Complejo Mayor de

Histocompatibilidad
HLA

MC Roxana Regalado Rafael

Médico Patólogo Clínico
 Trasplante de Médula Ósea:
Un largo camino
Siglo XIX, el médico hematólogo
alemán Arthur Pappenheim propuso
concepto de Célula Precursora como el
origen de todas las líneas celulares
hematopoyéticas.
En 1956, Lorenz et. al define la
colonización de la médula ósea del
receptor por las células progenitoras
hematopoyéticas (CPH) del donador.

Revista de Investigación Clínica/Vol.57, Num. 2 / Marzo – Abril 2005/ pp. 129-131

 Premio Nobel de Medicina - 1980
En 1959, Jean Dausset (Francia)
describe el sistema del Complejo
Mayor de Histocompatibilidad –
HLA.

“Si los leucocitos de dos personas

son compatibles, sus tejidos
también lo son”, deducción que
permitió el estudio de Fundación
histocompatibilidad del HLA entre Jean Dausset
el donante y el receptor para lograr (CEPH)
un trasplante exitoso.
 PERÚ
ONDT -2013
501 Trasplantes,- diversos órganos, 95% riñón
3.2 x millón de habitantes son donantes
24 845 466 24 225 182 donantes y
620 284 CBU's

Tipaje de HLA en TPH con doble objetivo

• Construir registros de donantes voluntarios
• Desarrollar la búsqueda de pacientes que
precisaran un donante compatible
 En 1969, el médico estadounidense
Donald Thomas comunicó el primer
trasplante en un paciente adulto con
Leucemia Aguda.
Revista de Investigación Clínica/Vol.57, Num. 2 / Marzo – Abril 2005/ pp. 129-131

En Perú, se crea en 1990 la primera

unidad de trasplante de médula ósea
en el Hospital Edgardo Rebagliati
EsSALUD.
En 1994 se realiza el primer
trasplante autólogo en un paciente
con enfermedad de Hodgkin.
SALAVERRY GARCÍA, Oswaldo. Historia de la medicina peruana en el siglo XX, Vol.1
CLASIFICACION DE LOS TRASPLANTES

Naturaleza del tejido trasplantado

Rol Funcional e Importancia de Cèlulas Madre
Hematopoyèticas
1. Supervivencia: Reconocimiento de los Propio
y lo Extraño.
2. Respuesta y Regulación Inmunológica.
3. Tolerancia Inmunologica: Transplante,
Aloinmunización, Refractariedad.
4. Autoinmunidad y predisposición a
Enfermedades (Resistencia o suceptibilidad)
5. Estudio de poblaciones y Paternidad.
 TRASPLANTE DE PROGENITORES
HEMATOPOYETICOS
1. TPH Autólogo:
Las células madre
autodonadas se reinfunden
en el paciente

Se colectan
células madre
del paciente

El paciente recibe
quimioterapia o radiación
 TRASPLANTE DE PROGENITORES
HEMATOPOYETICOS
2. TPH Alogénico: Relacionado – No Relacionado
Se colectan las El paciente recibe
células madre del quimioterapia o radiación
donante

Las células
madre son
infundidas en el
paciente
 TRASPLANTE DE PROGENITORES
HEMATOPOYETICOS
3. TPH Singénico o Isotrasplante: 4. Xenotrasplante:

Hermanos gemelos Tejido de animales

 Un receptor y un donante deben ser
HLA compatibles
• De la misma forma que en una transfusión de
sangre el donante y el receptor necesitan ser
compatibles en el grupo sanguíneo del
Sistema ABO.
• En un trasplante de órganos o de médula
ósea, ambos necesitan ser compatibles en el
Sistema HLA, o de Antígenos Leucocitarios
Humanos.
Sistema Principal de Histocompatibilidad
 ¿Qué es el Sistema HLA?
• Los Antígenos Leucocitarios Humanos – HLA
son moléculas que se encuentran en los
glóbulos blancos (o leucocitos) de la sangre y
en la superficie de casi todas las células de los
tejidos de un individuo.
• Tienen la función de reconocer lo propio y lo
ajeno y aseguran la respuesta inmune, capaz
de defender al organismo de algunos agentes
que generan infecciones.
 ¿Qué es el Sistema HLA?
• Ese conjunto de moléculas y las formas en que
son transmitidas de padres a hijos constituyen
un Sistema también denominado de
Histocompatibilidad (histo = tejidos) o de la
individualidad (lo propio y lo ajeno).
• Su descubrimiento ha permitido a la medicina
dar un salto cualitativo en las posibilidades de
éxito de un trasplante.
 ¿Cuál es la función del CMH?

• Presentar peptidos
Restricción CMH
• ¿Todos los antígenos
deben ser
presentados por
CMH ?
 ¿Cómo ayuda el Sistema HLA?
• El trasplante como tratamiento de ciertas
enfermedades es relativamente reciente.
• Los primeros se efectuaron en los años 60’
siendo el gran problema el rechazo.
• Posterior a la década de los 70’ el
descubrimiento del Sistema HLA se pudo
valorar mejor el fenómeno del rechazo, EICH y
realizar TAMO con menor riesgo medidos por
los criterios de compatibilidad.
 DISTRIBUCIÓN DIFERENCIAL DE LAS MOLÉCULAS
CMH

TEJIDO CMH- I CMH-II

LT +++ +/-
LB +++ +++
Macrofagos +++ ++
CD +++ +++
Células epiteliales
Tímicas + +++
Neutrofilos +++ -
Hepatocito + -
Riñón + -
Cerebro (neurona no) + -
Eritrocito - -
Sincitio trofoblástico - -
 CMH = HLA
CMH-I:
• se expresa constitutivamente en todos los tejidos
• niveles altos: células linfoides
• niveles moderados: mayoría
• bajos: hígado
• Se incrementa por IFN-I VIRUS
¿Cuántas moléculas de CMH-I se expresan en
cada célula nucleada ?
Más de 100.000 de cada CMH-I
CMH-II:
• Distribución restringida
• Inducido por IFNg
 ¿Qué significa ser HLA compatible?
• Existen «lugares estratégicos» en el Sistema HLA
que sirven para examinar si una persona puede
ser compatible con otra en caso de injerto: HLA-
A, HLA-B, HLA-C, HLA-DR y HLA-DQ.
• El tipo de molécula – antígeno – presente en A, B,
C, DR y DQ es lo que determina la posibilidad de
aceptación del tejido (órgano o médula ósea) de
un donante por el organismo de un receptor.

Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014

 ¿Qué significa ser HLA compatible?
• Para que dos personas sean compatibles los
antígenos presentes en cada uno de esos
lugares deben ser idénticos o tener ciertas
coincidencias.
• Se detecta a través de un análisis de sangre en
el que la muestra es sometida a varias técnicas
de laboratorio que incluye el análisis de ADN.
 ¿Qué significa ser HLA compatible?
Los antígenos se identifican por un número y pueden ser
enormemente variados.
• Se reconocen más de 300 para lugar A.
• Alrededor de 500 para el lugar B.
• Más de 150 para el C.
• 400 para el lugar DR.
• Más de 50 para el DQ.
• Bajo la lupa de la investigación estos números seguirán
incrementando de forma constante.
• Esto nos permite evidenciar un alto número de
COMBINACIONES posibles y por ello lo difícil que ellas
sean COINCIDENTES.
Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014
 Asociaciones HLA-Enfermedad
Enfermedad Gen HLA Riesgo relativo

Síndrome de Reiter B27 37

Espondilitis anquilosante B27 86
Tiroiditis de Hashimoto B47 15
Esclerosis Múltiple DR2 5
Artritis Reumatoide DR4 4
Diabetes Juvenil DR3/DR4 3–6
Enfermedad Celíaca DQ2 / DQ8 48
 ¿Qué significa ser HLA compatible?
• El ADN es el material genético heredado de
padres a hijos.
• Se halla en el cromosoma del núcleo de la célula
de todo el organismo … GB de la sangre.
• Están químicamente constituidos por un
encadenamiento de ELEMENTOS BÀSICOS que se
podrían comparar con las letras de un alfabeto.
• Estos EB se combinan para constituir un TEXTO
organizado que trasmite un mensaje.
• En este texto se reconocen diferentes secciones
que son los GENES.
Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014
 ¿Qué significa ser HLA compatible?
• El ADN se hereda de los padres en una
combinaciòn peculiar para cada hijo.
• Los genes del Sistema HLA se trasmiten siempre
en BLOQUE.
• Cada bloque se denomina HAPLOTIPO.
• El padre aporta un haplotipo (mitad del genotipo)
y la madre el otro dando origen al GENOTIPO
HLA.
• Este es el PERFIL GENETICO propio del nuevo ser.
 ¿Qué significa ser HLA compatible?
• Este perfil O «Huella Genética» es la que debe
COINCIDIR en los «Lugares estratégicos» para
que dos tejidos se acepten.
• Esto es llamado COMPATIBILIDAD.

Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014

Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014
 ¿Somos o no Compatibles?
• Un donante es HLA Compatible cuando su
«Huella Genética» controlada en A, B, C, DR y
DQ presenta una combinación molecular
idéntica o con ciertas coincidencias con la
combinación del receptor.
• Según el tipo de trasplante, se necesitará
diferentes grado de coincidencias.

Programa de MO – SINDOME Uruguay 2014

¿Somos o no Compatibles?
Los hijos podrán
heredar
cualquiera de
estas cuatro
combinaciones
del material
genético
transferido
por los padres.
 ¿Cuál heredará
cada uno?
Depende del azar.
Existen 50% de
posibilidades
de que 2 hermanos
compartan un solo
haplotipo,
25 % de posibilidades
de que no compartan
ninguno
y 25% de que coincidan
Autor: Dr. Ausberto Chunga Chunga – Hospital Nacional Edgardo
en ambos haplotipos Rebagliati Martins – Banco de Organos y Laboratorio de
Histocompatibilidad, Lima - Perú
Las personas con
genotipo ¿Cuál heredará cada uno?
a-c; a-d; b-c, b-d
descienden de
progenitores que
aportan los
haplotipos a y b, por
un lado, y c y d, por
otro.
Un individuo está
siempre constituido
por material genético
que provienen de los
padres biológicos.
 ¿Cuál heredará cada uno?
• Cualquiera de las cuatro combinaciones posibles indica que el
individuo proviene de los mismos padres.
• Sólo ciertas coincidencias en la combinación heredada hacen
que un hermano sea HLA compatible.
• Según el tipo de trasplante, receptor y donante deberán
compartir uno o dos haplotipos.
 ¿Qué es la Tipificación HLA?
• La tipificación HLA es un análisis complejo que permite
identificar y comparar receptores y donantes en
Sistema HLA, y determinar la compatibilidad - o no - de
sus perfiles (para un trasplante).

• La tipificación nos permite establecer qué posibilidades

tiene una persona de socorrer a otra, en base a la
donación de un órgano o de algunos centímetros
cúbicos de su médula ósea.

• Dato de suma importancia para el médico tratante

quien debe evaluar la posibilidad de encarar un
trasplante y sus posibilidades de éxito.
Identifiquemos
la
Compatibilidad
 BIOLOGIA DEL TRASPLANTE
ÉXITO O FRACASO

HISTOCOMPATIBILIDAD DE HLA

IGUAL - SIMILITUD GENETICA - DONANTE Y RECEPTOR ACEPTACION

AUSENCIA - SIMILITUD GENÉTICA- DONANTE Y RECEPTOR RECHAZO

ESTUDIO DE ANTIGENOS DE HLA PARA

TRASPLANTE EXITOSO
Evitar el riesgo de los dos obstáculos
principales:
 COMPATIBILIDAD HLA
SE EXIGE
LA MAXIMA MEDULA OSEA
C
O
M
P
A Renal 2° 3°
T MODERADA
I
B RENAL 1°
I
L
I
D Cardiaco Pulmonar
A
D
DEPENDE DEL AZAR Hepático
 ¿Para qué Tipificamos?
1. Estudios de histocompatibilidad para trasplante
de órganos vascularizados.
2. Estudios de histocompatibilidad para trasplante
de médula ósea.
3. Estudios de paternidad.
4. Estudios antropológicos para establecer posibles
relaciones entre distintas poblaciones o grupos
étnicos.
5. Estudios de asociación de alelos del HLA con
enfermedades (susceptibilidad)
 ¿Dónde se realiza la Tipificación?
• En los Laboratorios de
Histocompatibilidad a partir de una
extracción de sangre.
• Las muestras de pacientes y familiares
son sometidas a procedimientos
altamente especializados y muy
específicos que permiten identificar
los antígenos presentes en los “lugares
estratégicos” de la sangre analizada.
• Hemos implementado desde el inicio
la tipificación de los 5 locus para el
TAMO de CPH.
• La tipificación HLA requiere una
solicitud del médico tratante y una
extracción de sangre en día y hora
coordinados.
 ¿Cómo Tipificamos?
• Técnicas Serológicas:
- Microlinfocitotoxicidad en placas de Terasaki
• Técnicas Moleculares:
- PCR con cebadores específicos de secuencia (SSP)
- PCR con cebadores específicos de locus e
hibridización con sondas marcadas,
específicas de alelos (SSOP)
- Secuenciación directa (SBT)
- Hibridación reversa
- Luminex
 Resolución HLA Molecular
• Baja Resolución Molecular:
Resolución de 02 dígitos.

• Mediana Resolución Molecular: *** AD

Resolución de un set de posibles alelos.

• Alta Resolución Molecular:

Resolución de alelo único: Resolución de 04
dígitos.
 Técnica de PCR - SSO
Obtención DNA marcado Procesos para el marcaje de DNA
Amplificar Denaturar
Denaturación/
Neutralizació
n
(10min)

Añadir Beads

Hibridización
Lectura (15min-50°C)
Amplificación
(90min)
Hibridar Marcar

2ul DNA
8 ul
primer
0.2 ul Taq
1.8 ul
Lavado
Buffer Lavado

Añadir
SAPE
 Reactivos Procesos Polimorfismos
Nombre
característicos característicos detectados
Endonucleasas de Longitud del
RFLP restricción Southern blot fragmento de
bacteriana restricción
Cebadores de PCR Genérico a
PCR/electroforésis
SSP específicos a
en gel
antígenos HLA a
secuencia nível de alelo
Sondas de PCR/hibridación de
aligonucléotido sondas con
SSOP específicas a producto de la
Alelos HLA
secuencia PCR
Cebadores PCR/establecimien
marcados/terminald to de secuencia del Alelos a nivel de
SBT ores de secuencia producto de la secuencia exacta
marcados PCR
Análisis DNA desna- Reunión de tiras
Complejos del DNA
turalizado de tira de DNA /electro-
hetero- simple/generador forésis del DNA
característicos de
alelos
dúplex UHG recombinado
Resultado e
Informe
de estudios
de HLA
Informe Final de Resultados
 BIOLOGIA DEL TRASPLANTE
ÉXITO O FRACASO

HISTOCOMPATIBILIDAD DE HLA

IGUAL - SIMILITUD GENETICA - DONANTE Y RECEPTOR ACEPTACION

AUSENCIA - SIMILITUD GENÉTICA- DONANTE Y RECEPTOR RECHAZO

ESTUDIO DE ANTIGENOS DE HLA PARA

TRASPLANTE EXITOSO
Evitar el riesgo de los dos obstáculos
principales:
 RESPUESTA INMUNOLOGICA EN EL RECHAZO AGUDO

Medicina & Laboratorio, Volumen 16, Números 1-2, 2010

ETAPAS EN EL RECHAZO CRÓNICO

Medicina & Laboratorio, Volumen 16, Números 1-2, 2010

 DONANTE RELACIONADO
HAPLOIDENTICO
Los problemas principales que se relacionaban a
este tipo de donantes se pueden resumir:

1. Con repleción de células T (no modificado):

– Alta tasa de EICH.
– Alta mortalidad relacionada al trasplante.
2. Con Depleción de células T.
– Alta tasa de recaída.
– Alta mortalidad relacionada a reemergencia de la
enfermedad
 Equipo de Trabajo
Laboratorio de Histocompatibilidad y
Criopreservación

MC. Roxana Regalado R.

Blga. Gissella Noroña C.
Blgo. César Saravia P.
Blgo. Pável Rubio R.
Blga. Ruth Roncalla M.
Blga. Rosarella Monteza S.

rregalado@inen.sld.pe
lab_tamo@inen.sld.pe

2016500 Anexo 1428