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CÓDIGO M-2007- 05
CALIDAD
MANUAL DE HEMATOLOGIA
FECHA 28/10/2019
APOYO DIAGNOSTICO
NIT 800.084.206-2 VERSIÓN 2.0
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCION................................................................................................................. 4
JUSTIFICACION .................................................................................................................. 4
MARCO TEORICO ............................................................................................................... 4
1 ANTICOAGULANTES ................................................................................................ 5
1.1 OXALATO DE AMONIO Y POTASIO ......................................................................... 5
1.2 CITRATO DE SODIO AL 3.8% ................................................................................ 5
1.3 HEPARINA .............................................................................................................. 6
1.4 EDTA (ETILEN DIAMINO TETRA ACETATO) ........................................................ 6
1.5 CPD o ACD (CITRATO FOSFATO DEXTROSA) .................................................... 6
2 HEMATOLOGIA Y COAGULACION ............................................................................. 6
2.1 HEMATOLOGIA ...................................................................................................... 6
2.2 COAGULACION ...................................................................................................... 6
3 CUADRO HEMATICO AUTOMATIZADO ..................................................................... 6
INTRODUCCION
El hemograma automatizado es el resultado de años de investigación y evolución, en los cuales, paso a paso se fueron
realizando mejoras que han beneficiado la técnica y al profesional, y que hoy generan practicidad y especificidad. En él
se aborda el análisis de las características sanguíneas, que brindan un esquema del estado fisiológico del paciente,
como anemias, hemoconcentración, procesos febriles, infecciosos y cancerígenos.
El presente manual ha sido elaborado para que su contenido sea fácil de entender por el personal que labora en el
laboratorio ESE ISABU el cual contiene los aspectos más importantes del laboratorio, se exponen las principales
técnicas básicas del laboratorio de hematología y las alteraciones más frecuentes de los componentes de la sangre. El
manual tiene el propósito de ordenar todos los procedimientos que se realizan y tener un instrumento que facilite el
desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos técnicos en la sección de Hematología de
este modo se contribuye a mejorar la calidad de diagnóstico. El laboratorio de hematología cuenta con equipos de alta
tecnología siguiendo y cumpliendo las pautas de los controles de calidad interno y externo.
OBJETIVOS
Contar con un documento de consulta y orientación para el personal del laboratorio clínico del HLN y la UIMIST
Determinar y estandarizar las actividades que se deben de seguir y realizar en el Laboratorio Clínico en el área
de Hematología, con el fin de obtener resultados confiables que sean útiles para establecer el diagnóstico,
evaluar la evolución y/o pronóstico de una enfermedad, así como la valoración de la efectividad de un
tratamiento.
Ser una herramienta, práctica, de fácil acceso y fácil compresión para todo el personal que trabaja en el
laboratorio clínico
ALCANCE
Este manual ha sido diseñado para el personal de Bacteriología que se encuentre procesando muestras biológicas en el
área de Hematología del laboratorio clínico de la ESE ISABU.
GLOSARIO
Amastigotes: Forma aflagelada que se evidencia en los tejidos infectados.
Anemia: - una condición en la que hay una disminución en la cantidad de hemoglobina debido a una disminución del
número de células rojas de la sangre.
Anemia hemolítica: es un grupo de trastornos hemolíticos (sea intravascular como extravascular), que causan la
disminución de la masa de glóbulos rojos sanguíneos.
Coagulación: Proceso en el que se forman coágulos de sangre. Unas variedades de factores son necesarias para que
la sangre tenga una habilidad normal de coagular. La habilidad de coagular es evaluada por varios exámenes de sangre
incluyendo el tiempo de protrombina (TP), tiempo parcial de tromboplastina (TPT), y el conteo de plaquetas.
Examenes ABO: Exámenes de sangre que clasifican la sangre humana en uno de cuatro grupos: A, B, O, ó AB.
Glóbulos Rojos: Células en la sangre que transportan el oxígeno a la sangre y los tejidos.
Granulocitos: Un sub-tipo de glóbulos blancos nombrados debido a la presencia de gránulos en la célula. Estas células
protegen el cuerpo contra la infección bacteriana.
Hematopoyesis: Formación de los glóbulos rojos de la sangre, que tiene lugar principalmente en la médula roja de los
huesos.
Hemoglobina: La parte de los glóbulos rojos que transporta el oxígeno a los tejidos.
Hemolisis: Destrucción de los hematíes o glóbulos rojos de la sangre que va acompañada de liberación de
hemoglobina.
Hemostasia: Contención o detención de una hemorragia mediante los mecanismos fisiológicos del organismo.
Incompatibilidad sanguínea: Situación existente entre 2 individuos que pertenecen a grupos sanguíneos diferentes y
entre los cuales es imposible realizar una transfusión.
Histograma: Los histogramas son gráficos que indican la frecuencia de un hecho mediante una distribución de los
datos.
Malaria: Es causada por un parásito que se transmite a los humanos a través de la picadura de mosquitos anofeles
infectados.
Plaquetas: Células sanguíneas que ayudan a prevenir el sangrado y ayudan cpn la coagulación de la sangre cuando los
vasos se rompen.
Plasma: Es la fracción líquida y acelular de la sangre. Se obtiene al dejar a la sangre desprovista de células como los
glóbulos rojos y los glóbulos blancos.
Trombo aglutininas: Las aglutininas son globulinas de tipo gamma (gammaglobulinas), producidas por las mismas
células que producen los anticuerpos frente a antígenos extraños. La mayor parte de las aglutininas son moléculas de
inmunoglobulina de tipo IgM e IgG
SISTEMA DE GESTION DE
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MANUAL DE HEMATOLOGIA
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APOYO DIAGNOSTICO
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JUSTIFICACION
Se busca que el personal pueda familiarizarse con el equipo y pruebas realizadas en la sección de hematología
mediante un acercamiento general y didáctico, con el ánimo de generar cohesión y linealidad en su entendimiento, para
que se puedan solventar las dudas y puedan resolver asuntos relacionados con los procedimientos de rutina. El
presente manual revisa las principales características del equipo de hematología y sus procedimientos, así como las
pruebas realizadas y las alteraciones que se puedan presentar en el hemograma con el fin de generar una cultura
unificada y generalizada en los operantes
MARCO TEORICO
La sangre es uno de los vehículos más importantes para el transporte de diferentes componentes como el oxígeno y los
nutrientes que provienen desde el tracto gastrointestinal, además se encarga de mantener la homeostasis y participa en
la defensa contra los agentes patógenos.
El cuadro hemático es una de las pruebas más solicitadas en un laboratorio clínico, ya que aporta información
importante sobre el estado de salud de una persona. El cuadro hemático o hemograma o biometría hemática se encarga
de evaluar los diferentes elementos celulares que conforman la sangre como los glóbulos rojos, leucocitos, plaquetas,
plasma y proteínas que en él se encuentren.
El manual de hematología tiene como finalidad explicar el manejo del equipo usado para realizar el cuadro hemático
automatizado, explicar los procedimientos, fundamentos de las diferentes pruebas realizadas en esta sección.
1. ANTICOAGULANTES
Se utilizan para mantener la sangre fluida. La mayoría de estas sustancias tienen la propiedad de remover o quelar el
calcio presente en la sangre para de esta manera impedir que se dispare la cascada de coagulación y se coagule la
sangre.
a. ACCION: Los oxalatos actúan sobre la sangre removiendo el calcio en forma de oxalatos de calcio insolubles.
b. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Los oxalatos de potasio producen encogimiento de los eritrocitos haciéndolos disminuir su volumen. En
cambio, el oxalato de amonio hace que los glóbulos rojos se ingurgiten o aumenten su tamaño.
Por esto no es conveniente utilizar aisladamente ninguno de estos anticoagulantes. La mezcla seca de oxalato
de potasio y amonio es bastante buena, pues produce menos distorsión en el tamaño celular.
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a. ACCION: Los citratos solubles actúan como anticoagulantes combinándose con el calcio, formando una sal de caldo
insoluble.
b. USO: Estudios de coagulación como: tiempo de protrombina (PT), tiempo parcial de Tromboplastina (PTT),
Fibrinógeno, productos degradación del Fibrinógeno (PDF). También se puede utilizar para realizar la velocidad de
sedimentación globular.
Los oxalatos de potasio producen encogimiento de los eritrocitos haciéndolos disminuir su volumen. En
cambio, el oxalato de amonio hace que los glóbulos rojos se ingurgiten o aumenten su tamaño.
Por esto no es conveniente utilizar aisladamente ninguno de estos anticoagulantes. La mezcla seca de oxalato
de potasio y amonio es bastante buena, pues produce menos distorsión en el tamaño celular.
c. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
VENTAJA: Es una sustancia isotónica que evita la hemólisis y preserva los factores de la coagulación.
DESVENTAJA: Diluye la sangre y por esto no se puede usar para la elaboración del cuadro hemático.
1.3 HEPARINA
b. USOS: No altera el tamaño corpuscular de los glóbulos rojos. Reduce al máximo la posibilidad de hemólisis.
Se utiliza más que todo para hacer el estudio celular, fragilidad osmótica y para estudios genéticos.
a. ACCION: Forma un complejo con el calcio presente en la sangre, impidiendo la coagulación de la muestra.
c. USOS: Es el anticoagulante ideal para la realización de un cuadro hemático para el recuento de plaquetas y la
realización de La VSG.
Es el anticoagulante usado en banco de sangre para la recolección de las unidades o bolsas de sangre.
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Este anticoagulante, le proporciona todos los nutrientes a la sangre para su conservación en la nevera por espacio de un
mes.
2. HEMATOLOGIA Y COAGULACION
2.1 HEMATOLOGIA
2.2 COAGULACION
Tiempo de protrombina
Tiempo parcial de tromboplastina activada
Tiempo de sangría
Tiempo de coagulación
Antes de procesar un cuadro hemático a partir de una muestra anticoagulada hay que mezclar bien la muestra por
inversión del tubo varias veces.
Sin duda alguna el cuadro hemático (CH), es de las pruebas más solicitadas al laboratorio clínico como un perfil de
exámenes relacionados con los diferentes elementos celulares en la sangre y seguimiento de entidades hematológicas
como no hematológicas.
Para evaluar los anteriores parámetros, durante años se han desarrollado diferentes principios que le brindan al
laboratorista mayor exactitud con los resultados, generando calidad y confianza tanto a la institución como al usuario.
Entre estos principios se destaca la impedancia eléctrica, dispersión y absorción de luz; la primera se basa en la
propiedad de las células de ser malas conductoras de electricidad, esto significa que si se establece corriente continua
entre dos electrodos y al hacer vacío se hacer vacío se hace pasar a través de esta corriente una célula que se
encuentra diluida en un solución isotónica, conductora y des particularizada, la mala conducción de electricidad de la
célula hace que se produzca un aumento en la resistencia y se genere un impulso. Este impulso se traduce en un
cambio de voltaje y su tamaño es proporcional al de la célula, así como el número total de pulsos contados es igual al
número de células en la dilución.
El Horiba Pentra 80 XL es un equipo que realiza cuadros hemáticos automatizados de cuarta generación y puede
evaluar 26 parámetros (hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, volumen corpuscular medio, hemoglobina
corpuscular media, concentración de la hemoglobina corpuscular media, ancho de distribución de los eritrocitos,
recuento total de leucocitos, recuento diferencial de leucocitos, recuento de plaquetas y morfología de sangre periférica
por métodos electrónicos y manuales), puede procesar hasta 80 muestras por hora y solo usa 5 reactivos, incluyendo
una opción libre de cianuro para la determinación de hemoglobina (lysebio). Utiliza un sistema automático de bandejas o
racks, en los cuales caben hasta 10 muestras, y un sistema manual individual en los cuales se puede poner la muestra y
enviar la orden de procesamiento, que puede ser CBC o DIFF. El sistema automático de racks solo procesa en modo
DIFF.
VISTA FRONTAL
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1- Acceso a los reactivos: abra está cubierta para sustituir las botellas de reactivo.
2- Banco óptico: asegura el soporte y el ajuste de la célula de flujo, la lámpara y los elementos ópticos y electrónicos.
3- Dispositivo de la jeringa LMNE:
– Asegura la proporción correcta de diluyente de parada en la cámara LMNE.
– Inyecta la muestra en la célula de flujo.
– Inyecta el flujo de la vaina interior y exterior en la célula de flujo.
4- Dispositivo de la jeringa de reactivos:
– Asegura la proporción correcta de los reactivos:
– Reactivo lisante para hemoglobina (ABX Lyse).
– Reactivo de limpieza (ABX Cleaner).
– Reactivo lisante para el recuento DIFF (ABX Eosinofix).
– Diluyente para las diluciones (ABX Diluent) excepto el diluyente de parada
LMNE.
– Reactivo lisante para LEU/BASO (ABX Basolyse II).
5- Unidades de disquete y de CD
2- Dispositivo de recuento:
– Recibe los diferentes aclarados y diluciones.
– Regula la temperatura de las diluciones.
– Proporciona las diluciones para LEU/BASO, ERI/PLA y HB.
3- Placa base:
– Amplifica, procesa y cuenta las siguientes señales:
– Señales de resistividad y señales ópticas LMNE.
– Señal ERI y señal PLA.
– Señales de LEU/BASO.
– Mide la hemoglobina
VISTA POSTERIOR
BANDEJAS
Las bandejas del Horiba Pentra 80 XL se identifican en el sistema mediante etiquetas con código
de barras. Estas etiquetas deben colocarse en las bandejas del modo siguiente.
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Horiba Pentra 80 XL incluye una estación de control principal, conformado por un computador
integrado con pantalla táctil de 12 pulgadas y una resolución de 800 x 600.
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Esta barra se encuentra en la parte inferior de la pantalla y siempre contiene los mismos botones,
independientemente del menú abierto.
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MUESTRAS
MODO CBC
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MODO DIFF
La última parte de la muestra se utiliza para la cámara LMNE, desde la cual la muestra pasa a la
célula de flujo para el recuento de LMNE
TIPO DE
PARÁMETRO DEFINICIÓN UNIDADES
MEDICIÓN
LEU Leucocitos 10³/uL IMPEDANCIA
LIN% Porcentaje de linfocitos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
LIN# Valor absoluto de linfocitos 10³/uL
LUZ
MON% Porcentaje de Monocitos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
MON# Valor absoluto de Monocitos 10³/uL
LUZ
NEU% Porcentaje de Neutrófilos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
NEU# Valor absoluto de Neutrófilos 10³/uL
LUZ
EOS% Porcentaje de Eosinófilos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
EOS# Valor absoluto de Eosinófilos 10³/uL
LUZ
BAS% Porcentaje de Basófilos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
BAS# Valor absoluto de Basófilos 10³/uL
LUZ
Porcentaje de Células grandes
LIC% % IMPEDANCIA
inmaduras
ABSORCIÓN DE
Valor absoluto de Células grandes
LIC# 10³/uL LUZ
inmaduras
ALY% Porcentaje de Linfocitos atípicos % IMPEDANCIA
ABSORCIÓN DE
ALY# Valor absoluto de Linfocitos atípicos 10³/uL
LUZ
ERI Eritrocitos 106/uL IMPEDANCIA
HB Concentración de hemoglobina g/dL FOTOMETRÍA
HCT Hematocrito % CALCULO
VCM Volumen Corpuscular Medio fL CALCULO
HCM Hemoglobina Corpuscular Media pg CALCULO
Concentración de Hemoglobina
CHCM g/dL CALCULO
Corpuscular Media
IDE Índice de Distribución de Eritrocitos % CALCULO
PLA Plaquetas 10³/uL IMPEDANCIA
IDP Índice de Distribución de Plaquetas % CALCULO
VPM Volumen Plaquetar Medio fL CALCULO
PCT Plaquetocritos % CALCULO
3.1.5 PARAMETROS
Cada parámetro analizado en el equipo ABX Pentra 80 posee una forma específica de lectura, la
cual se presenta a continuación:
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ERI/PLA
Los ERI y las PLA se miden según el principio de variación de impedancia electrónica. Esto
significa que se genera un campo electrónico alrededor de la microapertura en la cámara a través
de la cual pasan las células sanguíneas. La muestra se diluye con un diluyente electrolítico (fluido
conductor de corriente electrónica), que la agita y la pasa a través de la microapertura calibrada. A
cada lado de la apertura hay dos electrodos entre los cuales no deja de pasar corriente eléctrica.
A medida que las células sanguíneas pasan por la apertura, crean resistencia (impedancia) en el
campo electrónico entre los dos electrodos. El voltaje que mide las células es proporcional al
tamaño de la célula. Dado que la corriente es constante y no se modifica mientras más grande sea
la célula, mayor resistencia tendrá. Mientras más pequeña sea la célula, menos resistencia tendrá.
Estos voltajes electrónicos varían a medida que las células atraviesan la apertura. Los impulsos se
amplifican, se canalizan según su tamaño y umbral, se agrupan, y luego se calculan
matemáticamente junto con los coeficientes de calibración para conseguir un valor numérico final
de ERI y PLA.
Histogramas
ERI: curvas de distribución en 256 canales de recuento comprendidos entre 30 fl y 300 fl.
PLA: curvas de distribución en 256 canales comprendidos entre 2 fl y un umbral móvil. Este umbral
varía de acuerdo con la población microcítica que existe en el área de análisis.
- Interferencias ERI:
Eritrocitos aglutinados: pueden causar un recuento inferior de los ERI. Las muestras con
esta condición pueden detectarse por sus elevados valores de HCM y CHCM, y
comprobarse mediante su examen microscópico.
Aglutininas frías: las inmunoglobulinas M, cuyos valores son mayores en esta
enfermedad, pueden disminuir el recuento de ERI y PLA e incrementar el VCM.
-Interferencias PLA:
Los eritrocitos muy pequeños (microcitos), los fragmentos de eritrocitos (esquistocitos) y
los fragmentos de LEU pueden interferir en el recuento de plaquetas y causar recuentos
elevados de las mismas.
Eritrocitos aglutinados: Pueden atrapar plaquetas y causar un recuento bajo erróneo de
las mismas. La presencia de eritrocitos aglutinados puede detectarse observando los
valores anormales de HCM y CHCM, y mediante un examen microscópico minucioso.
Un número excesivo de plaquetas gigantes: puede causar un recuento inferior e
inexacto de plaquetas, puesto que estas plaquetas grandes pueden exceder el umbral
superior del parámetro de plaquetas y no entrar en el recuento.
Quimioterapia: las drogas citotóxicas e inmunosupresoras pueden aumentar la fragilidad
de estas células y disminuir los recuentos de PLA. Puede resultar necesario usar métodos
de referencia (manuales) para obtener un recuento de plaquetas preciso.
Hemólisis: las muestras hemolizadas contienen estroma de eritrocitos, que puede
incrementar los recuentos de plaquetas.
Sangre con A.C.D.: la sangre anticoagulada con ácido citrato-dextrosa puede contener
agregados plaquetarios que pueden disminuir el recuento de plaquetas.
Una concentración elevada de lípidos y/o colesterol: puede interferir en el recuento
correcto de plaquetas. En pacientes que están siendo sometidos a tratamiento parenteral
con intralípidos, se ha informado de una sobreestimación en el recuento de plaquetas que
puede ocultar una trombopenia.
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LEU/BAS
LEU: el número de células contado durante un tiempo determinado por volumen x coeficiente de
LEU de calibración.
BAS: el número de células contado durante un tiempo determinado por volumen x coeficiente de
LEU de calibración como porcentaje del número total de leucocitos (basófilos y núcleos de LEU)
La diferenciación entre BASO y otros leucocitos se obtiene gracias a la acción lisante específica
del reactivo ABX Basolyse II.
-Interferencias LEU:
Leucocitos: los resultados de LEU que excedan los límites de linealidad del sistema
requerirán una dilución de la muestra de sangre (muestra leucémica seguida de
leucopenia). El reproceso de la muestra diluida permitirá obtener el valor del análisis
correcto.
Eritrocitos no lisados: en casos excepcionales, los eritrocitos de la muestra de sangre no
se lisan completamente. Estos eritrocitos no lisados aparecerán en el histograma de LEU
con una alarma L1 o con una línea de base demasiado elevada en el lado correspondiente
a la población linfocitaria. La existencia de eritrocitos no lisados provocará un elevado
recuento de LEU falso.
Mieloma múltiple: la precipitación de proteínas en pacientes con mieloma múltiple puede
generar recuentos de LEU elevados.
Leucemia: esta enfermedad puede generar un recuento de LEU muy bajo debido a una
posible mayor fragilidad de los leucocitos, que puede provocar la destrucción de algunas de
estas células durante el recuento. Estos fragmentos de glóbulos blancos también
interferirán en los parámetros diferenciales de los glóbulos blancos.
Quimioterapia: las drogas citotóxicas e inmunosupresoras pueden aumentar la fragilidad
de las membranas leucocitarias, que puede provocar recuentos LEU bajos.
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-Interferencias BAS
Un número excesivo de leucocitos (leucocitosis) puede provocar una subida artificial del
recuento de basófilos debido a la desviación de la población de leucocitos en la zona de los
basófilos.
Los monocitos y los blastos presentan gránulos mayores y pueden desplazarse al área de
recuento de basófilos.
Un número anormalmente bajo de leucocitos (leucopenia) también puede aumentar los
resultados relativos a los basófilos. Los elementos presentes en la zona de basófilos se
recuperan en una pequeña cantidad total de leucocitos, lo que aumenta el error estadístico
y genera variabilidades en el porcentaje.
La debilidad de las células leucocitarias en algunas enfermedades (leucemia linfática
crónica) o durante el tratamiento frente al cáncer (quimioterapia) puede revertir en el canal
basófilo durante la evaluación de los leucocitos debido a su destrucción, lo que aumenta las
estadísticas de los basófilos.
La leucemia hace que los basófilos pierdan sus características citoquímicas y reaccionen
anormalmente a los reactivos. La destrucción de los citoplasmas basófilos evita su
diferenciación con los otros leucocitos.
Los basófilos de tamaño muy reducido (como consecuencia de los tratamientos) pueden
interferir en el recuento de leucocitos dado que no es posible diferenciar los tamaños de las
células.
Los basófilos anormales (como consecuencia de la desgranulación provocada por las
alergias) pueden interferir en los recuentos de leucocitos porque los tamaños de células no
pueden diferenciarse y porque pueden perder el material intracitoplásmico característico.
LMNE
Los recuentos de LEU y del diferencial en 5 partes en la célula de flujo se basan en 3 principios
básicos:
El sistema hidrodinámico secuencial doble (DHSS) permite un flujo lineal de las células a
través del haz de luz (patentado por HORIBA ABX).
El volumen de la célula se mide mediante la corriente eléctrica (cambios en la impedancia).
La medición de la luz transmitida con un ángulo de 0 aumentos permite una respuesta
medida de acuerdo con la estructura interna de cada célula y su absorbancia, porque la luz
no absorbida pasa a través de los espacios en el material nuclear de cada célula.
LIN: los linfocitos son células redondas muy pequeñas de citoplasma condensado y núcleo grande.
Por su tamaño reducido, estas células suelen colocarse en la parte inferior del eje Y óptico y en la
parte inferior del eje X de volumen. El extremo izquierdo del área de linfocitos (LL) debería estar
vacía. La detección de las células en el área (LL) indica que hay linfocitos pequeños, agregados
plaquetarios, eritroblastos (eritrocitos nucleados) y una alineación mal ajustada de la célula de
flujo. También puede percibirse ruido de fondo en esta área si hay muchas interferencias.
-Interferencias:
La presencia de eritroblastos, de algunos parásitos y de eritrocitos resistentes a la lisis
puede interferir en la precisión del recuento de LIN.
Las limitaciones indicadas para el recuento de LEU también afectan a los recuentos de
LIN# y LIN%.
MON: los monocitos son células muy grandes de forma irregular con núcleos muy complejos. El
núcleo contiene capas y, a veces, vacuolas. El citoplasma también es grande y está compuesto
por material intracelular no granulado. Estas células no se dispersan ni absorben gran cantidad de
luz cuando pasan por la célula de flujo. Por lo tanto, se colocan en la parte inferior del eje Y óptico.
Dado que los monocitos son células grandes, se colocan a la derecha en el eje X de volumen.
-Interferencias:
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NEU: los neutrófilos son más grandes que los linfocitos. Los neutrófilos contienen material granular
en el citoplasma y tienen un núcleo segmentado. Debido a estas características celulares, la luz
atraviesa más estas células cuando pasan por la célula de flujo. Esto hace que los neutrófilos se
coloquen más arriba en el eje Y óptico y que se distribuyan por el eje X de volumen en función de
su grado de madurez. La hipersegmentación y el aumento de los gránulos colocan a estas células
más arriba en el eje Y óptico.
-Interferencias:
La presencia excesiva de eosinófilos, metamielocitos, mielocitos, promielocitos, blastos y
plasmocitos puede interferir en la precisión del recuento de neutrófilos.
EOS: los eosinófilos son parecidos a los neutrófilos. Contienen material granular y núcleos
segmentados en el citoplasma. El material granular se colorea con ABX Eosinofix antes de que los
eosinófilos pasen por el haz de luz en la célula de flujo. Debido a la coloración del reactivo, los
eosinófilos se colocan en la parte más alta del eje Y óptico. La
Hipersegmentación y el aumento de los gránulos distribuyen esta población por la parte superior
derecha de la matriz.
-Interferencias:
La presencia de granulaciones anormales (áreas sin granulación, granulaciones tóxicas,
etc.) puede interferir en el recuento de eosinófilos.
LIC y ALY
Las células inmaduras granulocíticas se detectan por su gran volumen y la presencia de más
gránulos que aumentan la cantidad de luz que pasa por las células y la intensidad de la luz
dispersada. Por consiguiente, las células como los metamielocitos se encontrarán a la derecha de
los neutrófilos y casi al mismo nivel. Los mielocitos y los promielocitos aparecerán en posición de
saturación en la parte extrema derecha de la matriz. Los metamielocitos, los mielocitos y los
promielocitos se clasificarán como (LIC) y los resultados relacionados con ellos se incluirán en el
valor de los neutrófilos. Normalmente, los blastos se situarán a la derecha de la población de
monocitos y, por este motivo, incrementarán el recuento de LIC. Los blastos pequeños se
encontrarán entre los linfocitos normales y las poblaciones de monocitos (ALY).
El sistema genera un aviso de blastos cuando aumentan los recuentos dentro del área LIC, en
relación con la detección de blastos en el histograma de basófilos.
Los linfocitos grandes se detectan normalmente en la zona de los ALY, donde también se
encuentran formas linfoides reactivas, linfocitos estimulados y plasmocitos.
Los agregados plaquetarios y los restos de fragmentos de los eritrocitos se representan en el área
de ruido de fondo situada en el ángulo inferior izquierdo de la matriz. La mayoría de los umbrales
de población celular son fijos e indican los límites de la normalidad morfológica de los leucocitos.
Los cambios en la morfología de una población concreta se expresarán en la matriz mediante un
desplazamiento de la población correspondiente.
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HB
Durante el ciclo de análisis, el reactivo lisante se libera en la cámara de dilución.
Alphalyse: Este reactivo rompe la membrana celular de los eritrocitos y libera hemoglobina en el
interior de la célula. La hemoglobina liberada por el reactivo lisante se combina con el cianuro de
potasio del reactivo lisante para formar un compuesto cromogénico de cianometahemoglobina. A
continuación, se mide este compuesto en la parte óptica de la cámara de la primera dilución
usando una técnica espectrofotométrica a una longitud de onda de 550 nm.
Lysebio: Reactivo para la lisis de eritrocitos y la determinación sin cianuro de la hemoglobina. La
adición del agente de lisis produce una liberación de hemoglobina. Todo el hierro hemínico se
oxidiza y se estabiliza. Los complejos resultantes de la oxidación se cuantifican por
espectrofotometría a una longitud de onda de 550 nm.
-Interferencias:
Turbidez de la muestra de sangre: algunos factores fisiológicos y/o terapéuticos pueden
incrementar los resultados de la HB. Para obtener resultados de HB precisos cuando existe
una turbidez elevada en la muestra de sangre, se debe determinar las causas de esta
turbidez y seguir el procedimiento adecuado entre los que se describen a continuación:
Número alto de LEU: un valor de LEU muy alto causará una difracción excesiva de la luz.
En estos casos, debe usar los métodos de referencia (manuales). La muestra diluida
debería centrifugarse y el fluido sobrenadante debería medirse con un espectrofotómetro.
Concentración elevada de lípidos: una concentración elevada de lípidos en la muestra de
sangre dará al plasma un aspecto “lechoso”. Esto puede ocurrir en casos de hiperlipidemia,
hiperproteinemia e hiperbilirrubinemia. Para obtener una determinación precisa de la
hemoglobina debe usar métodos de referencia (manuales) y un blanco del plasma.
Turbidez elevada: puede aparecer en casos en que los eritrocitos son resistentes a la lisis.
Esto puede conducir a un elevado resultado HB incorrecto, pero se puede detectar
observando los valores anormales HCM, CHCM y la línea de base incrementada en el
margen superior del histograma LEU. Si los resultados de hemoglobina son erróneos,
provocará que los resultados de HCM y CHCM sean también incorrectos.
Sangres fetales: la mezcla de sangre materna y fetal puede producir valores altos y
erróneos de la HB.
Todos los impulsos de los eritrocitos se agrupan por tamaños. Luego se calcula el promedio de
altura de impulso de cada grupo. A continuación se calcula el promedio de todos los promedios de
altura de impulso de eritrocitos. Esta función es una integración numérica de VCM.
- Interferencias:
Aglutinación de eritrocitos: puede producir valores HCT y VCM erróneos. La aglutinación
de glóbulos rojos puede detectarse observando los valores anormales HCM y MHCM, y
mediante examen del frotis de sangre maculada. En estos casos puede resultar necesario
usar métodos manuales para obtener un valor HCT preciso.
IDE
El IDE se utiliza para determinar anomalías en los eritrocitos relacionadas con la anisocitosis. El
IDE permite al usuario realizar un seguimiento de la evolución de la anchura del histograma ERI en
relación con el número y el volumen medio de células.
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-Interferencias:
Deficiencia nutricional o transfusión sanguínea: puede causar resultados del IDE
elevados debidos a una deficiencia de hierro y/o de cobalamina y/o de folato.
-Interferencias:
Aglutinación de eritrocitos: puede producir valores de VCM erróneos. La aglutinación de
eritrocitos puede detectarse observando los valores anormales de HCM y CHCM, y
mediante su examen microscópico. En estos casos puede resultar necesario usar métodos
manuales para obtener un valor de VCM preciso.
Un número excesivo de plaquetas grandes y/o un recuento de LEU demasiado elevado
pueden interferir en la determinación exacta del valor del VCM. En estos casos, puede
descubrirse el error mediante un examen microscópico minucioso.
El valor HCM se determina según el valor HB y el recuento ERI. Las limitaciones indicadas
para HB y ERI tienen efecto en el valor HCM y pueden provocar valores inexactos.
El valor CHCM se determina según los valores HB y HCT. Las limitaciones indicadas para
HB y HCT tienen efecto en el valor HCM y pueden provocar valores inexactos.
VPM:
El VPM se deriva directamente del análisis de la curva de distribución de plaquetas.
-Interferencias:
Las plaquetas gigantes que exceden el umbral máximo del parámetro de plaquetas
pueden no ser contabilizadas como plaquetas. En consecuencia, estas plaquetas grandes
no se incluirán en el cálculo del instrumento del volumen plaquetario medio.
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PCT:
Los trombocitos se calculan usando la fórmula:
PCT% = PLA (103/mm3) x VPM (μm3) /10.000
IDP:
El IDP se calcula a partir del histograma PLA.
ABX PENTRA 80
Velocidad de procesamiento 80 muestras / hora
Volumen mínimo de muestra 53 µl
LEU/BAS 1/200
LMNE 1/80
Relaciones de dilución
ERI/PLA 1/10.000
HB 1/250
Impedancia para LEU, PLA, ERI, BAS
Fotometría para HB
Impedancia y absorción de luz para LIN, MON, NEU,
Medidas y cálculos EOS, ALY y LIC
Cálculos a partir de datos almacenados que se han
medido para HCT, VCM, HCM, CHCM, IDE, VPM, PCT e
IDP
LEU/BAS 80 μm
Diámetro de las aberturas de
LMNE 60 μm
recuento
ERI/PLA 50 μm
Cámara HB, LED 555 nm
Método Drabkin modificado (cianmethemoglobina)
Medida de la Hemoglobina
Fuente de luz Diodo electroluminiscente
Longitud de onda 550 nm +/- 10 nm
Estadísticas y control de Paquete de control de calidad extendido.
calidad
Procedimiento de calibración automática
Calibración
Introducción directa de los coeficientes de calibración
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Calibrador Minocal
Diluyente: ABX Diluent (20 o 10 litros)
Solución limpiadora: ABX Cleaner (1 litro, integrado)
Reactivos ABX Eosinofix (1 litro, integrado)
ABX Basolyse II (1 litro, integrado)
Solución lisante: ABX Lyse (0,4 litros, integrado)
Eliminación automática
Residuos Tratamiento de residuos según las normas
locales/nacionales
LINEALIDAD
Límite de linealidad: valores máximo y mínimo dentro de los cuales el instrumento no genera
ninguna alarma de dilución.
Estabilidad mx: Las muestras pueden utilizarse en los 15 ó 20 minutos después de la extracción.
Los resultados en todos los parámetros dependen del modo de conservación de la muestra.
Estabilidad relativa de la muestra durante 48 horas a 4°C
En el modo de tubo abierto, las muestras de sangre deberán mezclarse bien con cuidado
inmediatamente antes de colocarlas en el soporte de tubos y cerrar la puerta del soporte de tubos.
De este modo, se garantiza una mezcla homogénea para la medición.
ENCENDIDO
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Previo a activar la función, aliste las muestras en las bandejas provistas con el Equipo
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Haga clic sobre la opción para iniciar el modo automático. Inmediatamente, las bandejas
que haya cargado con muestras empezaran a ser analizadas.
Dentro del equipo, se identificarán las muestras por medio del código de barras
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MODO MANUAL
La opción “botón test” ahorra reactivo en los análisis que requieren solo la determinación de
parámetros eritrocitarios, en las cuales se usara el modo CBC. Si la muestra requiere recuento
diferencial, se usará el modo DIFF, que realizará el recuento total y diferencial de leucocitos
Los reactivos HORIBA ABX especificados para este instrumento han sido aprobados de
conformidad con la directiva europea 98/79/CE (Anexo III) para dispositivos médicos in vitro.
– Reactivo lisante para hemoglobina (ABX Lyse).
– Reactivo de limpieza (ABX Cleaner).
– Reactivo lisante para el recuento DIFF (ABX Eosinofix).
– Diluyente para las diluciones (ABX Diluent) excepto el diluyente de parada LMNE.
– Reactivo lisante para LEU/BASO (ABX Basolyse II).
1- ABX Lyse
2- ABX Basolyse II
3- ABX Eosinofix
4- ABX Cleaner
5- ABX Diluent
6- Contenedor de residuos
Cuando se pone en marcha el instrumento, el usuario debe comparar la cantidad que queda de
cada reactivo con la carga de trabajo diaria definida. Si uno o varios reactivos alcanzan un nivel
mínimo durante el día se generará una alarma y aparecerá una ventana de alarma con el siguiente
mensaje
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ABX EOSINOFIX
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Haga clic en el campo «Nº Lote» y use el lector de códigos de barras para actualizar
algunas de las especificaciones del reactivo: número de lote, fecha de caducidad
ABX EOSINOFIX
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Cuando el instrumento detecta un error o una alarma, estos aparecerán en la pantalla Alarma.
Se activa el botón Alarma y parpadea
AVISO DE SOSPECHA «!»:
Se puede generar un aviso de sospecha cuando se detectan anomalías en el recuento,
posiblemente por patología, muestra coagulada, células plasmáticas.
Cuando existe una pobre correlación entre las mediciones ópticas y de resistividad en la
matriz.
Cuando los recuentos de un determinado parámetro divergen más de los límites
predefinidos.
AVISO NO:
Significado: ruido de fondo (Background NOise).
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en el área de ruido de fondo
está por encima del límite definido en NO#, o cuando el número de partículas contadas
frente al número total de LEU excede el límite NO%.
Anomalías posibles: Agregados plaquetarios, Gran número de plaquetas, membrana de
eritrocitos resistente a la lisis (estroma), Eritroblastos, Contaminación.
AVISO LL:
Significado: linfocitos izquierda (Left Lymphocytes). Presencia de una población significativamente
grande en la parte izquierda del área de linfocitos.
Este aviso se genera cuando el número de partículas contadas está por encima del límite
definido en LL#, o cuando el número de partículas contadas frente al número total de LEU
excede el límite LL%.
Anomalías posibles: Linfocitos pequeños, Agregados plaquetarios, Eritroblastos, Membrana
de eritrocitos resistente a la lisis (estroma),
Este aviso aparece con un (!) en: LIN% LIN#, NEU% NEU#, MON% MON#, EOS% EOS#,
ALY% ALY#, LIC% LIC#
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AVISO LL1:
Significado: linfocitos a la izquierda 1 (Left Lymphocytes 1). Presencia de una población
significativamente grande de células en la parte izquierda del área de linfocitos.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas está por encima del límite
definido en LL1# y cuando el número de partículas contadas en LL frente al número total
de linfocitos excede el límite LL1%.
Anomalías posibles: Agregados plaquetarios, Eritroblastos, Membrana de eritrocitos
resistente a la lisis (estroma), Estroma, Linfocitos anormales pequeños.
AVISO NL:
Significado: Neutro/Linfo. Presencia de una población significativamente grande de células situada
en la zona de umbrales de separación entre linfocitos y neutrófilos.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta zona está por
encima del límite definido en NL#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite NL%.
Anomalías posibles: Neutrófilos pequeños sin gránulos y/o ligeramente segmentados,
Linfocitos con núcleo segmentado o linfocitos activados, Neutrófilos con membrana débil
Este aviso aparece con un (!) en: LIN% LIN# y NEU% NEU#
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AVISO MN:
Significado: Mono/Neutro. Presencia de una población significativamente grande de células situada
en la zona de umbrales de separación entre monocitos y neutrófilos.
Este aviso se genera cuando el número de partículas contadas en esta zona está por
encima del límite definido en MN#, o cuando el número de partículas contadas MN frente al
número total de LEU excede el límite MN%.
Anomalías posibles: Monocitos que tienen gránulos en su citoplasma o monocitos
hiperbasofílicos, Neutrófilos jóvenes con núcleo no segmentado (bandas).
Este aviso aparece con un (!) en: ALY % ALY # y LIC % LIC # y sustituye: NEU% y #,
MON% y # por «---»
AVISO LN:
Significado: neutrófilos a la izquierda (Left Neutro). Presencia de una población significativamente
grande de células en la parte izquierda del área de neutrófilos.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en LN#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite LN%.
Anomalías posibles: Destrucción de neutrófilos a causa de una almacenamiento incorrecto
de la muestra o porque la muestra es vieja, Contaminación, estroma o agregados
plaquetarios.
Este aviso aparece con un (!) en todos los parámetros diferenciales de LEU.
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AVISO NE:
Significado: Neutro/Eosino. Presencia de una población significativamente grande de células en el
área que separa los neutrófilos y los eosinófilos a causa de una superposición de ambas
poblaciones.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en NE#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite NE%.
Anomalías posibles: Eosinófilos jóvenes, Neutrófilos hipersegmentados, Eosinófilos
hipogranulares, Neutrófilos con granulaciones citotóxicas.
Este aviso aparece con un (!) en: LIC %LIC # y sustituye: NEU %, NEU #, EOS %, EOS #
por «----»
AVISO RM:
Significado: monocitos a la derecha (Right Mono). Presencia de una población significativamente
grande de células en la parte derecha del área de monocitos (LIC bajo).
Este aviso se genera cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en RM#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite RM%.
Anomalías posibles: Monocitos grandes, Monocitos hiperbasofílicos, Mielocitos o
promielocitos, Blastos grandes.
Este aviso con un (!) en: NEU% NEU#, MON% MON#, LIC% LIC#.
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AVISO RN:
Significado: neutrófilos a la derecha (Right Neutro). Presencia de una población significativamente
grande de células en la parte derecha del área de neutrófilos (LIC alto).
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en RN#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite RN%.
Anomalías posibles: Neutrófilos grandes, Células inmaduras de hemopoyesis con
granulocitos (metamielocitos, mielocitos, promielocitos).
Este aviso aparece con un (!) en: NEU% NEU#, LIC% LIC #.
AVISO LIC:
Significado: Células inmaduras grandes (Large Immature Cells). Presencia de una población
significativamente grande de células en las áreas RN + RM + canal 127.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en LIC#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite LIC%.
Anomalías posibles: Monocitos grandes, Monocitos hiperbasofílicos, Mielocitos –
metamielocitos – promielocitos, Blastos grandes, Neutrófilos grandes.
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AVISO ALY:
Significado: linfocitos atípicos (Atypical Lymphocytes). Presencia de una población
significativamente grande de células en la parte derecha del área de linfocitos.
Se genera este aviso cuando el número de partículas contadas en esta área está por
encima del límite definido en ALY#, o cuando el número de partículas contadas frente al
número total de LEU excede el límite ALY.
Anomalías posibles: Linfocitos grandes, Formas linfoides reactivas, Linfocitos estimulados,
Plasmocitos.
Cada vez que se realiza el extendido de sangre periférica debe haber una mezcla de la muestra de
sangre en forma suave, varias veces, tratando que los extendidos no queden muy gruesos ni muy
delgados, para así obtener una distribución adecuada de las células sanguíneas en diferentes
áreas del frotis y poder observar los eritrocitos en su tamaño, forma y color, así como realizar una
buena fórmula leucocitaria o diferencial y una buena observación de plaquetas en su morfología y
numero.
Una buena extensión realizada mediante esta técnica debe tener entre 3 y 4 cm de
longitud, un mínimo aceptable de 2,5 cm y presentar tres áreas de diferente grosor:
Zona gruesa o cabeza: se halla en la región inmediata al punto de partida de la
extensión. En ella siempre se aprecia un aumento del número de linfocitos.
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Los defectos de una extensión pueden ser, la excesiva longitud y escaso grosor o
viceversa, esto se presenta por un inadecuado tamaño de la gota de sangre, un error en la
velocidad o a un fallo en el ángulo de extensión de la misma. Otro defecto del frotis puede
ser la presencia de escalones o estrías ocasionado por la falta de uniformidad en el
deslizamiento de la gota, la existencia de abundantes zonas redondas que carecen de
sangre se debe a la presencia de restos de grasa o de suciedad en el portaobjetos.
Los glóbulos rojos son células especializadas del cuerpo humano, que se encargan
principalmente del transporte de oxígeno a todas las células, y la remoción del dióxido de
carbono producto de la oxidación celular.
ALTERACIONES EN LA COLORACIÓN
5. RECUENTO DE RETICULOCITOS
PRINCIPIO
Los reticulocitos son eritrocitos no nucleados inmaduros que contienen ácido ribonucleico
y que continúan sintetizando hemoglobina después de la pérdida del núcleo. Cuando la
sangre se incuba brevemente en una solución de azul de metileno o azul de cresilo
brillante recién elaborados, el RNA se precipita como un complejo colorante-
ribonucleoproteína, que microscópicamente aparece como una malla (retículo) azul oscura
o como gránulos de color azul que permiten identificar y contar los reticulocitos.
METODOLOGIA
A. MATERIALES
Procedimiento
B. CALCULO DE RESULTADOS
C. INTERVALOS DE REFERENCIA
D. INTERFERENCIAS
PRINCIPIO
La velocidad de sedimentación globular es un reactante de fase aguda que indica
presencia e intensidad de un proceso inflamatorio, aunque no es un método diagnóstico
de una enfermedad específica. Este parámetro depende de la agregabilidad de los
eritrocitos, puede aumentar cuando hay una elevación de la concentración plasmática del
fibrinógeno o de otras proteínas asimétricas.
FUNDAMENTO
Cuando se coloca sangre venosa bien mezclada en un tubo vertical, los eritrocitos
tenderán a caer hacia la parte inferior. La velocidad de sedimentación globular (VSG) es
equivalente a la longitud del recorrido descendente de la parte superior de la columna de
eritrocitos en un intervalo de tiempo determinado, y varios factores contribuyen a este
valor.
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METODOLOGIA
A. MATERIALES
Pipetas de westergren
Soporte para tubos
Reloj
Procedimiento
B. INTERVALOS DE REFERENCIA
Hombres: 0 – 15 mm/hr
Mujeres: 0 – 20 mm/hr
C. INTERFERENCIAS
7 RECUENTO DE PLAQUETAS
PRINCIPIO
METODOLOGIA
RECUENTO EN LÁMINA
A. INTERVALOS DE REFERENCIA
ALTERACIONES CUANTITATIVAS
a. Trombocitosis
b. Trombocitopenia
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APOYO DIAGNOSTICO
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ALTERACIONES CUANLITATIVAS
a. Cambios en forma
b. Cambios en tamaño
Plaquetas
C. INTERFERENCIAS
8 HEMOCLASIFICACION
PRINCIPIO
Esta prueba aprovecha las características inmunológicas que expresa cada individuo de
acuerdo a su particular codificación genética. En dichas pruebas se evidencia los
antígenos (Hemoclasificación Directa) y anticuerpos o aglutininas naturales
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METODOLOGIA
A. MATERIALES
HEMOCLASIFICACION DIRECTA
Interpretación
B. INTERFERENCIAS
PRINCIPIO
METODOLOGIA
A. MATERIALES
Procedimiento
B. INTERPRETACION DE RESULTADOS
NOTA: En el caso que con el anti D no haya aglutinación se debe hacer la prueba
utilizando glóbulos rojos lavados y adicionarles el suero Anti CDE, para confirmar la
ausencia o presencia de cualquiera de los otros antígenos del sistema Rh.
Si después de este procedimiento el resultado sigue dando negativo se debe hacer la
investigación de la variante Du. (También llamado Rh positivo débil).
C. INTERFERENCIAS
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Reactivos vencidos
Errores propios del operador de la prueba
Ejemplos
PRINCIPIO
METODOLOGIA
A. MATERIALES
Suero de Coombs
Sangre de la paciente sin anticoagulante (suero)
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Glóbulos rojos O+
Solución salina al 0.85%
Albumina
Procedimiento
Agregar dos gotas de la solución salmón de Glóbulos Rojos O+ más dos gotas del
suero del paciente en un tubo de ensayo
Centrifugar
Agregar dos gotas de albumina
Llevar a baño María a 37°C durante 30 minutos
Centrifugar a 1000-2000rpm por 2 minutos y observar aglutinación
Realizar tres lavados, en el tercer lavado descartar la solución salina tanto como
sea posible, resuspender los hematíes sedimentados
Agregar dos gotas de Globulina anti humana de Coombs
Dejar el tubo en reposo durante 15 o 30 minutos
Centrifugar a 1000 rpm durante 2 minutos
Agitar el tubo cuidadosamente y observar si hay aglutinación
B. INTERFERENCIAS
Y falsos negativos por lavado inadecuado, tiempos de incubación insuficientes, mal control
de temperatura.
METODOLOGIA
La lectura será positiva si hay aglutinación por tanto el hematíe posee el antígeno
investigado.
Una persona que es Du positiva si va a actuar como donante, debe considerarse como Rh
positiva, ya que aunque el Du sea débil puede sensibilizar a un Rh negativo; formando anti
D.
PRINCIPIO
METODOLOGIA
Procedimiento
Se aplica sobre todo en anemia hemolítica del recién nacido por anticuerpos anti D
procedentes de la madre. Se realiza con la sangre del cordón del recién nacido.
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13 TIEMPO DE PROTROMBINA PT
PRINCIPIO
Esta prueba puede también utilizarse para controlar una terapéutica anticoagulante en
paciente que reciban cumarínicos.
FUNDAMENTO
REACTIVOS Y MATERIALES
MUESTRA
METODOLOGIA
Procedimiento
A. INTERVALO DE REFERENCIA
Normal: 10 – 14 segundos
Terapia anticoagulante: 35 – 40 segundos
TOMA DE LA MUESTRA: Punción venosa, con las mismas indicaciones que para el ítem
anterior.
PRINCIPIO
Contiene un activador que puede ser caolín, celite, cefalina o sílice micronizada.
FUNDAMENTO
REACTIVOS
Cloruro calcio
Tromboplastina parcial.
Plasma testigo normal
MATERIALES
Baño maría
Cronómetro
Tubos de ensayo
MUESTRA
Plasma citratado.
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METODOLOGIA
Procedimiento
INTERVALO DE REFERENCIA
Esta prueba permite valorar la normalidad o anormalidad de los factores I, II, V, VIII, IX, X
y XII
MÁCULA
PÁPULA
NÓDULO
ÚLCERA Y CICATRIZ
Procedimiento:
-Con manos enguantadas realice limpieza del sitio de la lesión utilizando algodón
impregnado en alcohol o solución salina y jabón quirúrgico. Si hay costra remuévala
cuidadosamente.
-Sobre la cara interna del borde de la úlcera realice un raspado con el borde romo de una
lanceta o de una hoja de bisturí. Hágalo de manera tal que no sangre mucho.
-El material así obtenido se extiende en forma suave sobre una lámina portaobjetos
previamente limpiada, desengrasada y debidamente rotulada.
-Tome otras tres muestras de la misma manera colocando dos muestras por lámina en
dos láminas portaobjetos.
-Tiña las láminas con colorante de Wright. Para evitar la formación de precipitados de
colorante es aconsejable realizar la tinción con las láminas invertidas sobre una superficie
que tenga el colorante.
-Para identificar un amastigote como tal, debe observarse las formas ovaladas o
redondeadas características y distinguirse claramente el núcleo del cinetoplasto.
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Interpretación:
Si dos exámenes directos tomando en cada uno dos láminas con dos muestras por lámina
son negativos, y persiste la sospecha clínica de leishmaniasis, debe practicarse biopsia.
-Actualmente se puede procesar por métodos de detección de ADN parasitario con una
sensibilidad mayor a 70%.
• En el lugar de toma de muestra se debe contar con láminas portaobjetos nuevas, limpias,
esmeriladas y con banda mate, lápiz o marcador de punta fina para marcar la lámina,
lancetas estériles, algodón, alcohol, guantes, guardián para desechar material
cortopunzante y caneca con bolsa roja. Si las láminas nuevas no las adquirió
desengrasadas, puede alistarlas poniéndolas sueltas sumergidas en alcohol antiséptico al
70% por 24 horas, después de lo cual se saca una a una y se secan con un trapo tipo
pañal el cual no suelta hilaza. Luego las arregla envueltas en papel craft por paquetes de
10 láminas. Los paquetes a su vez los puede guardar en una caja que tenga bolsas de
silica gel. Identifique los paquetes como laminas nuevas desengrasadas.
• La toma de muestra idealmente debe hacerse por punción capilar debido que así se
obtienen las mejores preparaciones, sin embargo también es posible hacer el montaje de
las muestras con sangre tomada a partir de punción venosa utilizando anticoagulante.
• Las posibles zonas para la punción capilar son: el dedo índice o medio de la mano no
dominante, en el grueso artejo, o en el lóbulo de la oreja.
• Es importante poder elaborar dos láminas por paciente siguiendo el esquema que se
muestra en la figura 3.
• Una vez elaboradas las gotas gruesas se dejan secar a temperatura ambiente por 20
minutos, en un mesón horizontal y ordenado. Se debe proteger de los insectos cuando sea
necesario.
• Para finalizar la toma de muestra del paciente se limpia con algodón embebido en
alcohol en el sitio de punción para finalmente colocar una torunda de algodón seca en esta
zona. Pídale al paciente que sostenga el algodón en esta posición haciendo ligera presión.
-Tiña las láminas con coloración de Field. Para evitar la formación de precipitados de
colorante es aconsejable realizar la tinción con las láminas invertidas sobre una superficie
que tenga el colorante.
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Para considerar una muestra negativa se debe revisar como mínimo 200 campos.
Si hay menos de 100 parásitos en 200 leucocitos, hacer el recuento hasta 500 leucocitos
así:
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Si la parasitemia es muy alta contar 500 parásitos y los leucocitos que haya encontrado,
usando la fórmula:
En todas las muestras recibidas que se toman sin código de barras, se debe
comparar y verificar el nombre escrito en el tubo con el sticker del código del
paciente.
Tubos tapa lila: verificación de coágulos, volumen de la muestra (según
resultados)
Tubos tapa amarilla: se verifica la hemolisis (ausente), coágulos de fibrina
(ausente, volver a centrifugar) y volumen de muestra.
Tubos tapa azul: verificación de volumen de muestra, coágulos o hemolisis de la
misma (ausente)
Orina, materia fecal, esputo y demás líquidos, se realiza la verificación del
volumen de la muestra (si es muy poca el volumen de orina y el paciente no
puede orinar o es recolectada por sonda, se realiza la observación en el
resultado)
ASPECTOS A MEJORAR
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17 BIBLIOGRAFIA
Instituto Nacional de Salud, guía para la atención clínica e integral del paciente con
leishmaniasis. Convenio 256 de 2009 y numero 237 de 2010.-
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Versión Fecha Motivo del cambio Descripción del cambio