¿Qué es la citometría de flujo?

R// De acuerdo a una consulta cibergrafica la citometría de flujo es “Método de laboratorio

para determinar el número de células, el porcentaje de células vivas y ciertas características
de las células (como el tamaño y la forma) en una muestra de sangre, médula ósea u otro
tejido. También sirve para identificar marcadores tumorales, como antígenos, en la
superficie celular” (Instituto Nacional Del Cáncer).
¿Cuál es el fundamento de esta técnica?
R// Con respecto a lo investigado “El fundamento de la citometría de flujo consiste en
hacer pasar las células alineadas por delante de un láser y medir la luz emitida por cada una
de las células a medida que lo atraviesan. De esta forma, el sistema mide, por un lado, el
grado de dispersión de luz (indicador del tamaño, forma y estructura de la partícula) y, por
otro lado, si las partículas han sido teñidas con una o más moléculas fluorescentes, el láser
excita estas moléculas proporcionando una información biológica adicional relacionada con
cada partícula individual, como la actividad metabólica, el contenido en ADN o la
presencia de determinados marcadores intracelulares o de superficie. De forma precisa el
sistema óptico y electrónico recogen tanto la luz dispersada como la fluorescencia emitida
por cada partícula para luego convertirla en una señal digital que puede ser interpretada por
el ordenador para su análisis”. (Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona, 2009).
¿en qué consiste la separación de células por citometría de flujo?

R// Según la citometría de flujo “La separación celular por citometría de flujo o “Cell
Sorting” es el proceso de separación física de partículas en base a la expresión diferencial
de uno o varios parámetros analizables por técnicas de citometría de flujo analítica. Las
separaciones de células o poblaciones celulares homogéneas se realizan con objeto de llevar
a cabo posteriormente ensayos bioquímicos, moleculares o de diferenciación celular de
poblaciones de interés, y requieren de la utilización de sofisticados aparatos de citometría
de flujo, denominados “Cell Sorters”. Existen varios modos de “sorting” que se ajustan en
función de cuales sean los requisitos de cada separación. Los distintos ajustes permiten, por
ejemplo, optimizar la pureza de la población separada, optimizar la recuperación celular de
la población separada o separar números exactos de células en placas multipocillo.
Tienen menor potencia que las técnicas de separación masiva (centrifugación, etc...), pero
permiten separaciones que estas técnicas no consiguen. Actualmente se puede hacer
separación inmunomagnética para las cuales hay diferentes casas comerciales que tienen
gran variedad de reactivos y aparatos” (Moreno C., 2008).

Los Sorters se caracterizan por:

5.1.- Recuperación (recovery): porcentaje de partículas sorteadas recogidas en el colector,
del total de partículas activadas por el Sorter.
5.2.- Pureza (purity): porcentaje de partículas sorteadas recogidas que cumplen los criterios
seleccionados, en función del total sorteado.
5.3.- Rendimiento: porcentaje de partículas recogidas que cumplen los criterios
seleccionados, en función de las partículas teóricas que los cumplirían.
Mencione algunas aplicaciones de la citometría de flujo en cultivos celulares.

R// Marcadores celulares post-cultivo de las muestras: La combinación de la citometría

de flujo post-cultivo y/o estimulación celular es otra de las aplicaciones clínicas principales
de la citometría. El uso de marcadores de activación o marcadores que puedan cambiar tras
el cultivo celular con distintos estímulos, como el CD62L que puede disminuir post-
estimulación o CD69, CD40L e ICAM1 que se incrementan pos estimulación, permiten
valorar la capacidad funcional de la respuesta inmunitaria al responder a estos estímulos.

 Estudios de la biología del desarrollo y diferenciación celular.

 Ensayos de citotoxicidad y mecanismos de acción de fármacos.

 Estudio de características estructurales y funcionales de las células:

- Identificación de poblaciones celulares y fenotipaje mediante antígenos de superficie.

- Viabilidad, proliferación.
- Cinética celular.
- Ciclo celular, cuantificación de DNA, ploidias. Apoptosis.
- Producción de citosinas.
- Señalización y Cuantificación de proteínas.
- Microbiología.
- Etc.
(Sección de Cultivos Celulares y Citometría de Flujo. SCSIE)

Bibliografía

Servicio de Citometría de flujo - Centro Nacional de Biotecnología. (s/f-a). Recuperado el

27 de abril de 2020 de http://wwwuser.cnb.csic.es/~citometria/introduccion.html

Servicio de Citometría de flujo - Centro Nacional de Biotecnología. (s/f-b). Recuperado el

27 de abril de 2020 de http://wwwuser.cnb.csic.es/~citometria/funciones.html

Vaquero José miguel. (s/f). Citometría de Flujo - CMR[B] Centro de Medicina

Regenerativa de Barcelona. Recuperado el 27 de abril de 2020
de https://www.cmrb.eu/plataformas-tecnicas/citometria.html

Ana Flórez Raga. Cultivo, crio conservación, análisis y separación de células. Recuperado
el 29 de abril del 2020 de https://otriuv.es/oct/seccion-de-cultivos-celulares-y-citometria-de-
flujo-scsie/