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negativa. Tanto en la parte M como en la G, la lnea control consiste en un anticuerpo secundario contra una de las protenas del conjugado.

VIRAPID MONO M&G

VR001: Test inmunocromatogrfico para la deteccin cualitativa de los marcadores del virus Epstein-Barr (EBV) en suero/plasma humano. 25 tests. INTRODUCCIN: El VIRAPID MONO M&G es un inmunoensayo para la deteccin cualitativa de cuatro marcadores serolgicos del virus de Epstein-Barr (EBV), dos de tipo IgM, VCA y heterfilos y dos de IgG, VCA y EBNA. Este test es para uso profesional y ayuda en el diagnstico de la mononucleosis infecciosa en muestras de suero y plasma. El virus de Epstein-Barr (EBV) pertenece a la familia herpesvirus y es uno de los virus ms comunes en humanos. El virus est presente en todo el mundo y se estima que un 95% de los adultos de edad comprendidas entre los 35 y 40 aos han sido infectados en algn momento de su vida. La mononucleosis infecciosa es la enfermedad ms comn provocada por el virus de Epstein-Barr y puede producir fiebre, adenopatas, esplenomegalia y faringitis. Algunos casos pueden ser provocados por citomegalovirus, Toxoplasma gondii, adenovirus, etc. EBV produce adems sndromes proliferativos en inmunodeprimidos y la infeccin por EBV se asocia a la patognesis del linfoma de Burkitt y del carcinoma de nasofaringe. Para la deteccin de Epstein-Barr, se pueden medir anticuerpos frente varios complejos de antgenos. Estos son: antgeno de la cpside (VCA), antgeno temprano (EA) y antgeno del ncleo (EBNA). La presencia de anticuerpos IgM frente a VCA y la ausencia de anticuerpos a EBNA son indicativos de una infeccin primaria por EBV. El incremento o altos niveles de anticuerpos IgG frente a VCA y la ausencia de respuesta inmune frente a EBNA despus de al menos 4 semanas de enfermedad tambin sugiere una infeccin primaria por EBV. Adems, el 80% de los pacientes con una infeccin activa de EBV producen anticuerpos frente a EA. La presencia simultnea de anticuerpos IgG frente a VCA y a EBNA es indicativa de una infeccin pasada (anterior a 4-6 meses o incluso aos). Dado que el 95% de los adultos ha tenido contacto previo con EBV, la mayora de los adultos presentar anticuerpos como seal de infecciones pasadas. Un nivel elevado de anticuerpos puede estar presente durante aos y no ser necesariamente indicador de infeccin reciente. Se ha descrito que en los sueros de pacientes de mononucleosis infecciosas aparecen anticuerpos frente a eritrocitos de otras especies animales, llamados anticuerpos heterfilos. Las protenas responsables de esta aglutinacin son glicoprotenas procedentes de membranas eritrocitarias denominadas antgeno de Paul-Bunnell. Estos anticuerpos se desarrollan en el 80-85% de los pacientes adultos y adolescentes, alcanzan valores altos en el primer mes de la infeccin y su deteccin tiene un alto valor diagnstico. FUNDAMENTO DEL MTODO: Cuando se aade la muestra en cada uno de los pocillos del doble casete, junto con la solucin de revelado (VIRCELL DEVELOPER SOLUTION), el oro coloidal se solubiliza y se produce la primera reaccin inmunolgica entre los anticuerpos especficos del suero/plasma con la protena que lleva las partculas de oro. En la parte M hay dos conjugados, uno con antgeno de Paul-Bunnell (purificado a partir de eritrocitos bovinos) y otro con EBV p18. Dichas protenas reconocen los anticuerpos heterfilos de Paul-Bunnell (PB HA) y anticuerpos contra la cpside del EBV respectivamente. En la parte G slo hay un conjugado, que est preparado con un anticuerpo secundario anti IgG humano. Tras la primera reaccin, los complejos migran por la membrana hasta las correspondientes lneas de reaccin (Lneas test). En el ensayo M, la primera corresponde a los anticuerpos IgM de VCA y contiene anti IgM humana. La segunda lnea test es de nuevo antgeno de Paul-Bunnell. En la parte G, las dos lneas son EBV p18 y EBNA respectivamente. En cada una de las tiras se incluye una lnea control, cuya misin es la de validar el ensayo. Siempre tiene que aparecer, aunque la muestra sea

Analito a detectar

Pad de conjugado Flujo

Lnea test

Lnea control

Pad de muestra Membrana de nitrocelulosa Pad absorbente

CARACTERSTICAS: El kit VIRAPID MONO M&G detecta en un nico ensayo los 4 marcadores serolgicos ms importantes usados para el diagnstico de la mononucleosis infecciosa causada por EBV. El test se realiza en pocos minutos con la ayuda de una micropipeta y un cronmetro y puede ser ledo visualmente. Recomendamos leer atentamente el apartado de Recomendaciones y precauciones. CONTENIDO DEL KIT: 1 VIRCELL MONO M&G CASSETTE: 25 casetes para la deteccin especfica de los marcadores del virus Epstein-Barr (EBV). 2 VIRCELL MONO M&G DEVELOPER SOLUTION: 4 ml de solucin tamponada. Contiene azida sdica. Conservar a 2-30C y comprobar la fecha de caducidad. Material necesario no contenido en el kit: Micropipetas automticas y sus puntas correspondientes Cronmetro CONSERVACIN: Conservar a temperatura ambiente o refrigerado, 2 a 30C. NO CONGELAR. No utilizar los componentes del kit despus de la fecha de caducidad. La caducidad indicada ser vlida siempre que los componentes se mantengan cerrados y conservados entre 2 y 30C. ESTABILIDAD DE LOS COMPONENTES UNA VEZ ABIERTOS: COMPONENTE VIRCELL CASSETTE Resto de componentes ESTABILIDAD Una vez abierto usar en la siguiente hora Almacenar a 2-30C y usar hasta su fecha de caducidad

ESTABILIDAD Y USO DE LOS REACTIVOS: El kit es estable hasta su fecha de caducidad a 2-30C. Usar todos los reactivos en condiciones aspticas para contaminaciones microbianas.

evitar

VIRCELL, S.L. no se responsabiliza de la inadecuada utilizacin de los reactivos contenidos en el kit. RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES: 1. Este producto es slo para diagnstico in vitro y est destinado al uso por personal sanitario cualificado.

PRODUCTO PARA DIAGNSTICO IN VITRO

Fabricante: VIRCELL, S.L. Pza. Domnguez Ortiz 1. Polgono Industrial Dos de Octubre.18320 Santa Fe *GRANADA* SPAIN* Tel.+34.958.441264* Fax+34.958.510712

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Usar slo componentes del kit. No intercambiar VIRCELL CASSETTES y VIRCELL DEVELOPER SOLUTION entre lotes y equipos. Las muestras deben ser tratadas como si fuesen infecciosas, utilizando procedimientos de seguridad del laboratorio. Usar guantes protectores desechables, batas de laboratorio, y proteccin ocular cuando se manipulen las muestras. Lavarse las manos adecuadamente tras la manipulacin de las muestras. No use el kit tras su fecha de caducidad. Todo el material no usado debe ser desechado de acuerdo a la regulacin aplicable. Los componentes de este equipo podrn contener sustancias de origen animal y/o humano. A pesar de no ser infeccioso, este material debera ser manipulado como potencialmente infeccioso. Todo el material debe ser manipulado y desechado como potencialmente infeccioso. Observe la regulacin local en materia de residuos clnicos. La solucin de revelado contiene azida sdica. La azida sdica puede reaccionar con las tuberas metlicas y dar lugar a componentes explosivos. Utilizar una gran cantidad de agua a la hora de tirar la solucin. Si el test o elementos del mismo (casetes o solucin de revelado) se almacenan en el refrigerador, han de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizados. Los casetes son estables en los sobres sin abrir hasta la fecha que marca en la etiqueta. No abrir el sobre hasta el momento de usarlos. Se pueden hacer varios test al mismo tiempo. Para evitar contaminaciones, no dejar que la punta del bote de la solucin de revelado toque el pocillo de la muestra. Es importante que el tamao de las gotas de la solucin de revelado sea correcto. Para esto apretar suavemente, dejando que el aire pase dentro de la botella entre cada dos muestras. Hay que evitar la utilizacin de muestras congeladas-descongeladas un gran nmero de veces, as como las que estn hemolizadas. Ambos casos pueden dar lugar a resultados errneos (prdida significativa de la seal) o fallos de lectura por falta de visibilidad.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS Y PROTOCOLO DE VALIDACIN POR EL USUARIO: Para llevar a cabo la lectura de los resultados y determinar la positividad de la muestra, se usa una tarjeta de intensidades, incluida en el kit. Dispone de cuatro niveles colorimtricos de respuesta, desde 0.5 hasta 3. Si la intensidad de la lnea test es menor de 0.5, la muestra se considera negativa, y positiva cuando la banda es igual o ms intensa que dicho valor. La lnea control siempre debe ser positiva y legible si el test ha sido realizado correctamente. Si esta lnea no aparece, el test deber ser considerado invlido. Si en la muestra hay anticuerpos especficos de cada conjugado, las lneas test correspondientes mostrarn una reaccin positiva. Un suero/plasma ser positivo cuando aparezca una o varias de las lneas test, ms la lnea control. La interpretacin de los resultados se realiza teniendo en cuenta la siguiente tabla:

Lnea control 2 Lnea test: PB HA 1a Lnea test: VCA IgM

a

Lnea control 2a Lnea test: EBNA IgG 1a Lnea test: VCA IgG

TOMA DE MUESTRA: La sangre debe extraerse en condiciones aspticas mediante tcnicas de venipuntura por personal experimentado. Se recomienda el uso de tcnicas estriles o aspticas para evitar la contaminacin de la muestra. Los sueros deben mantenerse refrigerados entre 2 y 8C si se van a procesar dentro de los 7 das siguientes a la toma, pero si el procesamiento se va a prolongar deben congelarse a -20C, evitando las congelaciones y descongelaciones innecesarias. No utilizar sueros hiperlipmicos, hemolizados o contaminados. Los sueros que presenten partculas pueden ser clarificados por centrifugacin. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS: Todos los reactivos suministrados estn listos para su uso.
+/-* + +/-

Deteccin anticuerpos Deteccin anticuerpos EBV IgM EBV IgG

Anticuerpos anti EBV VCAVCAEBNA IgM IgG -IgG -

PB HA -

Caso No infeccin

Interpretacin No ha existido contacto con EBV *Nios menores de 4 aos y el 20% de los adultos no desarrollan anticuerpos heterfilos. **En el caso de obtener solo el VCA-M positivo, se recomienda analizar una segunda muestra en 1-2 semanas. *** Cuando EBNA-G aparece positivo, se corresponde con una infeccin pasada latente sin evidencia de infeccin reciente. Cuando EBNA-G aparece negativo, puede ser un resultado falso negativo de EBNA-G y por lo tanto se recomienda comprobarlo por otras tcnicas. Infeccin pasada con niveles de IgM aun detectables Analizar una segunda muestra y/o utilizar otras tcnicas.

PROCEDIMIENTO DEL TEST 1.-Sacar todos los reactivos 1 hora antes de la realizacin del test para que alcancen la temperatura ambiente, evitando sacar el casete del envase. 2.-Abrir el sobre y colocar el casete 1 en una superficie plana. 3.-Con una micropipeta automtica, dosificar en cada pocillo 40 l de muestra, siempre empezando por el test M. Dejar que la gota se absorba. 4.-Aadir dos gotas de solucin de revelado 2 en cada pocillo. No esperar ms de cinco minutos tras adicionar la muestra. 5.-Leer los resultados entre 10 y 20 minutos. Descartar cualquier medida por encima de los 30 minutos. CONTROL DE CALIDAD INTERNO: Cada lote se somete a control de calidad interno antes de su liberacin asegurando el cumplimiento del protocolo de validacin por el usuario mediante especificaciones ms estrictas. Los resultados de control final de cada lote estn disponibles.

Infeccin reciente**

+/-***

Infeccin pasada

+/+

+ -

+ -

+ -

Infeccin primaria tarda No concluyente

Tabla. Interpretacin de los marcadores serolgicos de la mononucleosis debida al EBV. HA: Anticuerpos heterfilos.

Todos los resultados en los que aparezca la combinacin: EBNA-G positivo y VCA-G negativo, se considerarn invlidos y se debern repetir y/o utilizar otras tcnicas.

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LIMITACIONES DEL MTODO: 1.-Este mtodo est diseado para ser utilizado con suero/plasma humano. 2.-El uso de este kit requiere la cuidadosa lectura y comprensin del folleto de instrucciones. Es necesario seguir estrictamente el protocolo para obtener resultados fiables. 3.-El test no indica el lugar de la infeccin. No pretende sustituir al aislamiento. 4.-Como cualquier test diagnstico, los resultados deben ser valorados considerando todos los datos clnicos y de laboratorio. Los resultados del kit deben ser usados junto con la sintomatologa clnica y otros procedimientos diagnsticos. 5.-Los resultados del test son cualitativos. No existe correlacin entre la magnitud del resultado positivo y el ttulo de anticuerpos en la muestra. 6.-Este test ha sido verificado para ser usado con suero/plasma humano. No ha sido verificado con otros tipos de muestras. 7.-La fiabilidad de los resultados depender de una adecuada recogida de las muestras, transporte, almacenamiento y procedimientos de procesamiento. 8.-Un resultado negativo no excluye la posibilidad de infeccin. 9.-Un test positivo no excluye la posibilidad de que otros patgenos estn implicados en la enfermedad. 10.-Enfermos con infecciones por citomegalovirus pueden dar falsos positivos con virus Epstein-Barr. 11.-Los sueros de pacientes inmunodeprimidos pueden mostrar resultados falsamente negativos. 12.-Otras enfermedades (citomegalovirus, toxoplasmosis, adenovirus, rubeola) producen sndromes similares a la mononucleosis infecciosa y deben ser descartados en caso sospechoso de este sndrome. 13.-Las caractersticas de funcionamiento no han sido estudiadas en pacientes con carcinoma nasofarngeo, linfoma de Burkitt y otras enfermedades asociadas al EBV distintas a la mononucleosis infecciosa. 14.-Dado que el 95% de los adultos ha tenido contacto previo con EBV, la mayora de los adultos presentar anticuerpos como seal de infecciones pasadas. Un nivel elevado de anticuerpos puede estar presente durante aos y no ser necesariamente indicador de infeccin reciente. 15.-La ausencia de anticuerpos heterfilos es frecuente en nios. 16.-En algunos individuos, la presencia de anticuerpos heterfilos puede prolongarse durante meses. 17.-Algunos pacientes con infeccin pasada no presentan respuesta IgG frente a EBNA, sino slo frente a VCA. Para descartar que no correspondan a casos agudos, se recomienda usar tcnicas alternativas. PRESTACIONES SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD:

En todos los ensayos se observaron resultados similares. REACCIN CRUZADA E INTERFERENCIAS: Algunos sueros con ttulos altos de factor reumatoide pueden dar lugar a resultados falsos positivos en el test de IgM de VCA. Se han ensayado 46 muestras positivas de factor reumatoide (RF igual o superior a 2+ en un ltex comercial), de las cuales 19 dieron un falso positivo en VIRAPID VCA M. Todos los VCA M falsos positivos por RF fueron negativos en HA y positivos en la parte G del test, minimizando el riesgo de un diagnstico incorrecto. SMBOLOS UTILIZADOS EN EL PRODUCTO:
Producto para el diagnstico in vitro

Fecha de caducidad 30C Conservar entre 2-30C 2C

x

Contiene suficiente para <X> pruebas

Lote

Referencia (catlogo)

Consultar instrucciones de uso

Resultado negativo

Resultado positivo: intensidad baja

Resultado positivo: intensidad alta

Carta de interpretacin de VIRAPID

RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO DE TRABAJO Se ensayaron 390 muestras frente a un equipo ELISA comercial para la lnea VCA-G. Se ensayaron 390 muestras frente a un equipo ELISA comercial para la lnea EBNA-G. Se ensayaron 197 muestras frente a un equipo ELISA comercial para la lnea VCA-M. Se ensayaron 197 muestras frente a un equipo de aglutinacin comercial para la lnea PB. Se obtuvieron los siguientes resultados: Lneas test Sensibilidad (%) Especificidad (%) 91 97 VCA-M 94 99 PB 92 95 VCA-G 91 92 EBNA-G PRECISIN INTRAENSAYO: 3 muestras (una positiva cercana al lmite de deteccin para cada test y una negativa) fueron ensayadas 5 veces en un nico ensayo realizado por el mismo operador en condiciones de trabajo idnticas. En todos los ensayos se observaron resultados similares. PRECISIN INTERENSAYO:

Aadir 40 l de muestra en cada pocillo

Aadir 2 gotas de solucin de revelado

Resultados de la lectura

BIBLIOGRAFA: 1. Bruu, A. L., R. Hjetland, E. Holter, L. Mortensen, O. Natas, W. Petterson, A. G. Skar, T. Skarpaas, T. Tjade, and B. Asjo. 2000. Evaluation of 12 commercial tests for detection of Epstein-Barr virus- specific and heterophile antibodies. Clin Diagn Lab Immunol 7:451-6. 2. De Paschale, M., Agrappi, C., Manco, MT., Mirri, P., Vigan, EF. And Clerici, P. 2008. Seroepidemiology of EBV and interpretation of the isolated VCA IgG pattern. J. Med. Virol. Dec. 23; 81(2):325-331. 3. Debyser, Z., M. Reynders, P. Goubau, and J. Desmyter. 1997. Comparative evaluation of three ELISA techniques and an indirect

3 muestras (una positiva cercana al lmite de deteccin para cada test y una negativa) fueron ensayadas individualmente durante 3 das consecutivos por 2 operadores diferentes. PRODUCTO PARA DIAGNSTICO IN VITRO http://www.vircell.com

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immunofluorescence assay for the serological diagnosis of Epstein-Barr virus infection. Clin Diagn Virol 8:71-81. 4. Dolken, G., U. Weitzmann, C. Boldt, M. Bitzer, W. Brugger, and G. W. Lohr. 1984. Enzyme-linked immunosorbent assay for IgG antibodies to Epstein-Barr virus-associated early antigens and viral capsid antigen. J Immunol Methods 67:225-33. 5. Ho, D. W., P. R. Field, and A. L. Cunningham. 1989. Rapid diagnosis of acute Epstein-Barr virus infection by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for specific immunoglobulin M (IgM) antibody without rheumatoid factor and specific IgG interference. J Clin Microbiol 27:952-8. 6. Hofmann H, P.-K. Th. 1994. Diagnosis of EBV infection by means of ELISA. Serodiagn Immunother Infect Dis 6:133-139. 7. Luka, J., R. C. Chase, and G. R. Pearson. 1984. A sensitive enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) against the major EBV-associated antigens. I. Correlation between ELISA and immunofluorescence titers using purified antigens. J Immunol Methods 67:145-56. 8. Niederman, J. C. 1985. Chronicity of Epstein-Barr virus infection. Ann Intern Med 102:119-21. 9. Okano, M., G. M. Thiele, J. R. Davis, H. L. Grierson, and D. T. Purtilo. 1988. Epstein-Barr virus and human diseases: recent advances in diagnosis. Clin Microbiol Rev 1:300-12. 10. CDC (Nacional Center for Infectious Diseases). Epstein-Barr Virus and Infectious Mononucleosis. www.cdc.gov/ncidod/diseases/ebv.htm. 11. Valent, C. and Ench, Y. 1985. Epstein-Barr Virus Infectious Mononucleosis in Children. II. Heterophil Antibody and Viral-Specific Responses. Pediatric, vol. 75, n 6, June 1985, 1011-1019. Para cualquier aclaracin o consulta, contactar con: customerservice@vircell.com

REVISADO: Mayo-10

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