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 Guevara Guevara Juan Antonio 4QV1 Sección1

 Ibarra Manríquez Irving David. .


I N S T I T UT O P O L I T É C N I C O N A C I O N A L
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Bioquímica General

Reacciones enzimáticas de óxido-reducción Resultados y discusión

Introducción.
Tabla 1. Resultados de la actividad de la
El piruvato representa un punto de bifurcación deshidrogenasa láctica.
importante en el catabolismo de los carbohidratos. En Tubos
Tiempo
1 2 3 4 5
los tejidos animales en condiciones aerobias, el piruvato
0 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
es el resultado de la glicolisis y el NADH, formado por la 2 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
deshidrogenación del gliceraldehído 3 fosfato, es 4 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
reoxidado después a NAD+ por el O2. Sin embargo, en 6 min +++ ++++ ++++ ++++ ++++
condiciones anaerobias, en los músculos esqueléticos 8 min +++ ++++ ++++ ++++ ++++
10 min ++ ++++ ++++ ++++ ++++
muy activos o en las bacterias acido lácticas, el NADH
15 min + +++ +++ ++++ ++++
producido en la glicolisis no puede ser reoxidado por el 30 min + ++ ++ ++++ +++
O2, pero puede reoxidarse por el propio piruvato al
convertirse en lactato. (1)

La succinato deshidrogenasa cataliza la


deshidrogenación estereoespecífica de succinato a
fumarato. Esta enzima es inhibida fuertemente por el
malonato, un análogo estructural del succinato y un
ejemplo de un inhibidor competitivo. La
Figura 1. Actividad de la deshidrogenasa láctica del tubo 1 al
deshidrogenación del succinato produce FADH2 que 5 ordenados de izquierda a derecha.
debe reoxidarse antes que la succinato deshidrogenasa
puede emprender otro ciclo catalítico. La reoxidación del Los resultados obtenidos en esta prueba fueron los
FADH2 se produce cuando sus electrones se pasan a la esperados, el tubo 1 como se muestra en la imagen
cadena transportadora de electrones mitocondrial. (2) perdió su color casi por completo esto porque contenía
lo necesario para dar positivo en este proceso, contenía
La citocromo C oxidasa cataliza las oxidaciones de un el sustrato, la enzima, el catalizador que favorece la
electrón de cuatro moléculas de citocromo C reducidas reacción hacia el piruvato, la coenzima y el aceite vegetal
consecutivas y la reducción simultanea de cuatro para mantener una baja concentración de O2 , en cuanto
electrones de una molécula de O2. El núcleo de al tubo 2 se observó la reducción del azul de metileno en
complejo IV se compone de sus tres subunidades la parte del fondo del tubo, debido a que no se le agregó
mayores y más hidrófobas, I, II, III, que están codificados coenzima pero el extracto de la enzima pudo contener
por el DNA mitocondrial. (3) restos de coenzima por ser crudo y verse ligeramente
esa reducción en la zona donde hay menor
Objetivo.
concentración de O2. El tubo 3 al no ser añadido el
Determinar la actividad de algunas enzimas que sustrato se esperaría que no se observara reducción
participan en reacciones de óxido-reducción y discutir la pero al igual que con el tubo 2, el extracto es crudo por
importancia de los cofactores y el efecto de algunos lo tanto puede poseer trazas de lactato. Al tubo 4 no se
inhibidores le agregó enzima por lo cual la reacción no ocurrió y no
se observó reducción. En el último tubo se pueden
apreciar 2 fases, una zona parcialmente reducida (zona
inferior) y una zona totalmente oxidada. El resultado de
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estas fases es consecuencia de que no se le adicionó el de tipo competitivo sobre la enzima y por lo tanto no
catalizador que favorece la reacción hacia el piruvato por hubo reacción además de que se le suministró una
lo tanto la reacción al ser reversible se encuentra dirigida cantidad suficiente para que esto pasara. En los tubos 5,
tanto hacia piruvato como lactato. 6 y 7, cada uno contenía los mismos volúmenes, como la
única diferencia se hallaba el inhibidor, este encontraba
Tabla 2. Resultados de la actividad de la deshidrogenasa
en diferentes volúmenes siendo mayor en el tubo 5 y
succínica. menor en el tubo 6 y 7, además el tubo 7 contenía un
Tubos poco más de sustrato por lo cual se observó como la
Tiempo
1 2 3 4 5 6 7 reducción en estos tubos iba aumentando de acuerdo a
0 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
las cantidades de inhibidor adicionadas como se muestra
2 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
4 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ en la figura 2. Además en el último tubo puede
6 min ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ observarse que el inhibidor es de tipo competitivo
8 min +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ porque el resultado es casi igual que en el tubo 1 por lo
10 min + ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ que sabemos la velocidad máxima la misma.
15 min + ++++ ++++ ++++ +++ +++ ++
20 min + ++++ ++++ ++++ ++ + +

Tabla 3. Resultados de la actividad de la citocromo oxidasa.


Tubos
Tiempo
1 2 3 4 5 6 7 8
0 min +++ +++ + +++ ++ ++ + +
1 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +
2 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +
4 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +
Figura 2. Actividad de la deshidrogenasa succínica de los 6 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +
tubos 1 al 7 ordenados de izquierda a derecha. 8 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +
10 min ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++ + +

Al determinar la actividad de la deshidrogenasa succínica


a comparación de la determinación anterior en esta se
utilizó un inhibidor además de que no se le adicionó a los
tubos la coenzima debido a que esta se encuentra unida
a la enzima succinato deshidrogenasa. Figura 3. Actividad de la citocromo oxidasa de los tubos 1 al 8
ordenados de izquierda a derecha.
En el tubo 1 se observa reducción total del azul de
metileno porque contiene el sustrato, la enzima y está
Al realizar esta prueba al no seguirse las instrucciones
sellado con aceite vegetal y al no contener inhibidor la
como se debía se obtuvieron resultados diferentes pero
reacción se favoreció a la formación de fumarato. En
correspondientes a lo adicionado a cada tubo. A todos
cambio al tubo 2 no se le agregó enzima por lo que la
los tubos se les añadió enzima entonces no
reacción no se llevó a cabo. Al tubo 3 no se le agregó el
proporcionaron las lecturas deseadas, los tubos 2, 6 y 8
sustrato, en nuestra prueba no hubo reducción pero en
no debían contener enzima, el tubo 4 no llevaba
el caso de algunos equipos sí se observó una ligera
parafenilendiamina pero se le agregó que sirve como
reducción esto por el extracto de la enzima que pudo
donador artificial de electrones.
contener trazas de succinato. El tubo 4 presentó
reducción porque contenía malonato el cual un inhibidor
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El tubo 1 contenía todos los reactivos correspondientes Bibliografía
por lo cual sí se observó una intensificación del color, en
el tubo 2 el resultado tuvo que ser negativo ya que no  Melo Ruiz, Virginia. “Bioquímica de los procesos
había que agregar enzima, pero al hacerlo, lógicamente metabólicos” Reverté, México 2006. Pág 160. (1)
fue positivo. Al tubo 3 le fue adicionado inhibidor  Voet, Donald “Fundamentos de bioquímica: la vida
irreversible que es el cianuro de potasio el cual actúa a nivel molecular” 2ª edición, Medica
sobre el complejo IV de la cadena respiratoria donde se panamericana. Buenos Aires, Argentina. Pág 530,
encuentra la enzima citocromo oxidasa, el resultado fue 564. (2)(3)
negativo. El tubo 4 no contenía parafenildiamina y no se
esperaba la intensificación del color o al menos que el
extracto de la enzima contuviera alguna traza de otra
molécula que pudiera ser un donador de electrones. El
tubo 5 contenía cada reactivo para llevar acabo la
reacción, pero se le añadió además a-naftol, reacciona
con la parafenildiamina y forma un compuesto colorido
llamado azul de indofenol y la coloración del tubo se
muestra café, pero es ligeramente claro. Al tubo 6
también se le agregó enzima, pero este representa uno
de esos errores, no la requería por eso se observa
intensificación del color lo cual no concuerda con el
resultado buscado. En el tubo 7 no se efectuó la reacción
gracias al inhibidor presente. Respecto al tubo 8 de igual
manera tenía enzima y hay que reiterar que esto no era
lo indicado en la práctica, aunque el resultado fue el
esperado debido a que la reacción no sucedió por la
presencia del inhibidor, pero la coloración difiere porque
el extracto de la enzima tiene una tonalidad
característica.

Conclusión

Los órganos extraídos aún eran depósito de enzimas con


actividad eficiente.

Obviando los tubos descritos, en el resto se pudo


comprobar el efecto esperado sobre la actividad de las
enzimas estudiadas.

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