulares de naturaleza catiónica (básicos) se unen
selectivamente al tinte ácido eosina, tiñéndose en variados tonos de naranja y
rojo. A estos elementos se los denomina acidófilos o eosinófilos. Este es el
caso de la hemoglobina, y de las proteínas contenidas en las granulaciones de
los granulocitos eosinófilos.
Los componentes celulares que tienen afinidad por ambos tipos de colorantes
se denominan neutrófilos y se tiñen en variados tonos de violeta.
Resultado:

 Los núcleos aparecen en colores que van del color azul al púrpura-
negro.
 Los citoplasmas de las células maduras aparecen de un color violeta
muy pálido o marrón muy pálido.
 Los glóbulos rojos, ricos en hemoglobina aparecen de colores entre
rosados y beige.
 Los gránulos de los neutrófilos aparecen de colores entre violeta y
marrón.
 Los gránulos de los eosinófilos aparecen de color naranja.
 Los gránulos de los basófilos de color entre azul y negro.
 Los gránulos de los linfocitos grandes aparecen de color púrpura.
 Las células con gran producción de ARN (como linfocitos productores de
inmunoglobulinas y células inmaduras) presentan un citoplasma de color
azul intenso.
Cabe destacar que las coloraciones finales obtenidas son muy dependientes
del pH de las soluciones de tinción y de las soluciones de lavado, por lo que los
tonos pueden variar bastante, teniendo un aspecto más verdoso cuando el pH
final obtenido es cercano a 5 y un tono rojizo cuando el pH final es cercano a 9.
Para evitar estos efectos se suelen utilizar soluciones amortiguadoras de pH
neutro para preparar las soluciones de tinción y las soluciones de lavado.

Particularidades[editar]
Dos tipos de comportamiento tintorial coexisten en esta coloración: Por un lado
está el comportamiento ortocromático, en este caso el tinte conserva el color
cuando se fija al componente celular. Este es el caso del eosinato de metileno,
aquí el color naranja de la eosina se conserva y el color del azul de metileno se
conserva.
Por otro lado está el comportamiento metacromático, en este caso el tinte
cambia de color una vez unido al componente celular. Es lo que ocurre con los
derivados del azul de metileno. Los azure A y B originalmente de intenso color
azul se convierten en púrpuras cuando se unen a los componentes celulares
azurófilos.
Las diluciones de las soluciones de tinción y los lavados deberían hacerse con
una solución tamponada a pH 7,2-7,3 (pH próximo al fisiológico) para no
perturbar las afinidades de tinción de los constituyentes celulares.
Técnica[editar]
EL procedimiento descrito a continuación es simplemente a título informativo.
Debe ser adaptado de acuerdo a las especificaciones del fabricante de los
colorantes y a los resultados obtenidos.
Resumen del protocolo de tinción de Giemsa: - desparafinar los cortes si es
necesario y rehidratarlos - incubar con solución de May-Grunwald durante 5-7
min - lavar con PBS - incubar con solución de Giemsa durante 10-15 min - lavar
con PBS e incubar en PBS durante 5 min - aclarar con agua y secar al aire -
aclarar con xileno o similar y montar

Fijación[editar]
El primer paso es fijar las células sanguíneas presentes en el frotis. La fijación
es un proceso fisicoquímico que altera las propiedades químicas de las
proteínas que forman las células, para que luego resistan el proceso de teñido
preservando la estructura que tenían cuando estaban vivas. En la técnica de
May-Grünwald/Giemsa la fijación la hace el metanol de la solución de May-
Grünwald. Para fijar se colocan los vidrios con los frotis horizontalmente en una
parrilla o en una caja de coloración y se vierten unas 20 gotas de solución
sobre cada uno hasta que los frotis queden completamente cubiertos. Se
mantienen así durante 2 o 3 minutos para que el metanol fije las células.
Tinción con May-Grünwald[editar]
Simultáneamente al proceso de fijación, tanto el azul de metileno como la
eosina habrán permeado todos los compartimientos celulares, pero los
colorantes no se podrán unir a sus respectivas estructuras afines hasta que la
solución se convierta en polar, esto se consigue agregando lentamente agua,
permitiendo así que los colorantes precipiten selectivamente.
Lavado y rehidratación[editar]
La solución de Giemsa es mucho más polar que la solución de May-Grünwald,
y para permitir que actúe correctamente es conveniente que el preparado se
encuentre convenientemente rehidratado, luego de haber añadido el agua a la
primera solución se lavan los vidrios con un chorro de agua tamponada y luego
se cubren con la misma solución de lavado durante un minuto, para permitir
una correcta rehidratación.
Tinción con Giemsa[editar]
La solución de Giemsa es inestable una vez diluida en agua, por lo que
conviene prepararla inmediatamente antes de su uso, usualmente se prepara
haciendo una dilución 1:10 de la solución comercial en agua destilada
tamponada con fosfatos a pH 7,2. Se cubren los portaobjetos con la solución
de Giemsa recién preparada y se dejan teñir por espacio de 15 a 20 minutos,
transcurridos los cuales se retira el colorante se lavan los portaobjetos con la
solución tamponada y se dejan escurrir en posición vertical hasta que estén
completamente secos.
Observación[editar]
Se hace en microscopio óptico de gran aumento con objetivo de inmersión en
aceite, esto permite ver detalles de la cromatina de los núcleos y dilucidar
correctamente las estructuras observadas.

Granulocitos Granulocito basófilo Monocito Linfocito

Granulocitos neutrófilo (a
Granulocito basófilo
rriba) y eosinófilo (abajo) Monocito Linfocito

Bibliografía[editar]
 ARP, ed. (1992). Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de
las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP).

Enlaces externos[editar]
 Método de May Grünwald Giemsa
 Tinción de las extensiones de sangre periférica
 Imagen de una tinción de May Grünwald-Giemsa de neutrófilos
 Imagen de una tinción de May Grünwald-Giemsa de sangre periférica