Cromatografía: técnicas, estudios y aplicación.

Resumen .

El incremento en las aplicaciones de diferentes proteínas en campos médicos, del

medio ambiente y el basto mundo de la industria de alimentos; van generando un interés peculiar

en la elaboración de procesos que permitan el análisis y la mayor purificación de proteínas

posible. En esta revisión se incluye el concepto general, características y cuatro estudios

aplicativos de métodos cromatógraficos para el estudio y análisis de proteínas.

Palabras clave: técnicas cromatográficas, cromatografía de líquidos, cambios

conformacionales, estabilidad de proteínas, bioseparaciones.

Abstract.

The increase in the applications of different proteins in medical fields, the

environment and the vast world of the food industry; they are generating a peculiar interest in

the elaboration of processes that allow the analysis and the greatest possible purification of

proteins. This review includes the general concept, characteristics and four applicative studies

of chromatographic methods for the study and analysis of proteins.

Keywords: chromatographic techniques, liquid chromatography, conformational

changes, protein stability, bioseparations.

Introducción.

La cromatografía es un procedimiento químico en el que se separa una mezcla en su

componente individual mediante una fase móvil y una fase estacionaria. Las aplicaciones

prácticas de la cromatografía se encuentran por ejemplo en la producción, donde se usa la

cromatografía para la limpieza y aislamiento de sustancias. Por otro lado, en la analítica

química se usa la cromatografía para separar mezclas en compuestos homogéneos. La

cromatografía juega un papel importante en muchos sectores, como la química orgánica, la

bioquímica, la química inorgánica, la química ambiental y la química alimenticia.

Al tener un campo amplio en su uso, es bueno saber que existen tipos de

cromatografía lis cuales son usados por diferentes áreas según su necesidad, por ejemplo: la

cromatografía en papel: La cromatografía en papel pertenece a la categoría "Cromatografía

de líquidos". La fase estacionaria se compone de una cinta de papel introducida verticalmente

en un recipiente de cristal y la fase móvil de un líquido. Cromatografía en capa fina: La

cromatografía en capa fina pertenece a la categoría "Cromatografía de líquidos" y el principio

de funcionamiento es el mismo que el de la cromatografía en papel. Las ventajas de la

cromatografía en capa fina son un tiempo de ejecución rápido y una alta muestra de

comprobación. Cromatografía en columna: La cromatografía en columna pertenece a la

categoría "Cromatografía de líquidos". En la cromatografía en columna la fase estacionaria se

compone normalmente de un gel de sílice o alúmina pulverizado que se introduce en un tubo

de vidrio y este se rellena con un disolvente (fase móvil). Campos de aplicaciones de la

cromatografía en columna son por ejemplo la limpieza de preparados. Cromatografía de

gases: En la cromatografía de gases se usan dos diferentes procedimientos.

1. La cromatografía de gas líquido

2. La cromatografía de gas sólido

El procedimiento más usado es la cromatografía de gas líquido. En este caso se

introduce el material portador (por ejemplo, aceite de silicona) en un tubo espiral de hasta 5
metros. El gas a analizar fluye junto al al gas portador (nitrógeno, helio, argón) a través de la

espiral. Según las oscilaciones de temperatura es posible determinar los componentes de la

mezcla.

Con base en lo ya expresado, el objetivo de este artículo de revisión es hacer un

conjunto de principios fundamentales de las técnicas cromatografías utilizadas, así también

como el análisis, estabilidad y demás del proceso.

Método.

Después de hablar un poco de que es la cromatografía, algunos tipos y de algunas

industrias que la maneja, Es idóneo hablar directamente de cuatro tipos de aplicaciones

directas de la cromatografía en la industria.

Para el análisis de estos datos se estudió más a fondo cuatro de los cinco artículos

revisados en este trabajo. Los cuales hablan de prácticas directas en las cuales se está

aplicando un proceso cromatógrafo. Entre esos artículos se encuentras procesos como:

- Aislamiento de lectinas por cromatografía de afinidad,

- Evaluación de ácidos orgánicos en bebidas de fruta comerciales por cromatografía

líquida de alta eficiencia,

- Análisis de fitoesteroles en la semilla de persea americana por cromatografía de

gases y cromatografía líquida, y.

- Evaluación de ocratoxina a en theobroma “cacao trinitario”, por cromatografía

líquida de alta y análisis micotoxigénico durante el proceso de cosecha, fermentado, secado y

almacenado.
 Desarrollo.

De estos cuatro diferentes industrias y procesos claramente diferentes, se puede inferir

que las cosas que tienen en común es que utilizan cromatografía liquida. La cromatografía

líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla.

Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es

sílica que se ha tratado con RMe2SiCl . La fase móvil actúa de portador de la muestra.

Aplicaciones: esta técnica de cromatografía está más que nada indicada para llevar a

cabo la separación de compuestos orgánicos semivólatiles. Compuestos tales como

Hidrocarburos Poliaromáticos (PAHs), Aminoácidos: OTA, Ácido Fólico, Herbicidas,

Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehído…etc. Teniendo en cuenta lo anterior dos de los

rangos de trabajo que hay que tener en cuenta para muestras líquidas: µg L-1 - mg L-1 Rango

de trabajo para muestras sólidas: µg Kg-1 - µg g-1.

Equipos: para este tipo de proceso podría llevarse a cabo con un número de equipos

especializados para esta práctica, estos son unos de ellos: VARÍAN 920 LC Bomba de

gradiente cuaternaria. Columna termostatizada rango de temperatura: ambiente+10ºC-65ºC.

Automuestreador (200 vialesx2ml) con jeringa de inyección (0-50μl) con posibilidad de

realizar incrementos de 1μl

Tipo de muestras: de acuerdo con las practicas leídas en los artículos revisados, las

muestras recolectadas para estudio y aplicación del proceso pueden variar entre Aguas, suelos,

alimentos, extractos, entre otros.

 Resultados y discusión.

Después de su debido procedimiento, todas las propuestas en las cuales se puso en

práctica la cromatografía liquida obtuvieron resultados excelentes, en los cuales el proceso

llevó el proceso a los mejores resultados posibles.

En uno de los casos se analizaron diez bebidas comercializadas, obtenidas de ocho

tipos de frutas, estas fueron analizadas por cromatografía liquida, encontrando en ellas alta

variabilidad de la concentración de ciertos ácidos. En el caso de la extracción de OTA se

demostró que este método solio ser altamente eficaz en los tres niveles de su evaluación.

Conclusión.

Es completamente visible que la cromatografía es un gran método de separación,

estudio y análisis de las proteínas. Las técnicas mencionadas y utilizadas pueden llevarse a

cabo por diferentes mecanismos como: cambio iónico, partición, adsorción, absorción

continua. Los estudios experimentales dejan claras sus ventajas de la purificación de

proteínas. Esta ha sido utilizada con éxito en los diferentes casos, determinando así cambios

conformacionales y estabilidad en ciertas proteínas.

La metodología cromatográfica empleada en todos los casos permitió el análisis de

cada materia buscado, el método utilizado mostro repitibilidad, reproducibilidad y linealidad,

lo que nos dice claramente que es un método apropiado y que puede llegar a utilizarse en
procesos con características parecidas y objetos de estudio que contengan ese mismo tipo de

moléculas.

Referencias bibliográficas.

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script=sci_arttext&pid=s1665-27382012000300006&lng=es&tlng=es.