República Bolivariana de Venezuela

Ministerio del Poder Popular para la Educación

Instituto Politécnico Universitario Santiago Mariño
Mérida, Edo - Mérida

QUIMICA ANALITICA

Autor
Kevin Jhonson
Ramirez Sandoval
V-28.195.658
Esc.: 49 ing. Quimica

Noviembre de 2020
 INDICE

Introducción ............................................................................................................. 3

Absorción molecular y la teoría de absorción molecular ......................................... 4

Tipos de transiciones moleculares ....................................................................... 4

Ley de Lenber y Beer .............................................................................................. 5

Ejercicio ............................................................................................................... 7

Instrumentos de medición de absorción molecular ................................................. 7

Instrumentos con configuración óptica de un solo haz ........................................ 8

Instrumentos de doble haz................................................................................... 8

Espectro electromagnético ...................................................................................... 9

Ejercicio ............................................................................................................. 11

Radiación electromagnética .................................................................................. 11

Algunos parámetros básicos relacionados con la radiación .............................. 12

El espectro de radiación electromagnética ........................................................ 13

Ejercicio ............................................................................................................. 15

Fotometría ............................................................................................................. 15
 Introducción

El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización

de técnicas analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así
como su caracterización físico-química y biológica. Uno de los métodos más
sencillos, accesibles, útiles y utilizados es la espectroscopía, en general, y la
espectroscopía ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y cuantificar
biomoléculas en solución y en muestras biológicas, con el empleo de reactivos
específicos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un producto
coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.

El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas

para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo
que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.
 Absorción molecular y la teoría de absorción molecular

Todos los átomos o moléculas poseen un número discreto de niveles de

energía. A temperatura ambiente la mayoría de las especies se encuentran en su
nivel energético más bajo denominado estado fundamental. Cuando una onda
electromagnética interacciona con un átomo o molécula, la energía de dicha onda
puede resultar absorbida si coincide exactamente con la energía necesaria para
llevar a la especie química en cuestión desde el estado fundamental hasta alguno
de los niveles energéticos superiores. En este caso la energía de la onda se
transfiere a la molécula promoviéndola a un estado de energía más elevado o
estado excitado.

Después de un periodo de tiempo muy breve (unos pocos nanosegundos) la

especie excitada se relaja a su estado original devolviendo energía al medio que le
rodea.

Tipos de transiciones moleculares

La excitación originada por radiaciones visibles o ultravioleta promueve

transferencias de electrones que se hallan en niveles bajos de energía hasta
orbitales de energía superior. La transición de un electrón entre diferentes niveles
de energía se denomina transición electrónica y el proceso de absorción asociado
es conocido como absorción electrónica.

Además de las transiciones electrónicas las moléculas presentan

transiciones vibracionales que ocurren como consecuencia de los niveles de
energía cuantizados asociados a los enlaces intramoleculares. Las transiciones
vibracionales se producen cuando se produce absorción de energía de longitud de
onda infrarroja.
 Una molécula también posee un gran número de estados rotacionales
cuantizados debidos al movimiento rotacional de la molécula alrededor de centro de
gravedad.

La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la

cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la
muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos da una
medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la
muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una
relación logarítmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto

que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el
logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la
intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100%
e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces
A vale log 1 = 0. La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que
atraviesa la luz a través de la solución del cromóforo y de la concentración de éste.

Ley de Lenber y Beer

Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de

longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su

concentración –a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-
; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución –a igual
concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas
se encontrará-; y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad -
denominada coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo. Como
A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La segunda
magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre
que sea posible, en M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este
coeficiente así expresado, en términos de unidades de concentración molar (o un
submúltiplo apropiado), se denomina coeficiente de extinción molar (εM). Cuando,
por desconocerse el peso molecular del soluto, la concentración de la disolución se
expresa en otras unidades distintas de M, por ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε
resultan ser distintas, por ejemplo g-1·L·cm-1, y al coeficiente así expresado se
denomina coeficiente de extinción específico (εs). La ley de Lambert-Beer se cumple
para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía con la concentración,
debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de moléculas, cambios del
medio, etc.

Disponemos de una fuente emisora de radiación electromagnética (lámpara), unos

sistemas de enfoque (rendijas) para hacer que la radiación incida
perpendicularmente a la muestra, un dispositivo que permita seleccionar la longitud
de onda que incide sobre la muestra (red de difracción) y un sistema electrónico de
medida de intensidad de luz.

Imaginemos también que hacemos dos medidas de la intensidad de luz:

1) La primera medida la muestra será una disolución con la misma matriz que el
analito que deseemos determinar pero en ausencia de éste (disolución blanco). La
intensidad de radiación (luz) que llega al lector será

2) La segunda medida se hará en presencia del analito (cromóforo) que deseemos

estudiar. En este caso la intensidad de luz que llega al lector será I. Como
trabajamos con analitos que absorben radiación a la longitud de onda que
selecciona la red de difracción, lógicamente

La expresión matemática de ambos parámetros es:

Ejercicio

1) Una disolución 100 µM de un determinado cromóforo tuvo una transmitancia

a 525 nm de 0.5 cuando se midió en una celda 1.5 cm de longitud. Calcular:
a) la absorbancia de la disolución; b) la absorptividad molar del cromóforo

Instrumentos de medición de absorción molecular

los componentes básicos de un espectrofotómetro de absorción. Es decir, de un

instrumento diseñado para cuantificar la absorción de radiación ultravioleta o visible
por sustancias químicas. Dichos componentes básicos son:

● La fuente de luz que emite la radiación que posteriormente interactúa con la

muestra.

● Un sistema monocromador que permita separar bandas de luz estrechas, ya sea

antes o después de la interacción de la luz con la muestra. El monocromador está
constituido por lentes, espejos, redes de difracción, prismas de refracción, rendijas
etc.

● Un compartimento para colocar la muestra en celdas o cubetas adecuadas,

dependiendo de la región del espectro utilizada. El compartimento estará colocado
de manera que el haz de luz de la fuente atraviese la muestra perpendicularmente.

● Un sistema para la detección de la radiación que ha atravesado la muestra o

sistema detector.

● Sistemas electrónicos de amplificación, transformación y comparación de señal.

● Sistemas de registro de señal o almacenamiento de datos

Todos estos componentes se pueden ensamblar de diversas maneras

dependiendo de varios factores. No obstante, las dos configuraciones más
empleadas son las de espectrofotómetros de haz sencillo o espectrofotómetros de
doble haz.

Instrumentos con configuración óptica de un solo haz

Los instrumentos de simple haz son aquellos en los cuales el haz de luz sigue
una única trayectoria entre la fuente y el detector. La banda de luz atraviesa la
muestra que se halla contenida en una celda, la luz transmitida por la muestra pasa
al detector originándose una corriente eléctrica que por medio de diferentes circuitos
permite observar una señal, ya sea el movimiento de una aguja o señal digital o un
registro gráfico.

Instrumentos de doble haz

En los instrumentos de doble haz la luz proveniente de la fuente es dividida

en dos haces después de salir del monocromador mediante un sistema de espejos
divisores. Esta división produce dos haces de luz, uno de ellos se dirige a la celda
de referencia, que contiene el blanco, y el otro haz se dirige hacia la celda de
muestra. Los dos haces de luz después de atravesar la celda de referencia y la de
muestra llegan a detectores separados para obtener la señal correspondiente.
 Los sistemas de doble haz tienen la ventaja de que cualquier variación en la
intensidad de la fuente, la eficiencia de la red, la reflectividad de los espejos, la
fotosensibilidad del detector, etc., afecta simultáneamente a los dos haces. En
consecuencia, la relación de energía de los dos haces permanece siempre
constante.

Espectro electromagnético

Se denomina espectro electromagnético a la distribución energética del

conjunto de las ondas electromagnéticas. Referido a un objeto se denomina
espectro electromagnético o simplemente espectro a la radiación electromagnética
que emite (espectro de emisión) o absorbe (espectro de absorción) una sustancia.
Dicha radiación sirve para identificar la sustancia de manera análoga a una huella
dactilar. Los espectros se pueden contemplar mediante espectroscopios que,
además de permitir observar el espectro, permiten realizar medidas sobre el mismo,
como son la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad de la radiación. La
longitud de una onda es el período espacial de la misma, es decir, la distancia que
hay de pulso a pulso.
Frecuencia es una magnitud que mide el número de repeticiones por unidad de
tiempo de cualquier fenómeno o suceso periódico.
El espectro electromagnético se extiende desde la radiación de menor
longitud de onda, como los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz
ultravioleta, la luz visible y los rayos infrarrojos, hasta las ondas electromagnéticas
de mayor longitud de onda, como son las ondas de radio. Se cree que el límite para
la longitud de onda más pequeña posible es la longitud de Planck mientras que el
límite máximo sería el tamaño del Universo, aunque formalmente el espectro
electromagnético es infinito y continuo.
Para su estudio, el espectro electromagnético se divide en segmentos o
bandas, aunque esta división es inexacta.

Se puede obtener mucha información acerca de las propiedades físicas de

un objeto a través del estudio de su espectro electromagnético, ya sea por la luz
emitida (radiación de cuerpo negro) o absorbida por él. Esto es la espectroscopia y
se usa ampliamente en astrofísica y química. Para ello se analizan los espectros de
emisión y absorción.
El espectro electromagnético se extiende desde las bajas frecuencias usadas
para la radio moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma (extremo
de la onda corta), que cubren longitudes de onda de entre miles de kilómetros y la
fracción del tamaño de un átomo. Se piensa que el límite de la longitud de onda
corta está en las cercanías de la longitud Planck, mientras que el límite de la longitud
de onda larga es el tamaño del universo mismo, aunque en principio el espectro sea
infinito y continuo.
Ejercicio

Calcular la longitud de onda de las siguientes radiaciones electromagnéticas

a) frecuencia microondas =2·1011Hz

b) frecuencia luz roja =4.3·1014Hz

𝑚
𝐶 = 3𝑥108
𝑠𝑔

3𝑥108
a. 𝑡1 = 2𝑥1011 = 1.5𝑥10−3 = 0.0015𝑚
3𝑥108
b. 𝑡2 = 4.3𝑥1014 = 6.97𝑥10−7 𝑚

Radiación electromagnética

La radiación electromagnética es una combinación de campos eléctricos y

magnéticos oscilantes, que se propagan a través del espacio transportando energía
de un lugar a otro. A diferencia de otros tipos de onda, como el sonido, que necesitan
un medio material para propagarse, la radiación electromagnética se puede
propagar en el vacío.
Las radiaciones electromagnéticas se caracterizan por la existencia en cada
punto del espacio en que se transmiten de un campo eléctrico y un campo
magnético relacionados entre sí. Las ondas electromagnéticas presentan una
variación periódica que se propaga en el vacío a una velocidad de 300.000 km/seg.
La radiación electromagnética es portadora de una cantidad de energía y
presenta características específicas según la banda de frecuencias (o longitud de
onda) en que se halle inscrita. La radiación electromagnética puede propagarse sin
un soporte material, es decir, viajar por el vacío.

Algunos parámetros básicos relacionados con la radiación

 Longitud de onda(landa.bmp) = distancia entre dos puntos iguales de la onda

(se suele medir en unidades de longitud, normalmente nm o Å).

 Número de ondas(landa-1.bmp) = magnitud inversa de longitud de onda (se

suele medir en cm-1).

 Periodo(tau.bmp) = tiempo que tarda la onda en llegar a dos puntos idénticos

del ciclo de la onda (se mide en unidades de tiempo, normalmente s).

 Frecuencia(frec.bmp) = número de ciclos en una unidad de tiempo (se

expresa en unidades inversas de tiempo, normalmente s-1).

 Hertzio(Hz) = Unidad de frecuencia del sistema internacional. Es la

frecuencia que corresponde a un fenómeno periódico cuyo período es un
segundo.

 Velocidad de la onda(V) = Es la relación entre la longitud de onda y el periodo

y se suele expresar en cm/s. La velocidad de una onda desplazándose en el
vacío es de 300.000 km/s..

 Energía de la onda = Se calcula como el producto entre la frecuencia y la

constante de Plank (h = 6.62 X 10-34 J. s). Es importante indicar que la
energía de las ondas electromagnéticas está cuantificada.
No debe confundirse energía de los fotones con su luminosidad ó intensidad de la
radiación. El número de fotones es proporcional a la luminosidad, pero la energía
del fotón está relacionada con el color (longitud de onda) de éste.

De todo lo expuesto debemos resaltar la idea de que cuanto mayor es la frecuencia

de una onda electromagnética mayor es su energía asociada y menor su longitud
de onda.

El espectro de radiación electromagnética

Las ondas electromagnéticas cubren una amplia gama de frecuencias y

longitudes de onda. La clasificación no tiene límites precisos ya que fuentes
diferentes pueden producir ondas en intervalos de frecuencia parcialmente
superpuestos. La Figura 1 muestras las diferentes regiones del espectro
electromagnético, que son las siguientes:

 Ondas de radiofrecuencia: Estas ondas se utilizan para propagar señales de

radio y televisión.

 Microondas: Estas ondas se utilizan en el radar y otros sistemas de

comunicaciones.

 Infrarrojo: Estas ondas son producidas por cuerpos calientes y tienen muchas
aplicaciones en industria, medicina, astronomía.

 Luz o espectro visible: Es una estrecha banda formadas por las longitudes
de onda para la cual la retina humana es sensible. Las diferentes
sensaciones que la luz produce en el ojo, que se denominan colores,
dependen de la longitud de onda.
 Ultravioleta: Su energía es del orden de magnitud de la energía involucrada
en muchas reacciones químicas, lo que explica muchos de sus efectos
químicos.

 Rayos X: Tiene numerosas aplicaciones médicas.

 Rayos gamma (y.bmp). Estas ondas electromagnéticas son de origen

nuclear y se superponen al límite superior del espectro de rayos X.
Ejercicio

El campo eléctrico de una onda electromagnética plana en el vacío viene

dado, en unidades del sistema internacional (SI), por Ex = 0, Ey = 5 cos 6 × 1013(t
− x/c) y Ez = 0. Indique cuál es la dirección de propagación y el plano de polarización
de la onda y calcule su frecuencia, su longitud de onda y su intensidad media.

Fotometría

La fotometría, como técnica instrumental, es un método óptico de análisis

químico que está relacionado con la colorimetría y la espectrofotometría.

La colorimetría se emplea para determinar visualmente la concentración de

compuestos coloreados en una solución, mientras que la fotometría y la
espectrofotometría se basan en la medida de la absorbancia de una solución a una
longitud de onda específica empleando fuentes de luz como radiación
electromagnética.

Los métodos ópticos se clasifica en:

 Métodos espectroscópicos, si existe un intercambio de energía entre la

radiación electromagnética y la materia. En estos métodos se miden el
espectro, siendo este debido a transiciones entre distintos niveles
energéticos.
  Métodos no espectroscópicos, cuando no tiene lugar intercambio de energía
como consecuencia de la interacción materia-radiacción electromagnética.
No se producen transiciones entre los diferentes estados energéticos, sino lo
que realmente ocurre son cambios en la dirección o en las propiedades
físicas de la radiación electromagnética

Se define la fotometría como técnica óptica de la absorción de radiación que va

a permitir relacionar la cantidad de luz absorbida con la concentración del analito
que interesa conocer. La radiación electromagnética es una onda que se caracteriza
por su longitud de onda, frecuencia ν amplitud y abarca desde 390 nm a 750 nm,
esto quiere decir que será la zona visible del espectro.

La radiación u onda electromagnética que puede percibir el ojo humano se define

como LUZ VISIBLE y tiene unas propiedades muy bien definidas:
 Se propaga en el vacío a la velocidad de 3x108 m/s.
 Se propaga en línea recta.
 Se refleja cuando llega a una superficie reflectante.
 Se refracta, cuando pasa de un medio a otro.
 En general, las sustancias transmiten, absorben y reflejan la luz.