UNIVERSIDAD AUTÓNOMA GABRIEL RENÉ
MORENO
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y
BIOQUÍMICAS
INVESTIGACION DE LABORATORIO
PEROXISOMA-CATALASA
MATERIA : Biotecnología
DOCENTE : Dra. Mari lizzie cuellar
NOMBRE : Bill Jhonny Merida
GRUPO : B1
REGISTRO : 217031358
BQM-440 : BIOTECCNOLGIA
INVESTIGACIÓN DE LABORATORIO
● Objetivo :
- Determinar la presencia de la enzima catalasa
- Determinar el tiempo de reacción de la enzima catalasa ● Fundamento:
Los peroxisomas son vesículas que tienen diferentes enzimas ; entre las mas
comunes son la urato oxidasa y la catalasa . La catalasa es la que se encarga de
descomponer el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno ● Materiales :
- mortero. – Hígado
-Tubo de ensayo. – Papa
- Pipetas Pasteur. – Espinaca
- papel filtro. -Peróxido de hidrógeno
- Embudo
- Vasos precipitados
● Procedimiento: Preparación de homogenados:
Para preparar el homogenado, a partir de pedazos de papa, hígado, y espinaca por
separado en una licuadora o mortero y moler con un poco de agua hasta diluir parte
de la muestra.
Poner cada homogenado en un tubo de ensayo (frasco esterilizado).
Con gotero, ponga 5 gotas de cada homogenado en las fosas (adecuar alguna vasija
o paire de porcelana para cada muestra por separado) de la placa de porcelana;
añada 3 gotas de peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) a cada muestra.
Observe y anote los resultados en la siguiente tabla
Homogenado Reacción al añadir las gotas de peróxido
Papa
Color : Rosado claro (crema)
Olor : característico de papa ; olor
agradable
La reacción con el peróxido de
hidrogeno es gradual
Hígado
Color : gradual entre café-rojo
Olor : característico del hígado ; es un
olor desagradable
La reacción con el peróxido de
hidrogeno fue instantánea , bastante
rápida
Espinaca
Color : verde
Olor : ligeramente picante ,
es regularmente agradable
La reacción fue rápida
Agua
Color : incoloro
Olor :inodoro
No existió reacción con el peróxido de
hidrogeno
PREGUNTAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:
¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?
Ocurrieron reacciones a diferentes velocidades generando burbujas de
oxigeno
¿Ocurrió lo mismo para todas las muestras?
No , en el caso del agua no ocurrió ningún tipo de Reacción sim embargo
en las muestras orgánicas como ser el hígado , papa y espinaca ocurrieron
reacciones produciendo burbujas de oxigeno solo con una diferencia ; a
diferentes velocidades de reacción ¿Por qué se forman las burbujas?
Por que el peróxido de hidrógeno es una sustancia inestable que espontáneamente se
descompone en agua y oxígeno. Durante la reacción de descomposición, el oxígeno
gaseoso se escapa en forma de burbujas debido a la reacción de la catalasa con el
sustrato ( peróxido de hidrogeno)
¿Qué otros organismos se podrían probar? Se podrían probar con todos los
organismos ya que todos los organismos eucariótico poseen catalasa y seria
mejor probar con los diferentes tejidos ya que cada uno presentara una
diferente velocidad de reacción
● Procesamiento 2 : Homogenados con peróxido de hidrogeno
1. Identifique 5 tubos de ensayo.
2. Ponga 3 mL de cada homogenado en los tubos como sigue:
A - Hígado
B - Papa
C - Setas
D - Espinaca
E - Agua
3. Haga una marca hasta donde llega cada homogenado.
4. Ponga 3 mL de peróxido de hidrógeno en cada tubo de ensayo.
5. Observe la reacción por tubo y marque el cambio en líquido.
6. Tabule los resultados en la Tabla siguiente tabla
Tubo Cantidad de burbuja Cantidad de homogenado
que se consumió
Papa
Las burbujas fueron pocos Liquido total de 6 ml solo
ya que alcanzo solo una quedó 4.5 ml
altura del tubo de ensayo
de 2.5 cm
Agua
No hay reacción No consumió nada ,
quedando todo el liquido
total de 6 ml
Hígado
Las burbujas fueron Liquido total fue de 6 ml
bastantes ; alcanzaron solo quedo 5.8 ml
una altura de todo el
tubo de ensayo
Espinaca
Las burbujas fueron Liquido total fue de 6 ml
bastantes ; alcanzaron quedando solo 5.5 ml
una altura de 5 cm
Qué organismos produjo más gas?
Fue la muestra de hígado
¿Qué gas se está produciendo?
El gas que se produce es solo oxigeno
¿Qué sugiere la evidencia o los resultados de los experimentos realizados?
¿Contienen catalasa?
Sugiere que las diferentes muestras empleadas contienen catalasa. Es decir
que todos las células poseen peroxisomas . La mayoría de las células
eucariotas
● Procedimiento 3 : Efecto de la temperatura
1. Rotular 5 tubos de ensayo, y calentar baño de H20 hasta 80°C, y otro hasta 37°C.
2. Añadir 5 mL de hígado homogenado a cada uno.
3. Colocar los tubos en las siguientes condiciones:
Tubo 1 = 80°C (poner tubo por 5 minutos)
Tubo 2 = 37°C (poner tubo por 5 minutos)
Tubo 3 = Temperatura ambiental
Tubo 4 = En hielo (dejar por 30 minutos)
Tubo 5 = En congelador / 4°C (dejar por 30 minutos)
4. Añada 2 mL de peróxido al tubo 1. Observe los resultados y el tiempo que tarda en
producirse las burbujas.
5. Tome el tiempo inicial al añadir el peróxido y el tiempo cuando empiece a
producirse las burbujas.
6. Repetir con los demás tubos.
Imagen Temperatura Velocidad de reacción
No existió reacción alguna
80 °C ; el homogenado se hizo
blanco
Reacción instantánea . En
cuanto entra en contacto
37 °C
con el peróxido inicio la
reacción
Reacción muy rápida
Ambiente Tiempo de reacción fue de
0.95 seg.
Si existió reacción , fue una
Hielo reacción lenta.
Tiempo de reacción 0.70
seg
La reacción fue lenta
Congelador Tiempo de reacción 1.3 seg
7. Grafique sus resultados (tiempo de reacción vs. temperatura) en la siguiente Tabla
● Efecto de la temperatura : describir la gráfica =
La grafica indica que los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas ya
que por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones
catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir
de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la
cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima por encima de esta
temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura es
contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización
térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
¿Cuál es la relación entre el pH y la actividad enzimática?
La relación entre el pH y la actividad enzimática será la siguiente , las enzimas al
poseer grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos
pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las
proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en el cual la
conformación será la más adecuada para la actividad catalítica (Figura de la derecha).
Este es el llamado pH óptimo
Las enzimas del estómago funcionan mejor con un pH de 2. ¿Cómo
afectaría un pH de 4 en el estómago a la digestión?
La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de
pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente
su actividad. Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7
y la arginasa lo tiene a pH 10 . Si el pH aumentará a 4 , en el caso de la pepsina se
desnaturalizaría
¿De qué otras maneras se le ocurriría se podría probar el funcionamiento o
no funcionamiento de las enzimas estudiadas en el laboratorio? .
Espectrofotométricos
En los ensayos espectrofotométricos puede seguirse el curso de una
reacción observando cómo cambia la luz absorbida por la solución en la
que se está dando la reacción. Para poder utilizar un ensayo de este tipo
debe haber entre los sustratos o los productos alguno que absorba luz a
una longitud de onda determinada, y que sea la única molécula de la
mezcla de reacción que lo hace a la misma; de esta forma, se puede
observar el aumento o la disminución de la absorbancia a dicha longitud de
onda
Fluorimétricos
En el fenómeno de la fluorescencia una molécula emite luz de una longitud
de onda determinada tras absorber luz a otra longitud de onda. Los
ensayos fluorimétricos usan la diferencia en la fluorescencia entre producto
y sustrato para medir la reacción enzimática.
Calorimétricos
La calorimetría es la medida del calor liberado o absorbido por una reacción
química. Estos ensayos son muy generales, ya que muchísimas reacciones
llevan asociado algún cambio de calor y utilizando unmicrocalorímetro no
es necesario utilizar grandes cantidades de enzima o sustrato. Estos
ensayos pueden ser usados para medir reacciones imposibles de medir con
otros métodos.[4]
Quimioluminiscencia
La quimioluminiscencia es la emisión de luz por una reacción química.
Algunas reacciones enzimáticas producen luz y ésta puede ser medida para
detectar la formación de producto.
Radiométricos
En los ensayos radiométricos se mide la incorporación de radiactividad en
los sustratos o su liberación desde sustratos. Los radioisótopos más usados
en estos ensayos son 14C, 32P, 35S y 125I. Como los isótopos radiactivos
permiten el marcaje de un solo átomo de un sustrato, estos ensayos son
extremadamente sensibles y específicos. Son frecuentemente utilizados en
bioquímica y son a menudo la única manera de medir una reacción
específica en extractos crudos (mezclas complejas de las enzimas liberadas
al lisar células).
Cromatográficos
En los ensayos cromatográficos se mide la formación de producto
separando los componentes de la mezcla de reacción por cromatografía.
Normalmente, se lleva a cabo mediante HPLC. Aunque esta aproximación
puede requerir grandes cantidades de material de partida, su sensibilidad
puede incrementarse mediante marcaje radiactivo de los sustratos o los
productos.
¿Puede mencionar ejemplos de otras enzimas que actúen en nuestro
cuerpo?
En el organismo actúan varias enzimas unos ejemplos que se puede
mencionar entre las enzimas digestivas son
Amilasa, producida en la boca. La pepsina, producida en el estómago.
La tripsina, producida en el páncreas. La lipasa pancreática, producida
en el páncreas.
¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el
funcionamiento de las enzimas
Podría ocasionar que las Enzimas se desnaturalizan ya que eso ocurre
cuando sobrepasan su temperatura optima de las enzimas
¿Puede mencionar alguna condición médica que se deba al
malfuncionamiento o no funcionamiento de una enzima?
Las condiciones clínicas debida a un mal funcionamiento de enzimas son:
Fenilcetonuria; Porfiria; Porfiria Eritropoyética
Congénita;Albinismo;Histidinemia;Gota;Talasemia;Hemofilia;Hemofilia A;
Hemofilia B; Hemofilia C; ; Enfermedad De Gaucher; Citrulinemia;
Deficiencia De G6pd;Enfermedad De Almacenamiento De Glucosa Tipo I;
;
Xantomatosis;Fucosidosis;Aciduria;Arginosuccinica;Galactosemia;Hiperglic
er olemia;Xeroderma Pigmentosum Enfermedad De Pompe ;Aciduria
Metilmalónica; ;Enfermedad de Batten ;Síndrome de Lesch-Nyhan
;Enfermedad de Niemann-Pick; Enzimopatías Eritrocitarias ; Homocistinuria
;Hiperplasia Suprarrenal Congenita; Hipercolesterolemia familiar; Síndrome
de Bloom
¿Qué sucede cuando se pone peróxido de hidrógeno en una herida?
Ocurre la formacion de burbujas de oxigeno ; eso es debido a la cantidad
de microrganismos q existen en esa herida y también a la catalasa
liberada por la ruptura celular
¿Qué sugiere la evidencia?
La evidencia sugiere que muchos seres vivos forman catalasa y que la
temperatura es un factor importante en la actividad de la enzima , ya que si
se supera la temperatura optima de cada enzima esta no reaccionara en su
máxima capacidad,, ya que se desnaturalizaría
Explique porque tantas especies producen la enzima catalasa.
Primeramente El peróxido de hidrógeno es un residuo del
metabolismo celular de muchos organismos vivos pero dada su
toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos
peligrosos. Esta función la efectúa la catalasa que cataliza su
descomposición en agua y oxígeno
¿En qué otras maneras las enzimas son importantes para nosotros?
Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos
vivos. Son indispensables en la transducción de señales y en procesos de
regulación, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. También son
capaces de producir movimiento, Otro tipo deATPasas en la membrana
celular son las bombas de iones implicadas en procesos de transporte
activo. Además, las enzimas también están implicadas en funciones mucho
más exóticas, como la producción de luz por la luciferasa en las luciérnagas.
Una importante función de las enzimas es la que presentan en el sistema
digestivo de los animales. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas
son capaces de degradar moléculas grandes
Mencione ejemplos de cosas en nuestro diario vivir que envuelven algún
uso de enzimas.
Detergentes ; alimentos ; bebidas y lo nuevo es el empleo de enzimas en
los textiles
● Conclusiones :
Todos los. Seres vivos presentan catalasa debido a que el peróxido de
hidrogeno es un resultados del metabolismo celular y al ser toxico es
necesario sr eliminado o reducido , La papa como el hígado y la. Espinaca
contienen la enzima (Catalasa) la cual es un poderoso antioxidante, es
decir, que impide la oxidación de las sustancias químicas. Si agregamos
agua oxigenada o Peróxido de Oxigeno (H2O2) , la catalasa separará el
Oxigeno del Peróxido de Oxigeno, liberando una gran cantidad de gas (O2),
esto es lo que produce el burbujeo que observamos en nuestro
experimento, por el contrario cuando esta cocinado como lo que ocurrió en
el procedimiento 3 la cual la muestra fue sometida a 80 °C , esta no podría
reaccionar porque esta se desnaturalizó en la cocción.
● Bibliografía :
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#ph
https://www.conasi.eu/blog/consejos-de-salud/que-son-las-enzimas/
https://es.m.wikipedia.org/wiki/Catalasa
https://es.m.wikibooks.org/wiki/Enfermedades_metab
%C3%B3licas_produci das_por_enzimas_defectuosas
https://espaciociencia.com/enzimas-en-nuestra-vida-diaria/
