Laboratorio N° 2

Métodos bioquímicos
Técnica: Cromatografía de espinacas

Integrantes:
-Javiera Ilaja
-Javiera Ortega
-Nayaret Arancibia
-Yamila Flores
-Kimberlyn Esteban
-Yanli Prado
Curso: 4°E
Profesora: Moyra Campillay
Asignatura: Genoma
Fecha de entrega: 10/05/2019
 INTRODUCCIÓN:

Los métodos de separación de sustancias químicas son numerosos. La

sencillez o dificultad de los mismos viene dada por la semejanza que exista entre
las sustancias a separar. Cuanto más diferentes sean éstas, más sencilla será la
técnica empleada.
La cromatografía es una técnica de separación de los componentes de una
mezcla, por distribución de éstos entre dos fases, una estacionaria y otra móvil. La
fase estacionaria puede ser un sólido, un líquido sobre un soporte sólido o un gel,
y la móvil un líquido o un gas.
De varios tipos de cromatografías usaremos y daremos a conocer mediante este
informe la experiencia hacia la experimentación de la Cromatografía en papel, que
es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos,
ya que, pese a no ser una técnica muy potente, no requiere de ningún tipo de
equipamiento lo que la hace económica y sencilla de hacer.
El descubrimiento de la cromatografía en papel fue en 1943 por el químico inglés
Archer John Porter Martin y el también bioquímico inglés Richard Laurence
Millington Synge proporcionó, por primera vez, los medios de explorar los
constituyentes de plantas y para su separación e identificación. Hubo una
explosión de actividad en este campo a partir de 1945. Por lo cual usaremos una
espinaca para nuestra experimentación para así lograr separar sus pigmentos
mediante un solvente previamente investigado, siguiendo fielmente los pasos y
precauciones para que el trabajo sea todo un éxito y lograr los objetivos
planteados sobre el experimento.
Esperamos que sea de su agrado y la invitamos cordialmente a usted profesora
Moyra Campillay para que vea nuestro proceso, los resultados e investigaciones
hechas sobre nuestra cromatografía de espinaca hecha en clases.

OBJETIVOS
• Conocer los principios básicos de la cromatografía, así como la
descomposición de diferentes tintas.
• Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica
sencilla de cromatografía en papel.
 Marco teórico

Alcohol: Sustancia química que se

encuentra en bebidas, como la cerveza,
el vino y el licor. También se encuentra
en algunas medicinas, enjuagues
bucales, productos para la limpieza del
hogar y aceites esenciales (líquido
perfumado que se obtiene de ciertas
plantas). Se elabora por medio de un proceso químico que se llama
fermentación en el que se usan azúcares y levadura. Hay diferentes
tipos de alcohol. El tipo que se usa para
las bebidas alcohólicas se llama alcohol etílico (etanol). El consumo de
cantidades moderadas o grandes de alcohol puede aumentar el riesgo
de ciertos tipos de cáncer, como el cáncer de boca, garganta, esófago,
mama, hígado, colon y recto

El alcohol es un líquido incoloro, de olor característico, soluble tanto en

agua como en grasas; se caracteriza por ser una sustancia
psicoactiva, depresora del sistema nervioso central, y con capacidad
de causar dependencia.
Se calcula que 1 gramo de alcohol aporta al organismo 7,1 Kcal.; este
aporte energético no se acompaña de un aporte nutritivo como
minerales, proteínas o vitaminas.
El alcohol se ha utilizado ampliamente en muchas culturas durante
siglos y en nuestro país su consumo forma parte de nuestros usos y
costumbres: es nuestra droga cultural por excelencia, hasta el punto
de que el hecho de beber es considerado normal ya que tres cuartas
partes de la población española beben de manera esporádica o
habitual. Sin embargo, actualmente se está tomando conciencia de
que el alcohol es una droga más y de que su consumo no es en
absoluto inocuo.
De hecho, el consumo de alcohol es uno de los principales factores
que se relacionan con la salud de los individuos y de las poblaciones,
ya que las consecuencias de su consumo abusivo tienen un gran
impacto en términos de salud y en términos sociales
toalla de papel (nova):También
conocido como papel toalla, es un
tipo de papel que se utiliza en
labores de secado y limpieza,
fundamentalmente, en la cocina.

El papel absorbente tiene casi las

mismas funciones que las toallas
convencionales, tales como secar las
manos, limpiar ventanas, quitar el
polvo y absorber los líquidos
derramados. Se emplean
habitualmente en trabajos de cocina. Dado que los pliegos de papel
absorbente son desechables, se escogen a menudo para evitar la
extensión de gérmenes.

Delantal: La bata es una prenda habitual en los

laboratorios, lugares para la experimentación
científica, y se usa, principalmente, con el fin de
proteger la ropa y la piel en caso de que una
sustancia química amenace con derramarse.
Las batas más conocidas son las de color blanco,
debido al amplio uso que los médicos les han dado
en diferentes momentos de la historia. En el siglo
XIX, por ejemplo, se utilizaban en cirugías para
proteger tanto al paciente como al cirujano y evitar cualquier tipo de
contaminación.
El color blanco, que simboliza vida y pureza, contribuyó a que los
hospitales fueran vistos como lugares donde los enfermos son curados
y no como el lugar donde van a morir. Además, la vestimenta blanca
otorgó un status especial al oficio médico
 El papel de filtros: Es un papel que se corta
en forma circular y se introduce en
un embudo de filtración, con el fin de
ser filtro para las impurezas insolubles y
permitir el paso de la solución a través de
sus poros.
El "papel filtro" se usa principalmente
en laboratorios analíticos para filtrar soluciones heterogéneas.
Normalmente está constituido por derivados de celulosa y permite el
manejo de soluciones con pH entre 0 y 12 y temperaturas de hasta
120°C.
Normalmente tienen un área aproximada de 10 cm² y
un peso aproximado desde 80 hasta 130 g/m².
Actualmente se pueden conseguir papeles filtro de diferentes
rugosidades y diámetros de poro.
Dentro de los diferentes tipos de papeles filtro existen los cuantitativos,
que también permiten un filtrado adecuado y además permiten
cuantificar el número de partículas suspendidas en el líquido a filtrar.
Son también utilizados principalmente para el análisis gravimétrico y
preparación de muestras.

Papel absorbente: Tiene como función absorber líquidos con mucha

facilidad y posee una gran afinidad de retenerlos.
Vaso precipitado:
Formas y características
Un vaso de precipitado tiene forma cilíndrica y posee un fondo plano. Se
encuentran en varias capacidades.
Se encuentran graduados. Pero no calibrados, esto provoca que la graduación sea
inexacta.
Son de vidrio y de plástico (Cuando están hechos de vidrio se utiliza un tipo de
material mucho más resistente que el convencional denominado pírex).
Posee componentes de teflón y otros materiales resistentes a la corrosión.
Su capacidad varía desde el mililitro hasta el litro (o incluso más).
Usos
Su objetivo principal es contener líquidos o sustancias químicas diversas de
distinto tipo.
Como su nombre lo dice permite obtener precipitados a partir de la reacción de
otras sustancias.
Normalmente es utilizado para trasportar líquidos a otros recipientes.
También se puede utilizar para calentar, disolver, o preparar reacciones químicas.
Metodología de uso:
Para calentar sustancias o líquidos contenidos en el vaso se utiliza una rejilla de
asbesto, ya que entrega una temperatura uniforme.
Si el vaso se encuentra caliente debe tomarse con guantes u otro material.
La preparación de reacciones y soluciones preparadas en el vaso de precipitado,
nunca deben enfocarse hacia nuestro rostro o cuerpo.
Nunca se debe experimentar con cambios de temperatura muy bruscos.
Cámara fotográfica:
Con la cámara digital se puede fotografiar una imagen y crear de inmediato un
documento en formatos estandarizados para el ordenador. La cámara utiliza como
plano de enfoque un sensor CCD (Charge coupled device), es un chip sensible a
la luz, electrónico y con una superficie fotosensible que reacciona a la luz. Este
chip es como el ojo de la cámara digital y uno de los elementos más importantes
Una vez realizada la toma fotográfica, ésta se almacena en la tarjeta de memoria
de la cámara.
Características de la cámara digital
Entre sus características, destacamos:
- El sensor de imagen
- El monitor LCD.
- La tarjeta de memoria para comunicarse con el PC.
- Memoria y software.
Capsula Petri:
Formas y características
Recipiente redondo, hecho de vidrio o de plástico, posee diferentes diámetros, es
de fondo bajo, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero un poco más
grande de diámetro, ya que se puede colocar encima y cerrar el recipiente, como
una tapa.
Usos
Es utilizado para poder observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas
como químicas. Las cuales se encuentran encerradas dentro de la placa.
Es utilizado para el cultivo de bacterias y otras especies relacionadas.
También es utilizado para masar sólidos en una balanza.
Precauciones
Se deben utilizar con precaución, ya que se debe evitar el contacto con
organismos biológicos, en caso de trabajar con ellos.
Utilizar implemento de protección antes de trabajar con organismos biológicos
(antiparras, bata, guantes, etc.).

Film transparente:
El film resulta ser junto con la botillería y las bolsas el producto con mayor peso
específico. El film se fabrica a partir de la granza del polietileno y el polipropileno
como los dos principales materiales utilizados. Existe una amplia cantidad de
aplicaciones del film. Es un elemento de cocina de suma utilidad no solo a la hora
de guardar alimentos en la heladera o para transporte sino también para ser
utilizado durante la cocción. Consiste en una fina lámina de plástico transparente
que se compra usualmente en un rollo y que se adhiere a sí mismo, permitiendo
sellar
Mortero:
Usos
El Mortero tiene como finalidad machacar o triturar sustancias sólidas.
Características y Formas
El Mortero posee un instrumento pequeño creado del mismo material llamado
“Mano o Pilón” y es el encargado del triturado.
Normalmente se encuentran hechos de Madera, Porcelana, Piedra y Mármol.
Precauciones
Si al machacar sustancias peligrosas o líquidos en conjunto con sólidos, deberá
molerse o triturarse muy suavemente para evitar salpicaduras.
Hojas de espinaca:
Etimología del nombre
El nombre de espinaca deriva del término spina o espina, debido a que los frutos
de la planta hortícola, cuando están en su punto de maduración, se presentan
armados de espinas.
Origen
Se estima que la espinaca ha sido cultivada por los árabes y los persas hace
2.000 años. Durante la invasión mora a España la introdujeron en el continente
europeo, desde donde se extendió a otras partes del mundo.
Características
Se trata de plantas que se pueden encontrar con frecuencia en espacios situados
junto a la costa o terrenos salinos templados, formada por un tallo ramificado de
unos 15 cm del que surgen un conjunto o "manojo" de hojas con estructura lisa o
rizada de aproximadamente 20 cm (dependiendo de la calidad del cultivo y la
variedad a la que pertenezcan) dispuestas de forma circular o en roseta. Estas
hojas presentan un color verde oscuro y brillante. Son la única parte de la planta
que se consumen con asiduidad, mostrando un sabor ligeramente ácido pero
sugestivo e interesante.
Propiedades nutritivas y salud
Las espinacas, están compuestas en su mayor parte por agua (más de un 90%),
con unos porcentajes muy bajos de hidratos de carbono y grasas por lo que son
recomendadas por expertos nutricionistas como parte de la dieta a seguir en caso
de desear regular o perder peso.
Los grupos de vitaminas presentes en estas plantas son E, A, C y B,
proporcionando acción antioxidante, regulando el buen estado de la visión para las
personas con problemas oculares, el cabello, la piel, las mucosas, los huesos y el
sistema inmunológico, resultando adecuadas para la prevención de enfermedades
cardiovasculares y degenerativas como el cáncer. Además, intervienen en la
formación de colágeno, glóbulos rojos (por lo que está indicada para el tratamiento
de anemias, glóbulos blancos, absorción del hierro de los alimentos, así como en
la resistencia ante infecciones. Su alto contenido en folatos las hace aconsejables
en dietas de mujeres embarazadas ya que previene malformaciones del feto
durante las primeras semanas de embarazo.
Las espinacas son ricas en calcio, potasio, hierro, magnesio, fósforo, yodo y sodio.
Estos minerales desarrollan una importante función estructural para determinados
elementos del ser humano como los huesos o los dientes y aportan beneficios
para el funcionamiento de los intestinos, músculos o nervios. También poseen un
suave efecto laxante, diurético (sobre todo su alto contenido en potasio y bajo en
sodio), mejoran la inmunidad, la transmisión y generación de impulsos nerviosos,
junto a la actividad muscular.
Los aportes en fibra proporcionan un suave efecto laxante que mejora el
estreñimiento y colabora en la reducción del colesterol

Embudo:
El embudo de laboratorio es un recipiente cónico, el cual es usado en el
laboratorio para pasar líquidos de un recipiente a otro. También es utilizado para
realizar el filtrado de algunas sustancias.
Formas y características de un embudo de laboratorio
El embudo de laboratorio es un recipiente que puede ser de vidrio, acero
inoxidable, porcelana o de plástico. Existen varios tipos de embudos y estos son:
los embudos planos, los cuales pueden tener el cuello corto o largo y que se usan
para realizar operaciones básicas en el laboratorio.
También están los embudos de filtración, cuya forma es cónica y están elaborados
con vidrio. Cuando son usados para filtración en caliente, el vidrio debe ser de tipo
pírex y no tienen tubo de salida, en cambio los de filtración en frío si lo tienen.

Matraz:
El matraz es un recipiente de vidrio que se utiliza en los laboratorios, tiene forma
de cono y tiene un cuello cilíndrico, es plano por la base. Se utiliza para calentar
líquidos cuando hay peligro de pérdida por evaporación.
Ventajas de su utilización
Es más seguro que un vaso de precipitado, ya que la estructura del matraz evita
perdidas de la sustancia o solución contenida (agitación o evaporación).
Es ideal para agitar soluciones. Se puede tapar fácilmente utilizando algodón o
tapa.
Características y formas
Frasco con Base redonda, la cual posee una estructura cónica en la zona del
medio y en la zona superior se aprecia una boca con cuello estrecho. Cuando se
habla de Matraz Erlenmeyer, se está hablando de un matraz graduado que
contiene marcas que indican un determinado volumen. Se encuentran en distintas
capacidades.
Metodología de uso
Para calentar líquidos contenidos en el matraz, debe colocarse sobre una rejilla de
asbesto bajo un trípode, también se puede utilizar un aro de metal en conjunto con
soporte universal, o utilizar pinzas para buretas o agarraderas que funcionen como
sostén del matraz.
La cromatografía.

Definición

La cromatografía es un proceso que se puede utilizar para separar los

diversos componentes de una mezcla. Hay diferentes tipos en uso,
incluyendo gas, líquido, papel y la cromatografía de gel permeable.
Este proceso puede llegar a ser muy útiles especialmente con mezclas
complejas.

La técnica cromatográfica es muy útil en una variedad de campos

incluyendo ciencias puras, aplicadas, medicina forense y atletismo
entre otros. El proceso se basa en el hecho de que diferentes
moléculas se comportan de manera diferente cuando se disuelven con
un solvente y se mueven a través de un medio absorbente.
En cromatografía los investigadores separan los componentes
individuales de un compuesto para uso en el laboratorio o en
investigación. Este proceso puede llegar a ser extremadamente
preciso, mediante esta técnica, por ejemplo, los científicos pueden
aislar dos hebras de ADN que difieren en sólo unas pocas piezas de
información. En cromatografía analítica, el objetivo es averiguar lo que
hay en una muestra.

Las pruebas en caso de reconocimiento de drogas se basa en esta

técnica para aislar sustancias ilícitas en orina y muestras de sangre.
En el ejemplo anterior con un punto de tinta y un trozo de papel se
puede dejar en claro los conceptos básicos detrás del proceso.
Aunque la mayoría de los métodos son un poco más sofisticados. Es
importante elegir el disolvente correcto para la muestra investigada y
seleccionar un medio sólido apropiado para que la muestra se pueda
dispersar.

El resultado de esta técnica es un cromatógrafo que es una impresión

que proporciona información sobre la sustancia que se analiza. La
impresión general del gráfico es una serie de valles y picos. Cada pico
representa una sustancia presente en la muestra, y las
concentraciones de estas sustancias se puede determinar observando
la altura y la anchura del pico. Máquinas de cromatografía de alta
eficiencia generan copias impresas de forma automática a medida que
se producen los datos. 

Un ejemplo muy simple es el caso del que se presenta con una marca
de tinta en un
pedazo de
papel. El papel
podría ser
sumergido en agua, la acción capilar del agua hará que se disperse a
través del papel. A medida que la tinta se mueve sus ingredientes se
separaran, revelando un patrón distintivo que podría ser utilizado para
determinar los componentes de la tinta.

Cromatografía plana, este tipo de técnica se realiza por medio de la

utilización de un material sólido como un papel, gracias a esto puede
subclasificarse en “capa gruesa” o “capa fina”, debido a que la fase
estacionaria reposa sobre soporte totalmente rígido, esta capa se
pone en contacto con la fase móvil que es líquida y el mismo comienza
a ascender, de acuerdo a la ubicación de cada elemento en el papel
puede lograr su identificación; por otra parte se encuentra la
cromatografía en columna, en la cual se utiliza varios cilindros largos
cuyo nombre es “bureta” como fase estacionaria, y una mezcla
liquida como fase móvil, de igual forma pueden usarse otro estado
físico para la fase móvil, como el gas, los distintos compuestos a
separar van a ir ascendiendo de forma progresiva por la columna; de
acuerdo al estado físico de las fases utilizadas para el proceso la
cromatografía puede clasificarse en: cromatografía de gases, ya que
su fase móvil es de carácter gaseoso, por otra parte está la
cromatografía líquida, en la cual la fase móvil está compuesta por un
agente líquido, y por último la cromatografía HPLC caracterizada por
poseer un alto nivel de eficacia y precisión en la separación de
compuestos.
Procedimiento
Materiales:
-Hojas de espinaca
-Mortero
-Embudo
-Matraz
-Papel filtro
-Alcohol
-Papel Absorbente

Procedimiento:
1. Lavar las hojas de espinaca y extraerles el nervio.

2. Poner las hojas en un mortero y se cubren con alcohol, se trituran hasta lograr
una buena homogeneización. De esta forma se rompen las células y los
pigmentos que se hallaban encerrados en los cloroplastos dentro de ellas pasan al
alcohol.
3. Filtrar con un embudo y papel de filtro, luego tapar el filtrado para conservar el
alcohol.

4. Colocar el filtrado en una placa Petri, y sobre ella poner un rectángulo de papel
absorbente de unos 15 centímetros de ancho por 10 centímetros de alto doblado
en V para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri.
5. Esperamos hasta que el alcohol y los pigmentos vayan ascendiendo por el
papel produciéndose la separación cromatografía.

6. En la disolución extraída del vegetal tendremos tantos pigmentos como bandas

coloreadas aparezcan en la cromatografía.
 Análisis de resultado
Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografía de la espinaca, vemos
cuatro bandas o zonas, que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos
presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad con el éter de
petróleo se reconocen estas bandas y en este orden: clorofila b, clorofila a,
xantofila y carotenos. Como podemos observar en el esquema.

Este es el aspecto final de las cromatografías obtenidas con las hojas de

espinacas

Pigmento Color
Carotenos Naranja
Xantofilas Amarillo
Clorofila A Verde
Clorofila B Verde

¿Qué son los pigmentos?

Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de
colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde,
amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados
compuestos químicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que
presenta un determinado órgano vegetal depende generalmente del predominio de
uno u otro o la combinación de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal
presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que
incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes
coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prácticamente sin sufrir
modificaciones. El conjunto de longitudes de onda que absorbe un pigmento se
conoce como su espectro de absorción.

Las Clorofilas
El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la
presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y
clorofila b. Se encuentran prácticamente en todas las plantas con semilla,
helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las raíces, tallos, hojas y frutos a
condición de que estos órganos estén situados por encima del suelo y queden
expuestos a la luz. También, aunque aparentemente falten en algunas hojas de
color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas,
puede comprobarse incluso allí la presencia de las clorofilas, que estaban
enmascaradas por los demás pigmentos.
Compuesta por una porfirina que lleva incorporado un átomo de magnesio en el
centro del núcleo tetrapirrólico. El ion Mg2 está coordinado con los cuatro átomos
de nitrógeno centrales, lo que hace de la clorofila un complejo extraordinariamente
estable.
Hay cinco tipos principales de clorofila: a, b, c y d, más una molécula relacionada
que se encuentra en procariontes llamada bacterioclorofila. En las plantas, la
clorofila a y clorofila b son los principales pigmentos fotosintéticos. Las moléculas
de clorofila absorben longitudes de onda azules y rojas, como se demuestra con
los picos en los espectros de absorción anteriores.
A nivel estructural, las moléculas de clorofila se componen de una cola hidrófoba
("que le teme al agua") que se inserta en la membrana del tilacoide y una cabeza
de anillo de porfirina (un grupo circular de átomos que rodean a un ion magnesio)
que absorbe la luz.
Aunque tanto la clorofila a como la clorofila b absorben luz, la clorofila a tiene una
función única y crucial al convertir la energía de la luz en energía química. Todas
las plantas fotosintéticas, algas y cianobacterias contienen clorofila a, mientras
que solo las plantas y algas verdes contienen clorofila b, junto con algunos tipos
de cianobacterias.
Debido a la función central de la clorofila a en la fotosíntesis, todos los pigmentos
utilizados además de la clorofila a se conocen como pigmentos accesorios, que
incluyen otras clorofilas, así como otras clases de pigmentos, como los
carotenoides. El uso de pigmentos accesorios permite la absorción de una gama
más amplia de longitudes de onda y, por lo tanto, una captura mayor de energía
de la luz solar.

¿Dónde están los pigmentos?

Estos pigmentos se encuentran en el interior de las células vegetales
específicamente en una organela llamada cloroplasto. Los cloroplastos son
simplemente plástidos que contienen pigmentos clorofílicos. Los compuestos
clorofílicos están ligados químicamente con las estructuras internas del cloroplasto
(membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las
clorofilas, existen también en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y
amarillo-anaranjados que son los carotenoides y xantofilas.

Carotenoides
Los carotenoides son otro grupo clave de pigmentos que absorben la luz violeta y
verde azulada Los brillantes carotenoides encontrados en frutos como el rojo del
tomate (licopeno), el amarillo de las semillas de maíz (zeaxantina) o el naranja de
una cáscara de esta fruta (β-caroteno) se utilizan como avisos para atraer
animales, que pueden ayudar a dispersar las semillas de plantas.
El sistema de dobles enlaces conjugados está formado exclusivamente por
átomos de carbono, en general consisten de una cadena larga de hidrocarburo,
por esto son compuestos insolubles en agua, pero sí en solventes grasos. Se
dividen en Carotenos que son hidrocarburos insaturados y en Xantofilas que son
derivados oxigenados de los carotenos.
En la fotosíntesis, los carotenoides ayudan a capturar la luz, pero también tienen
una función importante al deshacerse del exceso de energía luminosa. Cuando
una hoja está expuesta a pleno sol, recibe una cantidad enorme de energía; si
dicha energía no se maneja adecuadamente, puede dañar la maquinaria
fotosintética. Los carotenoides de los cloroplastos ayudan a absorber el exceso de
energía y a disiparla como calor.

Xantofilas
La xantofila, son compuestos químicos parecidos a los carotenos, y a diferencia de
estos últimos además de contener carbono e hidrogeno contienen uno o más
átomos de oxígeno dentro de la molécula, pero igual que los carotenos, presentan
colores llamativos (rojo, naranja y amarillo). Vegetales como el pimiento amarillo y
rojo representa una fuente importante de xantofilas.
Una de las moléculas pertenecientes a la familia de las xantofilas es la luteína.
Esta se encuentra en numerosas plantas, tales como el Cempasúchil.
La clorofila a y b por ser los pigmentos primarios presentaran una absorbancia
superior a los demás pigmentos presentando una absorbancia entre los 400 y 450
nm y otro entre los 630 a 700 nm. Los carotenos y xantofilas por ser “pigmentos
accesorios” presentan una absorbancia más baja, estos pigmentos accesorios no
tienen una participación muy importante en el proceso de fotosíntesis, pero si son
vitales en la protección de las clorofilas por tener una mayor resistencia a la
fotoxidación. Las clorofilas y carotenoides presentan una absorción baja entre los
500 y 600 nm que es donde principalmente se presenta el color verde del espectro
de luz visible, esta energía no es absorbida es por eso que la mayoría de las
plantas se las ve de color verde. Cuando las clorofilas se descomponen
comienzan a verse los carotenos y xantofilas que son de colores amarillos a
naranja.

¿Qué significa para un pigmento absorber la luz?

Cuando una molécula de pigmento absorbe un fotón, pasa a un estado de
excitación; es decir, tiene energía extra y ya no se encuentra en su estado normal
o fundamental. A un nivel subatómico, la excitación se produce cuando un electrón
sube a un orbital de mayor energía que está más alejado del núcleo.
Solo un fotón con la cantidad justa de energía para subir un electrón entre
orbitales puede excitar un pigmento. De hecho, es por esta razón que diferentes
pigmentos absorben distintas longitudes de onda de la luz: las "brechas de
energía" entre los orbitales son diferentes en cada pigmento, es decir, en cada
caso se necesitan fotones de diferentes longitudes de onda para proporcionar un
impulso de energía que coincida con esas brechas
Un pigmento excitado es inestable, y tiene varias "opciones" disponibles para
llegar a ser más estable. Por ejemplo, puede transferir su energía extra o su
electrón excitado a una molécula vecina.

Las fases cromatográficas son dos:

La fase móvil: que fluye a través de una fase estacionaria, arrastrando con ella a
los compuestos de la mezcla.
La fase estacionaria: En la cual están retenidos los componentes de la muestra, y
a través de la cual fluye la fase móvil arrastrando a los mismos, es decir, que hace
pasar la mezcla para que en esa fase deje un claro rastro de sus elementos
químicos (la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro
de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo)
El alcohol, con los pigmentos disueltos en él, va ascendiendo por el papel como
consecuencia de la capilaridad o acción capilar. Los pigmentos menos solubles y
con mayor polaridad se quedan pegados al papel más abajo, mientras que los
más solubles y de menor polaridad siguen ascendiendo con el alcohol.  Como
cada pigmento tiene un grado de solubilidad distinto y diferente masa, en la tira de
papel se forman franjas coloreadas según se van depositando los pigmentos
Tomando en cuenta lo mencionado, el pigmento verde fuerte es el de mayor
polaridad, mientras que el pigmento naranja es el de menor polaridad.
De esta manera, las moléculas del soluto se absorben en la fase estacionaria, y a
medida que se produce la elución, van siendo desplazadas por las moléculas de
disolvente de la fase móvil. La retención del soluto se debe a la competencia que
se establece entre la fase móvil y éste, la cual radica en la polaridad de ambos.
Entonces, los componentes del soluto más polares se retienen más rápido que
aquellos con una menor polaridad.
La separación de los pigmentos mediante cromatografía se da a través de un
mecanismo de adsorción física, dónde se establecen una serie de equilibrios de
adsorción-desorción que dependen de la polaridad de cada pigmento y del tipo de
fuerzas intermoleculares que pueden establecer con los componentes de la fase
estacionaria y con la estructura del disolvente de la fase móvil. Así, la clorofila b,
más polar que la a, se adsorbe más intensamente y presenta, en consecuencia,
un factor de retardo (Rf) menor. Los carotenos, en cambio, son hidrocarburos y
aunque la deslocalización de los electrones pi de sus estructuras generan fuerzas
Van der Waals, no son lo suficientemente fuertes como para interactuar con la
fase estacionaria, por lo que quedan disueltos en la fase móvil y son arrastrados
por ésta, presentando en consecuencia, un factor de retardo mayor. Por tanto, La
separación de los componentes de la mezcla se determina por las interacciones
polares de los componentes de la misma con las fases estacionaria y móvil .

Lo que viene a decir en la técnica de cromatografía más típica, la Cromatografía

en Papel, es que tras mezclar la sustancia que queremos analizar con un
disolvente (fase móvil), la hacemos pasar por un papel especial (fase
estacionaria), que se colorea en función de las sustancias que están en lo que
estudiamos.
Por lo cual se encuentran:

 Analito: Es la mezcla que va a ser separada mediante la técnica cromatográfica

elegida.
 Fase Móvil: Mezcla de Analito con un disolvente que desplaza los componentes
a diferente velocidad.
 Fase Estacionaria: Sustancias fijas sobre las que se mueve la Fase Móvil.

CONCLUSION:
En este informe se dio a conocer el proceso y resultados obtenidos
que llevamos a cabo en el laboratorio sobre cromatografía en papel,
como lo planteado anteriormente y visto en todo el trabajo, utilizamos
la espinaca para llevar a cabo nuestra experimentación en el
laboratorio.
Dimos a conocer y comprobar mediante nuestra ardua investigación
los diferentes tipos de pigmentos fotosintéticos que se encontraban
contenidos en las hojas espina los cuales se lograron ver después de
la absorción del papel filtro con la mezcla hecha con el alcohol y las
hojas de espinaca, al principio no se lograba distinguir muy bien, sin
embargo, cuando el papel ya seco se podía lograr distinguir mediante
diferentes colores, estas fueron:
 1. La clorofila b que se encontraba de un color verde en la parte
baja del papel.
2. La clorofila a se representó mediante un verde un poco más
oscuro que el anterior.
3. La xantofila se veía como un amarrillo bien claro y de mayor
superficie en el papel absorbente.
4. Los Carotenos visto de un color naranja en la parte superior del
papel.
Con esto nos dimos cuenta que la espinaca no solo está compuesta
por pigmentos verdes como se pensaría al verla a simple vista, sino de
otros dos como como la xantofila y carotenos que son de un color
sumamente diferentes; Aprendimos que una cromatografía en papel
no es tan simple como se piensa, si bien esta no usa maquinas
especiales, no tiene un costo muy alto y los pasos son más simples
comparada con otras cromatografías, no obstante hay que tener
extremo cuidado con el proceso, ya que con un paso en falso e incluso
una pequeña distracción puede hacer o alterar que las muestras
hechas fallen, lo decimos por experiencia propia como se mostró en el
informe, tuvimos que repetir el experimento dos veces por haber
cometidos algunos pequeños errores que hizo que nuestra
cromatografía no subiera, pero por fortuna en la segunda vez
repitiendo la experiencia logramos hacerlo con éxito gracias a lo
aprendido en la primera experiencia sin cometer los mismos errores.
Con los objetivos planteados al inicio de este informe podemos decir
que fue un éxito:
 Conocer los principios básicos de la cromatografía, así como la
descomposición de diferentes tintas, este lo logramos mediante
la investigación previa antes del laboratorio para lograr hacer
nuestra guía para el laboratorio y además con la investigación
post laboratorio hecha y expuesta en este trabajo.
 Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una
técnica sencilla de cromatografía en papel, este también y
comprobado fue cumplido con éxito, ya que se puede ver las
distintas muestras reales hechas en clases que se mostraron
como pruebas en este informe.
Gracias a este experimento logramos aprender por experiencia propia
el hermoso trabajo llevado por las cromatografías en papel, ver como
la mezcla va subiendo por el papel y al secar lograr ver los pigmentos
separados de los otros es muy bello e interesante de analizar, lo que
más sorprende aun es que esta experiencia se puede realizar con
diferentes materiales que podemos encontrar comúnmente en
nuestras casas. Con una buena manipulación y paciencia se pueden
obtener resultados magníficos.