Instrumental II

Cromatografía de Gases

Jhon Jairo Melchor Moncada

Química
E-mail: jjmelchor@utp.edu.co
2020-II
Conceptos
Ancho de pico (w)
Alto de pico (h)
Simetría de pico (10%W)
Constante de distribución (Kc)
Tiempo de retención (tR)
Tiempo muerto (tM)
Tiempo de retención corregido (tR’)
Resolución
La resolución entre dos picos cromatográficos (Rs) es una medida cuantitativa de su separación,
definida por:
2(𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐵𝐵 − 𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐴𝐴 )
𝑅𝑅𝑠𝑠 =
𝑊𝑊𝐴𝐴 + 𝑊𝑊𝐵𝐵

Respuesta del detector

Tiempo
Resolución
Ejemplo: En un análisis cromatográfico de aceite de limón, el pico de limoneno tiene un tiempo
de retención de 8,36 min con un ancho de línea base de 0,96 min. El gama terpineno eluye a 9,54
min con un ancho de base de 0,64 min. Cuál es la res

2(𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐵𝐵 − 𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐴𝐴 ) 2(9,54 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 − 8,36𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚)

𝑅𝑅𝑠𝑠 = = = 1,48
𝑊𝑊𝐴𝐴 + 𝑊𝑊𝐵𝐵 0,64 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 + 0,96 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚
Factor de retención
Ejemplo: Un análisis cromatográfico de ácidos de bajo peso molecular, el ácido butírico eluye
con un tiempo de retención de 7,63 min. La columna tiene un tiempo muerto de 0,31 min.
Calcular el factor de retención del analito.

𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐴𝐴 − 𝑡𝑡𝑚𝑚 7,63 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 − 0,31 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚

𝑘𝑘 = = = 23,6
𝑡𝑡𝑚𝑚 0,31 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚
Selectividad
Ejemplo: El tiempo de retención para el ácido isobutírico es de 5,98 min. Cuál es el factor de
selectividad para el ácido isobutírico y el ácido butírico?

𝑘𝑘𝐵𝐵 𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐵𝐵 − 𝑡𝑡𝑚𝑚 7,63 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 − 0,31 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚

𝛼𝛼 = = = = 1,29
𝑘𝑘𝐴𝐴 𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐴𝐴 − 𝑡𝑡𝑚𝑚 5,98𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 − 0,31 𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚
Eficiencia de la columna
Ejemplo: Un análisis cromatográfico para el pesticida Dieldrin dío un tiempo de retención de
8,68 min y un ancho de línea base de 0,29 min. Cuál es el número de platos teóricos? Dado que
la longitud de columna es de 2 m, cuál es la altura de plato teórico en mm?

𝐿𝐿 𝑡𝑡𝑚𝑚 2
𝑁𝑁 = ; 𝑁𝑁 = 16
𝐻𝐻 𝑤𝑤

Platos teórico:

Altura de plato teórico:

Conceptos
Optimización en las separaciones cromatográficas

Resolución en términos de eficiencia, factor de separación y selectividad:

𝑁𝑁 α−1 𝑘𝑘𝑘𝐵𝐵
𝑅𝑅𝑠𝑠 = × ×
4 α 1+𝑘𝑘𝑘𝐵𝐵

Tiempo de retención en función de la eficiencia, factor de separación y selectividad:

16𝑅𝑅 2 𝐻𝐻 α 2 (1+𝑘𝑘𝑘𝐵𝐵 )3
𝑡𝑡𝑅𝑅,𝐵𝐵 = × ×
𝑢𝑢 α−1 𝑘𝑘𝑘𝐵𝐵 2
 Optimización en las separaciones cromatográficas
1) Usando k’ para optimizar la resolución
Problema general de elución

tR,B (relativo a tR,B cuando k’B es 1)

R (relativo a R cuando k’B es 1)

Factor de retención del soluto B (k’B)

Optimización en las separaciones cromatográficas
2) Usando α para optimizar la resolución
Optimización en las separaciones cromatográficas
3) Usando la eficiencia de la columna para optimizar la resolución

L ⇧ tR ⇧
Teoría del ensanchamiento de bandas
𝐵𝐵
𝐻𝐻 = 𝐴𝐴 + + 𝐶𝐶𝑠𝑠 𝑢𝑢 + 𝐶𝐶𝑚𝑚 𝑢𝑢
𝑢𝑢
a) Efecto de la trayectoria múltiple
A =2λdp
dp diámetro promedio de partícula
λ constante de calidad de relleno
Teoría del ensanchamiento de bandas
𝐵𝐵
𝐻𝐻 = 𝐴𝐴 + + 𝐶𝐶𝑠𝑠 𝑢𝑢 + 𝐶𝐶𝑚𝑚 𝑢𝑢
𝑢𝑢
b) Difusión longitudinal
𝐵𝐵 2ϒ𝐷𝐷𝑀𝑀
=
𝑢𝑢 𝑢𝑢
DM coeficiente de difusión en la fase móvil
ϒ constante relacionada con el empaquetado de la columna
Teoría del ensanchamiento de bandas
𝐵𝐵
𝐻𝐻 = 𝐴𝐴 + + 𝐶𝐶𝑠𝑠 𝑢𝑢 + 𝐶𝐶𝑚𝑚 𝑢𝑢
𝑢𝑢
c) Transferencia de masa en la fase estacionaria y móvil
𝑓𝑓(𝑘𝑘 ′ )𝑑𝑑𝑓𝑓2 𝑓𝑓′(𝑘𝑘 ′ )𝑑𝑑𝑝𝑝2
𝐶𝐶𝑠𝑠 𝑢𝑢 = 𝑢𝑢 ; 𝐶𝐶𝑚𝑚 𝑢𝑢 = 𝑢𝑢
𝐷𝐷𝑠𝑠 𝐷𝐷𝑚𝑚
df espesor del revestimiento líquido en la fase estacionaria
Teoría del ensanchamiento de bandas
𝐵𝐵
𝐻𝐻 = 𝐴𝐴 + + 𝐶𝐶𝑠𝑠 𝑢𝑢 + 𝐶𝐶𝑚𝑚 𝑢𝑢 , Van Deemter
𝑢𝑢
Rendimiento de la columna

1) Cambia composición de fase móvil

2) Cambiar temperatura de la columna
3) Cambiar composición de la fase
estacionaria
4) Utilizar efectos químicos especiales
Aplicaciones

1) Análisis cualitativo
2) Análisis cuantitativo
a) Análisis basados en la altura de pico
b) Análisis basados en las áreas de los picos

Calibración y patrones
Método de patrón interno
Método de normalización de áreas
Ejercicios

1) Los tiempos de retención de dos sustancias A y B son 15.6 y 16.53 minutos,

respectivamente, en columna de 30 centímetros. Además, el tiempo de retención de una
sustancia que no es retenida es de 1.30 min. Las anchuras de pico para A y B son 1.11 y
1.21 minutos, respectivamente. Calcular:
a) La resolución de la columna.
b) El número de platos promedio de la columna.
c) La altura del plato
d) La longitud de la columna necesarias para conseguir una resolución de 1.5.
e) El tiempo necesario para que la sustancia B eluya en la columna que da un valor de 1.5.
f) La altura de plato necesario para obtener una resolución de 1.5 mediante la columna
original de 30 cm y el tiempo que se da en un principio.
Cromatografía de Gases
Cromatografía de gases

Volumen de retención
Fase móvil
El gas de arrastre o fase móvil para GC debe ser inerte y libre de
contaminantes.
H2 Son gases compresibles que se expanden con el incremento de la
temperatura (incrementa su viscosidad y disminuye la velocidad
lineal, aumenta ancho de pico).
Fase móvil
Fase móvil
Fase móvil
Fase móvil, resumen
1) Modo presión constante: Pa

2) Modo flujo constante: cm3/s

3) Modo velocidad lineal constante: cm/s

Fase móvil, resumen
El gas de arrastre mueve los solutos a través de la columna

El helio, hidrógeno y nitrógeno son ampliamente usados como gas.

El nitrógeno suministra la mejor eficiencia pero es extremadamente lento.

El helio suministra tiempo de análisis y eficiencia buena pero es costoso.

El hidrógeno proporciona los tiempos de análisis más rápidos en un amplio rango de velocidad
lineal. (mucha precaución y control)

Flujo constante minimiza los cambios en el gas de arrastre cuando se usa programa de
temperatura.
Puerto de inyección

Columna empaquetada (GSC, Columna capilar Split / splitless

GLC) (columna tubular abierta)
Columnas cromatográficas

Columna empaquetada (GSC, GLC)

Columnas de vidrio, acero inoxidable, cobre o
aluminio,
Longitud: 2-6 m
Diámetro interno: 2-4 mm
Diámetro de partícula: 30 a 350 µm
Fase estacionaria: tierra diatomáceas activadas,
polímeros de fluorocarbon
Columnas cromatográficas

Columna capilar
(columna tubular abierta) Columnas de sílice fundida, recubiertas con un
polímero
Longitud: 15 – 100 m
Diámetro interno: 150 - 300 µm
Columnas cromatográficas

Columnas tubulares abiertas

 De uso común en GC
 Alta resolución, cortos tiempos de análisis, y alta sensibilidad
 Baja capacidad de muestra

 Aumento de la resolución
- Columna estrecha Aumenta la resolución

- La resolución es proporcional a 𝑵𝑵, donde N incrementa directamente

con la longitud de la columna
Columnas cromatográficas

Aumentando la resolución

Disminuir diámetro de tubo

Aumenta resolución
Aumentar longitud columna
Aumenta resolución
Columnas cromatográficas

Aumentando la resolución
Aumentar el espesor de fase estacionaria
Aumenta resolución de compuestos eluidos tempranamente

También, aumenta el factor

de capacidad y reduce la
cola en los picos

Pero, disminuye la estabilidad

de la fase estacionaria
Columnas cromatográficas
Columnas cromatográficas
BONDED PHASE TEMP °C GENERAL USE OF PHASE EQUIVALENTS
SE-30, OV-1, OV-101,
Most frequently used phase in GC. Low selectivity, separates DB-1, SPB-1, BP-1, HP-
Methyl polysiloxane 50-325
compounds according to boiling points. Excellent thermal stability 1, ULTRA-1, RTx-1, AT-1,
CPSil-5
SE-54, OV-23, DB-5,
Methyl 5% Phenyl Similar to methyl polysiloxane but slightly more selective due to phenyl
50-325 SPB-5, BP-5, HP-5,
Polysiloxane content. Excellent thermal stability. ULTRA 2, RTx-5, CPSil-8
Added selectivity due to higher phenyl content. Usually retains similar compounds longer OV-17, DB-17, SPB-7,
Methyl 50% Phenyl
40-325 than methyl silicone. Provides efficient separations of PAHS and biomedical samples such as BP-10, HP-17, RTx-17,
Polysiloxane drugs, sugars and steroids. Good thermal stability. AT-50,
Selectivity for compounds with lone pair electrons or carbonyl groups. Retains oxygenated
50% Trifluoropropyl 50% compounds in the order ether, hydroxy, ester and keto Widely used as a confirmatory phase DB-210, RTx-200, HP-
40-300
Methyl polysiloxane for chlorinated pesticides. Also suitable for PCB’s, phenols and nitroaromatics. Good thermal 210
stability.

6% Cyanopropylphenyl
30-320
94% Methylpolysiloxane
An additional choice for a general purpose phase with nominal selectivity for polarizable
DB-1301, RTx-1301, HP-
and polar compounds. More of a boiling point phase than 007-1701; and exhibits less
retention of polyaromatic compounds than 007-17.Good thermal stability.
1301

Unique selectivity of cyanopropyl and phenyl groups provide efficient separations of

Methyl 7% Cyanopropyl
280
7% Phenyl Polysiloxane
Methyl 25% Cyanopropyl
40-240
25% Phenyl Polysiloxane
DB-1701, CPSil-19, RTx-
derivitized sugars and many environmental samples. Not truly a polar phase. Good thermal
stability
1701, AT-1701
Polar phase which provides efficient separations of polar molecules such as fatty acids and DB-255, HP-255, CPSil-
alditol acetate derivatives of sugars. Fair thermal stability 43, RTx-225, AT-255
Columnas cromatográficas
DB-1 DB-5

H3C H3C
R Si O R Si O R Si O
CH3 H CH3 H CH3 H
100% 95% 5%

DB-5.MS
Para reducir “bleeding” de la fase
H3C H3C H3C estacionaria:
-Enlaces a la silica (Covalente)
R Si O Si O
R Si O
-Enlaces covalentes entre misma
fase
CH3 CH3 H CH3 H
Columnas cromatográficas

Tiempo de retención
El orden de elución es principalmente determinado por la volatilidad

El Segundo factor es similar en polaridad entre los compuestos y la fase estacionaria

Se puede manipular o ajustar el tiempo de retención, cambiando la polaridad de la fase estacionaria

Se puede usar estos tiempos de retención para clasificar la resolución de la columna
(comparar los tiempos de retención entre compuestos y como ellos cambian entre columnas)

Se puede usar para identificar compuestos desconocidos

Columnas cromatográficas
Programa de temperature y presión

Mejora la eficiencia de la
columna
 Programa de temperatura:
- La tempera aumenta
mediante la separación
(gradiente)

- Aumenta la presión de
vapor del soluto y
disminuye el tiempo de
retención

Temperature gradient improves

resolution while also decreasing
retention time
Columnas cromatográficas

ISOTHERMAL
Column temp. 120oC

Programmed temp.
(30oC to 180oC) (5o/min)
Detector

Características del detector ideal

1) Sensibilidad adecuada. 10-8 a 10-15 g de soluto/s.

2) Estabilidad y reproducibilidad
3) Amplio intervalo dinámico
4) Intervalo de temperatura desde la temperatura ambiente hasta
por lo menos 400 ºC
5) Tiempo de respuesta corto independiente del flujo
6) Alta confiabilidad y manejo sencillo
7) Respuesta semejante para todos los solutos o selectivo
8) No debe de destruir la muestra
Detector
Detector de ionización por llama (FID)
Número de iones formados es
proporcional al número de átomos de
carbono que se reducen en la llama.

Cambios en flujo no afectan la

respuesta.

Grupos funcionales como carbonilo,

alcohol, halógeno y amina originan
pocos iones.

Insensible a gases como H2O, CO2,

SO2, CO, gases nobles y Nox.

Sensibilidad de 10-13 g/s

Intervalo de respuesta lineal de 107
Detector de conductividad térmica (TCD)
Helio e hidrógeno tienen conductividades de
6 a 10 veces mayor que la mayoría de
compuestos orgánicos.

Detector universal
No destructivo
Amplio intervalo dinámico lineal (105)

Respuesta a compuestos orgánicos e

inorgánicos

Baja sensibilidad de 10-8 g de soluto /mL

No uso de columnas capilares

Detector de captura de electrones (ECD)

Sensible a compuestos orgánicos que

contienen halógenos

Respuesta selectiva, compuestos halógenos,

peróxidos, quinonas y grupos nitro.

Insensible a aminas, alcoholes e

hidrocarburos

No destructivo
Espectrómetro de masas (MS)

Detector universal para todos los analitos

Limites de detección de 25 fg a 100 pg.

Rango lineal de 105 ordenes de magnitud

El espectro de masas ayuda a identificar

compuestos.

Destructivo
Espectrómetro de masas (MS)
Integrador
Determinar el área bajo la curva.

Curvas de calibración
con estándar externo y
a) Método de corte curvas de calibración
b) Método de valle con estándar interno
c) Método exponencial
d) Método gaussiano
Columnas cromatográficas
Method Development in GC

How to Choose a Procedure for a Particular Problem

 Many Satisfactory Solutions
 The order in which the decision should be made should consider:
1. Goal of the analysis
2. Sample preparation
3. Detector
4. Column
5. Injection

 Goal of the analysis

- Qualitative vs. quantitative
- Resolution vs. sensitivity
- Precision vs. time
- Interest in a specific analyte

 Sample preparation
- Cleaning-up a complex sample is essential
- Garbage in  garbage out

 Choosing the Detector

- Detect a specific analyte(s) or everything in the sample
- sensitivity
- Identify an unknown (MS, FTIR)
Columnas cromatográficas
Method Development in GC

How to Choose a Procedure for a Particular Problem

 Selecting the Column
- Consider stationary phase, column diameter and length, stationary phase
thickness
- Match column polarity to sample polarity
- To improve resolution, use a:
a. Longer column
b. Narrower column
c. Different stationary phase

 Choosing the Injection Method

- Split injection is best for high concentrated samples
- Splitless injection is best for very dilute solutions
- On-column injection is best for quantitative analysis and thermally instable
compounds
Ejemplo (análisis cuantitativo):
Se analizaron 5 estándar y una muestra que contenía la misma concentración de estándar
interno de 25 mg/mL. Para los cinco estándar la concentración de analito son 0,20; 0,40;
0,6; 0,8 y 1,0 mg/mL, respectivamente. Determine la concentración de analito en la muestra,
a) ignorando el estándar interno y realizando una curva de calibración y b) creando una
curva de calibración con el estándar interno. Para cada caso, reportar la concentración del
analito. (Usar la altura de los picos en vez de las áreas de los picos).
Ejemplo:
Ejemplo:
Zhou y colaboradores determinaron el porcentaje en de agua en metanol por columna
capilar GC usando una fase no polar y detector de conductividad térmica. Una serie de
estándar dio los siguientes resultados:

Cuál es el porcentaje en peso de agua en una muestra que dio una altura de pico de 8,63?
Ejemplo:
Un analista usó cromatografía de gases para determinar el porcentaje en volumen de
salicilato de metilo en loción tópica. Un conjunto de 3 adición estándar fue preparado por
transferencia de 20 mL de muestra en cada matraz de 25 mL y pipeteando 0,0 – 0,2 y 0,5
mL de silicato de metilo a los matraces. Todos los 3 matraces fueron aforados con
isopropanol. El análisis de las 3 muestras dieron alturas de pico de 57 mm, 88,5 mm y 132,5
mm, respectivamente. Determine el porcentaje en volumen de silicato de metilo en loción
tópica.
Ejemplo (análisis cualitativo):
En la separación de una mezcla de hidrocarburos los siguientes tiempos de retención
corregidos son medidos: 2.23 min para el propano, 5,71 min para isobutano, 6,67 min para
el butano. Cuál es el índice de retención de Kovat para cada hidrocarburo?