Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Universidad del Perú. Decana de América

Escuela de Estudios Generales

Área de Ingeniería

BIOLOGÍA PARA CIENCIAS E INGENIERÍA

Práctica de Laboratorio:
Inmovilización de la amilasa para la obtención de glucosa

Sección 9

NÚMERO DE GRUPO : 5

Integrantes:

Jahiro Ronald Baldarrago Perez

Gonzalo Fernandez Malca

Nataly Andrea Rojas Barnett

Cristian Enver Sanchez Quispitupa

Adriana Raida Vasquez Utani

Margarita del Pilar Vila Marin

DOCENTE: ​Angela Renne Arias Ramirez

 INTRODUCCIÓN

En la actualidad, son numerosos los procesos biotecnológicos que se llevan a cabo mediante

la utilización de células o de sus enzimas aisladas, siendo éste un campo con grandes

perspectivas a futuro. Una de las aplicaciones en procesos industriales de la biotecnología es

el uso de enzimas para la obtención de productos químicos, farmacéuticos o alimentarios.

Entre las muchas ventajas de su uso está la gran actividad catalítica, a temperatura ambiente y

presión atmosférica, y gran especificidad de sustrato. Por otro lado, la inestabilidad que

presentan en los procesos químicos industriales y la dificultad de poder separarse de sustratos

y productos, todos solubles en agua, hacen que las enzimas no se puedan reutilizar. Entonces,

se ideó una alternativa, el método de inmovilizarlas a un soporte inerte para hacer factible que

un proceso biotecnológico sea rentable . Se denomina una “inmovilización de enzimas” al

confinamiento físico de una enzima o célula en una determinada región del espacio, de

manera que su actividad catalítica se retenga, y pueda ser reutilizada, posteriormente

simplificado del término “biocatalizadores inmovilizados” a enzimas, células enteras u

orgánulos celulares (o bien combinaciones de ellos) que se encuentran en un estado tal que se

permite su reutilización . Las ventajas desde el punto de vista aplicado son el gran aumento

de la estabilidad de la enzima o célula inmovilizada, el incremento de la productividad

enzimática por la capacidad de reutilización, la facilidad de recuperación y purificación de los

productos, que se puede elegir entre una gran variedad de diseños ingenieriles, incluso que

aumenta la facilidad de operación y control del proceso, al trabajar en condiciones más

suaves. Las desventajas son que, generalmente, se disminuye la actividad enzimática por la

alteración de la enzima respecto de su estado nativo, se aumentan los problemas difusionales,

se aumenta el costo del proceso, y el intervalo de pH de trabajo puede ser distinto al del

biocatalizador nativo.
 MARCO TEÓRICO

● Enzima: ​Es un catalizador biológico, su objetivo es aumentar la velocidad con

que ocurre una reacción, existen muchas enzimas que son codificadas por el

genoma para producir proteínas o ARN que aceleran las reacciones químicas,

entre otras funciones dentro de una célula.

● Enzima Inmovilizada​: ​Es una ​enzima que ha sido fijada en un material inerte,

insoluble. Son sometidas a procesos y estos pueden incrementar la resistencia a

cambios en las condiciones en las que se encuentra el preparado, como el pH y

temperatura, también permite que las enzimas sean contenidas en un soporte

durante la reacción, luego de la cual son fácilmente separadas de los productos

y pueden ser reutilizadas.

● Amilasa: Es una enzima, tiene como función catalizar la digestión de los

hidratos de carbono, entendido como una reacción de hidrólisis para digerir el

almidón o el glucógeno, y formar azúcares simples más sencillos.en otras

palabras se encarga de ayudar a digerir los carbohidratos y se produce en el

páncreas y en las glándulas salivales.

 OBJETIVOS

● Obtener la glucosa a través de la inmovilización de la enzima amilasa.

● Comprender la importancia del uso de las enzimas inmovilizadas para mejorar el

rendimiento de transformación enzimáticas no solo en alimentos sino también en otros

compuestos bioactivos.

● Reconocer e identificar algunas características del uso de soportes empleados para la

inmovilización de enzimas.

● Comprobar la actividad de la enzima sobre el sustrato.

● Elaborar un preparado a base de enzimas inmovilizadas por atrapamiento en gel de

agar.

● Establecer las condiciones experimentales óptimas para lograr la estabilidad de las

enzimas en el proceso de inmovilización.

● Determinar y comparar las condiciones óptimas de actividad de las enzimas libres e

inmovilizadas a diferente pH y temperatura.

 MATERIALES

Experimento 1: Inmovilización de la amilasa para la obtención de la glucosa:

❏ Gelatina

❏ Aceite helado

❏ Jeringas de 10mL

❏ Cocina

❏ Baño Maria aprox. 46°C

❏ Frascos de vidrio transparente

❏ Colador

❏ Agua destilada o agua de grifo

❏ Saliva recolectada

Experimento 2: Evaluación de la acción de la amilasa inmovilizada y no inmovilizada en

la producción de glucosa:

❏ Agua destilada/de grifo

❏ Aprox. 15 ml de solución de maicena (media cucharadita pequeña de maizena

disuelto en medio vaso de agua)

❏ Tintura de yodo o alcohol yodado

 PROCEDIMIENTO

Experimento 1: Inmovilización de la amilasa para la obtención de la glucosa:

● (I) Recolectar en un vaso aprox. 3 ml de saliva humana.

● (II) Preparar una suspensión de gelatina en agua aprox. 100 ml y disolver

completamente en la cocina, dejar enfriar hasta aprox. 46°C.

● Mezclar I y II en un solo recipiente y colocar en baño Maria.

● Disponer de 2 recipientes o vasos con alcohol helado (colocado previamente 24 horas

antes del experimento).

● Con una jeringa de 10 ml cargar la mezcla del agar con saliva (no usar la aguja que

viene con la jeringa , usar solamente la jeringa) y dejar caer gota a gota en forma

constante y rápida el contenido de la jeringa sobre el aceite helado (250 ml menos

dependiendo del recipiente) contenido en un vaso.

● Observará que se forman pequeñas esferitas.

● Luego, pasar todo el contenido del vaso a través de un colador.

● Lavar con agua las perlas obtenidas en el colador por 3 veces consecutivas.

● Colocar las perlas en un vaso y conservar a 4°C para su posterior uso.

Experimento 2: Evaluación de la acción de la amilasa inmovilizada y no inmovilizada en

la producción de glucosa:

● Disponer de 3 vasos diferentes y rotular como C (control), EI (enzima inmovilizada),

EL (enzima libre).

● En C colocar 15 ml de solución de maizena más 3 ml de agua.

● En EI colocar 15 ml de solución de maizena más la totalidad de perlas obtenidas en el

paso anterior (Inmovilización de amilasa) más 3 ml de agua destilada.

● En EL colocar 15 ml de solución de maizena más 3 ml de saliva.

● Incubar aprox. a 37°C por 30 min en baño Maria.

● Transcurrido ese tiempo extraer 2 mL de cada tubo y colocarlo en otros tubos

rotulados correspondientes.

● Agregar de 3 a 4 gotas de lugol a cada tubo.

● Observar el tipo de cambio en la intensidad de color.

 RESULTADOS

En el primer experimento, se obtiene unas esferas de cristal transparente las cuales son

reservadas para ser usadas en el segundo experimento.En este, son agregadas en el envase

que le pusimos el nombre de Enzima Inmovilizada (EI). Luego, pasar media hora a 37° en

baño maría en conjunto con los materiales de la saliva y maicena distribuidos en los

diferentes recipientes según el procedimiento. Agregamos el alcohol yodado, esperamos unos

instantes, y se puede observar cómo cambia de color cada uno. Al que le pusimos de nombre

“Control” se quedó de color morado, el de “Enzima Inmovilizada” cambio a color rosa y por

último el de “Enzima Libre” se torno de un color morado claro como se puede observar en la

última imagen.
Tratamientos Observaciones caracteristicas respecto al cambio de color

Control morado oscuro

EI rosado claro

EL morado claro
 ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En el primer experimento se usa la enzima de amilasa la cual se extrae de la saliva y para su

obtención en gel usamos la gelatina y en el segundo experimento de se tienen 3 recipientes,

en de control 15ml de solución de maizena más 3ml de agua destilada por lo que las enzimas

no actúan con la maicena y este recipiente queda de color morado, en el recipiente de Enzima

Inmovilizada se le agrega 15ml de solución de maizena, las perlas obtenidas del anterior

experimento y 3ml de agua destilada lo que resulta un color rosado puesto que las enzimas

“amilasa” han pasado por un proceso , por ultimo en el recipiente de Enzima Libre le

agregamos 15ml de solución de maizena y 3ml de saliva esto hizo que la enzima “amilasa”

no fue procesada por lo tanto no actuo como la Enzima Inmovilizada con el almidón

quedando de color morado claro.

 CONCLUSIONES

El uso y la aplicación de enzimas inmovilizadas en diferentes áreas, es muy extenso y han

sido de gran impacto por que han minimizado los costes de operación y por la facilidad en la

recuperación de la enzima y separación del producto. Esto se debe principalmente a la

reutilización del biocatalizador inmovilizado, lo cual permite que a nivel industrial y otras

áreas de aplicación sea considerado como una tecnología rentable.

 CUESTIONARIO

1. Explique ¿Por qué se utilizó la temperatura de 37°C para la actividad de

la amilasa salival? ¿Qué ocurriría si utiliza 30 o 42°C?

Puesto que la temperatura altera la actividad de estas, por lo tanto no

tendríamos el resultado esperado de los colores morado, morado claro y rosado,
entonces el color variaría .

2. ¿Qué factores afectarían a la actividad de la enzima inmovilizada?

El factor que interviene en mayor proporción a la actividad de la enzima

inmovilizada es la temperatura, esta varía dependiendo de la enzima y para que
actúe correctamente debe estar a la temperatura , otro factor que interviene es el
ph y también este depende de acuerdo a la enzima, como último factor tenemos
al tiempo que influye en el proceso.

3. Nombre algunos alimentos/ productos en casa obtenidos por biotecnología.

- Detergentes: ​Desarrollando enzimas que remueven manchas sin el uso de

fosfatos, esto permitió reemplazar los componentes más contaminantes de
los detergentes y en vez de eso usa aditivos biológicos; mejorando así los
resultados para los consumidores y en la actualidad existen los
detergentes biodegradables los cuales usan enzimas en su formulación y
la eliminación de fosfatos y otros componentes que son difíciles de
degradar de forma natural.

- Alimentos con probióticos: ​Se le agrega un microorganismo vivo al

alimento para incrementar las propiedades nutricionales de la comida

- Cosméticos: ​En estos años hubo un crecimiento en el uso de enzimas

como ingrediente agregado en diferentes cremas y cosméticos, porque se
han encontrado enzimas que previenen daño a la piel protegiéndola de la
contaminación y de los rayos ultravioletas, estas enzimas trabajan en
conjunto con ingredientes químicos comunes en los productos de uso
personal como el polietilenglicol que se obtienen del petróleo que
últimamente han sido reemplazados por 1,3-propanodiol, que cumple las
mismas funciones pero estas son amigables con el ambiente.
- Cerveza y vino: ​Se produce alcohol a través de la fermentación y
actualmente con la biología sintética se agregan nuevas características a
las bebidas usando organismos modificados genéticamente, por ejemplo,
para añadir sabores como café o chocolate; o colores. Por ejemplo
tenemos la cerveza fluorescente que creó Scintia, para la exposición
Lúcida el año 2018 o las cervezas de Medio Oriente con sabores y colores
diferentes.
 REFERENCIAS

● “ELABORACIÓN DE UN PREPARADO A BASE DE ENZIMAS

INMOVILIZADAS POR ATRAPAMIENTO EN GEL DE AGAR, PAR A EL
TRATAMIENTO DE DESECHOS ORGÁNICOS PRESENTES EN AGUAS
RESIDUALES ” ​http://ri.ues.edu.sv/id/eprint/6058/1/10102929.pdf

● INMOVILIZACION DE ENZIMAS.
https://webs.ucm.es/info/btg/personales/jmsanchez/00_INMOVILIZACION_Introduc
cion.pdf

● NUEVOS MÉTODOS Y SOPORTES PARA LA INMOVILIZACIÓN DE

ENZIMAS.
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/147843/Cebri%C3%A1n%20-%20Nuev
os%20m%C3%A9todos%20y%20soportes%20para%20la%20inmovilizaci%C3%B3
n%20de%20enzimas.pdf?sequence=1

● APLICACIONES DE LAS ENZIMAS INMOVILIZADAS.

http://www.actaquimicamexicana.uadec.mx/articulos/AQM11/11-1AplicacionEnzima
s.pdf

● ENZIMOLOGÍA – INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS.

https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/5983/mod_resource/content/0/I
NMOVILIZACION_DE_ENZIMAS.pdf